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基于非洲猪瘟病毒D250R蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立

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中国兽医科学 2025年

作者：朱文青徐丽华刘佳畦邬雨倩金子安吴旭琪袁秀芳周继勇郑肖娟浙江大学动物医学中心农业农村部动物病毒学重点实验室浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

D250R是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)感染早期表达的具有脱帽酶活性的非结构蛋白。本研究构建了pET-32a-D250R重组原核表达质粒，经IPTG诱导和镍亲和纯化成功获得原核细胞表达的重组蛋白His-D250R，该蛋白和真核细胞... 详细信息

D250R是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)感染早期表达的具有脱帽酶活性的非结构蛋白。本研究构建了pET-32a-D250R重组原核表达质粒，经IPTG诱导和镍亲和纯化成功获得原核细胞表达的重组蛋白His-D250R，该蛋白和真核细胞表达的重组蛋白Flag-D250R均能被ASFV标准阳性血清识别，证明D250R蛋白是ELISA抗体检测方法的潜在靶标。在此基础上，以纯化的重组蛋白为免疫原制备鼠源多克隆抗体，该抗体ELISA效价大于1∶409 600。Western-blot试验表明该抗体与Flag-D250R和His-D250R均具有良好的反应性，证明His-D250R蛋白具有良好的抗原性。进一步以His-D250R蛋白为包被抗原，通过对抗原包被、封闭、抗体孵育、底物反应等条件的优化，建立间接ELISA抗体检测方法。其阴阳性临界值为0.359，检测PRV、PRRSV、PCV2、CSFV等阳性血清结果均呈阴性反应，灵敏度达1∶3 200，批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%，与商品化试剂盒符合率达98.8%。上述结果表明，基于His-D250R蛋白建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性、重复性良好，具备一定临床应用价值，可以为非洲猪瘟诊断方法开发提供重要支持。

关键词：非洲猪瘟病毒 D250R蛋白原核表达多克隆抗体间接ELISA

不同羊种及部位对脂肪源挥发性物质组成的影响

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中国食品学报 2013年第7期13卷 229-235页

作者：彭永佳王佳堃林嘉刘建新浙江大学动物科学学院奶业科学研究所杭州310058

为了比较不同羊种和脂肪部位对脂肪源挥发性物质组成差异的影响,采用固相微萃取和气相色谱-质谱联用,测定湖羊、山羊和去势山羊皮下脂肪和肾周脂肪中挥发性物质。用主成分分析法、聚类分析法和方差分析法分析数据。测定结果表明皮下脂... 详细信息

为了比较不同羊种和脂肪部位对脂肪源挥发性物质组成差异的影响,采用固相微萃取和气相色谱-质谱联用,测定湖羊、山羊和去势山羊皮下脂肪和肾周脂肪中挥发性物质。用主成分分析法、聚类分析法和方差分析法分析数据。测定结果表明皮下脂肪以醛类物质为主,肾周脂肪以醇类和烃类物质为主。通过主成分分析得出的主要挥发性物质——(E)-2-壬烯醛、(E)-2-辛烯醛、(E)-2-癸烯醛、壬醛、庚醛、辛醛和2-十一酮在湖羊皮下脂肪组织中显著高于山羊皮下脂肪。不论湖羊还是山羊,这些物质在皮下脂肪中的含量均显著高于在肾周脂肪。去势对山羊脂肪组织挥发性成分含量没有影响。

关键词：脂肪组织挥发性物质主成分分析

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乳腺重构的过程及其调节因素

生物化学与生物物理进展 2021年第12期48卷 1456-1462页

作者：伍超群刘建新石恒波浙江大学动物科学学院奶业科学研究所杭州310058

受到妊娠周期的影响,乳腺组织在雌性哺乳动物一生中经历着妊娠-哺乳-退化的周期性发育变化.在乳腺退化到再次泌乳的过程中,乳腺细胞经历凋亡和更新,从而实现乳腺组织的自我更新和修复,即乳腺重构.重构期间乳腺在组织结构和生理过程中发... 详细信息

受到妊娠周期的影响,乳腺组织在雌性哺乳动物一生中经历着妊娠-哺乳-退化的周期性发育变化.在乳腺退化到再次泌乳的过程中,乳腺细胞经历凋亡和更新,从而实现乳腺组织的自我更新和修复,即乳腺重构.重构期间乳腺在组织结构和生理过程中发生显著变化,但该过程物种间差异较大.乳用家畜为维持泌乳,妊娠期和干奶期重叠,展示出独特的再生性乳腺重构.再生性乳腺重构对乳畜乳腺健康和下一周期的泌乳具有重要意义,研究此过程将为后续调控乳腺自我更新和改善乳腺健康提供思路.本综述总结了近年来动物乳腺重构的研究进展,系统归纳了影响乳腺重构的因素,包括激素、蛋白酶、细胞因子、热应激、氧化应激、光照周期等,旨在解析乳腺重构的生理机制,为精准调控该过程提供科学依据.

关键词：乳腺重构健康细胞更新氧化应激

泌乳中期荷斯坦奶牛瘤胃细菌群落组成与多样性变化

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2023年第4期49卷 578-590页

作者：马晓娇薛茗元孙会增刘建新浙江大学动物科学学院奶业科学研究所浙江杭州310058

本研究旨在探究泌乳中期荷斯坦奶牛瘤胃细菌群落组成及其多样性的变化。共设置2个试验:试验1,选取20头泌乳中期健康高产荷斯坦奶牛,饲喂相同饲粮,持续8周,分别在第0、4、7周的第7天采集瘤胃内容物;试验2,选取30头泌乳中期健康高产荷斯... 详细信息

本研究旨在探究泌乳中期荷斯坦奶牛瘤胃细菌群落组成及其多样性的变化。共设置2个试验:试验1,选取20头泌乳中期健康高产荷斯坦奶牛,饲喂相同饲粮,持续8周,分别在第0、4、7周的第7天采集瘤胃内容物;试验2,选取30头泌乳中期健康高产荷斯坦奶牛,在基础饲粮的基础上补充20 g/d瘤胃保护蛋氨酸,持续8周,分别在第0、8周的第7天采集瘤胃内容物。分析2个试验在不同时间点采集到的瘤胃内容物的细菌群落组成与多样性变化,以及功能稳定性差异。结果发现:2个试验中,瘤胃细菌的α多样性、β多样性、功能稳定性在不同时间点之间都不存在显著差异(P>0.05)。试验1在高丰度细菌的门和属水平上分别发现6个与1个差异细菌,分别是放线菌门、变形菌门、蓝菌门、绿弯菌门、互养菌门、纤维杆菌门与Lachnospiraceae_NK3A20_group;试验2在高丰度细菌的门和属水平上分别发现3个与1个差异细菌,分别为放线菌门、螺旋体门、迷踪菌门与unclassified_f_Lachnospiraceae。由此可见,在相同的饲粮条件下,泌乳中期荷斯坦奶牛瘤胃细菌组成随时间变化的程度有限,其多样性与功能稳定性均未发生显著改变;在基础饲粮基础上补充瘤胃保护蛋氨酸时,得到的结果相似。综上所述,本研究表明,处于泌乳中期荷斯坦奶牛的瘤胃微生物群落组成和功能相对稳定,在奶牛泌乳中期开展相关试验时,无需特别考虑瘤胃细菌会随泌乳阶段进程出现群落结构和功能的改变。

关键词：荷斯坦奶牛泌乳中期瘤胃细菌微生物多样性功能稳定性

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围生期奶牛易感疾病的原因及常见病患的早期监测

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2019年第5期45卷 519-525页

作者：管若溦刘建新浙江大学动物科学学院奶业科学研究所

围生期奶牛常处于能量负平衡状态,其身体功能的紊乱,会带来生理和代谢的双重应激,使奶牛处于疾病易感的状态,在环境不佳、饲养管理不当时,产后会诱发多类代谢性疾病和感染性疾病,严重威胁奶牛的健康和生产性能。因此,了解围生期奶牛产... 详细信息

围生期奶牛常处于能量负平衡状态,其身体功能的紊乱,会带来生理和代谢的双重应激,使奶牛处于疾病易感的状态,在环境不佳、饲养管理不当时,产后会诱发多类代谢性疾病和感染性疾病,严重威胁奶牛的健康和生产性能。因此,了解围生期奶牛产后易感疾病的原因并对疾病进行早期监测成为奶牛健康养殖的热点之一。本文从能量代谢、免疫功能、饲养管理及环境因素等多方面入手,阐述了围生期奶牛产后易感疾病的原因,并对血液、乳汁中常见病患的生物标志物及疾病早期监测的最新研究进展进行了综述。

关键词：围生期代谢特征免疫抑制环境因素饲养管理早期监测

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不同年龄奶水牛瘤胃菌群多样性研究

动物营养学报 2019年第11期31卷 5053-5064页

作者：彭科兰任大喜刘建新浙江大学动物科学学院奶业科学研究所

本研究旨在利用16S rRNA高通量测序技术分析不同年龄奶水牛瘤胃菌群多样性,探究其随年龄增长变化的规律。选择4个年龄组,即Y组(12月龄,胎次=0)、M组(3~5岁,胎次=1)、E组(6~8岁,胎次=2)和O组(9岁及以上,胎次≥3),各组奶水牛分别为9、7、4... 详细信息

本研究旨在利用16S rRNA高通量测序技术分析不同年龄奶水牛瘤胃菌群多样性,探究其随年龄增长变化的规律。选择4个年龄组,即Y组(12月龄,胎次=0)、M组(3~5岁,胎次=1)、E组(6~8岁,胎次=2)和O组(9岁及以上,胎次≥3),各组奶水牛分别为9、7、4和5头,采集瘤胃液并提取总DNA,经PCR扩增后对16S rDNA的V3~V4区进行高通量测序。结果表明:alpha多样性分析结果发现,随着年龄增长,奶水牛瘤胃菌群数量呈现显著下降的趋势(P=0.07),菌属相对丰度显著减少(P所有年龄奶水牛瘤胃的优势菌群为拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria);属水平下,普雷沃氏菌属_1(Prevotella_1)相对丰度在4个年龄组均最高,优势菌属和次级优势菌属的相对丰度随奶水牛年龄的增长呈现相互聚拢的趋势。不同年龄奶水牛瘤胃中存在着差异显著的特征性菌属,12月龄奶水牛瘤胃中以乳酸菌属(Lactobacillus)和糖酵菌属(Saccharofermentans)为主,其相对丰度随着年龄增长而显著减少(P所述,随着奶水牛年龄增长,其瘤胃菌群数量和相对丰度显著减少,优势菌群和亚优势菌群呈现一定的年龄特征变化;奶水牛瘤胃存在着一些年龄特征菌属,其菌群结构紧密性随年龄增加而减弱,表明宿主年龄增长可影响瘤胃菌群结构和功能的稳定。

关键词：奶水牛瘤胃微生物多样性菌群年龄

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黄芩苷测定方法及药代动力学研究进展

亚太传统医药 2025年

作者：李启智刘俊田永强鲍小杰谈满良李小冬浙江大学苏州工业技术研究院苏州盛德堂医药科技有限公司隆德县葆易圣药业有限公司浙江大学动物科学学院

黄芩苷(7-D-葡萄糖醛酸-5,6-二羟基黄酮)是从黄芩药材根部提取的天然黄酮类化合物,黄芩是中药常用的药用植物。研究证明,黄芩苷具有多种药理活性,如抗癌、抗炎、抗氧化、抗细胞凋亡及抗菌等。目前,黄芩苷检测及鉴定方法,包括常规的色谱... 详细信息

黄芩苷(7-D-葡萄糖醛酸-5,6-二羟基黄酮)是从黄芩药材根部提取的天然黄酮类化合物,黄芩是中药常用的药用植物。研究证明,黄芩苷具有多种药理活性,如抗癌、抗炎、抗氧化、抗细胞凋亡及抗菌等。目前,黄芩苷检测及鉴定方法,包括常规的色谱检测方法与传感器测定方法。其中,传感器测定法,如电化学方法、荧光传感器方法等,这些技术具有更好的检测限、灵敏度及选择性。综述在现有检测方法下,黄芩苷的吸收、分配、代谢及排泄等体内、体外药代动力学。研究表明,黄芩苷在胃肠道中的水解、肠肝循环、载体介导的细胞膜转运、体循环中的不同代谢途径,以及胆汁及尿液中的排泄十分复杂。

关键词：黄芩黄芩苷检测方法生物传感器药代动力学

基于网络药理学和分子对接探究芹菜素缓解奶牛热应激及低氧应激的潜力与机制

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中国农业科学 2024年第5期57卷 1010-1022页

作者：刘卓琳刘红云浙江大学动物科学学院奶业科学研究所

【目的】利用网络药理学和分子对接方法，系统预测芹菜素缓解奶牛热应激及低氧应激的作用机制。为芹菜素的应用提供参考。【方法】首先从TCMSP（中药系统药理学数据库）和Gene Cards（基因数据库）分别检索“Apigenin”“heat stress”... 详细信息

【目的】利用网络药理学和分子对接方法，系统预测芹菜素缓解奶牛热应激及低氧应激的作用机制。为芹菜素的应用提供参考。【方法】首先从TCMSP（中药系统药理学数据库）和Gene Cards（基因数据库）分别检索“Apigenin”“heat stress”“hypoxia”，获得芹菜素、热应激和低氧应激相关靶点，韦恩交集取得芹菜素缓解双重应激（热应激+低氧）的靶点集。利用STRING数据库构建双重靶点蛋白-蛋白互作（PPI）网络，使用Cytoscape 3.9.1软件的Cyto NCA插件分别对网络节点中心性进行计算，筛选得到核心靶点。利用David数据库的分析工具“Functional Annotation”对度值排名前30的芹菜素缓解双重应激靶点进行基因本体（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。同时，对以上靶点进行分子复合物检测分析（MCODE）得到核心基因簇，并进一步对核心基因簇进行GO和KEGG分析。根据KEGG通路富集结果与核心靶点信息构建芹菜素-双重应激靶点-信号通路网络。最后，使用Autodock vina程序将芹菜素与核心靶点逐一进行分子对接，利用Pymol软件和PLIP网站分析其相互作用模式并将结果可视化。【结果】TCMSP数据库检索得到芹菜素靶点68个，Gene Cards数据库中获得低氧相关基因6 661个，热应激相关基因9 046个，获得三者的交集靶点56个，即芹菜素缓解双重应激的可能靶点。靶点PPI网络的节点数为56，边数为436，平均节点度值为15.6，平均局部聚类系数为0.728,PPI富集P值研究利用网络药理学和分子对接方法挖掘了芹菜素缓解多重应激的潜力，为芹菜素及富含芹菜素的植物在奶牛生产上的应用提供了理论参考。

关键词：芹菜素奶牛热应激低氧网络药理学分子对接

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动物低氧应激与线粒体功能机制

动物营养学报 2020年第11期32卷 5046-5052页

作者：陆逸蔡杰王迪铭刘建新浙江大学动物科学学院奶业科学研究所杭州310029

低氧是动物面临环境、疾病、代谢变化的重要应激源之一,可导致机体自由基稳衡态失衡,损伤细胞。线粒体是感应氧气变化、产生活性氧(ROS)的最重要的细胞器,通过控制其总量和改变能量代谢以适应低氧。低氧状态可激活低氧诱导因子-1(HIF-1... 详细信息

低氧是动物面临环境、疾病、代谢变化的重要应激源之一,可导致机体自由基稳衡态失衡,损伤细胞。线粒体是感应氧气变化、产生活性氧(ROS)的最重要的细胞器,通过控制其总量和改变能量代谢以适应低氧。低氧状态可激活低氧诱导因子-1(HIF-1)参与调控低氧补偿机制,降低ROS带来的细胞损害;同时线粒体生物合成增加,可能是线粒体抵御低氧应激、提高机体适应性的新策略。本文综述了动物低氧应激的分类,以及从细胞和分子水平讨论了低氧应激中HIF-1的适应性调节机制以及线粒体功能的变化。

关键词：低氧应激 HIF-1 线粒体线粒体生物合成