检索结果-南通市图书馆

含多抗原表位的嵌合SARS-CoV基因疫苗的构建和免疫原性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

复旦学报（医学版） 2005年第2期32卷 130-133页

作者：汪晓华童德妍徐焕宾熊思东复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室-上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的　研制基于表位的SARS- CoV基因疫苗 ,为传统灭活或减毒疫苗提供有益的配伍选择。方法　通过网络数据库结合生物软件分析的方法 ,确定可能在SARS- CoV感染过程中起重要作用并具较好抗原性参数的结构区域作为候选抗原表位 ,以密码子... 详细信息

目的　研制基于表位的SARS- CoV基因疫苗 ,为传统灭活或减毒疫苗提供有益的配伍选择。方法　通过网络数据库结合生物软件分析的方法 ,确定可能在SARS- CoV感染过程中起重要作用并具较好抗原性参数的结构区域作为候选抗原表位 ,以密码子优化的方法提高表位串联蛋白的真核表达效率 ,构建了含多抗原表位的嵌合SARS- CoV基因疫苗。结果　多表位串联基因接入真核表达载体后 ,可在真核细胞内高效表达。多表位嵌合SARS -CoV基因疫苗免疫小鼠后 ,可诱导融合蛋白特异的体液免疫反应。结论　该基于多抗原表位的嵌合SARS- CoV基因疫苗可以诱导抗体应答 ,为该疫苗的深入研究奠定了基础。

关键词： SARS-CoV 多抗原表位基因疫苗免疫原性研究嵌合真核表达载体体液免疫反应网络数据库配伍选择减毒疫苗软件分析感染过程表达效率高效表达免疫小鼠融合蛋白抗体应答结构区抗原性密码子细胞内串联

SARS-Cov M蛋白的真核表达及其免疫原性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

复旦学报（医学版） 2005年第1期32卷 21-24页

作者：童德妍汪晓华郑秀娟关庆东熊思东复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室-上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的初步研究SARS-Coy病毒M蛋白基因的真核表达效率和免疫原性为进一步的疫苗研究奠定基础。方法以PCR方法在全病毒基因组文库中获得全长M基因,分别克隆至pcDNA4-his／myc和pVAON33载体获得重组质粒pcDNA4-his／myc-M和pVAON33-M。... 详细信息

目的初步研究SARS-Coy病毒M蛋白基因的真核表达效率和免疫原性为进一步的疫苗研究奠定基础。方法以PCR方法在全病毒基因组文库中获得全长M基因,分别克隆至pcDNA4-his／myc和pVAON33载体获得重组质粒pcDNA4-his／myc-M和pVAON33-M。以Western Blot方法利用融合分子羧基段的myc表位检测pcDNA4-his／myc-M转染的293T细胞中M蛋白的真核表达。以ELISA方法检测pVAON33-M质粒基因免疫小鼠诱导产生特异性抗血清。结果pcDNA4-his／myc-M转染后48 h可检测到SARS-Cov M蛋白表达。 pVAON33-M基因免疫能够诱导产生M特异的体液免疫应答。结论本研究的结果表明SARS-Cov M蛋白可以在真核细胞中有效表达并有良好免疫原性,可以作为SARS-Cov疫苗研制的候选抗原之一。

关键词： M蛋白 SARS-Cov 真核表达免疫原性研究转染诱导 DNA 真核细胞克隆文库

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

集聚蛋白在淋巴细胞活化中的作用

中华微生物学和免疫学杂志 2005年第7期25卷 555-558页

作者：张进平苏丽萍乔宾徐焕宾张瑞华储以微王缨熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的研究在神经突触形成中发挥重要作用的集聚蛋白(agrin)是否在淋巴细胞中表达并影响淋巴细胞的活化和免疫突触的形成。方法应用RT-PCR检测集聚蛋白在静止和活化淋巴细胞中的表达,并应用实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达量与淋巴细... 详细信息

目的研究在神经突触形成中发挥重要作用的集聚蛋白(agrin)是否在淋巴细胞中表达并影响淋巴细胞的活化和免疫突触的形成。方法应用RT-PCR检测集聚蛋白在静止和活化淋巴细胞中的表达,并应用实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达量与淋巴细胞活化之间的关系;用抗集聚蛋白抗体观察其对淋巴细胞增殖和免疫突触形成的影响;应用共聚焦显微镜观察集聚蛋白是否参与免疫突触的形成。结果RT-PCR结果显示集聚蛋白在静止和活化的淋巴细胞中均有表达,且经过实时定量PCR分析发现,集聚蛋白的表达和淋巴细胞的活化密切相关;当集聚蛋白被阻断后淋巴细胞的增殖被显著抑制;经共聚焦显微镜观察发现,集聚蛋白在活化的淋巴细胞中以帽化结构形式存在,且和CD3分子共定位,抗集聚蛋白抗体可以明显减少这种帽化结构的形成。结论在神经突触中发挥重要作用的集聚蛋白同样存在于淋巴细胞,可能通过影响淋巴细胞的免疫突触的形成参与淋巴细胞的活化。

关键词：集聚蛋白淋巴细胞活化免疫突触 RT-PCR检测实时定量PCR 神经突触形成淋巴细胞增殖活化淋巴细胞蛋白抗体微镜观察

原核表达系统T7RNA聚合酶/启动子在真核细胞中表达目的基因的实验研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2005年第2期21卷 182-186页

作者：袁志刚张进平储以微王缨徐薇熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

将目前高表达水平强大的原核表达系统之一T7RNA聚合酶启动子表达系统通过一系列改进引入真核细胞。通过转染真核细胞实验表明 ,采用真核启动子CMV调控T7RNA聚合酶的表达和在T7启动子下游插入EMCVIRES序列两种解决方案能使该原核表达... 详细信息

将目前高表达水平强大的原核表达系统之一T7RNA聚合酶启动子表达系统通过一系列改进引入真核细胞。通过转染真核细胞实验表明 ,采用真核启动子CMV调控T7RNA聚合酶的表达和在T7启动子下游插入EMCVIRES序列两种解决方案能使该原核表达系统在真核细胞高效表达目的基因 ,且能适应不同的真核细胞环境 ,是一良好的细胞类型非依赖的表达体系。

关键词： T7 RNA聚合酶 T7启动子原核表达系统真核细胞

B7反义肽预处理脾细胞诱导异基因嵌合体形成及延长移植物存活

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华医学杂志 2004年第2期84卷 138-141页

作者：陈晋张瑞华刘全胜储以微何球藻熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的　尝试以B7 CD2 8/CTLA4为靶点 ,用B7反义肽 (B7AP)预处理供者的脾细胞 ,免疫受者后结合输注供者骨髓细胞 ,诱导受体形成异基因嵌合体。方法　每只用 5× 10 6/ 10 0 μlB7AP预处理的供者小鼠 (C5 7BL/ 6 )脾细胞免疫受者小鼠 (BALB... 详细信息

目的　尝试以B7 CD2 8/CTLA4为靶点 ,用B7反义肽 (B7AP)预处理供者的脾细胞 ,免疫受者后结合输注供者骨髓细胞 ,诱导受体形成异基因嵌合体。方法　每只用 5× 10 6/ 10 0 μlB7AP预处理的供者小鼠 (C5 7BL/ 6 )脾细胞免疫受者小鼠 (BALB/c) ,诱导特异性同种低免疫应答反应 ;在此基础上每只受者小鼠输注供者骨髓细胞 2× 10 7/ 10 0 μl,诱导受者形成异基因嵌合体 ,以流式细胞术 (FACS)连续动态监测嵌合状态的维持情况并用小鼠心肌移植模型研究移植物存活的影响因素。结果　在受者体内成功诱导出了特异性同种低免疫应答反应 ,应答水平只有正常未免疫组的 4 3%(n =6 ,P 基因嵌合体 ,并显著延长同种小鼠心肌移植存活的时间 ,为移植免疫的研究提供了一个简单易行的嵌合体平台技术 ,也为用B7AP在移植免疫中的应用进行了有益的尝试。

关键词： B7反义肽预处理脾细胞异基因嵌合体同种异体移植移植免疫学

ALD-DNA对巨噬细胞株RAW264.7的刺激作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

复旦学报（医学版） 2005年第5期32卷 505-508页

作者：乔滨徐薇陈刚张凤杨秀利熊思东复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室-上海基因与疫苗研究中心上海200032

目的体外观察ConA活化淋巴细胞来源的DNA(ALDDNA)对BALB/c小鼠巨噬细胞株RAW264.7的刺激作用。方法将ALDDNA及未活化淋巴细胞来源的DNA(UnALDDNA)分别与BALB/c小鼠来源的巨噬细胞株RAW264.7孵育48h,然后以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细... 详细信息

目的体外观察ConA活化淋巴细胞来源的DNA(ALDDNA)对BALB/c小鼠巨噬细胞株RAW264.7的刺激作用。方法将ALDDNA及未活化淋巴细胞来源的DNA(UnALDDNA)分别与BALB/c小鼠来源的巨噬细胞株RAW264.7孵育48h,然后以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪测定细胞表面分子的表达,ELISA检测白细胞介素6(IL6)、白细胞介素12(IL12)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的分泌情况。结果ALDDNA在体外能够明显刺激细胞发生增殖,上调细胞表面主要组织相容性复合体(MHC)II类分子以及共刺激分子CD40、CD80和CD86的表达,并能够诱导细胞分泌IL6、IL12和TNFα。结论ALDDNA对RAW264.7细胞具有免疫刺激作用。

关键词：活化淋巴细胞来源的DNA 巨噬细胞免疫刺激

趋化因子IP10抑制乳腺癌细胞4T1播散转移的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华医学杂志 2006年第3期86卷 176-181页

作者：杨秀利储以微徐林李宝华熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室 200032

目的观察增强IP10在肿瘤局部的表达对乳腺癌细胞4T1远端播散转移的作用。方法用电转染的方法建立稳定表达IP10的4T1细胞株IP10-4T1。将BALB/c小鼠分为IP10-4T1细胞组、4T1细胞组和转染pcDNA3的4T1细胞组(pcDNA3-4T1)。利用实验性肺转移... 详细信息

目的观察增强IP10在肿瘤局部的表达对乳腺癌细胞4T1远端播散转移的作用。方法用电转染的方法建立稳定表达IP10的4T1细胞株IP10-4T1。将BALB/c小鼠分为IP10-4T1细胞组、4T1细胞组和转染pcDNA3的4T1细胞组(pcDNA3-4T1)。利用实验性肺转移模型和体外杀伤实验研究接种IP10-4T1对4T1细胞播散转移的影响。结果IP10-4T1细胞中IP10mRNA转录水平相对含量为0.92±0.12与未转染的4T1细胞(0.35±0.12)和pcDNA3-4T1细胞(0.29±0.08)比较差异有统计学意义(P实验性肺转移结果显示,IP10-4T1组小鼠肺重为0.27g±0.02g,与4T1细胞组(0.48g±0.08g)和pcDNA3-4T1组(0.43g±0.16g)比较明显减轻(P=0.021);其肺表面形成的转移结节数较对照组少;IP10-4T1组肺组织中形成的4T1细胞克隆数为2.6±1.7,明显低于4T1组(34.0±6.3)和pcDNA3-4T1组(33.0±2.3,P免疫应答水平,通过肿瘤特异性的杀伤作用,抑制肿瘤细胞在体内播散转移。

关键词：乳腺肿瘤肿瘤转移细胞培养

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

BALB/c小鼠胸腺细胞发育模型的建立

复旦学报（医学版） 2005年第5期32卷 571-575页

作者：邵先安张瑞华蒋正刚孙志平储以微熊思东复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室上海200032

目的建立胸腺细胞体外研究模型,为T细胞早期发育及相关实验提供有效技术平台。方法无菌摘取14.5天龄胚鼠胸腺,胸腺器官体外培养,FACS检测不同培养时间点细胞存活状况和表型变化,计数每个胸腺小叶的细胞数变化。结果胸腺体外培养显示:经... 详细信息

目的建立胸腺细胞体外研究模型,为T细胞早期发育及相关实验提供有效技术平台。方法无菌摘取14.5天龄胚鼠胸腺,胸腺器官体外培养,FACS检测不同培养时间点细胞存活状况和表型变化,计数每个胸腺小叶的细胞数变化。结果胸腺体外培养显示:经过6d的培养,胸腺细胞存活率均在88.0%以上,由双阴性发育至双阳性细胞,CD4+CD8+双阳性细胞由培养第0天的0上升到第6天的89.07%;细胞数量随胸腺发育(培养时间的增加)而增多,每个胸腺小叶胸腺细胞数量也由培养0d的0.75×104个上升到第6天的1.38×106个。而体内数据显示:胸腺细胞由胚龄14.5d的双阴性阶段发育到新生鼠的双阳性阶段,每个胸腺小叶细胞数量由14.5d的0.75×104个上升到新生鼠的2.56×106个,同时间段CD4+CD8+双阳性细胞比例由0上升到91.22%。体内、外胸腺细胞表型、数量变化趋势一致。结论体外培养状态下胸腺细胞数量和表型变化与体内自然变化趋势一致,在体外培养可以模拟体内胸腺细胞由双阴性到双阳性的发育过程,这将为T细胞发育的研究提供简易、有效的技术平台。

关键词：胸腺细胞双阳性双阴性模型

HIPK2在IL-2撤除诱导T细胞凋亡中的作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

复旦学报（医学版） 2005年第6期32卷 631-635页

作者：邓富刚王缨熊思东储以微任学芳陈晓菁杨秀利复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室上海200032

目的研究同源结构域相关的蛋白激酶2(homeodomain-interacting protein kinase2,HIPK2)在白介素2(interleukin2,IL-2)撤除诱导的T细胞凋亡中的表达及其作用。方法IL-2依赖性的T细胞株(CTLL-2),撤除IL-2后可诱导凋亡。运用PI染色和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡,实时定量RT-PCR检测HIPK2及其他细胞凋亡相关基因的表达。通过反义技术下调HIPK2的表达,观察HIPK2在IL-2撤除诱导的T细胞凋亡中的作用。结果随IL-2撤除时间延长,CTLL-2细胞凋亡率增加,细胞基因组DNA发生了明显片段化。参与死亡受体凋亡途径的基因FasL和Fas表达没有明显改变(P>0.05),Bcl-2家族中促凋亡基因Bi m表达明显上调(P基因Bcl-xL表达明显下调(P基因Bi m的表达被显著下调(P基因Bcl-xL明显上调(P基因Bi m和下调抗凋亡基因Bcl-xL的表达相关。

关键词：同源结构域相关的蛋白激酶2 白细胞介素2撤除凋亡