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载脂蛋白E在恶性肿瘤中的作用机制

生物化学与生物物理进展 2024年第7期51卷 1551-1565页

作者：高博文王丽徐泱复旦大学附属中山医院肝肿瘤外科癌变与侵袭原理教育部重点实验室上海200032 复旦大学生物医学研究院上海200032

载脂蛋白E(apoE)是脂质代谢中的重要分子,通过调节细胞增殖、能量代谢、氧化应激、机体固有免疫等方式,在多种恶性肿瘤的发生发展中发挥重要作用,并影响患者的治疗效果,已成为潜在的肿瘤标志物和有潜力的治疗靶点,对于深入理解多种恶性... 详细信息

载脂蛋白E(apoE)是脂质代谢中的重要分子,通过调节细胞增殖、能量代谢、氧化应激、机体固有免疫等方式,在多种恶性肿瘤的发生发展中发挥重要作用,并影响患者的治疗效果,已成为潜在的肿瘤标志物和有潜力的治疗靶点,对于深入理解多种恶性肿瘤的病因学,推动恶性肿瘤的预防及开发新的治疗策略具有重要意义。本文对apoE的生物化学与分子生物学属性进行介绍,并梳理apoE在各个癌种的发生发展中发挥的作用,总结apoE与肿瘤的各种生物学特性之间的关系,探讨其作为肿瘤标志物与治疗靶点的潜力和应用价值。

关键词：载脂蛋白E 恶性肿瘤脂质代谢基因多态性肿瘤免疫

乙型肝炎病毒核心颗粒展示新型冠状病毒刺突蛋白B细胞线性表位及其免疫原性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第3期44卷 234-240页

作者：陈小美袁雯婕王世杰王建荣杭小锋万延民王勇翔复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 海军军医大学长征医院感染科上海200003 复旦大学附属华山医院感染科上海市传染病与生物安全应急响应重点实验室国家传染病医学中心上海200040

目的获得展示新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)刺突蛋白B细胞线性表位的乙型肝炎病毒衣壳样颗粒(capsid-like particles,CLPs)并评价其免疫原性。方法将SARS-CoV-2的4条B细胞线性表位(M1、S1-57、S14P5和S21P2)置换乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)第80位丙氨酸。在大肠埃希菌BL21 Star(DE3)中诱导表达这4种线性表位和HBc的重组融合蛋白(M1-HBc、S1-57-HBc、S14P5-HBc和S21P2-HBc)。SDS-PAGE、Western blot和非变性琼脂糖凝胶电泳(native agarose gel electrophoresis,NAGE)鉴定表达产物。蔗糖密度梯度超速离心纯化CLPs并经Western blot验证其抗原性。用纯化的CLPs免疫BALB/c小鼠,通过ELISA测定血清中的抗体滴度。结果重组融合蛋白M1-HBc和S1-57-HBc自组装成M1-CLP和S1-57-CLP,S1-57-CLP免疫小鼠后靶向S1-57多肽的抗体滴度高达1∶1000000。结论在原核系统中成功表达了展示SARS-CoV-2 M1或S1-57线性表位的乙型肝炎病毒CLPs,S1-57-CLP具有良好的免疫原性,为研制SARS-CoV-2新型诊断试剂和疫苗提供了新思路。

关键词：免疫原性新型冠状病毒 B细胞线性表位衣壳样颗粒抗体

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N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶的功能与机制

生物化学与生物物理进展 2024年第5期51卷 985-999页

作者：芦鑫荣童永亮孔维溧邹琳沈旦枫吕绍衔刘瑞杰张绍兴张瑜芯侯琳琳孙桂芹陈力复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生健康委员会重点实验室上海200032 浙江中医药大学医学技术与信息工程学院杭州310053 青岛农业大学动物医学院青岛266106

N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶(endo-beta-N-acetylglucosaminidase,ENGase)广泛分布于各种生物中,主要通过降解错误折叠的糖蛋白,参与细胞和生命的调控。ENGase也是糖链编辑的有效工具酶,可专一性水解游离寡糖链及糖肽或糖蛋白上核心五糖... 详细信息

N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶(endo-beta-N-acetylglucosaminidase,ENGase)广泛分布于各种生物中,主要通过降解错误折叠的糖蛋白,参与细胞和生命的调控。ENGase也是糖链编辑的有效工具酶,可专一性水解游离寡糖链及糖肽或糖蛋白上核心五糖的N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)之间的β-14糖苷键。其水解产物是寡糖链和一个GlcNAc,或带有一个GlcNAc的糖肽或糖蛋白。本文对ENGase的发现、分布、蛋白质结构、酶学反应及生物学功能进行阐述,为ENGase的生物学研究提供思路,为糖生物学与糖组学的应用研究奠定基础。

关键词： N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶 N-糖基化游离寡糖糖链编辑糖生物学

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糖蛋白过敏原N-糖链与过敏的相关性研究

生物化学与生物物理进展 2024年第5期51卷 1023-1033页

作者：张瑜芯刘瑞杰张绍兴袁舒颖陈妍雯叶以琳林谦阁芦鑫荣童永亮陈力孙桂芹浙江中医药大学医学技术与信息工程学院杭州310053 嘉兴妇幼保健院检验科嘉兴314009 上海交通大学医学院附属仁济医院宁波医院宁波市杭州湾医院中心实验室宁波315336 复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生健康委员会重点实验室上海200032

糖蛋白是一种含有寡糖链的蛋白质,糖链与蛋白质之间以共价键相连。N-糖蛋白为常见过敏原之一,主要来源于食物、吸入物、昆虫毒素等,能够引起过敏反应。N-糖蛋白过敏原的N-糖链结构影响过敏原与IgE的结合,影响抗原提呈细胞(APC)对过敏原... 详细信息

糖蛋白是一种含有寡糖链的蛋白质,糖链与蛋白质之间以共价键相连。N-糖蛋白为常见过敏原之一,主要来源于食物、吸入物、昆虫毒素等,能够引起过敏反应。N-糖蛋白过敏原的N-糖链结构影响过敏原与IgE的结合,影响抗原提呈细胞(APC)对过敏原的识别和提呈。本文在介绍与过敏相关的N-糖蛋白、常见N-糖蛋白过敏原的N-糖链结构及与过敏相关的糖基化酶的基础上,进一步分析过敏原N-糖链影响过敏的机制,为临床预防与治疗过敏性疾病提供新的思路。

关键词：过敏反应 N-糖基化 N-糖链结构糖基化相关酶过敏机制

CDC20通过稳定NLRP3的表达促进食管癌细胞增殖的研究

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中国癌症杂志 2024年第5期34卷 473-484页

作者：关瑞瑞郝茜张雅琦孙庆港陈怡恬李秀敏周祥韩涛新乡医学院健康中原研究院新乡市分子癌学重点实验室河南新乡453003 新乡医学院第三附属医院消化内科河南新乡453003 复旦大学附属肿瘤医院肿瘤研究所复旦大学上海医学院肿瘤学系上海200032 新乡医学院基础医学院河南新乡453003 新乡医学院第一附属医院消化内科河南新乡453003

背景与目的:食管癌(esophageal carcinoma,ESCA)是死亡率较高的恶性肿瘤之一,其发生、发展的机制不明。CDC20被认为具有癌基因功能,其表达失调与肿瘤的发生、发展密切相关。CDC20在多种肿瘤中表达升高,敲低CDC20能够抑制肿瘤细胞增殖。N... 详细信息

背景与目的:食管癌(esophageal carcinoma,ESCA)是死亡率较高的恶性肿瘤之一,其发生、发展的机制不明。CDC20被认为具有癌基因功能,其表达失调与肿瘤的发生、发展密切相关。CDC20在多种肿瘤中表达升高,敲低CDC20能够抑制肿瘤细胞增殖。NLRP3是炎症小体的主要成分之一,炎症小体失调与肿瘤的发生、发展也密切相关。本研究旨在探究CDC20是否通过NLRP3促进ESCA细胞增殖,同时分析其调控机制。方法:通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和GTEx公共数据库分析ESCA患者中CDC20和NLRP3基因的表达水平。收集新乡医学院第一附属医院收治的80例ESCA患者的临床病理学资料和组织,通过免疫组织化学染色检测NLRP3在ESCA患者中的蛋白表达水平。本研究通过新乡医学院第一附属医院伦理委员会的审批(编号:EC-021-137)。通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)技术检测敲低CDC20和NLRP3基因后对食管鳞状细胞癌细胞系EC9706和KYSE150增殖能力的影响。通过免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)、蛋白酶体抑制剂和泛素化实验检测CDC20是否与NLRP3相互作用,以及阐明CDC20是否通过泛素化途径调控NLRP3表达。结果:TCGA数据库分析结果显示,ESCA组织中CDC20和NLRP3 mRNA表达水平明显高于癌旁组织。免疫组织化学结果也进一步显示,与癌旁组织相比,CDC20、NLRP3在ESCA组织中蛋白表达水平升高。敲低CDC20和NLRP3基因可抑制ESCA细胞增殖。Co-IP、蛋白酶体抑制剂和泛素化实验证实CDC20通过NLRP3的LRR区与NLRP3相互作用,且CDC20通过促进NLRP3泛素化稳定其表达。结论:CDC20和NLRP3在ESCA癌组织中表达上调,且CDC20通过泛素化NLRP3稳定其表达,从而促进ESCA细胞增殖,提示CDC20和NLRP3可能是ESCA潜在的诊断靶向标志物。

关键词：食管癌 CDC20 NLRP3 泛素化增殖

微小残留病灶在非转移性结直肠癌中的应用研究进展

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中华胃肠外科杂志 2024年第7期27卷 749-755页

作者：曹玓王芳张荣欣魏冰何明彦彭俊杰陈功中山大学肿瘤防治中心结直肠科华南肿瘤学国家重点实验室肿瘤医学省部共建协同创新中心广州510060 中山大学肿瘤防治中心分子诊断科华南肿瘤学国家重点实验室肿瘤医学省部共建协同创新中心广州510060 郑州大学附属肿瘤医院分子病理科郑州450003 中山大学附属肿瘤医院甘肃医院甘肃省肿瘤医院结直肠外科兰州730050 复旦大学附属肿瘤医院大肠外科复旦大学上海医学院肿瘤学系上海200032

近年来,微小残留病灶(MRD)在实体瘤中的应用受到广泛关注,一般是指在接受根治性治疗,如手术切除等手段后影像学无法发现的残留癌灶,术后MRD阳性状态与肿瘤复发风险升高明显相关。在结直肠癌中,循环肿瘤DNA(ctDNA)是评估MRD的有效标志物... 详细信息

近年来,微小残留病灶(MRD)在实体瘤中的应用受到广泛关注,一般是指在接受根治性治疗,如手术切除等手段后影像学无法发现的残留癌灶,术后MRD阳性状态与肿瘤复发风险升高明显相关。在结直肠癌中,循环肿瘤DNA(ctDNA)是评估MRD的有效标志物,其在非转移性(Ⅰ~Ⅲ期)结直肠癌中的应用尤为重要,作为一种实时、准确和便捷的生物标志物,能够有效预警肿瘤复发,指导术后辅助化疗决策,并为复发监测提供重要信息。ctDNA检测技术的应用前景广阔,有望为结直肠癌患者带来更为精准的个体化治疗方案。本文综合分析了ctDNA在检测非转移性结直肠癌患者MRD中的应用进展,详细探讨并梳理了其在临床治疗决策中的指导作用,同时展望了该领域的未来发展方向。

关键词：结直肠肿瘤,非转移性循环肿瘤DNA 微小残留病灶精准医疗

正常和帕金森病患者基底神经节的转录差异分析

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解剖学报 2024年第4期55卷 482-492页

作者：俎高钰李凤娇咸伟伟郭旸洋赵百成李文生尤琳雅复旦大学基础医学院人体解剖学与组织学胚胎学系上海200032 上海市医学图像处理与计算机辅助手术重点实验室上海200032

目的分析人基底神经节各核团的分子标志物以及不同核团间、不同性别、疾病相关的差异表达,探讨差异表达基因的生物学功能。方法针对来源于10具人尸脑45个基底神经节核团样本,按是否有神经疾病分为对照组和帕金森病组,对照组按性别分为... 详细信息

目的分析人基底神经节各核团的分子标志物以及不同核团间、不同性别、疾病相关的差异表达,探讨差异表达基因的生物学功能。方法针对来源于10具人尸脑45个基底神经节核团样本,按是否有神经疾病分为对照组和帕金森病组,对照组按性别分为女性和男性组,提取各样本RNA进行高通量转录组测序。生物信息学分析鉴定对照组各核团的分子标志物、不同核团间、不同性别以及帕金森病相关的差异表达基因,并对差异表达基因进行基因富集分析和功能注释。结果测序分析发现,top差异表达基因包含尾状核的DRD1、FOXG1、FAM183A;黑质的SLC6A3、EN1、SLC18A2、TH;苍白球的MEPE、FGF10;底丘脑的SLC17A6、PMCH、SHOX2等。其中,壳核top差异表达基因与尾状核存在部分重叠,如DRD1、FOXG1等。对照组不同核团间鉴定出大量差异表达基因,尾状核与苍白球间存在数量最多的差异表达基因(9321),其次是壳核与苍白球间(6341),尾状核与黑质间(6054)。黑质与底丘脑间存在数量最少的差异表达基因(44)。基因富集分析发现,尾状核与苍白球间下调基因显著富集在神经元髓鞘形成、细胞迁移调节等;壳核与苍白球上调基因富集在化学突触传递、膜电位调节、金属离子转运、神经递质转运等,而下调基因富集在神经元髓鞘形成、细胞黏附等;尾状核与黑质上调基因富集在化学突触传递、轴突传导等,而下调基因富集在神经元髓鞘形成等。另外,尾状核、壳核、黑质、苍白球和底丘脑分别鉴定到性别差异上调基因468、548、1402、333和341个,以及下调基因756、988、2532、444和1372个。基因富集分析发现,上调基因大多富集在免疫反应相关通路,下调基因富集在化学突触传递等。最后,尾状核、壳核、黑质、苍白球和底丘脑分别鉴定出帕金森病特异上调基因709、852、276、507和416个,以及下调基因830、2014、1218、836和1730个。基因富集分析发现,上调基因大多富集在凋亡信号调节,下调基因大多富集在化学突触传递、动作电位调节等。结论我们发现并分析了人基底神经节不同核团的分子标志物、核团间差异、性别差异和帕金森病的相关差异。

关键词：基底神经节帕金森病高通量转录组测序差异表达分析人

mB7AP-exCD40L融合蛋白的分子设计及其在Pichia pastoris中的表达和生物活性

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复旦学报（医学版） 2005年第4期32卷 401-406,F003页

作者：陈晋储以微邵先安任学芳张洪勇高海峰何球藻熊思东复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室-上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的小鼠B7反义肽与小鼠CD40L胞外区融合蛋白(mB7AP-exCD40L)的分子模拟设计及其酵母表达体系的建立,研究其酵母表达产物的生物活性。方法分子模拟设计mB7AP-exCD40L;构建pPIC9K-mB7AP-exCD40L质粒并用电击法转化PichiapastorisGS115。W... 详细信息

目的小鼠B7反义肽与小鼠CD40L胞外区融合蛋白(mB7AP-exCD40L)的分子模拟设计及其酵母表达体系的建立,研究其酵母表达产物的生物活性。方法分子模拟设计mB7AP-exCD40L;构建pPIC9K-mB7AP-exCD40L质粒并用电击法转化PichiapastorisGS115。Westernblot鉴定融合蛋白的表达,混合淋巴细胞反应(MLR)研究mB7AP-exCD40L对淋巴细胞增殖的影响。结果构建的重组Pichiapastoris实现了mB7AP-exCD40L的分泌表达,表达蛋白质的相对分子质量约2.6×103,对MLR具有抑制作用。结论分子模拟设计的mB7AP-exCD40L在Pichiapastoris表达体系成功表达,为进一步研究mB7AP-exCD40L在抗移植排斥反应中的作用奠定了基础。

关键词： pastoris 融合蛋白生物活性分子设计混合淋巴细胞反应重组Pichia Western 抗移植排斥反应酵母表达体系分子模拟淋巴细胞增殖相对分子质量 CD40L B7反义肽 GS115 表达产物 blot 分泌表达抑制作用胞外区电击法

SARS-Cov M蛋白的真核表达及其免疫原性研究

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复旦学报（医学版） 2005年第1期32卷 21-24页

作者：童德妍汪晓华郑秀娟关庆东熊思东复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室-上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的初步研究SARS-Coy病毒M蛋白基因的真核表达效率和免疫原性为进一步的疫苗研究奠定基础。方法以PCR方法在全病毒基因组文库中获得全长M基因,分别克隆至pcDNA4-his／myc和pVAON33载体获得重组质粒pcDNA4-his／myc-M和pVAON33-M。... 详细信息

目的初步研究SARS-Coy病毒M蛋白基因的真核表达效率和免疫原性为进一步的疫苗研究奠定基础。方法以PCR方法在全病毒基因组文库中获得全长M基因,分别克隆至pcDNA4-his／myc和pVAON33载体获得重组质粒pcDNA4-his／myc-M和pVAON33-M。以Western Blot方法利用融合分子羧基段的myc表位检测pcDNA4-his／myc-M转染的293T细胞中M蛋白的真核表达。以ELISA方法检测pVAON33-M质粒基因免疫小鼠诱导产生特异性抗血清。结果pcDNA4-his／myc-M转染后48 h可检测到SARS-Cov M蛋白表达。 pVAON33-M基因免疫能够诱导产生M特异的体液免疫应答。结论本研究的结果表明SARS-Cov M蛋白可以在真核细胞中有效表达并有良好免疫原性,可以作为SARS-Cov疫苗研制的候选抗原之一。

关键词： M蛋白 SARS-Cov 真核表达免疫原性研究转染诱导 DNA 真核细胞克隆文库