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渭南市羊小反刍兽疫监测与分析

动物医学进展 2024年第9期45卷 138-141页

作者：徐梦迪王国超南苹瑶秦鸽鸽韦唯吴奇强白鸽渭南市动物疫病预防控制中心陕西渭南714000

为评估渭南市羊小反刍兽疫的免疫抗体水平及病毒感染状况,对2019-2022年在渭南市采集的2 499份血清学样品和606份病原学样品,分别采用阻断ELISA方法和荧光RT-PCR方法进行免疫抗体检测和病毒核酸检测。结果显示,小反刍兽疫免疫抗体个体... 详细信息

为评估渭南市羊小反刍兽疫的免疫抗体水平及病毒感染状况,对2019-2022年在渭南市采集的2 499份血清学样品和606份病原学样品,分别采用阻断ELISA方法和荧光RT-PCR方法进行免疫抗体检测和病毒核酸检测。结果显示,小反刍兽疫免疫抗体个体合格率为88.24%,区域场群合格率为91.99%,不同区域免疫抗体水平合格率均高于农业农村部的免疫要求(≥70%)。分类统计不同年份和不同场点类型的免疫抗体合格率均达到国家免疫效果评估要求。病原学样品病毒核酸均为阴性。结果表明渭南市小反刍兽疫防控效果较好,但仍需持续做好小反刍兽疫的强制免疫及监测,确保养殖安全。

关键词：羊小反刍兽疫监测

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楼房养猪生物安全关键点盘点与分析

猪业科学 2024年第7期41卷 24-25页

作者：孙华伟张敬峰江苏省农业科学院兽医所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家动物疫病南京观测实验点江苏南京210014

2023年6月15日,三部委联合制定印发《全国现代设施农业建设规划(2023—2030年)》,体现了国家对楼房养猪的鼓励和支持。但楼房养猪是一个系统工程,养猪从业者应以理性、客观、开放和包容的态度看待这一养猪模式,在实践中不断完善和提高,... 详细信息

2023年6月15日,三部委联合制定印发《全国现代设施农业建设规划(2023—2030年)》,体现了国家对楼房养猪的鼓励和支持。但楼房养猪是一个系统工程,养猪从业者应以理性、客观、开放和包容的态度看待这一养猪模式,在实践中不断完善和提高,才能让楼房养猪更好地服务于产业发展。

关键词：现代设施农业系统工程盘点养猪模式从业者

鸭疫里默氏杆菌耐药基因传播方式的鉴定及分布

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微生物学报 2024年

作者：杨宇豪姚弈舟朱德康张相德程安春刘马峰西南动物疫病防控技术教育部工程研究中心四川省动物疫病防控国际联合研究中心动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心江苏益客食品集团股份有限公司

【目的】鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer， RA）是一种感染鸭、鹅等禽类的革兰氏阴性病原菌。该菌的临床分离株具有多重耐药性且具有逐年增加的趋势，然而耐药基因在该菌的传播方式未被明确鉴定。本研究旨在鉴定耐药基因在... 详细信息

【目的】鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer， RA）是一种感染鸭、鹅等禽类的革兰氏阴性病原菌。该菌的临床分离株具有多重耐药性且具有逐年增加的趋势，然而耐药基因在该菌的传播方式未被明确鉴定。本研究旨在鉴定耐药基因在鸭疫里默氏杆菌的传播方式，以及这些耐药基因在该菌临床分离株中的分布情况。【方法】测定参考菌株RA ATCC 11845、临床分离株RA CH-1、RA CH-2对10类28种药物的耐药表型；通过基因组分析和基因缺失株的构建鉴定耐药基因；自然转化实验鉴定其耐药基因传播方式；通过PCR检测这些耐药基因在不同临床菌株的分布情况。【结果】耐药检测结果表明，鸭疫里默氏杆菌RA CH-1株、RA CH-2株对β-内酰胺类、四环素类、大环内酯类、林可胺类及酰胺醇类等药物均具有耐药性，而RA ATCC 11845株对以上药物敏感；13个耐药基因分别缺失后对相关药物变的敏感，表明其参与耐药；以上耐药基因均可通过自然转化方式转移至敏感菌株RA ATCC11845；相关耐药基因在2017-2023年分离的100株临床株的检出率最低为3%，最高为89%。【结论】耐药基因在鸭疫里默氏杆菌可通过自然转化的形式进行传播，不同耐药基因在该菌临床分离株中的分布不同，其中tetX1耐药基因携带率最高，blaOXA2耐药基因携带率最低。

关键词：鸭疫里默氏杆菌耐药基因传播方式自然转化

鸡chNHE1精准基因编辑细胞系的构建及其抗ALV-J感染的研究

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畜牧兽医学报 2024年

作者：张学富陈运通范文瑞张子博于蒙蒙王素艳祁小乐李留安高玉龙天津农学院动物科学与动物医学学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室禽免疫抑制病创新团队

为构建ALV-J受体分子chNHE1精准基因编辑细胞系，本研究利用荧光标记的CRISPR/Cas9系统，在DF-1细胞中将chNHE1介导ALV-J进入宿主细胞的关键氨基酸V33进行突变、W38进行缺失，同时将编码第34-37位氨基酸的密码子同义替换。通过流式细胞... 详细信息

为构建ALV-J受体分子chNHE1精准基因编辑细胞系，本研究利用荧光标记的CRISPR/Cas9系统，在DF-1细胞中将chNHE1介导ALV-J进入宿主细胞的关键氨基酸V33进行突变、W38进行缺失，同时将编码第34-37位氨基酸的密码子同义替换。通过流式细胞分选获得48株单克隆细胞系，PCR及测序分析结果显示，其中有14株单克隆细胞系的chNHE1成功发生V33突变、W38缺失以及34-37位氨基酸的密码子同义替换，基因编辑效率为29%。为了验证chNHE1基因编辑DF-1细胞系的遗传稳定性及增殖水平，对传至第25代的细胞系进行测序分析，结果显示，chNHE1基因未发生回复性突变；进一步细胞计数分析结果显示，chNHE1基因编辑细胞系增殖水平未受到影响；为了评价chNHE1基因编辑细胞系抗ALV-J感染的能力，分别利用ALV-J荧光报告病毒（ALV-J-GFP）及ALV-J原型毒株（HPRS-103）对其进行病毒感染试验，荧光观察结果及流式细胞分析结果显示，chNHE1基因编辑细胞系可完全抵抗0.1 MOI ALV-J-GFP的感染；进一步间接免疫荧光试验、PCR扩增试验以及病毒滴度测定试验结果显示，chNHE1基因编辑细胞系可完全抵抗0.1 MOI HPRS-103毒株及0.1 MOI JL08CH3-1毒株的感染。本研究利用荧光标记的CRISPR/Cas9系统结合流式细胞分选，成功构建了chNHE1基因编辑细胞系，其可完全抵抗ALV-J的感染，且该细胞系遗传稳定性及增殖活性良好，为建立抗ALV-J感染的新技术提供了理论支持及基因编辑靶点。

关键词： DF-1 chNHE1 ALV-J 基因编辑

多房棘球绦虫蛋白Musashi-1的克隆及RNA结合功能初步鉴定

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中国兽医科学 2024年第10期 1377-1384页

作者：吴易璇仲顺虎郭小腊陈轶霞西北民族大学生命科学与工程学院临夏市动物疫病预防控制中心中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防治国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

初步探究Musashi-1蛋白在多房棘球蚴中的分布及其与RNA结合的能力。利用RACE技术获得Musashi-1全长，扩增该基因并克隆到载体pET-28a上，表达并纯化Musashi-1重组蛋白用于制备多克隆抗体；免疫荧光观察Musashi-1在多房棘球蚴组织中的分... 详细信息

初步探究Musashi-1蛋白在多房棘球蚴中的分布及其与RNA结合的能力。利用RACE技术获得Musashi-1全长，扩增该基因并克隆到载体pET-28a上，表达并纯化Musashi-1重组蛋白用于制备多克隆抗体；免疫荧光观察Musashi-1在多房棘球蚴组织中的分布；双荧光素酶试验检测Musashi-1蛋白与RNA结合能力。结果显示多房棘球绦虫Musashi-1基因有两个转录本，分别为1 017 bp和966 bp。Western-blot结果表明，制备的多克隆抗体能够特异性识别天然多房棘球绦虫Musashi-1蛋白。免疫荧光试验表明Musashi-1蛋白主要分布在多房棘球蚴生发层细胞中。在亚细胞水平上，Musashi-1蛋白主要分布在细胞质中。双荧光素酶试验表明Musashi-1蛋白能够与Musashi家族共识别RNA基序(富含GUA)结合。本研究确定了编码Musashi-1基因的全长，证实Musashi-1蛋白主要分布在多房棘球蚴生发层细胞中，具有RNA结合能力。本研究为进一步探讨多房棘球绦虫Musashi-1蛋白在多房棘球蚴生发层细胞中的功能提供了帮助。

关键词：多房棘球绦虫 RNA结合蛋白 Musashi-1 生发层

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oppCDF基因缺失对鼠伤寒沙门菌致病性的影响

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中国畜牧兽医 2024年第8期51卷 3519-3527页

作者：叶景芬张家莉陈世雄杨婉武绍碧杨琦贵州大学动物科学学院贵阳550025 贵州大学动物疫病研究所贵阳550025

[目的]沙门菌是常见的人畜共患病原菌,可引发多种食源性疾病,鼠伤寒沙门菌是沙门菌的重要血清型之一,具有重要的公共卫生研究意义。本试验旨在研究转运蛋白相关基因oppCDF对鼠伤寒沙门菌生物特性的影响,为新型沙门菌减毒疫苗的制备提供... 详细信息

[目的]沙门菌是常见的人畜共患病原菌,可引发多种食源性疾病,鼠伤寒沙门菌是沙门菌的重要血清型之一,具有重要的公共卫生研究意义。本试验旨在研究转运蛋白相关基因oppCDF对鼠伤寒沙门菌生物特性的影响,为新型沙门菌减毒疫苗的制备提供理论基础。[方法]本试验通过比较鼠伤寒沙门菌野生株及已成功构建的oppCDF基因缺失株的生化特性、遗传稳定性、耐药性、黏附性、侵袭力、半数致死量(LD_(50))及小鼠肝脏、脾脏载菌量,分析oppCDF基因与鼠伤寒沙门菌生物特性之间的关系。[结果]oppC、oppD和oppF基因分别缺失后鼠伤寒沙门菌生化特性未发生明显改变且能稳定遗传,表明oppCDF基因表型未发生变化;与野生株STM LT2相比,基因缺失株STM LT2ΔoppC对红霉素变为敏感、氯霉素敏感性降低,STM LT2ΔoppD对头孢氨苄敏感性降低,STM LT2ΔoppF对复方新诺明敏感性增强,3株基因缺失株均对氨苄西林不敏感。3株基因缺失株LD_(50)检测结果显示,与野生株STM LT2相比,STM LT2ΔoppC毒力下降,但STM LT2ΔoppD、STM LT2ΔoppF毒力分别上升1.6和8.6倍;STM LT2ΔoppC的黏附性显著降低(P<0.05),侵袭力降低,定植力极显著下降(P<0.01);STM LT2ΔoppD的黏附性、侵袭力降低,但定植力极显著上升(P<0.01);STM LT2ΔoppF的黏附性显著降低(P<0.05),但侵袭力显著增强(P<0.05),定植力极显著上升(P<0.01)。[结论]oppC基因缺失可降低鼠伤寒沙门菌的致病性,但oppD、oppF基因缺失可增强鼠伤寒沙门菌的致病性,以上结果为沙门菌的致病机制研究提供了理论基础。

关键词：鼠伤寒沙门菌 oppCDF基因生物学特性致病性

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养猪行业内卷的本质与破局

猪业科学 2024年第9期41卷 26-28,6页

作者：孙华伟张敬峰江苏省农业科学院兽医所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家动物疫病南京观测实验点江苏南京210014

0引言在2024年夏季巴黎奥运会的男子万米比赛中,一场前所未有的精彩赛事将会永远被铭记在奥利匹克史册上——共13人组成的冲刺集团均冲进了“27分大关”,这13位万米长跑高手集体打破了尘封16年的世界纪录。这一惊艳的成绩立即震惊世界,... 详细信息

0引言在2024年夏季巴黎奥运会的男子万米比赛中,一场前所未有的精彩赛事将会永远被铭记在奥利匹克史册上——共13人组成的冲刺集团均冲进了“27分大关”,这13位万米长跑高手集体打破了尘封16年的世界纪录。这一惊艳的成绩立即震惊世界,无数人惊呼,活久见,见过破世界纪录的,没见过世界纪录被“群殴”的。

关键词：世界纪录奥运会养猪行业赛事

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绵羊肺炎支原体贵州临床分离株GZ1 p109基因序列分析与原核表达

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黑龙江畜牧兽医 2024年第5期 61-65页

作者：曾庆行申艳娟冉芳菲杨鹏成虹松韦秒粘李英余潆朱二鹏程振涛贵州大学动物科学学院贵阳550025 贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室贵阳550025

为了探究绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)贵州临床分离株GZ1 p109基因生物信息及重组蛋白p109的免疫原性,试验采用PCR扩增Mo p109部分基因并克隆至T克隆载体pMD-19T中,经DNA测序后进行生物信息学分析;将双酶切后的p109基... 详细信息

为了探究绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)贵州临床分离株GZ1 p109基因生物信息及重组蛋白p109的免疫原性,试验采用PCR扩增Mo p109部分基因并克隆至T克隆载体pMD-19T中,经DNA测序后进行生物信息学分析;将双酶切后的p109基因片段与原核表达载体pColdⅠ连接,然后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,用IPTG诱导重组蛋白表达,然后进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果表明:扩增得到的Mo贵州临床分离株GZ1 p109部分基因片段大小为576 bp,编码蛋白的分子量为21.33 ku,由192个氨基酸组成;p109蛋白的二级结构主要有α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲,第1~17,24~35,52~63,72~122,138~148,150~153,161~173,182~192位的氨基酸区段抗原指数相对较高;Mo贵州临床分离株GZ1与Mo 274株(登录号为CP079199)的亲缘关系很近;试验成功构建了pColdⅠ-p109原核表达重组质粒,表达的目的蛋白大小为27 ku,该重组蛋白p109能够与抗Mo阳性血清发生特异性结合。说明试验制备的重组蛋白p109具备良好的免疫原性。

关键词：绵羊肺炎支原体 p109基因原核表达免疫原性序列分析生物信息学分析

塞内卡病毒A完整病毒和空衣壳的分离及抗体应答分析

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畜牧兽医学报 2024年

作者：李梅穆素雨董虎李硕潘颂佳郭慧琛孙世琪中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室

塞内卡病毒A（SenecavirusA，SVA）在复制过程中可形成完整病毒和空衣壳，他们的分离条件和抗体应答差异目前还是未知的。本研究利用盐酸胍形成SVA空衣壳，通过优化不同的密度梯度、介质、转速、时间条件进行超速离心，获得分离SVA完整... 详细信息

塞内卡病毒A（SenecavirusA，SVA）在复制过程中可形成完整病毒和空衣壳，他们的分离条件和抗体应答差异目前还是未知的。本研究利用盐酸胍形成SVA空衣壳，通过优化不同的密度梯度、介质、转速、时间条件进行超速离心，获得分离SVA完整病毒和空衣壳的最佳条件，并按 SVA完整病毒12.5 μg·只-1，空衣壳12.5 μg·只-1肌肉注射免疫BALB/c小鼠，免疫后1～7周检测特异性抗体和中和抗体。结果显示SVA的MOI=1时感染细胞2 h加入100 mmol·L-1盐酸胍可以使SVA完整病毒全部形成空衣壳；在10%～50%氯化铯，36 000 r·min-1，离心2.5 h是区分SVA完整病毒和空衣壳的最佳条件；而且SVA完整病毒与空衣壳诱导小鼠的特异性抗体和中和抗体水平无显著差异（P=ns）。本研究为塞内卡病毒A完整病毒和空衣壳的分离纯化、重组SVA 病毒样颗粒疫苗的开发提供参考。

关键词：塞内卡病毒A 完整病毒空衣壳分离条件优化免疫原性