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基于UPLC-Q-Orbitrap-MS分析芪苈强心胶囊的物质基础及其体内分布

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：张建伟华杰凯李荣胜王琴常昕楠刘伟沈杰上海中医药大学附属曙光医院国家中医药管理局中药制剂三级实验室

目的：基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Orbitrap-MS），定性分析芪苈强心胶囊中的化学成分及其体内分布。方法：采用UPLC-Q-Orbitrap-MS对芪苈强心胶囊供试品溶液、灌胃给药后小鼠的血清及脑、心脏、肺脏... 详细信息

目的：基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Orbitrap-MS），定性分析芪苈强心胶囊中的化学成分及其体内分布。方法：采用UPLC-Q-Orbitrap-MS对芪苈强心胶囊供试品溶液、灌胃给药后小鼠的血清及脑、心脏、肺脏、脾脏、肝脏、肾脏中的化学成分进行检测，通过Thermo Xcalibur 2.2软件构建化合物信息数据库，并拟合准分子离子对应的化合物分子式，以保留时间、精确相对分子质量、碎片离子等信息，结合对照品和文献数据，鉴定芪苈强心胶囊中化学成分及其体内分布。结果：从芪苈强心胶囊中共鉴定或推测出233种化合物，包括萜类70种、黄酮类58种、有机酸类24种、生物碱类16种、甾类20种、香豆素类7种、其他类38种，其中73种通过对照品鉴定。组织分布结果显示，分别在血、脑、心脏、肺脏、脾脏、肝脏及肾脏中检测到移行成分71、17、38、33、32、58、43种。奎宁酸、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱等37种化学成分移行入血和心脏；毛蕊异黄酮、美迪紫檀烷、芒柄花素、泽泻醇B和泽泻醇A等14种化学成分在血和各组织中均有分布。结论：该研究较全面地分析了芪苈强心胶囊的物质基础及其体内分布情况，其中黄芪甲苷、丹酚酸B、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg3、毛蕊异黄酮苷和芥子碱等成分可能是治疗心力衰竭的重要成分，可为芪苈强心胶囊的质量控制和药效物质基础研究提供依据。

关键词：芪苈强心胶囊化学成分分析成分归属超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Orbitrap-MS) 组织分布物质基础心力衰竭

基于网络毒理学结合网络药理学及实验验证探讨黄芪减雷公藤肾毒性机制

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中药药理与临床 2024年

作者：吴溪吴德玲魏良兵刘涛王紫柠孟楣高家荣安徽中医药大学新安医学教育部重点实验室安徽中医药大学第一附属医院国家中医药管理局中药制剂三级实验室

目的：利用网络毒理学筛选雷公藤致肾毒性靶点，利用网络药理学与分子对接探讨黄芪减雷公藤肾毒性的作用机制，并进行动物实验验证。方法：在OMIM、PharmGKB、GeneCards收集肾毒性相关靶点，在CTD检索雷公藤肾毒性靶点，Venny2.1.0获得... 详细信息

目的：利用网络毒理学筛选雷公藤致肾毒性靶点，利用网络药理学与分子对接探讨黄芪减雷公藤肾毒性的作用机制，并进行动物实验验证。方法：在OMIM、PharmGKB、GeneCards收集肾毒性相关靶点，在CTD检索雷公藤肾毒性靶点，Venny2.1.0获得雷公藤肾毒性交集靶点；检索TCMSP、ETCM、以及文献补充收集黄芪成分，Swiss Target Prediction收集黄芪成分作用靶点，Venny2.1.0获得黄芪干预雷公藤肾毒性交集靶点；通过Cytoscape3.9.1构建网络图；利用Metascape对交集靶点进行GO功能和KEGG通路富集；Autodock4.2进行分子对接。根据预测结果进行动物实验验证，分别进行血清检测、病理组织下观察以及对KEGG分析中通路进行验证。结果：收集黄芪化学成分46个、雷公藤致肾毒性靶点425个、黄芪干预雷公藤肾毒性潜在靶点83个。富集分析发现共同靶点主要参与细胞对化学应激的反应、细胞迁移、细胞运动等生物工程。KEGG信号通路排除广泛通路后主要富集于AGE-RAGE、HIF-1、C型凝集素受体、IL-17、PI3K/AKT等信号通路。PPI结果显示AKT1、IL6、VEGFA可能是黄芪干预雷公藤肾毒性的核心靶点，其中AKT1为最重要的核心靶点。“中药-成分-靶点-通路”结果显示异鼠李素、华良姜素、山柰酚、槲皮素、3-羟基-9，10-二甲氧基紫檀烷可能是黄芪干预雷公藤肾毒性的核心成分。分子对接结果发现黄芪中以上核心成分与核心靶点结合后，均与AKT1结合最强。动物实验结果说明模型对照组大鼠出现急性肾损伤，血清SCr、BUN含量显著升高（P<0.01），雷公藤水提物能够明显下调PI3K、AKT mRNA表达，而配伍黄芪水提物后能够上调其表达。结论：黄芪中核心成分可能作用于AKT1核心靶点，通过调控PI3K/AKT通路发挥干预雷公藤肾毒性的作用。

关键词：黄芪雷公藤网络毒理学和网络药理学肾毒性机制

长链非编码RNA AW112010通过miR-204/POU2F2轴改善衰老小鼠脂肪细胞的胰岛素抵抗

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中华内分泌代谢杂志 2024年第1期40卷 44-52页

作者：王锐王淑文张一凡胡雅琪原琪温媛陈晓玲卢婷郑颖林志勇薛梦珍王雅琦夏芳奇朱蕾奇袁成福三峡大学基础医学院国家中医药管理局中药药理(肿瘤)科研三级实验室宜昌443002

目的探讨长链非编码RNA AW112010(lncRNA AW112010)是否可能通过miR-204/POU类同源盒2(POU2F2)信号通路改善衰老脂肪细胞的胰岛素抵抗。方法体内实验:将C57BL/6小鼠按体重分成年轻对照组(4月龄)、衰老模型组(18月龄);实时荧光定量PCR及W... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA AW112010(lncRNA AW112010)是否可能通过miR-204/POU类同源盒2(POU2F2)信号通路改善衰老脂肪细胞的胰岛素抵抗。方法体内实验:将C57BL/6小鼠按体重分成年轻对照组(4月龄)、衰老模型组(18月龄);实时荧光定量PCR及Western印迹法检测附睾脂肪组织中lncRNA AW112010、miR-204-5p、POU2F2、衰老相关指标(p16、p21)及胰岛素信号通路基因[胰岛素受体(INSR)、胰岛素受体底物1(IRS1)、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)]的表达量。体外实验:用阿霉素诱导3T3-L1衰老脂肪细胞模型,β-gal染色观察细胞衰老,成功构建miR-204抑制剂及miR-204模拟物的小干扰RNA,转染3T3-L1脂肪细胞。结果实时荧光PCR与Western印迹结果表明,与年轻小鼠比较,衰老小鼠附睾脂肪组织中AW112010的表达水平增高,而miR-204-5p的表达水平降低;衰老小鼠附睾脂肪组织中POU2F2、p16、p21的表达水平增高,而INSR、IRS1、PI3K、GLUT4 mRNA及蛋白的表达水平降低。β-gal染色结果表明,阿霉素诱导的3T3-L1衰老脂肪细胞数量明显增多,且与对照组相比,阿霉素诱导的衰老脂肪细胞中AW112010、POU2F2、p16、p21的表达量增高,而miR-204-5p、INSR、IRS1、PI3K、GLUT4的表达量降低,培养基中葡萄糖的剩余量增多。与对照组相比,miR-204过表达后,衰老指标p16、p21及靶基因POU2F2的表达量降低;INSR、GLUT4的表达量增高。结论衰老小鼠脂肪细胞中上调的lncRNA AW112010可能通过靶向miR-204-5p/POU2F2/IRS1导致胰岛素抵抗。

关键词：衰老 LncRNA AW112010 miR-204-5p POU2F2 胰岛素抵抗

基于网络药理学和UPLC指纹图谱的紫苏质量标志物（Q-Marker）预测

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天然产物研究与开发 2024年

作者：张良琦陈凡张子桉林云周春娇汤卓翰江星明肖美凤湖南中医药大学药学院中药成药性与制剂制备湖南省重点实验室中药药性与药效国家中医药管理局重点实验室

基于UPLC指纹图谱和网络药理学法分析并筛选紫苏潜在质量标志物（Q-Marker）。首先建立15批紫苏叶及14批紫苏梗的指纹图谱，并对不同来源、批次的紫苏叶和紫苏梗中的成分及含量进行比较，标定紫苏不同部位的共有峰和非共有峰；采用网络... 详细信息

基于UPLC指纹图谱和网络药理学法分析并筛选紫苏潜在质量标志物（Q-Marker）。首先建立15批紫苏叶及14批紫苏梗的指纹图谱，并对不同来源、批次的紫苏叶和紫苏梗中的成分及含量进行比较，标定紫苏不同部位的共有峰和非共有峰；采用网络药理学法构建紫苏“成分-靶点”网络图，并构建靶点蛋白互作网络图，预测紫苏Q-Marker。本研究建立的紫苏不同部位的指纹图谱，共检测到了5种成分，其中迷迭香酸、咖啡酸、木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、木犀草素-7-O-二葡萄糖醛酸苷为叶和梗的共有成分，芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷为紫苏叶特有成分。筛选得到包括MAPK1、PIK3CA等在内的14个核心靶点，对以上靶点进行GO和KEGG功能分析可知涉及肿瘤坏死因子、新型冠状病毒、脂质和动脉粥样硬化等通路，最后构建“成分-靶点-通路”网络图，选取排名前4的靶蛋白与4个成分进行分子对接验证，结果显示成分与蛋白之间具有十分良好的结合性能。本实验基于UPLC法建立紫苏不同部位多成分含量测定方法，此方法操作简单、准确度高，可作为紫苏质量检测的参考方法；同时结合网络药理学和分子对接技术预测迷迭香酸、咖啡酸、木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、木犀草素-7-O-二葡萄糖醛酸苷为紫苏不同部位的潜在质量标志物，以此来评价紫苏“多成分-多靶点-多通路”的协同作用，为紫苏的质量控制提供了理论依据，同时也为后续的紫苏药效物质基础和作用机制提供坚实的基础。

关键词：紫苏指纹图谱质量标志物网络药理学化学成分

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS的佛耳草多成分定量分析

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中国实验方剂学杂志 2024年第9期30卷 148-155页

作者：曹春艳张家祺赵振铎沈沁戚胜兰刘伟张立超上海中医药大学附属市中医医院上海200071 上海中医药大学附属曙光医院国家中医药管理局中药制剂三级实验室肝肾疾病证教育部重点实验室上海市中医临床重点实验室上海201203

目的:建立一种快速稳定的液质联用方法同时分析佛耳草中17种化学成分的含量,为完善佛耳草质量标准提供实验依据。方法:采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱法(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)对15批不同产地佛耳草中的17种成分进... 详细信息

目的:建立一种快速稳定的液质联用方法同时分析佛耳草中17种化学成分的含量,为完善佛耳草质量标准提供实验依据。方法:采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱法(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)对15批不同产地佛耳草中的17种成分进行定量分析,使用ACQUITY UPLC?BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱(0~1.0min,8%A;1.0~4.0min,8%~26%A;4.0~9.0min,26%A;9.0~14.0min,26%~34%A;14.0~14.5min,34%~45%A;14.5~15.0min,45%~60%A;15.0~18.0min,60%~90%A;18.0~19.0min,90%A;19.0~19.01min,90%~8%A;19.01~20.0 min,8%A),流速0.3 mL·min^(-1),柱温40℃,进样量2μL;运用电喷雾离子源,正、负离子模式全扫描,扫描范围m/z 100~1000。结果:所建立的测定方法经方法学验证良好,能够用于17种成分的同时定量。15批佛耳草样品中奎宁酸、没食子酸、原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、1,3-O-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸A、异槲皮苷、1,5-O-二咖啡酰奎宁酸、大波斯菊苷、紫云英苷、异绿原酸C、木犀草素、芹菜素、高车前素的质量范围依次为39.60~179.12、0.17~0.84、2.41~8.38、4.33~31.50、13.63~180.38、2.43~14.75、1.16~19.68、0.49~5.63、55.77~445.16、0.23~10.26、62.04~530.10、1.11~18.01、11.36~90.61、12.22~65.98、7.22~69.84、3.37~45.65、0.30~2.59μg·g^(-1),其中有机酸类成分在佛耳草中含量比黄酮类成分更高,以1,5-O-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸A、奎宁酸、绿原酸含量较高,同时,贵州产地佛耳草样品中黄酮类成分含量高于江苏产地样品,江苏产地佛耳草样品中有机酸类成分含量则高于贵州产地样品。结论:建立的检测方法可用于佛耳草中17种成分含量的快速、准确测定,明确了佛耳草主要成分的含量范围,可为佛耳草质量控制标志物的选择提供参考。

关键词：佛耳草定量分析黄酮类有机酸类超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱法(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS) 质量控制质量标志物

天然产物中生物碱类成分调血脂作用机制研究进展

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中草药 2024年第5期55卷 1717-1727页

作者：周昶黄蓉蔡园杨乐怡董世芬姜艳艳北京中医药大学中药学院北京102488 国家中医药管理局“中药经典名方有效物质发现”重点研究室北京102488

高脂血症是临床常见疾病,也是动脉粥样硬化、缺血性心脏病、脑中风等心血管系统疾病的重要诱因。天然产物中生物碱类成分具有显著的调血脂作用,其机制主要包括促进肝脏胆固醇摄取、抑制肝脏胆固醇合成、促进胆固醇转化、抑制肠道胆固醇... 详细信息

高脂血症是临床常见疾病,也是动脉粥样硬化、缺血性心脏病、脑中风等心血管系统疾病的重要诱因。天然产物中生物碱类成分具有显著的调血脂作用,其机制主要包括促进肝脏胆固醇摄取、抑制肝脏胆固醇合成、促进胆固醇转化、抑制肠道胆固醇吸收、促进脂肪酸氧化、抑制脂肪生成、促进脂肪水解、调节胆汁酸代谢、调节肠道菌群、抗脂质过氧化、减轻胰岛素抵抗等。通过查阅近10年国内外相关文献,从作用基因靶点和作用通路层面,对天然产物中生物碱类化合物调血脂作用机制综述。为生物碱类成分及含有生物碱类成分的中药或天然药物的临床应用提供科学依据。

关键词：生物碱小檗碱荷叶碱吴茱萸碱高脂血症调血脂调节胆固醇

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防风多糖人工胃液代谢产物分析

中国中药杂志 2024年第2期49卷 498-508页

作者：李洁徐畅孙萌苏成园靖淑瑾姜艳艳刘斌北京中医药大学中药学院北京102488 国家中医药管理局“中药经典名方有效物质发现”重点研究室北京102488

为了深入了解防风多糖能否在胃液中代谢及代谢情况,该文以防风多糖的人工胃液代谢产物为研究对象,结合斑马鱼免疫活性评价,采用高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱(HPLC-IT-TOF-MS)技术系统分析了防风多糖的人工胃液代谢产物。根据所获... 详细信息

为了深入了解防风多糖能否在胃液中代谢及代谢情况,该文以防风多糖的人工胃液代谢产物为研究对象,结合斑马鱼免疫活性评价,采用高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱(HPLC-IT-TOF-MS)技术系统分析了防风多糖的人工胃液代谢产物。根据所获得的精确相对分子质量、色谱保留行为、质谱裂解规律、对照品比对以及相关文献报道,共分析鉴定了19种代谢产物。其中,代谢产生的单糖5种,寡糖14种。胃液代谢产物中可以准确鉴定出多种还原糖,包括甘露糖、葡萄糖、鼠李糖以及木糖。斑马鱼药效评价结果显示,防风多糖经过胃液代谢后仍具有较好的免疫活性,W3(人工胃液代谢2 h)提高免疫细胞密度的作用最为显著。其中,胃液代谢物M1和M3(Hex-Hex-Man)可能与药理活性关系最为密切,可将其作为潜在的活性片段进行进一步研究。

关键词：防风多糖人工胃液代谢产物质谱鉴定

基于网络药理学探讨姜知母干预肺寒湿咳的作用机制

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中国中药杂志 2024年

作者：王雅竹王晓婷田书青高慧辽宁中医药大学药学院国家中医药管理局中药炮制技术传承基地(辽宁)

基于网络药理学、分子对接技术和实验验证探讨姜知母干预“肺寒湿咳”的作用机制，为姜知母治疗肺寒湿咳这一传统用法提供现代药理学依据。使用中药系统药理学数据库分析平台（TCMSP），根据类药性原则选择口服生物利用度（OB≥30%）、... 详细信息

基于网络药理学、分子对接技术和实验验证探讨姜知母干预“肺寒湿咳”的作用机制，为姜知母治疗肺寒湿咳这一传统用法提供现代药理学依据。使用中药系统药理学数据库分析平台（TCMSP），根据类药性原则选择口服生物利用度（OB≥30%）、药物相似性（DL≥0.18）作为筛选条件并结合相关文献来获得姜知母活性成分，建立姜知母活性成分库；采用SwissTargetPrediction数据库预测活性成分的潜在靶点；通过SymMap数据库筛选到中医证候“肺寒湿咳”对应西医症状为急性支气管炎；从人类基因数据库（GeneCards）和在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）的Genemap获得急性支气管炎疾病的相关靶点；利用Venny数据库获取成分与疾病的交集靶点；利用STRING平台和Cytoscape软件构建交集靶点的蛋白相互作用（PPI）网络；借助DAVID数据库对潜在治疗靶点进行GO功能富集和KEGG通路分析；采用AutoDock等软件对部分活性成分与潜在靶点进行分子对接验证；最后采用烟熏加寒冷刺激法制备小鼠急性支气管炎疾病模型进行验证。该研究共筛选出姜知母活性成分潜在作用靶点557个，药物-疾病共同靶点157个，富集分析得到 1072 个GO功能富集条目和169个KEGG通路富集条目；分子对接结果显示活性成分和MAPK14、MMP3蛋白有较好的结合能力，活性成分中结合能力最强的是timosaponinAIII；体内动物实验表明，除生知母低剂量组、生知母高剂量组、姜汤组外，其余各给药组均可减轻小鼠肺组织病变，减轻炎症细胞浸润，降低小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-1β、IL-18、TNF-α 炎症因子水平，下调小鼠肺组织MAPK14、MMP3mRNA及MAPK14、MMP3蛋白的表达，且姜知母的改善效果优于生知母。该研究利用网络药理学和实验验证初步揭示了姜知母可通过调控IL-17、TNF 等信号通路，抑制炎症反应，达到治疗肺寒湿咳的作用，验证了姜知母治疗肺寒湿咳这一传统用法的科学性，为姜汤浸知母传统特色炮制工艺的传承和临床应用提供科学依据。

关键词：知母生姜炮制肺寒湿咳急性支气管炎网络药理学

4味归肺经中药的黄酮成分簇“印迹模板”特征分析及其体外归经研究方法建立

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中国实验方剂学杂志 2024年第9期30卷 141-147页

作者：贺琪珺盛丹丹陈宇霞欧阳少琴邓凯文贺福元陈新宇湖南中医药大学第一附属医院长沙410007 湖南中医药大学药学院中药炮制与制剂制备工程技术实验室中医药超分子机理与数理特征化实验室中药成药性与制剂制备湖南省重点实验室中药药性与药效国家中医药管理局重点实验室长沙410208

目的:对归肺经4味中药黄酮成分簇的“印迹模板”特征进行研究,建立中药体外归肺经的研究方法。方法:以普通高等教育“十三五”国家级规划教材《中药学》中只归肺经的苍耳子、鱼腥草、金荞麦、射干等13味中药为基础,确定鱼腥草、金荞麦... 详细信息

目的:对归肺经4味中药黄酮成分簇的“印迹模板”特征进行研究,建立中药体外归肺经的研究方法。方法:以普通高等教育“十三五”国家级规划教材《中药学》中只归肺经的苍耳子、鱼腥草、金荞麦、射干等13味中药为基础,确定鱼腥草、金荞麦、射干、桑白皮4味代表中药,通过高效液相色谱法(HPLC)建立指纹图谱,并计算4味中药中所含各类成分的分子连接性指数,运用夹角余弦法计算其与平均分子连接性指数的相似性,以此建立构印定量关系,确定各成分归肺经次序。选择绿原酸、芦丁、槲皮苷、异槲皮苷、金丝桃苷、表儿茶素、野鸢尾苷共7种对照品验证模型的黄酮类成分整体的构印关系及其预测能力。结果:鱼腥草、金荞麦、射干和桑白皮共含有437种化学成分,其平均分子连接性指数相似度为0.9956,4味中药共含黄酮类成分204个,平均分子连接性指数相似度为0.9780,仅次于生物碱的0.9851。7个对照品的保留时间(t_(R))与分子连接性指数相似度(S)呈良好构印关系(t_(R)=831.4×S-790.3,r=0.8614,P中药的总量一阶矩为24.26 min,列位21,能表征整体的99.19%,7种对照品的药材峰面积总量一阶矩为20.00 min,列位46,能表征整体的98.68%。结论:黄酮类成分簇是研究归肺经的“印迹模板”特征的适宜探针,据此能建立起定量结构信息与tR关系的体外中药归经研究方法。

关键词：中药归经肺经印迹模版定量构印关系分子连接性指数经络相似度