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兽医实验室常见问题梳理

畜禽业 2024年第10期35卷 43-45,49页

作者：邱明双张毅陈弟诗邓飞周莉媛李丽邵靓四川省动物疫病预防控制中心四川成都610041

兽医实验室须安全、公正、科学、及时、准确地出具报告,而非尝试性的操作去找出数据,这就要求人员、场所环境、设施设备、管理体系等要素可控、适宜且能持续性改进。然而,受资金情况、疫病流行情况、管理目标、人员素质等因素影响,各兽... 详细信息

兽医实验室须安全、公正、科学、及时、准确地出具报告,而非尝试性的操作去找出数据,这就要求人员、场所环境、设施设备、管理体系等要素可控、适宜且能持续性改进。然而,受资金情况、疫病流行情况、管理目标、人员素质等因素影响,各兽医实验室存在各种问题,其中不乏适宜解决,且在现有条件下能够解决,但至今尚未解决的问题,尤其以老旧实验室、院校实验室、贫困地区实验室较突出。因此,梳理兽医实验室常见问题,为实验室能力提升提供参考。

关键词：兽医实验室质量管理考核问题

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黄铜O-P液采集探杯使用方法

四川畜牧兽医 2024年第6期51卷 52-53页

作者：陈冬陈斌张毅李淳梁璐琪姚玲王敏四川省动物疫病预防控制中心四川成都610041

1采集探杯介绍探杯,即牛羊O-P液采集杯,无统一规格,通常是根据实际需要联系厂家定制,也有成品在市面上售卖,主要用于采集牛羊口蹄疫感染前期、康复期或无临床症状疑似病例的食道-咽部分泌物。探杯材质以黄铜为主,其他材质的探杯,如钢制... 详细信息

1采集探杯介绍探杯,即牛羊O-P液采集杯,无统一规格,通常是根据实际需要联系厂家定制,也有成品在市面上售卖,主要用于采集牛羊口蹄疫感染前期、康复期或无临床症状疑似病例的食道-咽部分泌物。探杯材质以黄铜为主,其他材质的探杯,如钢制的探杯太硬,易划伤牛羊咽喉和食管壁,铝制的探杯太软,在进入食道前后易发生弯曲,不便操作,铁制的探杯易生锈,不便消毒和保存等,在实践中被逐渐淘汰。

关键词：咽部分泌物疑似病例牛羊口蹄疫食管壁黄铜食道

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四川种畜禽场家栖老鼠习性探究及防控措施

四川畜牧兽医 2024年第3期51卷 44-46,48页

作者：陈冬陈斌梁璐琪姚玲李淳李羽薇四川省动物疫病预防控制中心四川成都610041

对四川省80余家种畜禽场开展动物疫病净化过程中发现,部分场对老鼠的认识和防控还停留在上世纪七八十年代,对老鼠的习性了解不足。在鼠害防控方面,目前种畜禽场普遍采取与灭鼠专业公司签订合同的方式进行灭鼠,进场灭鼠的频率通常为一年... 详细信息

对四川省80余家种畜禽场开展动物疫病净化过程中发现,部分场对老鼠的认识和防控还停留在上世纪七八十年代,对老鼠的习性了解不足。在鼠害防控方面,目前种畜禽场普遍采取与灭鼠专业公司签订合同的方式进行灭鼠,进场灭鼠的频率通常为一年四次。但在非洲猪瘟防控后时代的大背景下,有的种畜禽场已放弃或弱化了这种方式,加之,有的灭鼠公司防控流于形式,灭鼠效果并不理想,甚至导致老鼠出现了更大的耐药性和更灵敏的危害趋避性。

关键词：非洲猪瘟灭鼠效果种畜禽场疫病净化防控措施鼠害防控老鼠习性

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不同类型的酸化剂在断奶仔猪上应用效果

中国饲料 2024年第4期 25-28页

作者：王仕凡临沭县动物疫病预防控制中心山东临沭276700

文章比较了3种不同类型的酸化剂(有机酸型酸化剂、有机酸-有机酸盐型酸化剂、包被酸化剂)在断奶仔猪上的应用效果。试验选取120头28日龄杜大长三元杂交断奶仔猪为试验对象,按体重、性别随机分成4组,每组5个重复,每个重复6头猪。分别向... 详细信息

文章比较了3种不同类型的酸化剂(有机酸型酸化剂、有机酸-有机酸盐型酸化剂、包被酸化剂)在断奶仔猪上的应用效果。试验选取120头28日龄杜大长三元杂交断奶仔猪为试验对象,按体重、性别随机分成4组,每组5个重复,每个重复6头猪。分别向日粮中添加3‰的有机酸酸化剂、有机酸-有机酸盐型酸化剂和包被酸化剂,对照组不加酸化剂。试验结果表明,断奶后35 d,3种不同酸化剂组日增重比空白对照组分别提高2.13%、7.54%和6.34%;料肉比分别降低2.00%、5.50%、4.50%;断奶后2周腹泻率分别降低66.25%、76.27%和78.74%。3种不同类型的酸化剂均可提高断奶仔猪的生长性能,改善腹泻状况。其中,在3‰的添加量下,有机酸-有机酸盐型酸化剂和包被酸化剂优于有机酸型酸化剂,分别在提高生长性能和抗腹泻方面具有最佳效果。

关键词：断奶仔猪酸化剂生长性能腹泻率

一株牛呼吸道冠状病毒的分离鉴定及部分生物学特征

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畜牧兽医学报 2024年第7期55卷 3094-3104页

作者：班玛王清陈曦岳怡苏玉蓉岳华汤承西南民族大学畜牧兽医学院成都610041 四川省阿坝州动物疫病预防控制中心阿坝州624011

牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)是引起牛呼吸道疾病和消化道疾病的重要病原之一。本研究旨在分离牛呼吸道冠状病毒(BRCV)并研究其部分生物学特性。采集暴发呼吸道疾病的肉牛鼻拭子,经荧光定量PCR鉴定为BCoV阳性。将阳性样本接种... 详细信息

牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)是引起牛呼吸道疾病和消化道疾病的重要病原之一。本研究旨在分离牛呼吸道冠状病毒(BRCV)并研究其部分生物学特性。采集暴发呼吸道疾病的肉牛鼻拭子,经荧光定量PCR鉴定为BCoV阳性。将阳性样本接种人盲肠腺癌细胞(HCT-8),分离纯化后,对引起细胞病变的病毒分离株的S和HE基因进行序列测定和系统发育分析,并将病毒分离株接种BALB/c小鼠进行致病性研究。结果显示,成功分离到1株致细胞病变的毒株,经荧光定量PCR、间接免疫荧光和电镜观察鉴定为BRCV,蚀斑纯化后计算病毒TCID_(50)为10^(-8.46)·0.1 mL^(-1)。S基因和HE基因序列分析表明两种基因均发生重组事件;S蛋白具有2个独特的氨基酸突变(A33G和A975V),分别位于S1亚基的受体结合域和S2亚基;HE基因具有2个独特的氨基酸突变(L235R和L365F),分别位于凝集素域和近膜端域。分离株对4周龄BALB/c小鼠具有较强的致病性,能够引起小鼠呼吸加快和腹泻等临床症状,剖检和组织病理学显示肺和肠道出血,病毒主要分布在肺和肠组织,以肺组织中病毒载量最高。本研究首次在国内肉牛中分离到1株BRCV,S和HE基因分子有独特氨基酸突变,成功建立了小鼠感染模型,为进一步研究BCoV的生物学特性和遗传进化提供了参考。

关键词：牛呼吸道冠状病毒 S基因 HE基因小鼠致病性

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北京市畜禽屠宰行业发展情况调研

中国兽医杂志 2024年第5期60卷 153-156,F0003页

作者：程敏姮刘晓庆王慧强张跃郑博君高敏沈杭张启龙北京市动物疫病预防控制中心北京大兴102629

畜禽屠宰行业一头连着养殖业,一头连着肉品消费市场,既与养殖业息息相关,又与工商业密不可分,是促进一二三产业融合、调整产业结构的连接器和转化器,是肉类产品生产的关键,是守护人民群众“舌尖上的安全”和生命健康安全的重要民生行业... 详细信息

畜禽屠宰行业一头连着养殖业,一头连着肉品消费市场,既与养殖业息息相关,又与工商业密不可分,是促进一二三产业融合、调整产业结构的连接器和转化器,是肉类产品生产的关键,是守护人民群众“舌尖上的安全”和生命健康安全的重要民生行业。为加强畜禽屠宰行业的管理,促进行业结构调整和技术提升,提高肉产品卫生和质量安全水平。

关键词：肉类产品转化器养殖业质量安全水平情况调研调整产业结构消费市场生命健康

重组猪α干扰素/白细胞介素-2的可溶性表达及体外活性研究

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农业生物技术学报 2024年第3期32卷 595-604页

作者：冯桂丹闫若潜马震原柴茂周建浩康台生王淑娟杨海波刘影谢彩华赵雪丽王翠河南农业大学动物医学院上海市动物疫病预防控制中心河南省动物疫病预防控制中心河南省重大动物疫病监测预警与防控重点实验室河南科技大学动物科技学院

猪(Sus scrofa) α干扰素/白细胞介素-2 (porcine interferon α/porcine interleukin-2,PoIFN-α-linkerPoIL-2)在大肠杆菌(Escherichia coli)中多以包涵体形式表达，为在大肠杆菌系统中获得可溶性表达的具有活性的重组猪α干扰素/白介素2 (rPoIFN-α-linker-PoIL-2)蛋白，本研究根据大肠杆菌密码子偏好性对PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因进行可溶性改造并合成。将改造后的PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因克隆到表达载体p ET-32a(+)进行原核表达，采用镍铬亲和层析柱对表达的可溶性rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白进行纯化。分别采用淋巴细胞增殖检测法、ELISA方法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白体外促猪外周血T淋巴细胞(peripheral blood T lymphocyte,PBLC)增殖活性，及其与抗猪白介素2单抗、抗猪α干扰素单抗发生特异性免疫反应的活性；采用细胞病变抑制法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在不同细胞系上抑制不同病毒的增殖活性。结果显示，PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因可在大肠杆菌中高效可溶性表达，表达的rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白分子量大小约55 k D。rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白经镍铬亲和层析柱纯化后纯度达90%以上。rPoIFN-α-linker-PoIL-2具有显著的促PBLC增殖活性(P<0.05)；可以与抗PoIL-2、PoIFN-α单抗发生特异性免疫反应。rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在不同细胞上抑制不同病毒的增殖活性效价有差异，在猪肾细胞(porcine kidney cells,PK)-15、人羊膜细胞(human amniotic cells) WISH上抑制水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)增殖的活性单位分别为1.8×106和2.5×106IU/mg；在PK-15细胞上抑制伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、塞内卡病毒(Seneca virus A,SVA)增殖的活性单位分别为2.2×104、1.3×105IU/mg；在非洲绿猴肾细胞(Verda Reno,Vero)上抑制猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)增殖的活性单位为3.2×104IU/mg。本研究获得了可溶性表达的rPoIFN-α-linkerPoIL-2蛋白，该蛋白在不同细胞上具有抑制VSV、PRV、SVA及PEDV等病毒增殖的活性，为进一步研究rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在猪体内的活性提供了基础资料。

关键词：猪α干扰素猪白细胞介素-2 嵌合基因可溶性表达体外活性

杆状病毒表达系统表达BCoV纤突蛋白及其对小鼠的免疫原性

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 640-648页

作者：喻琦胜朱庆周群宋鑫张家祺陈涛云徐林张朝辉张斌西南民族大学畜牧兽医学院成都610041 四川省甘孜藏族自治州动物疫病预防控制中心康定626000

旨在为表达牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的纤突蛋白(S蛋白),并评价其作为免疫原免疫小鼠后的免疫效果。本研究以BCoV/SWUN/HXD-4/2021株的全长S基因为模板,针对昆虫细胞进行密码子优化和合成,构建重组质粒pFastBac-Dual-S,与DH1... 详细信息

旨在为表达牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的纤突蛋白(S蛋白),并评价其作为免疫原免疫小鼠后的免疫效果。本研究以BCoV/SWUN/HXD-4/2021株的全长S基因为模板,针对昆虫细胞进行密码子优化和合成,构建重组质粒pFastBac-Dual-S,与DH10Bac同源重组后转染昆虫细胞收获重组杆状病毒rpFastBac-S,利用基因组PCR、免疫印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验对其进行鉴定,测定杆状病毒滴度。优化和筛选感染剂量对蛋白表达的影响,超速离心纯化蛋白,免疫小鼠和评估其免疫效果。结果显示:优化后全长4108 bp的BCoV S基因CAI(密码子适应指数)从0.39调整为0.87,平均GC含量从35.8%调整为50.6%。经双酶切、PCR验证,重组质粒与重组杆粒均构建成功。用5μg重组杆粒Bacmid-S转染Sf9细胞并传代至第四代后细胞病变趋于稳定,感染杆状病毒约20 h后产生典型病变,收获重组杆状病毒进行鉴定。PCR电泳结果显示重组杆粒携带S目的蛋白基因;间接免疫荧光试验显示,试验组观察到特异性绿色荧光;Western blot结果显示重组杆状病毒rpFastBac-S所表达的蛋白为S目的蛋白,目的条带位于250 ku左右,感染剂量MOI=0.5时蛋白表达量最高。将50μg蛋白、20μg CpG免疫增强剂与等体积MF59佐剂充分混合乳化后,肌肉注射免疫小鼠,间接ELISA试验结果显示,小鼠免疫蛋白后产生了IgG特异性抗体,且抗体水平高于佐剂对照组(P0.05)。本研究利用杆状病毒表达系统表达了牛冠状病毒S蛋白,并对S蛋白免疫保护效果做了进一步评价,为后续牛冠状病毒疫苗研究提供了理论依据。

关键词：牛冠状病毒 S蛋白杆状病毒表达系统免疫原性

饲粮添加包被γ-氨基丁酸对断奶羔羊生长性能、血清激素及瘤胃发酵功能的影响

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饲料研究 2024年第16期47卷 8-12页

作者：徐建中甘肃省古浪县动物疫病预防控制中心甘肃武威733100

试验探究了饲料中添加包被γ-氨基丁酸(GABA)对羔羊生长性能、瘤胃发酵参数及血清激素水平的影响。试验选择健康的断奶羔羊60只,随机分成4组,每组3个重复,每个重复5只羊。各组羔羊分别饲喂添加0 (对照组)、100 (GABA1组)、150 (GABA2组)... 详细信息

试验探究了饲料中添加包被γ-氨基丁酸(GABA)对羔羊生长性能、瘤胃发酵参数及血清激素水平的影响。试验选择健康的断奶羔羊60只,随机分成4组,每组3个重复,每个重复5只羊。各组羔羊分别饲喂添加0 (对照组)、100 (GABA1组)、150 (GABA2组)、200 mg/kg (GABA3组)包被GABA的试验饲粮。预试期1周,正式试验期4周。结果显示,与对照组相比,GABA2组羔羊的末重和平均日增重显著增加(P<0.05),料重比显著降低(P<0.05)。所有包被GABA组羔羊的胆囊收缩素水平均极显著降低(P<0.01);GABA2组和GABA3组羔羊神经肽Y水平显著升高(P<0.05),去甲肾上腺素水平显著降低(P<0.05);GABA2组5-羟色胺水平显著升高(P<0.05),多巴胺水平显著降低(P<0.05)。GABA2组羔羊血清中碱性磷酸酶活性显著升高(P<0.05),谷草转氨酶活性显著降低(P<0.05)。GABA2组瘤胃菌体蛋白含量显著升高(P<0.05)。研究表明,包被GABA能够促进羔羊的生长性能,促进瘤胃菌体蛋白合成,改善血清激素缓解断奶应激,最适添加水平为150 mg/kg。

关键词：包被γ-氨基丁酸羔羊瘤胃发酵功能生长性能血清激素

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