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外泌体源性microRNAs在肺癌转移及早期诊断中的研究进展

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生命科学 2021年第6期33卷 759-765页

作者：冉晶晶李彤缪治永金珂四川大学华西医院人类疾病和免疫治疗实验室成都610041

肺癌转移是导致肺癌高死亡率的最重要原因。外泌体是由多种活细胞释放到胞外的直径为30~150nm的微囊泡。其中,肿瘤细胞,尤其是肺癌细胞分泌的外泌体通过向临近和远端的受体细胞传递microRNAs(miRNAs),从而调控转移细胞的远端定植及血管... 详细信息

肺癌转移是导致肺癌高死亡率的最重要原因。外泌体是由多种活细胞释放到胞外的直径为30~150nm的微囊泡。其中,肿瘤细胞,尤其是肺癌细胞分泌的外泌体通过向临近和远端的受体细胞传递microRNAs(miRNAs),从而调控转移细胞的远端定植及血管新生等过程。此外,肺癌细胞来源的外泌体miRNAs可以表征肿瘤细胞的病理和生理状态,因此,在肺癌的早期诊断、预测和生存预后中具有重要的应用价值。该综述主要对外泌体miRNAs在肺癌转移过程中的调控作用及其作为早期诊断标志物的潜在应用价值进行介绍。

关键词：外泌体miRNAs 肺癌转移早期诊断标志物

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STAT3的非转录功能研究进展

生命科学 2022年第1期34卷 34-38页

作者：陈艳琼白秀峰四川大学华西医院人类疾病和免疫治疗实验室成都610041

信号转导与转录激活因子3 (STAT3)是重要的转录因子,通过调节下游靶基因表达对细胞活性产生影响。肿瘤及自身免疫病患者的STAT3处于过度激活状态,据此已开发多款抑制STAT3转录活性的抑制剂,以及靶向降解STAT3的蛋白质水解靶向嵌合体(PRO... 详细信息

信号转导与转录激活因子3 (STAT3)是重要的转录因子,通过调节下游靶基因表达对细胞活性产生影响。肿瘤及自身免疫病患者的STAT3处于过度激活状态,据此已开发多款抑制STAT3转录活性的抑制剂,以及靶向降解STAT3的蛋白质水解靶向嵌合体(PROTAC)技术。然而,除细胞核之外,STAT3也被发现定位于线粒体、内质网及溶酶体等细胞器,并参与这些细胞器正常功能的调节,因此该综述总结了STAT3的非转录因子功能研究进展。

关键词： STAT3 线粒体内质网溶酶体非转录功能

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单克隆抗体技术进展及上市药物分析

药物生物技术 2022年第1期29卷 87-94页

作者：牟大超周轶白秀峰四川大学华西医院人类疾病和免疫治疗实验室四川成都610047

自二十世纪八十年代杂交瘤技术建立以来,抗体制备技术取得了长足的发展。抗体是由B淋巴细胞分泌的一种免疫球蛋白,因其能与受体特异性结合而产生许多生物学活性,如经典阻断作用、中和活性、激活补体、通过Fc受体对靶细胞产生杀伤作用和... 详细信息

自二十世纪八十年代杂交瘤技术建立以来,抗体制备技术取得了长足的发展。抗体是由B淋巴细胞分泌的一种免疫球蛋白,因其能与受体特异性结合而产生许多生物学活性,如经典阻断作用、中和活性、激活补体、通过Fc受体对靶细胞产生杀伤作用和调节机体免疫活性等,在临床治疗中广泛应用。抗体技术的发展经历了鼠源性单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源单克隆抗体的漫长历程。从鼠源性抗体到全人源抗体的过渡中,实现了多种生物技术的突破,如抗体库技术、人源化小鼠技术和B细胞克隆技术等。如今,抗体药物在整个药物市场中拥有举足轻重的地位。十年来(2011年1月~2021年11月),已有78种单克隆抗体药物被FDA批准上市使用,广泛分布于肿瘤领域、免疫性疾病领域、抗病原体感染领域、神经系统和代谢性疾病领域。文章就单克隆抗体技术进展和抗体药物上市情况进行综述,为新型抗体的制备和药物靶点的选择提供了思路。

关键词：全人源抗体人源化小鼠噬菌体展示技术 B细胞克隆技术免疫治疗自身免疫病新冠病毒

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STAT3在甲状腺癌中的研究进展

生命科学 2023年第7期35卷 876-882页

作者：吴沙沙刘枫四川大学华西医院人类疾病和免疫治疗研究室成都610041 四川大学华西医院甲状腺外科成都610041

甲状腺癌是常见的内分泌恶性肿瘤,其全球发病率持续上升。大部分甲状腺癌治疗效果良好,但一些手术难以切除且碘131难治的甲状腺癌预后较差。对于预后较差的甲状腺癌目前可采用靶向治疗。甲状腺癌靶向治疗的靶点包括VEGFR、FGFR、PDGFR、... 详细信息

甲状腺癌是常见的内分泌恶性肿瘤,其全球发病率持续上升。大部分甲状腺癌治疗效果良好,但一些手术难以切除且碘131难治的甲状腺癌预后较差。对于预后较差的甲状腺癌目前可采用靶向治疗。甲状腺癌靶向治疗的靶点包括VEGFR、FGFR、PDGFR、RET和KIT等。信号转导与转录激活因子3(STAT3)在多种恶性肿瘤中表达上调,并且STAT3抑制剂已被证实具有抑制甲状腺癌细胞生长的能力,使STAT3成为一个潜在的甲状腺癌治疗靶点。本文综述了STAT3和JAK/STAT信号通路与肿瘤发生发展的关系,同时详细讨论了STAT3在甲状腺癌中的功能,旨在为治疗甲状腺癌提供理论依据。

关键词： STAT3 甲状腺癌 JAK/STAT信号通路

YKL-40促进Ⅱ型肺泡上皮细胞A549炎症因子的表达

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四川大学学报（医学版） 2023年第5期54卷 954-958页

作者：缪治永冉晶晶牟大超吴沙沙陈艳琼李聪陈月红杨闵谢其冰四川大学华西医院人类疾病与免疫治疗研究室成都610041 四川大学华西医院公共实验管理科成都610041 四川大学华西医院风湿免疫科成都610041

目的YKL-40是一种人软骨糖蛋白39或几丁质酶-3样蛋白1,N端由酪氨酸(Y)、赖氨酸(K)、亮氨酸(L)组成,因此被命名为YKL-40。本研究探索YKL-40能否促进Ⅱ型肺泡上皮细胞炎症因子的表达。方法体外培养A549细胞,加入IL-1β(20 ng/mL)、IL-6(20... 详细信息

目的YKL-40是一种人软骨糖蛋白39或几丁质酶-3样蛋白1,N端由酪氨酸(Y)、赖氨酸(K)、亮氨酸(L)组成,因此被命名为YKL-40。本研究探索YKL-40能否促进Ⅱ型肺泡上皮细胞炎症因子的表达。方法体外培养A549细胞,加入IL-1β(20 ng/mL)、IL-6(20 ng/mL)、TNF-α(20 ng/mL)、IFN-γ(20 ng/mL),RT-qPCR检测YKL-40转录水平的表达;A549细胞中加入5、10、20 ng/mL的IL-1β培养,Western blot检测YKL-40蛋白水平的表达。A549细胞中加入0、100、500、1000 ng/mL人源重组YKL-40蛋白培养,RT-qPCR检测IL-6、IL-8的表达水平。设计三对靶向YKL-40小干扰RNA(si-YKL-40-1/2/3)和阴性对照(negative control,NC),分别转染A549细胞,RT-qPCR和Western blot鉴定YKL-40的表达,筛选出si-YKL-40-3用于后续实验。在A549细胞中,转染si-YKL-40-3和si-NC后,加入IL-1β(20 ng/mL)培养,RT-qPCR检测细胞YKL-40、IL-6、IL-8表达,QAH-INF-1试剂盒检测上清液中多种因子的表达。结果RT-qPCR结果表明,与对照组相比,IL-1β可以上调YKL-40蛋白的转录水平,差异有统计学意义(P<0.01),而IL-6、TNF-α、IFN-γ则不能上调;Western blot结果表明,IL-1β(20 ng/mL)可以显著促进YKL-40的表达,与对照组相比,不同质量浓度IL-1β组差异均有统计学意义(P<0.01)。A549细胞中加入人源重组YKL-40蛋白后,炎症因子IL-6和IL-8的表达明显升高,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);转染siYKL-40-3降低YKL-40的表达后,与对照组相比,IL-6(P<0.05)、IL-8(P<0.05)等炎症因子表达受到抑制。结论YKL-40能够促进Ⅱ型肺泡上皮细胞A549表达并分泌IL-6、IL-8等急性期炎性因子,从而加重炎症反应。通过靶向抑制YKL-40的表达可有效抑制炎症反应。

关键词： YKL-40 Ⅱ型肺泡上皮细胞小干扰RNA 炎症反应

不同外周血单个核细胞分离方法对流式细胞术分析结果的影响

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新乡医学院学报 2022年第5期39卷 470-473页

作者：牟大超吴沙沙周轶四川大学华西医院人类疾病和免疫治疗研究室四川成都610041

目的探讨3种外周血单个核细胞(PBMC)分离方法对后续流式细胞术分析结果的影响,并比较PBMC冻存前后流式细胞术分析结果。方法2019年5月,选择四川大学华西医院人类疾病和免疫治疗研究室6位体检健康的工作人员为受试对象,采集每位受试者外... 详细信息

目的探讨3种外周血单个核细胞(PBMC)分离方法对后续流式细胞术分析结果的影响,并比较PBMC冻存前后流式细胞术分析结果。方法2019年5月,选择四川大学华西医院人类疾病和免疫治疗研究室6位体检健康的工作人员为受试对象,采集每位受试者外周血15 mL,平均分为3份,分别采用Ficoll离心法、羟乙基淀粉(HES)沉降法和HES+Ficoll法分离PBMC。显微镜下观察3种方法分离所得PBMC的形态,并采用细胞计数仪进行细胞计数。分离所得PBMC于冻存前和冻存6个月后行流式细胞术分析,计算PBMC中淋巴细胞所占比例、淋巴细胞中活细胞(FVS780荧光强度小于102为活细胞)所占比例(细胞存活率)和活细胞中CD4^(+)T细胞数与CD8^(+)T细胞数的比值(CD4^(+)T/CD8^(+)T)。结果3种分离方法得到的PBMC形态均一致。与其他2种分离方法相比,HES沉降法分离得到的PBMC除淋巴细胞外还有部分红细胞。HES沉降法所得PBMC数量显著多于Ficoll离心法与HES+Ficoll法(P0.05);HES沉降法得到的PBMC中淋巴细胞比例显著低于Ficoll离心法和HES+Ficoll法(P0.05);Ficoll离心法、HES沉降法与Ficoll+HES法得到的存活细胞中CD4^(+)T/CD8^(+)T比值比较差异无统计学意义(P>0.05)。3种方法分离得到的PBMC冻存后淋巴细胞存活率均低于冻存前(P0.05)。结论HES沉降法分离得到的PBMC纯度(混有少量红细胞)不如其他2种方法,但其操作更为简便。且无论是冻存前的PBMC还是冻存6个月后的细胞,流式细胞术分析3种方法分离得到的PBMC的结果无统计学差异,因此,HES沉降法适用于抗凝全血的PBMC分离提取。

关键词： Ficoll离心羟乙基淀粉外周血单个核细胞流式细胞术

Pristane诱导BALB/c狼疮鼠模型的实验研究

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四川大学学报（医学版） 2006年第2期37卷 309-312页

作者：崔广梅刘钢刘渭阚兵毛咏秋魏于全四川大学华西医院临床免疫科成都610041 四川大学华西医院人类疾病生物治疗国家重点实验室

目的建立系统性红斑狼疮小鼠模型,探讨环境因素在发病机制中的地位。方法雌性BALB/c小鼠30只,分为两组,造模组一次性腹腔注射Pristane0.5mL,对照组一次性腹腔注射0.5mL生理盐水,注射前及注射后每月定期检测抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(dsD... 详细信息

目的建立系统性红斑狼疮小鼠模型,探讨环境因素在发病机制中的地位。方法雌性BALB/c小鼠30只,分为两组,造模组一次性腹腔注射Pristane0.5mL,对照组一次性腹腔注射0.5mL生理盐水,注射前及注射后每月定期检测抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(dsDNA)抗体,及随机尿蛋白定量,8个月时处死动物,观察肾脏HE染色及直接免疫荧光染色后镜下变化。结果造模组ANA和抗dsDNA抗体分别于造模3个月和4个月时开始出现;8个月时,阳性率分别为87.5%和47.8%;62.5%的小鼠出现≥+(300mg/L)蛋白尿;肾脏组织HE染色及直接免疫荧光染色见肾小球肾炎表现。对照组中各有1只小鼠分别为ANA、抗dsDNA抗体低滴度阳性;随机尿蛋白定量均≤+;肾脏组织未见病理改变。抗dsDNA抗体与蛋白尿之间存在一定相关性(r=0.538,P=0.003)。结论Pristane成功诱导系统性红斑狼疮动物模型。

关键词：系统性红斑狼疮 Pristane 动物模型

人参皂甙Rg1对糖尿病肾病大鼠TNF-α、MCP-1表达的影响

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四川大学学报（医学版） 2009年第3期40卷 466-471页

作者：张丽娜谢席胜左川樊均明四川大学华西医院肾脏内科成都610041 四川大学华西医院人类疾病生物治疗国家重点实验室

目的观察人参皂甙Rg1对糖尿病肾病大鼠尿蛋白以及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化因子蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组、糖尿病模型组、人参皂甙Rg1治疗组、厄贝沙坦(ARB)治疗组... 详细信息

目的观察人参皂甙Rg1对糖尿病肾病大鼠尿蛋白以及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化因子蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组、糖尿病模型组、人参皂甙Rg1治疗组、厄贝沙坦(ARB)治疗组。采用链脲佐菌素(65mg/kg)腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。于动物处死前1d测血糖,用代谢笼收集24h尿液,记录尿量行24h尿蛋白定量和肾功检查。光镜及电镜观察肾组织的病理变化。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血MCP-1、血及肾TNF-α水平;免疫组织化学检测肾脏组织MCP-1蛋白的表达;实时荧光定量PCR(real-ti me PCR)检测肾脏组织中MCP-1、TNF-α基因水平的表达。结果模型组大鼠镜下见肾小球体积增大,基底膜增厚及系膜物质增多,足细胞较正常对照组减少(P治疗组与模型组分别比较,肾小球基底膜未见明显增宽,足细胞数增加(P治疗组之间无明显差异。模型组大鼠血糖、24h尿蛋白、血肌酐水平升高,与对照组相比差异有统计学意义(P治疗组与模型组相比,血糖水平无明显变化(P>0.05),但24h尿蛋白、血肌酐水平均有所改善(P免疫组织化学、ELISA和real-ti me PCR结果表明,与对照组相比,模型组MCP-1、TNF-α的表达增加(P治疗组MCP-1、TNF-α表达较模型组减少(P治疗组无明显差异。相关性分析提示MCP-1、TNF-α水平与24h尿蛋白水平(r=0.7802,0.6963)、肾小球硬化指数(r=0.8296,0.7413)、足细胞基底膜厚度(r=0.7678,0.6701)成正相关(P<0.05)。结论人参皂甙Rg1能降低TNF-α、MCP-1的水平,改善糖尿病肾病大鼠足细胞及肾脏的病理损害,能显著减少糖尿病大鼠24h尿蛋白,具有一定的肾保护作用。

关键词：人参皂甙Rg1 糖尿病肾病肿瘤坏死因子-α 单核细胞趋化因子蛋白-1 蛋白尿

重组非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达、纯化及鉴定

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四川大学学报（医学版） 2005年第3期36卷 301-304页

作者：牛挺刘霆贾永前杨莉田聆刘继彦胡兵吴扬魏于全四川大学华西医院人类疾病生物治疗国家重点实验室

目的　构建非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子重组表达载体,进行蛋白质原核表达,并对表达产物进行分离、纯化和鉴定。方法　首先通过限制性核酸内切酶酶切及连接反应,构建非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达载体p ET- x V... 详细信息

目的　构建非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子重组表达载体,进行蛋白质原核表达,并对表达产物进行分离、纯化和鉴定。方法　首先通过限制性核酸内切酶酶切及连接反应,构建非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达载体p ET- x VEGF和p ET- m VEGF。筛选的重组质粒经酶切和DNA序列测定等证实正确性后,再转染感受态大肠杆菌BL 2 1(DE3) ,经IPTG诱导蛋白质表达。表达产物经Ni- NTA亲合层析及肠激酶特异性酶切进行分离纯化,最后用SDS- PAGE和蛋白免疫印迹法进行鉴定。结果　限制性核酸内切酶酶切和DNA序列测定等显示目的基因片段和阅读框架正确无误,表明非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达载体p ET-x VEGF和p ET- m VEGF构建成功。重组蛋白质在大肠杆菌中获得稳定表达,分离纯化的表达产物x VEGF和m VEGF 的纯度达到95 %以上,其相对分子质量与预期值一致。抗小鼠VEGF抗体可特异性识别x VEGF和m VEGF。结论　重组非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达、分离纯化及鉴定成功,为进一步研究异种VEGF蛋白质疫苗抗小鼠肿瘤模型奠定了基础。

关键词：血管内皮细胞生长因子重组蛋白质原核表达