重组非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达、纯化及鉴定

作     者：牛挺 刘霆 贾永前 杨莉 田聆 刘继彦 胡兵 吴扬 魏于全 NIU Ting;LIU Ting;JIA Yong-qian;YANG Li;TIAN Ling;LIU Ji-yan;HU Bing;WU Yang;WEI Yu-Quan

作者机构：四川大学华西医院人类疾病生物治疗国家重点实验室 

出 版 物：《四川大学学报：医学版》 (JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION))

年 卷 期：2005年第36卷第3期

页      面：301-304页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：科技部基础研究重大项目前期研究专项 (国科基字 [2 0 0 1] 5 0号 ) 国家自然科学基金 (批准号 3 0 10 0 168)资助 

主　　题：血管内皮细胞生长因子 重组蛋白质 原核表达 

摘      要：目的 构建非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子重组表达载体,进行蛋白质原核表达,并对表达产物进行分离、纯化和鉴定。方法 首先通过限制性核酸内切酶酶切及连接反应,构建非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达载体p ET- x VEGF和p ET- m VEGF。筛选的重组质粒经酶切和DNA序列测定等证实正确性后,再转染感受态大肠杆菌BL 2 1(DE3) ,经IPTG诱导蛋白质表达。表达产物经Ni- NTA亲合层析及肠激酶特异性酶切进行分离纯化,最后用SDS- PAGE和蛋白免疫印迹法进行鉴定。结果 限制性核酸内切酶酶切和DNA序列测定等显示目的基因片段和阅读框架正确无误,表明非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达载体p ET-x VEGF和p ET- m VEGF构建成功。重组蛋白质在大肠杆菌中获得稳定表达,分离纯化的表达产物x VEGF和m VEGF 的纯度达到95 %以上,其相对分子质量与预期值一致。抗小鼠VEGF抗体可特异性识别x VEGF和m VEGF。结论 重组非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达、分离纯化及鉴定成功,为进一步研究异种VEGF蛋白质疫苗抗小鼠肿瘤模型奠定了基础。