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Ischemic preconditioning induces chaperone hsp70 expression and inhibits protein aggregation in the CA1 neurons of rats

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Neuroscience Bulletin 2008年第5期24卷 288-296页

作者：葛鹏飞罗天飞张纪周陈大伟栾永新付双林吉林大学附属第一医院神经外科长春130021 吉林大学白求恩医学院生物化学系长春130021

Objective To investigate the effect of ischemic preconditioning on chaperone hsp70 expression and protein aggregation in the CA1 neurons of rats, and to further explore its potential neuroprotective mechanism. Methods Two-vesseloccluded transient global ischemia rat model was used. The rats were divided into sublethal 3-min ischemia group, lethal 10- min ischemia group and ischemic preconditioning group. Neuronal death in the CA1 region was observed by hematoxylineosin staining, and number of live neurons was assessed by cell counting under a light microscope. Immunochemistry and laser scanning confocal microscopy were used to observe the distribution of chaperone hsp70 in the CA1 neurons. Differential centrifuge was used to isolate cytosol, nucleus and protein aggregates fractions. Western blot was used to analyze the quantitative alterations of protein aggregates and inducible chaperone hsp70 in cellular fractions and in protein aggregates under different ischemic conditions. Results Histological examination showed that ischemic preconditioning significantly reduced delayed neuronal death in the hippocampus CA1 region （P 〈 0.01 vs 10-min ischemia group）. Sublethal ischemic preconditioning induced chaperone hsp70 expression in the CA1 neurons after 24 h reperfusion following 10-min ischemia. Induced-hsp70 combined with the abnormal proteins produced during the secondary lethal 10-min ischemia and inhibited the formation of cytotoxic protein aggregates（P〈0.01 vs 10-min ischemia group）.Conelusion Ischemic preconditioning induced chaperone hsp70 expression and inhibited protein aggregates formation in the CA1 neurons when suffered secondary lethal ischemia, which may protect neurons from death.

关键词： ischemic preconditioning protein aggregation chaperone hsp70

乙肝患者血清IL-2、sIL-2R水平与肝损程度、HBV DNA含量的变化

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中国老年学杂志 2008年第19期28卷 1883-1884页

作者：李俐张家颖刘剑凯杨成君吴山力马颖哲吉林大学白求恩医学院生物化学与分子生物学中心吉林长春130021 吉林大学白求恩医学院生物化学教研室

目的探讨乙型肝炎患者血清IL-2、sIL-2R含量与肝损程度和HBV DNA含量的相关性及临床意义。方法收集急、慢、重型乙肝患者血清标本共93例,28例健康人血清标本作为对照组,采用ELISA法检测各型乙型肝炎患者血清中IL-2、sIL-2R。HBV DNA定... 详细信息

目的探讨乙型肝炎患者血清IL-2、sIL-2R含量与肝损程度和HBV DNA含量的相关性及临床意义。方法收集急、慢、重型乙肝患者血清标本共93例,28例健康人血清标本作为对照组,采用ELISA法检测各型乙型肝炎患者血清中IL-2、sIL-2R。HBV DNA定量采用荧光定量PCR法。结果各型乙肝患者血清中IL-2均有所下降,sIL-2R均高于正常对照组(P<0.05),并随肝损伤程度加重,含量随之增加。慢性肝炎患者血清sIL-2R水平与HBV DNA含量呈正相关系。结论乙型肝炎患者血清IL-2、sIL-2R水平及HBV DNA含量可作为判断感染乙肝病毒后机体免疫水平和细胞受损程度的参考指标。

关键词：乙型肝炎 HBV DNA 白细胞介素

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用糠醛合成糠偶姻醋酸酯

精细化工 1998年第4期15卷 47-50页

作者：高大维贾晋礼华士英张玉敏顾强石龙吉林大学化学系白求恩医科大学预防医学院

以糠醛为原料，ＶＢ１为催化剂，利用偶姻缩合反应合成了糠偶姻，糠偶姻被醋酐酯化为糠偶姻醋酸酯。熔点７２～７３℃，收率８８％～９０％。通过元素分析、ＧＣＭＣ谱、ＩＲ谱、１ＨＮＭＲ谱对所合成的糠偶姻醋酸酯进行了全面分析表征。

关键词：呋喃甲醛糠偶姻醋酸酯合成

抗重组人白细胞介素-12单克隆抗体的制备及初步应用

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中国生物制品学杂志 2008年第8期21卷 705-707页

作者：李俐马颖哲张家颖张桂荣吉林大学白求恩医学院生物化学与分子生物学中心长春130021

目的制备抗重组人白细胞介素-12(rhIL-12)单克隆抗体(McAb),并建立检测IL-12的双抗体夹心ELISA方法。方法以纯化的rhIL-12(p70)免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测胃癌患者术前、术后血清IL-12水平的变化。结果... 详细信息

目的制备抗重组人白细胞介素-12(rhIL-12)单克隆抗体(McAb),并建立检测IL-12的双抗体夹心ELISA方法。方法以纯化的rhIL-12(p70)免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测胃癌患者术前、术后血清IL-12水平的变化。结果筛选出3株稳定分泌抗rhIL-12的单抗杂交瘤细胞株,纯化后单抗纯度达95%以上。免疫球蛋白亚类2株为IgG1,1株为IgG2a,轻链属!型,相对亲和力依次为EM5>EM6>EV9。Western blot及ELISA交叉试验表明,单抗具有良好的特异性。建立的双抗体夹心ELISA方法检测rhIL-12的最低检出限为20pg/ml,线性范围为25～3200pg/ml。应用此法检测胃癌患者术前血清IL-12水平较正常对照组明显降低,术后10d明显升高。术后给予免疫增强型NE组IL-12水平较未给予组明显升高。结论制备的抗rhIL-12单克隆抗体,能够用于IL-12的体内外免疫学检测,为IL-12的研究、检测及临床应用奠定了基础。

关键词：重组人白细胞介素-12 单克隆抗体双抗体夹心ELISA 胃癌

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日本刺沙蚕纤溶酶的酶学性质及其分类

吉林大学学报（医学版） 2011年第2期37卷 267-270页

作者：张连芝王少华邓志会薄其青葛鑫洪敏吉林大学白求恩医学院生物化学与分子生物学教研室吉林长春130021

目的:探讨日本刺沙蚕纤溶酶(NJF)的最适反应温度和最适反应pH值以及金属阳离子和蛋白酶抑制剂对酶活性的影响,确定NJF的酶学分类。方法:采用偶氮酪蛋白(azocasein)水解法测定NJF的最适温度及最适pH值;利用10种金属阳离子(Na+、K+、Cu2+... 详细信息

目的:探讨日本刺沙蚕纤溶酶(NJF)的最适反应温度和最适反应pH值以及金属阳离子和蛋白酶抑制剂对酶活性的影响,确定NJF的酶学分类。方法:采用偶氮酪蛋白(azocasein)水解法测定NJF的最适温度及最适pH值;利用10种金属阳离子(Na+、K+、Cu2+、Ca2+、Zn2+、Co2+、Fe2+、Fe3+、Al 3+和Hg2+)确定金属离子对NJF酶活性的影响;采用9种蛋白酶抑制剂(PMSF、EDTA、EGTA、β-巯基乙醇、苯甲脒、碘乙酸、抑肽酶、胃酶抑素A和大豆胰蛋白酶抑制剂)确定NJF的蛋白酶分类。结果:NJF具有较宽的热稳定性及pH稳定性范围,在40～80℃及pH7～11范围内有较好的稳定性,NJF酶最适温度为60℃,最适pH值为9;Hg2+能够强烈地抑制NJF的酶活性,Cu2+具有较弱的抑制作用,而其他金属阳离子对酶活性无明显抑制作用;NJF的酶活性能被典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF完全抑制。结论:NJF是一种典型的丝氨酸蛋白酶。

关键词：日本刺沙蚕酶学性质丝氨酸蛋白酶最适pH 最适温度

嘌呤核苷酸对慢性海洛因处理大鼠条件性位置偏爱与急性戒断的影响

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中国老年学杂志 2009年第22期29卷 2886-2888页

作者：李昆何海涛李鸿梅刘剑凯洪敏吉林大学白求恩医学院生物化学教研室吉林长春130021

目的研究嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠的条件性位置偏爱与急性戒断的影响。方法将50只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(腹腔注射生理盐水9d)、海洛因组(腹腔注射海洛因9d)、海洛因+单磷酸腺苷(AMP)+单磷酸鸟苷(GMP)组(腹腔注射海洛因及AMP... 详细信息

目的研究嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠的条件性位置偏爱与急性戒断的影响。方法将50只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(腹腔注射生理盐水9d)、海洛因组(腹腔注射海洛因9d)、海洛因+单磷酸腺苷(AMP)+单磷酸鸟苷(GMP)组(腹腔注射海洛因及AMP及GMP9d)、海洛因+AMP组(腹腔注射海洛因及AMP9d)、海洛因+GMP组(腹腔注射海洛因及GMP9d)。于第0、5、9天测评各组大鼠条件性位置偏爱,即观察黑白箱内大鼠在位置偏爱实验箱白侧(伴药侧)的停留时间。通过纳洛酮催促,对大鼠急性戒断症状进行观察与评定。结果盐水对照组注射5d后在伴药侧停留时间明显缩短,注射9d后进一步缩短,对伴药侧产生条件性位置厌恶;海洛因组大鼠给药9d后在伴药侧停留时间显著延长,产生了对伴药侧的位置偏爱;海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组给药后在伴药侧停留时间无明显延长,说明补偿嘌呤核苷酸可抑制海洛因的位置偏爱效应。海洛因与嘌呤核苷酸同时作用的大鼠戒断后,上睑下垂、齿颤和咀嚼发生次数比海洛因单独作用组明显减少(P<0.05)。结论系统应用嘌呤核苷酸可抑制海洛因依赖大鼠精神依赖,还可减轻其部分急性戒断症状。

关键词：海洛因依赖嘌呤核苷酸条件性位置偏爱戒断

超氧阴离子自由基对大鼠脑皮层神经细胞的损伤作用

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第5期33卷 552-558页

作者：姜招峰何湘平刘传缋杨翰仪北京联合大学应用文理学院生物化学系!北京100083 军事医学科学院毒物药物研究所!北京100850 吉林大学医学部生物化学教研室!长春130021

为了探讨超氧阴离子自由基对神经细胞的影响 ,以产生超氧阴离子自由基系统 (XO/X)作用于原代培养的新生大鼠大脑皮层神经元 ,分析神经细胞的生长状态、蛋白质被氧化修饰的程度、脂质过氧化程度、核DNA损伤程度、亚细胞结构变化以及Cu/Zn... 详细信息

为了探讨超氧阴离子自由基对神经细胞的影响 ,以产生超氧阴离子自由基系统 (XO/X)作用于原代培养的新生大鼠大脑皮层神经元 ,分析神经细胞的生长状态、蛋白质被氧化修饰的程度、脂质过氧化程度、核DNA损伤程度、亚细胞结构变化以及Cu/ZnSOD基因表达等变化。结果显示 :超氧阴离子自由基可使神经细胞的生长状态不佳 ,ATP酶活性降低为 4.2 2 3μmol/ (mg·min-1) (Pr) ,细胞总羰基含量增加为 2 95 .40 μmol/ g湿重 ,LPO含量增加为 4.87nmol/ g(Pr) ,膜脂流动性下降 (P值为 0 .398) ,核DNA单链断裂增加 (DNA在SCG中的迁移率为 7.35mm) ,亚细胞结构变化 (线粒体肿胀和变性等 )以及SOD基因表达增强 (SOD含量、SOD活性和SODmRNA丰度均增加 )。结果说明超氧阴离子自由基可损伤神经细胞的蛋白质、核酸、脂质和亚细胞结构

关键词：超氧阴离子自由基神经元细胞损伤 CuZn-SOD 脂质核酸

长春地区部分医院革兰阴性杆菌氨基糖苷类修饰酶基因的检测

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吉林大学学报（医学版） 2013年第2期39卷 405-409页

作者：周佳琦卢佳睿徐花韩放孙延波吉林大学白求恩医学院病原生物学系吉林长春130021 吉林大学白求恩医学院

目的:分析长春地区部分医院革兰阴性杆菌氨基糖苷类修饰酶基因的分布和类型,为抗生素的合理应用提供依据。方法:通过琼脂稀释法筛选出阿米卡星与庆大霉素的耐药菌株,采用聚合酶链式反应及序列分析的方法检测耐药菌株所携带的氨基糖苷类... 详细信息

目的:分析长春地区部分医院革兰阴性杆菌氨基糖苷类修饰酶基因的分布和类型,为抗生素的合理应用提供依据。方法:通过琼脂稀释法筛选出阿米卡星与庆大霉素的耐药菌株,采用聚合酶链式反应及序列分析的方法检测耐药菌株所携带的氨基糖苷类修饰酶基因类型。结果:69株革兰阴性杆菌对阿米卡星与庆大霉素的耐药率分别为44.9%和87.0%,其中63株(91.3%)检出氨基糖苷类修饰酶基因,基因类型包括aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3")-Ⅰ和ant(2")-Ⅰ,阳性率分别为4.3%、81.2%、43.5%、33.3%和13.0%;而aac(6′)-Ⅱ基因为阴性。结论:本地区革兰阴性杆菌氨基糖苷类修饰酶基因主要以aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3")-Ⅰ和ant(2")-Ⅰ5种类型存在,其中以aac(3)-Ⅱ型氨基糖苷类修饰酶基因最为常见。合理应用氨基糖苷类抗生素对于降低细菌的耐药性具有重要意义。

关键词：革兰阴性杆菌氨基糖苷类修饰酶耐药性

蜱传森林脑炎病毒非结构蛋白1原核表达载体的构建

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吉林大学学报（医学版） 2013年第3期39卷 620-624页

作者：宋天一李菁华张哲史红艳孙延波吉林大学白求恩医学院吉林大学白求恩医学院病原生物学系吉林长春130021

目的:构建蜱传森林脑炎病毒(TBEV)非结构蛋白1(NS1)的原核表达载体,以期获得其高纯度的表达,为制备多克隆抗体及其功能的研究奠定实验基础。方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因重组技术构建原核表达载体pEASYTM-E1-NS1。将重组... 详细信息

目的:构建蜱传森林脑炎病毒(TBEV)非结构蛋白1(NS1)的原核表达载体,以期获得其高纯度的表达,为制备多克隆抗体及其功能的研究奠定实验基础。方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因重组技术构建原核表达载体pEASYTM-E1-NS1。将重组后质粒pEASYTM-E1-NS1转化至BL21细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后进行镍离子亲和纯化,利用Bradford法测定蛋白浓度。采用SDS-PAGE和Western blotting法分析融合蛋白的表达水平。结果:含TBEV NS1的原核表达载体pEASYTM-E1-NS1经诱导后,可获得以包涵体形式存在的融合蛋白,通过亲和纯化得到较高纯度的蛋白质。SDS-PAGE和Western blotting,在相对分子质量约40 000处有特异性蛋白条带。结论:成功构建重组pEASYTM-E1-NS1原核表达载体,获得高纯度的重组TBEV NS1的融合蛋白。

关键词：蜱传森林脑炎病毒非结构蛋白1 原核表达融合蛋白