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日本刺沙蚕纤溶酶的酶学性质及其分类

吉林大学学报（医学版） 2011年第2期37卷 267-270页

作者：张连芝王少华邓志会薄其青葛鑫洪敏吉林大学白求恩医学院生物化学与分子生物学教研室吉林长春130021

目的:探讨日本刺沙蚕纤溶酶(NJF)的最适反应温度和最适反应pH值以及金属阳离子和蛋白酶抑制剂对酶活性的影响,确定NJF的酶学分类。方法:采用偶氮酪蛋白(azocasein)水解法测定NJF的最适温度及最适pH值;利用10种金属阳离子(Na+、K+、Cu2+... 详细信息

目的:探讨日本刺沙蚕纤溶酶(NJF)的最适反应温度和最适反应pH值以及金属阳离子和蛋白酶抑制剂对酶活性的影响,确定NJF的酶学分类。方法:采用偶氮酪蛋白(azocasein)水解法测定NJF的最适温度及最适pH值;利用10种金属阳离子(Na+、K+、Cu2+、Ca2+、Zn2+、Co2+、Fe2+、Fe3+、Al 3+和Hg2+)确定金属离子对NJF酶活性的影响;采用9种蛋白酶抑制剂(PMSF、EDTA、EGTA、β-巯基乙醇、苯甲脒、碘乙酸、抑肽酶、胃酶抑素A和大豆胰蛋白酶抑制剂)确定NJF的蛋白酶分类。结果:NJF具有较宽的热稳定性及pH稳定性范围,在40～80℃及pH7～11范围内有较好的稳定性,NJF酶最适温度为60℃,最适pH值为9;Hg2+能够强烈地抑制NJF的酶活性,Cu2+具有较弱的抑制作用,而其他金属阳离子对酶活性无明显抑制作用;NJF的酶活性能被典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF完全抑制。结论:NJF是一种典型的丝氨酸蛋白酶。

关键词：日本刺沙蚕酶学性质丝氨酸蛋白酶最适pH 最适温度

嘌呤核苷酸对慢性海洛因处理大鼠条件性位置偏爱与急性戒断的影响

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中国老年学杂志 2009年第22期29卷 2886-2888页

作者：李昆何海涛李鸿梅刘剑凯洪敏吉林大学白求恩医学院生物化学教研室吉林长春130021

目的研究嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠的条件性位置偏爱与急性戒断的影响。方法将50只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(腹腔注射生理盐水9d)、海洛因组(腹腔注射海洛因9d)、海洛因+单磷酸腺苷(AMP)+单磷酸鸟苷(GMP)组(腹腔注射海洛因及AMP... 详细信息

目的研究嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠的条件性位置偏爱与急性戒断的影响。方法将50只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(腹腔注射生理盐水9d)、海洛因组(腹腔注射海洛因9d)、海洛因+单磷酸腺苷(AMP)+单磷酸鸟苷(GMP)组(腹腔注射海洛因及AMP及GMP9d)、海洛因+AMP组(腹腔注射海洛因及AMP9d)、海洛因+GMP组(腹腔注射海洛因及GMP9d)。于第0、5、9天测评各组大鼠条件性位置偏爱,即观察黑白箱内大鼠在位置偏爱实验箱白侧(伴药侧)的停留时间。通过纳洛酮催促,对大鼠急性戒断症状进行观察与评定。结果盐水对照组注射5d后在伴药侧停留时间明显缩短,注射9d后进一步缩短,对伴药侧产生条件性位置厌恶;海洛因组大鼠给药9d后在伴药侧停留时间显著延长,产生了对伴药侧的位置偏爱;海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组给药后在伴药侧停留时间无明显延长,说明补偿嘌呤核苷酸可抑制海洛因的位置偏爱效应。海洛因与嘌呤核苷酸同时作用的大鼠戒断后,上睑下垂、齿颤和咀嚼发生次数比海洛因单独作用组明显减少(P<0.05)。结论系统应用嘌呤核苷酸可抑制海洛因依赖大鼠精神依赖,还可减轻其部分急性戒断症状。

关键词：海洛因依赖嘌呤核苷酸条件性位置偏爱戒断

嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠脑组织中DA和NE水平的影响及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2010年第1期36卷 123-126页

作者：何海涛李鸿梅李昆崔佳乐刘剑凯洪敏吉林大学基础医学院生物化学教研室吉林长春130021

目的:探讨外源性嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠脑组织中多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)水平以及代谢关键酶的影响,探索嘌呤核苷酸治疗药物依赖的可能性。方法:65只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(C)、海洛因组(H)、海洛因+嘌呤核苷酸组(... 详细信息

目的:探讨外源性嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠脑组织中多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)水平以及代谢关键酶的影响,探索嘌呤核苷酸治疗药物依赖的可能性。方法:65只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(C)、海洛因组(H)、海洛因+嘌呤核苷酸组(HAG)、海洛因+腺嘌呤核苷酸组(HA)、海洛因+鸟嘌呤核苷酸组(HG),每组13只。荧光分光光度计法检测各组大鼠中脑组织中DA和NE水平,ELISA试剂盒检测酪氨酸羟化酶(TH)水平,实时定量PCR法检测TH的表达。电镜下观察大鼠VTA区神经结构的形态变化。结果:与C组比较,H组DA、NE、TH水平和TH表达水平降低(P<0.05)。与H组比较,HAG组DA、NE、TH水平升高(P<0.05),HA组TH水平升高(P<0.05),HG组TH、NE水平升高(P<0.05)。与C组比较,H组TH基因表达降低;与H组比较,HAG、HA及HG组中TH基因表达水平升高(P<0.05)。电镜下H组出现神经毡水肿及髓鞘脱落现象,HAG、HA和HG组常染色体稍有增多,超微结构损伤都较H组减轻。结论:嘌呤核苷酸补偿能提高大鼠脑组织中DA和NE的水平,能够减轻海洛因对大鼠造成的损伤,提示嘌呤核苷酸治疗药物依赖具有可行性。

关键词：嘌呤核苷酸类海洛因多巴胺去甲肾上腺素酪氨酸羟化酶

嘌呤核苷酸减弱吗啡抑制的PC12细胞嘌呤核苷酸合成代谢

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吉林大学学报（医学版） 2007年第6期33卷 971-973页

作者：孙婷何海涛阚慕洁张连芝洪敏吉林大学基础医学院生物化学教研室吉林长春130021

目的:探讨外源性嘌呤核苷酸对吗啡致神经细胞核苷酸合成代谢降低的影响。方法:大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12细胞)分为对照组、吗啡组、单嘌呤核苷酸(AMP+GMP)组、三嘌呤核苷酸(ATP+GTP)组、吗啡+AMP+GMP组及吗啡+ATP+GTP组。应用RT-PCR法... 详细信息

目的:探讨外源性嘌呤核苷酸对吗啡致神经细胞核苷酸合成代谢降低的影响。方法:大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12细胞)分为对照组、吗啡组、单嘌呤核苷酸(AMP+GMP)组、三嘌呤核苷酸(ATP+GTP)组、吗啡+AMP+GMP组及吗啡+ATP+GTP组。应用RT-PCR法检测各实验组腺苷激酶(AK)和次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)基因转录产物含量的变化。结果:吗啡组AK mRNA及HGPRT mRNA表达量(分别为1.330±0.108和1.407±0.141)与对照组(1.874±0.161和1.923±0.155)比较明显降低(P0.05),HGPRT mRNA表达量(1.796±0.168)高于吗啡组(P0.05)。结论:外源性补充嘌呤核苷酸能改善吗啡所致的PC12细胞嘌呤核苷酸合成代谢关键酶基因表达降低。

关键词：嘌呤核苷酸类吗啡 PC12细胞腺苷激酶次黄嘌呤磷酸核糖转移酶

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pICln蛋白与低渗透压关系的初步研究

中国应用生理学杂志 2005年第1期21卷 24-25页

作者：马颖哲张桂荣王丽华吴山力吉林大学基础医学院生物化学教研室吉林长春130021

目的 :初步探讨pICln在低渗透压下的作用和变化。方法 :低渗处理pICln表达的大肠杆菌及LLC PK1细胞 ,测定大肠杆菌培养物的光密度及pICln在LLC PK1细胞的胞质及膜两相的分布。结果 :pICln表达的大肠杆菌的繁殖率明显高于对照组 ;低渗培... 详细信息

目的 :初步探讨pICln在低渗透压下的作用和变化。方法 :低渗处理pICln表达的大肠杆菌及LLC PK1细胞 ,测定大肠杆菌培养物的光密度及pICln在LLC PK1细胞的胞质及膜两相的分布。结果 :pICln表达的大肠杆菌的繁殖率明显高于对照组 ;低渗培养时LLC PK1细胞的pICln在胞质中明显增加。结论 :pICln具有抗肿胀、保护细胞的作用 ,它可能作为胞质调节蛋白来对抗低渗。

关键词： pICln 低渗细胞肿胀繁殖率

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海洛因对雌性大鼠催乳素基因表达的影响

吉林大学学报（医学版） 2006年第4期32卷 603-605页

作者：张纪周迟秀梅李奇洪敏吉林大学基础医学院生物化学教研室吉林长春130021

目的:研究海洛因对雌性大鼠垂体催乳素(PRL)基因表达的影响。方法:50只雌性Wistar大鼠,随机分为5组(每组10只):对照组、海洛因给药3和9 d组、海洛因给药9 d后停药3和9 d组;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测垂体PRL mRNA相对含量,放射免... 详细信息

目的:研究海洛因对雌性大鼠垂体催乳素(PRL)基因表达的影响。方法:50只雌性Wistar大鼠,随机分为5组(每组10只):对照组、海洛因给药3和9 d组、海洛因给药9 d后停药3和9 d组;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测垂体PRL mRNA相对含量,放射免疫分析法(RIA)检测血浆催乳素(PRL)水平。结果:给药3和9 d组及停药3 d组大鼠垂体PRL mRNA水平显著低于对照组(P0.05);与给药9 d组相比,停药3 d组PRL mRNA水平有增高趋势,但差异无显著性(P>0.05),停药9 d组的PRL mRNA的水平则显著高于给药9 d组(P0.05)。结论:海洛因使雌性大鼠垂体PRL mRNA表达水平下降,短期停用海洛因其无法恢复到正常水平。

关键词：海洛因催乳素基因表达放射免疫测定/方法逆转录聚合酶链反应/方法大鼠,Wistar

嘌呤核苷酸补偿对吗啡依赖大鼠嘌呤核苷酸分解代谢的影响

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中国药理学通报 2008年第8期24卷 1081-1083页

作者：何海涛孙婷崔佳乐李坤张建东洪敏吉林大学基础医学院生物化学教研室吉林长春130021

目的探讨外源性补偿嘌呤核苷酸对吗啡依赖大鼠嘌呤核苷酸分解代谢的影响。方法将60只♂Wistar大鼠随机分为对照组、吗啡组、吗啡+嘌呤核苷酸组、对照戒断组、吗啡戒断组和吗啡+嘌呤核苷酸戒断组,戒断组于d8给药后4h观察纳洛酮急性戒断... 详细信息

目的探讨外源性补偿嘌呤核苷酸对吗啡依赖大鼠嘌呤核苷酸分解代谢的影响。方法将60只♂Wistar大鼠随机分为对照组、吗啡组、吗啡+嘌呤核苷酸组、对照戒断组、吗啡戒断组和吗啡+嘌呤核苷酸戒断组,戒断组于d8给药后4h观察纳洛酮急性戒断症状。各组检测血尿酸(UA)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cre)含量,以及血浆和大脑皮质腺苷脱氨酶(ADA)活性。结果吗啡+嘌呤核苷酸戒断组的戒断症状综合评分明显少于吗啡戒断组(P0.05)。吗啡组及吗啡戒断组血浆及大脑皮质ADA活性明显高于相应的对照组和相应的吗啡+嘌呤核苷酸组(P<0.05或P<0.01)。结论补充嘌呤核苷酸可改善吗啡增强大鼠嘌呤核苷酸分解代谢作用。

关键词：嘌呤核苷酸吗啡戒断尿酸腺苷脱氨酶

嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸分解代谢的影响

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吉林大学学报（医学版） 2009年第5期35卷 837-840页

作者：李昆李鸿梅何海涛刘剑凯洪敏吉林大学基础医学院生物化学教研室吉林长春130021

目的:探讨外源性补偿嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸分解代谢的影响,阐明嘌呤核苷酸补偿治疗海洛因依赖效应机制。方法:将50只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、海洛因组、海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组。检测各... 详细信息

目的:探讨外源性补偿嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸分解代谢的影响,阐明嘌呤核苷酸补偿治疗海洛因依赖效应机制。方法:将50只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、海洛因组、海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组。检测各组血尿酸(UA)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cre)含量,以及血浆和大脑皮质腺苷脱氨酶(ADA)和黄嘌呤氧化酶(XO)活性。结果:海洛因组血浆中UA含量及ADA、XO的活性均比对照组明显升高(P0.05)。海洛因组大脑皮质中ADA、XO的活性均比对照组明显升高(P<0.05),而海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组大脑皮质ADA、XO的活性与海洛因组相比明显降低(P<0.05)。结论:海洛因可促进大鼠整体水平上嘌呤核苷酸的分解代谢,而补偿嘌呤核苷酸可以抑制或拮抗海洛因的上述作用。

关键词：嘌呤核苷酸类海洛因尿酸腺苷脱氨酶黄嘌呤氧化酶

热休克蛋白110-HER2／neu胞内区复合物免疫小鼠的脾淋巴细胞杀伤活性

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中华肿瘤杂志 2012年第1期34卷 11-14页

作者：韩冬徐煌颜炜群嘉兴学院医学院生物化学教研室 314001 吉林大学药学院生物工程教研室

目的探讨重组人热休克蛋白（HSP）110-HER2／neu胞内区（ICD）复合物免疫BalB／c小鼠的脾细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应。方法利用D2F2细胞构建高表达HER2／neu的小鼠乳腺癌模型，分别以磷酸盐缓冲液（PBS）、HSP110、HSP110-B789-797... 详细信息

目的探讨重组人热休克蛋白（HSP）110-HER2／neu胞内区（ICD）复合物免疫BalB／c小鼠的脾细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应。方法利用D2F2细胞构建高表达HER2／neu的小鼠乳腺癌模型，分别以磷酸盐缓冲液（PBS）、HSP110、HSP110-B789-797复合物和HSP110-HER2／neuICD复合物免疫小鼠。采用酶联免疫斑点法检测T细胞分泌γ-干扰素（IFN-γ）的水平，采用颗粒酶释放法检测CTL反应。结果免疫组化检测显示，高表达HER2／neu的小鼠乳腺癌模型构建成功。PBS组、HSP110组、HER2／neuICD组、HSP110-P789聊组和HSP110-HER2／neuICD组蓝色斑点数量分别为（4．57±1．33）个、（6．83±2．08）个、（16．17±2．86）个、（43．67±4．78）个和（76．51±8．17）个。HSP110-HER2／neuICD组与HSP110-P789．797组、HSP110-P789-797组与HER2／neuICD组相比，分泌IFN-^γ的小鼠脾细胞数量明显增多（P〈0．01）。PBS组、HSP110组、HER2／neuICD组、HSP110-P789W组和HSP110-HER2／neuICD组小鼠CTL对靶细胞的杀伤率分别为（8．15±1．27）％、（9．51±1．51）％、（14．03±2．45）％、（25．99±3．04）％和（38．15±3．95）％。HSP110-HER2／neuICD组与HSP110-P789-797组、HSP110-P799-797组与HER2／neuICD组相比，靶细胞杀伤率亦增高（均P〈0．01）。结论HSP110-HER2／neuICD复合物可刺激T淋巴细胞增殖为CTL，针对HER2／neu靶点产生抗肿瘤效应。

关键词：热休克蛋白110 T淋巴细胞免疫应答肿瘤疫苗