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用于生物大分子药物胞内递送的多重刺激响应型微凝胶载体

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化学学报 2024年第8期82卷 856-864页

作者：李梦丽张婕刘丽珍徐首红刘洪来华东理工大学化学与分子工程学院上海200237 结构可控先进功能材料及其制备教育部重点实验室上海200237

生物大分子药物疗效优、特异性强,但细胞转染困难且容易失活,本工作开发了一种多功能微凝胶载体ZIF@HA/PNIPAM_(1:k)gel,用于多药分区共载及细胞内、外的独立释放.该微凝胶表现出多重刺激响应能力,其核ZIF-8遇酸溶解,凝胶层高温收缩且... 详细信息

生物大分子药物疗效优、特异性强,但细胞转染困难且容易失活,本工作开发了一种多功能微凝胶载体ZIF@HA/PNIPAM_(1:k)gel,用于多药分区共载及细胞内、外的独立释放.该微凝胶表现出多重刺激响应能力,其核ZIF-8遇酸溶解,凝胶层高温收缩且可被谷胱甘肽(GSH)还原解离.小分子药物原花青素(PC)和大分子牛血清蛋白(FITC-BSA)作为药物模型可以分别包载于凝胶层和ZIF-8中.体外释药实验证明微凝胶在正常生理环境下能有效防止药物泄漏;在模拟肿瘤细胞外、内部微环境时,PC和FITC-BSA最高可分别达到74%和88%的释放量.本工作构建的载药系统将有助于生物大分子的胞内安全、有效递送及解决多药耐药问题,研究思路将对于大病化疗、受损组织修复等所需大分子胞内递送的研究提供有意义的科学指导.

关键词：微凝胶 ZIF-8 多重响应药物控释多药共载

运动训练对老年大鼠骨质疏松及RANK/RANKL/OPG信号通路的影响

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中国老年学杂志 2024年第9期44卷 2133-2138页

作者：王金玲黄夏荣黄福锦屈萌艰尹林伟胡文韬甘邵婷贾飞阳孙光华周君南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学科湖南衡阳421001 南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学中心湖南衡阳421001 南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学实验室湖南衡阳421001

目的研究运动训练对老年大鼠骨质疏松及核转录因子(NF)-κB受体活化因子(RANK)/RANK配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路的影响。方法16只24月龄雄性SD大鼠随机分为模型组和运动组,每组8只,采用自然衰老的方法复制老年骨质疏松动物模型... 详细信息

目的研究运动训练对老年大鼠骨质疏松及核转录因子(NF)-κB受体活化因子(RANK)/RANK配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路的影响。方法16只24月龄雄性SD大鼠随机分为模型组和运动组,每组8只,采用自然衰老的方法复制老年骨质疏松动物模型。另随机挑选8只3月龄雄性SD大鼠为青年组。运动组进行8 w跑台运动训练。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清骨代谢指标[Ⅰ型前胶原羧基末端肽(PICP)、Ⅰ型前胶原氨基末端肽(PINP)、Ⅰ型胶原交联C-末端肽(CTX-Ⅰ)、Ⅰ型胶原交联N-末端肽(NTX-Ⅰ)];双能X线检测骨密度;显微CT(Micro-CT)检测骨微结构;分别应用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹技术测定左股骨组织中RANK、RANKL、OPG mRNA和蛋白表达水平。结果与青年组比较,模型组血清NTX-Ⅰ、CTX-Ⅰ、RANKL、RANK mRNA及蛋白表达升高,PICP、PINP、OPG mRNA及蛋白表达降低,右股骨和腰椎骨密度降低,右胫骨和第5腰椎的骨体积分数、骨小梁数量减少,骨小梁间隔增宽,差异有统计学意义(P蛋白表达降低,PICP、PINP、OPG mRNA及蛋白表达升高,右股骨和腰椎骨密度升高,右胫骨的骨体积分数、骨小梁数量增加,骨小梁间隔变窄,第5腰椎的骨小梁间隔变窄,差异有统计学意义(P结构,调节骨代谢,其作用机制可能与调控RANK/RANKL/OPG信号通路有关。

关键词：运动骨质疏松核转录因子(NF)-κB受体活化因子(RANK)/RANK配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路

华泽兰内生真菌Septoriella phragmitis次级代谢产物及其生物活性研究

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天然产物研究与开发 2024年第6期36卷 986-992页

作者：张梦娇邝天浩赵金诺朱婷彭娟娟三峡大学生物与制药学院天然产物研究与利用湖北省重点实验室(中国轻工业功能酵母重点实验室) 宜昌443002

为研究华泽兰内生真菌Septoriella phragmitis的化学成分及其生物活性,运用硅胶柱柱色谱、半制备高效液相色谱等方法对其进行分离提纯,结合现代波谱技术鉴定化合物结构,从Septoriella phragmitis提取液中分离得到10个化合物,分别鉴定为... 详细信息

为研究华泽兰内生真菌Septoriella phragmitis的化学成分及其生物活性,运用硅胶柱柱色谱、半制备高效液相色谱等方法对其进行分离提纯,结合现代波谱技术鉴定化合物结构,从Septoriella phragmitis提取液中分离得到10个化合物,分别鉴定为腺苷(1)、cyclo-(S-Pro-S-Ile)(2)、5-羟基-2-羟甲基-4H-哌喃-4-酮(3)、3α-hydroxyartemisinic acid(4)、leptosphaerone C(5)、1-氨基四氢化萘(6)、泽兰素(7)、β-吲哚基丙氨酸(8)、环(丙氨酸-酪氨酸)二肽(9)、β-D-fructopyranocy-(2→6)-D-glucopyranose(10),所有化合物均为首次从华泽兰内生真菌Septoriella phragmitis中分离。对所得化合物采用对硝基苯基-β-吡喃半乳糖苷法测定α-葡萄糖苷酶抑制活性,对硝基苯磷酸盐法测定PTP1B抑制活性,MTT法测定胃癌细胞HGC-27抑制活性,标准精度对接法进行分子对接。化合物6和7有α-葡萄糖苷酶抑制活性,IC_(50)值分别为8.1、8.6μg/mL;化合物6、7和9有PTP1B抑制活性,IC_(50)值分别为6.5、8.2、0.5μg/mL;化合物5和6有胃癌细胞HGC-27抑制活性,IC_(50)值分别为12.2、16.8μg/mL。分子对接显示化合物6和7与α-葡萄糖苷酶和PTP1B蛋白有较强关联性,可作抗糖尿病先导化合物进行后续研究。

关键词：华泽兰 Septoriella phragmitis 次级代谢产物生物活性

电针对脑缺血再灌注损伤大鼠及神经细胞自噬的影响

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中国老年学杂志 2024年第10期44卷 2443-2448页

作者：黄夏荣封蔚彬胡莉芝谭金曲周桂娟王金玲尹林伟周君刘红雅曾亚华南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学中心湖南衡阳421001 南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学科湖南衡阳421001 南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学实验室湖南衡阳421001 南华大学衡阳医学院附属第一医院神经内科湖南衡阳421001

目的观察电针“百会”“水沟”穴对脑缺血再灌注损伤大鼠及神经细胞自噬的影响。方法SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、干预组各16只。假手术组麻醉后只分离左侧颈总、颈内、颈外动脉,不结扎、插线。模型组、干预组采用Zea Longa线... 详细信息

目的观察电针“百会”“水沟”穴对脑缺血再灌注损伤大鼠及神经细胞自噬的影响。方法SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、干预组各16只。假手术组麻醉后只分离左侧颈总、颈内、颈外动脉,不结扎、插线。模型组、干预组采用Zea Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。干预组电针“百会”“水沟”,电流强度1 mA,疏波频率3 Hz,密波频率15 Hz,1次/d,20 min/次,连续5 d。假手术组和模型组均不予电针处理,其他处理同干预组。制备模型5 d后,用Longa神经功能评分法对各组进行神经功能评分,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定脑梗死体积,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑脊液白细胞介素(IL)-6、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹分别检测缺血区海马组织自噬相关蛋白磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA和蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组神经功能评分明显升高,脑梗体积明显增加,脑脊液IL-6、IL-18、TNF-α水平明显升高,PI3K、Akt、mTOR mRNA及蛋白表达明显降低(均P功能评分明显降低,脑梗体积明显减小,脑脊液IL-6、IL-18、TNF-α水平明显降低,PI3K、Akt、mTOR mRNA及PI3K、Akt蛋白表达明显增高(均P功能,减少脑梗死体积。

关键词：电针百会水沟脑缺血再灌注损伤自噬

复方野菊花眼贴对蓝光诱导小鼠睑板腺功能异常的防治作用及其机制

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中华实验眼科杂志 2024年第2期42卷 117-128页

作者：李勇黄彩虹李清坚王玉倩吕雨霏张兆强胡皎月刘祖国南华大学附属第二医院眼科衡阳421000 厦门大学附属厦门眼科中心福建省眼科与视觉科学重点实验室福建省眼再生医学工程研究中心厦门大学眼科研究所厦门大学医学院厦门361102 南华大学附属第一医院眼科衡阳421000

目的探讨复方野菊花眼贴对蓝光诱导小鼠睑板腺功能异常的防治作用及其机制。方法将64只15周龄雄性C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分成2个部分,每部分32只,分别进行预防实验和治疗实验。预防实验和治疗实验各32只小鼠分别按照随机数字随... 详细信息

目的探讨复方野菊花眼贴对蓝光诱导小鼠睑板腺功能异常的防治作用及其机制。方法将64只15周龄雄性C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分成2个部分,每部分32只,分别进行预防实验和治疗实验。预防实验和治疗实验各32只小鼠分别按照随机数字随机分为正常组、蓝光组、溶剂组和眼贴组,每组8只。预防实验中,除正常组外,各组小鼠采用波长460 nm、光照度2000 lx的蓝光,每天暴露6 h,连续暴露15 d建立小鼠睑板腺功能异常模型;溶剂组和眼贴组每天在蓝光暴露前和暴露后,分别用相对应眼贴敷贴预防25 min,连续15 d,蓝光组仅接受蓝光暴露15 d处理,并于第15天行睑板腺开口照相观察小鼠睑板腺功能。治疗实验中,除正常组外,各组小鼠均采用上述方法建立小鼠睑板腺功能异常模型,溶剂组和眼贴组在结束15 d的蓝光暴露后,每天早上和下午分别用相对应眼贴敷贴治疗25 min,连续15 d,蓝光组置于标准环境中观察15 d,并在第15天行睑板腺开口照相观察小鼠睑板腺功能变化。预防实验及治疗实验的各组小鼠在处理完成后进行离体睑板腺拍照、油红O染色、苏木精-伊红染色观察小鼠睑板腺组织学变化;采用实时荧光定量PCR法检测各组睑板腺组织中炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)mRNA相对表达量;采用Western blot法检测睑板腺组织中核因子(NF)-κB和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)蛋白的表达,评估复方野菊花眼贴对蓝光诱导小鼠睑板腺炎症的改善程度。结果与正常组相比,蓝光组暴露后15 d小鼠睑板腺开口阻塞数量逐渐增加,睑板腺下睑相对剩余面积逐渐减小,差异均有统计学意义(均P实验中,眼贴组睑板腺开口阻塞数量为1.833±0.753,明显少于溶剂组的3.667±1.033,眼贴组睑板腺下睑相对剩余面积为0.718±0.091,明显大于溶剂组的0.624±0.130,差异均有统计学意义(均P蛋白相对表达量明显低于溶剂组,差异均有统计学意义(均P实验中,眼贴组和溶剂组的睑板腺开口阻塞数量分别为4.333±1.211和4.833±1.722,睑板腺下睑相对剩余面积分别为0.572±0.151和0.588±0.154,2个组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。苏木精-伊红染色结果显示,蓝光组和溶剂组睑板腺有炎性细胞浸润,眼贴组无炎性细胞浸润,腺泡形态接近正常组;油红O染色结果显示各组睑板腺均无明显脂质沉积。眼贴组IL-1β、IL-6、IFN-γmRNA相对表达量明显低于溶剂组,眼贴组NF-κB、p-NF-κB蛋白相对表达量明显低于溶剂组,差异均有统计学意义(均P功能异常具有防治作用。

关键词：炎症蓝光睑板腺功能异常复方野菊花眼贴

芳香烃受体蛋白质生理功能及在肿瘤中的作用机制

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第1期40卷 54-62页

作者：常文静严汉池天津大学生命科学学院结构生物学实验室天津300072

芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AHR)作为一种配体依赖性的转录因子,介导2,3,7,8-四氯二苯并对二恶英(2,3,7,8-tetrachloro-dibenzop-dioxin,TCDD)等卤代烃的毒性作用,属于碱性螺旋-环-螺旋-PAS(basic Helix-Loop-Helix-PER-ARNT-SIM,bHLH-PAS)家族成员,具有进化保守性,在多种动物和人类中表达。该蛋白质通过与特定配体结合发生构象改变,转位至细胞核同AHR核转运蛋白(AHR nuclear translocator,ARNT)形成二聚体,并对下游靶基因表达发挥调控作用。最近研究发现,AHR也成为控制细胞增殖分化、凋亡、迁移黏附等多种生理过程的关键转录因子,揭示了AHR在细胞稳态、宿主免疫和肿瘤发展中的重要作用。本文基于国内外对AHR的系列研究,讨论了AHR功能结构、发挥作用的信号通路及其多样性的配体,重点阐述其在防御和屏障保护、调节自身免疫进程、参与调节B细胞和多种T细胞亚群发育分化及其细胞因子的表达,以及在不同微环境中对肿瘤发挥促进或抑制作用的讨论,旨在为相关免疫疾病和肿瘤的AHR靶向治疗提供新思路。

关键词：芳香烃受体 2,3,7,8-四氯二苯并对二恶英免疫防御肿瘤

电针对老年骨质疏松大鼠骨组织中组织蛋白酶K及Ⅰ型胶原表达的影响

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中国老年学杂志 2024年第15期 3679-3683页

作者：屈萌艰彭昕珂彭婷周君廖源王金玲刘丹妮钟培瑞廖阳黄夏荣南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学科南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学中心南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学实验室南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学四川省重点实验室广州医科大学附属清远医院(清远市人民医院)康复科

目的探讨电针对老年大鼠骨质疏松及组织蛋白酶K、Ⅰ型胶原表达的影响。方法选取8只6月龄SD雄性大鼠为青年组，16只24月龄SD雄性大鼠随机分为老年组和电针组，每组8只。电针组接受电针干预，电针穴位：“肾俞”“血海”“太溪”“阳陵... 详细信息

目的探讨电针对老年大鼠骨质疏松及组织蛋白酶K、Ⅰ型胶原表达的影响。方法选取8只6月龄SD雄性大鼠为青年组，16只24月龄SD雄性大鼠随机分为老年组和电针组，每组8只。电针组接受电针干预，电针穴位：“肾俞”“血海”“太溪”“阳陵泉”。电流强度1 mA,疏密波，频率3 Hz/15 Hz,每周5 d, 1次/d,连续干预8 w,其余2组不接受干预。8 w后取材，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血骨代谢标志物Ⅰ型前胶原氨基末端肽(PⅠNP)、Ⅰ型胶原交联氨基末端肽(NTX)水平，双能X射线检测左侧胫骨和L5椎体的骨密度，显微CT检测右胫骨近端和L4椎体的骨微结构，Western印迹、实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测股骨组织组织蛋白酶K、Ⅰ型胶原蛋白及mRNA表达水平。结果与青年组相比，老年组NTX水平升高，PⅠNP水平降低，骨密度、骨体积分数、骨小梁数量均降低，骨小梁间距增大，组织蛋白酶K蛋白及mRNA表达升高，Ⅰ型胶原蛋白及mRNA表达降低，差异有统计学意义(P蛋白酶K蛋白及mRNA表达降低，Ⅰ型胶原蛋白及mRNA表达升高，差异有统计学意义(P蛋白酶K的表达从而抑制Ⅰ型胶原蛋白的降解，达到治疗骨质疏松的作用。

关键词：电针骨质疏松组织蛋白酶K Ⅰ型胶原蛋白骨吸收骨形成

mitoNEET过表达抑制铁死亡引起的棕色脂肪细胞线粒体代谢功能障碍

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中国病理生理杂志 2024年第5期40卷 852-861页

作者：郑红玉田震王燕霞周坤任重周支香熊文昊郑核姜志胜南华大学衡阳医学院心血管疾病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室动脉硬化性疾病湖南省国际科技创新合作基地湖南衡阳421001 邵阳中心医院(南华大学附属邵阳医院)肝胆外科湖南邵阳422000

目的:探究mitoNEET能否抑制铁死亡引起的棕色脂肪细胞线粒体代谢功能紊乱。方法:采用原代C57BL/6J小鼠棕色脂肪细胞构建体外模型,Western blot检测相关蛋白,试剂盒检测细胞中铁离子和ATP含量,荧光显微镜及流式细胞术检测线粒体膜电位和... 详细信息

目的:探究mitoNEET能否抑制铁死亡引起的棕色脂肪细胞线粒体代谢功能紊乱。方法:采用原代C57BL/6J小鼠棕色脂肪细胞构建体外模型,Western blot检测相关蛋白,试剂盒检测细胞中铁离子和ATP含量,荧光显微镜及流式细胞术检测线粒体膜电位和活性氧(ROS)水平。结果:与对照组相比,铁死亡诱导剂erastin处理组棕色脂肪细胞中铁死亡相关蛋白ACSL4表达增加了1.13倍,SLC7A11和GPX4表达分别减少了27.33%和25.33%(P蛋白含量下降了42.14%(P蛋白Nrf1、PGC-1α、MFN2和UCP1表达水平分别下降了20.98%、15.17%、15.03%和34.22%(P蛋白ACSL4表达下降了37.95%,SLC7A11和GPX4表达分别增加了77.82%和66.30%(P蛋白MFN2、PGC-1α、Nrf1和UCP1的表达分别上调了79.06%、72.89%、40.14%和31.68%(P<0.05)。试剂盒检测结果显示,与对照组相比,LV-mitoNEET组细胞铁离子含量降低了43.50%,ATP含量增加了33.50%(P<0.05)。结论:mitoNEET过表达抑制铁死亡引起的棕色脂肪细胞线粒体代谢紊乱。

关键词： mitoNEET蛋白棕色脂肪细胞线粒体铁死亡

去泛素化酶OTUB2通过诱导DDX54活性增加中性粒细胞外诱捕网的形成以及促进结直肠癌细胞活力和侵袭能力

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安徽医科大学学报 2024年第3期59卷 463-472页

作者：蒋良君李卫南华大学衡阳医学院附属南华医院消化内科衡阳421002 南华大学衡阳医学院附属南华医院肝胆外科衡阳421002

目的探讨含OTU结构域的泛素醛结合蛋白2(OTUB2)影响RNA解螺旋酶54(DDX54)的活性及其对中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的形成和结直肠癌(CRC)细胞活力、侵袭的影响。方法分离CRC患者和健康对照组的外周血中性粒细胞,并使用佛波酯(PMA)或脱... 详细信息

目的探讨含OTU结构域的泛素醛结合蛋白2(OTUB2)影响RNA解螺旋酶54(DDX54)的活性及其对中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的形成和结直肠癌(CRC)细胞活力、侵袭的影响。方法分离CRC患者和健康对照组的外周血中性粒细胞,并使用佛波酯(PMA)或脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ)刺激中性粒细胞4 h;Western blot检测NETs标记物髓过氧化物酶(MPO)和瓜氨酸组蛋白H3(Cit-H3)的表达;干预SW480细胞中OTUB2或DDX54的表达并将其和中性粒细胞共培养,细胞分为如下组:对照组(不做任何处理),NETs组、vector组、OTUB2组、NETs+si-OTUB2组(SW480细胞、转染了vector、OTUB2过表达质粒和si-OTUB2的SW480细胞分别与PMA处理的中性粒细胞共培养),OTUB2+DNaseⅠ组(转染了OTUB2过表达质粒的SW480细胞与DNaseⅠ处理的中性粒细胞共培养),si-OTUB2组、OTUB2+si-NC组和OTUB2+si-DDX54组(转染了si-OTUB2、OTUB2过表达质粒和si-NC、OTUB2过表达质粒和si-DDX54的SW480细胞分别与中性粒细胞共培养)。ELISA检测SW480细胞上清液中MPO-DNA复合物相对表达量和Cit-H3的浓度;MTT和Transwell检测SW480细胞活力和侵袭能力;RNA测序筛选OTUB2调控的下游基因并使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫共沉淀(co-IP)和谷胱甘肽S-转移酶(GST)亲和纯化(GST-pull-down)、His-tag pull-down实验验证DDX54和OTUB2的相互作用。结果与健康对照相比,CRC患者外周血中NETs的形成增加。与对照组相比,NETs组CRC细胞活力和侵袭增加(P实验、GST pull down实验和His-tag pull down实验表明OTUB2和DDX54之间存在相互作用。与OTUB2+si-NC组比较,OTUB2+si-DDX54组MPO-DNA复合物相对表达量和Cit-H3的浓度减少,细胞活力和侵袭减少(P<0.05)。结论去泛素化酶OTUB2可以通过上调DDX54的增加NETs的形成并促进CRC细胞活力和侵袭。

关键词：去泛素化 OTUB2 DDX54 中性粒细胞胞外诱捕网结直肠癌中性粒细胞