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细胞间黏附分子-1在强直性脊柱炎间充质干细胞黏附与迁移中的作用及其机制

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中华医学杂志 2024年第25期104卷 2350-2358页

作者：王开阳陆景顺宋晨宇乔木常梦寒李耀李久坤唐邹立鲍虹达邱勇钱邦平南京大学医学院附属鼓楼医院骨科脊柱外科南京

目的探讨细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在强直性脊柱炎(AS)骨髓间充质干细胞(MSCs)黏附与迁移中的作用及其机制。方法回顾性收集2021年10月至2022年10月南京大学医学院附属鼓楼医院AS和胸腰椎骨折患者(作为对照, HC组)术中骨髓组织和韧带组... 详细信息

目的探讨细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在强直性脊柱炎(AS)骨髓间充质干细胞(MSCs)黏附与迁移中的作用及其机制。方法回顾性收集2021年10月至2022年10月南京大学医学院附属鼓楼医院AS和胸腰椎骨折患者(作为对照, HC组)术中骨髓组织和韧带组织, 采用Ficoll分离法, 分离培养MSCs。高分辨率显微镜观察细胞形态, 并采用免疫荧光染色对比分析AS与HC组MSCs的细胞骨架差异。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和流式细胞术分析AS与对照组的组织ICAM-1表达。Transwell迁移实验及伤口愈合实验计算两组MSCs的迁移个数和迁移面积差异, 评估两组细胞的迁移速率。结果取AS组患者(2男1女, 年龄分别为33、37、32岁)和对照组患者(2男1女, 年龄分别为35、32、38岁)骨髓和棘间韧带组织。明场和荧光染色观察到AS-MSCs相较于HC-MSCs细胞形态宽大。棘间韧带免疫荧光染色结果显示AS患者表达更多的ICAM-1(68.38±3.42比48.31±2.43)和CD105(37.97±2.16比23.36±2.06)(均P实验证明AS-MSCs的迁移能力比HC-MSCs更强[(5 449±172)比(4 016±155)个, P<0.001], 并且使用ICAM-1抑制剂A-205804后, 对于AS-MSCs迁移速率的抑制效率高于HC-MSCs[(2 145±239)比(3 539±316)个, P=0.004]。结论 ICAM-1异常表达对于MSCs黏附和迁移有显著影响, AS-MSCs的ICAM-1表达显著性增加, 进而增加了AS-MSCs的迁移速率。

关键词：脊柱炎, 强直性间充质干细胞细胞黏附细胞间黏附分子-1 细胞迁移

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“E骨”-反肩置换术一站式术前规划系统

南方医科大学学报 2024年第5期44卷 967-973页

作者：李穆米昀沈世文吴心远严静东陈滨曹蕾南方医科大学南方医院信息中心广东广州510515 南方医科大学南方医院骨科-创伤骨科广东广州510515 南方医科大学生物医学工程学院//广东省医学图像处理重点实验室//广东省医学成像与诊断技术工程实验室广东广州510515 南方医科大学第一临床医学院广东广州510515 南京大学医学院附属金陵医院(东部战区总医院)骨科江苏南京210002

目的为提高反肩置换术术前规划的精准度和效率,本研究开发了“E骨”—反肩置换术一站式术前规划系统。方法利用nnU-net深度神经网络进行肩胛骨分割,获得精确的肩胛骨分割结果;结合骨密度、上下倾角和入钉长度3个关键因素自动定位基座,... 详细信息

目的为提高反肩置换术术前规划的精准度和效率,本研究开发了“E骨”—反肩置换术一站式术前规划系统。方法利用nnU-net深度神经网络进行肩胛骨分割,获得精确的肩胛骨分割结果;结合骨密度、上下倾角和入钉长度3个关键因素自动定位基座,并计算出手术规划所需定量参数;结合关节盂形态和基座定位信息生成个性化导板;编写系统界面,将各部分功能模块化组装便于使用,提供交互操作与规划结果显示的功能。结果构建出“E骨”术前规划系统。本系统与Mimics系统相比,减少了规划过程中繁琐的手动调整,平均入钉长度规划结果长于Mimics系统,且规划时间缩短86%。本系统肩胛骨分割精度达到99.93%,较Mimics更高。结论本研究为反肩置换术提供了一套一站式的高效、精准的术前规划方案,具有广泛的临床应用前景。

关键词：一站式反肩置换术术前规划系统肩胛骨分割基座定位

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温肾通督方通过减轻铁过载促进脊髓损伤修复

中国中西医结合杂志 2024年

作者：陈思娴马勇石磊吴承杰赵瑞华郭杨潘娅岚吴毛刘孟敏南京中医药大学中医学院·中西医结合学院南京中医药大学骨伤修复与重建新技术实验室南京中医药大学无锡附属医院江苏省中医退行性骨关节病临床医学创新中心

目的探究温肾通督方通过减轻脊髓损伤后铁过载现象促进微血管内皮细胞（MECs）吞噬和清理髓鞘碎片，进而改善脊髓损伤后炎症微环境的作用机制。方法 50只C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为5组，即：假手术组、模型组、甲磺酸去铁胺（DF... 详细信息

目的探究温肾通督方通过减轻脊髓损伤后铁过载现象促进微血管内皮细胞（MECs）吞噬和清理髓鞘碎片，进而改善脊髓损伤后炎症微环境的作用机制。方法 50只C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为5组，即：假手术组、模型组、甲磺酸去铁胺（DFO）组、温肾通督方组、温肾通督方+DFO组，每组各10只。采用改良Allen’s法制备脊髓损伤小鼠模型，通过HE染色和尼氏染色观察脊髓的病理改变；采用铁离子比色法检测试剂盒测定血清中铁离子含量；利用ELISA法检测脊髓匀浆和血清中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平；通过3D激光共聚焦观察脊髓中MECs吞噬和清理髓鞘碎片情况。结果实验过程中模型组、DFO组及温肾通督方组各死亡1只。与模型组比较，HE染色结果表明，DFO组和温肾通督方组能够减少脊髓空洞和神经纤维排列紊乱现象；尼氏染色分析显示，DFO组和温肾通督方组可改善尼氏体形态和神经元固缩现象；铁离子比色法检测发现，DFO组和温肾通督方组小鼠血清中铁离子浓度显著减少（P<0.01）;ELISA结果显示，与假手术组比较，模型组血清及脊髓组织匀浆中MCP-1、IL-6、IL-1β和TNF-α浓度含量均显著上升（P<0.01）。与模型组比较，DFO、温肾通督方组能够显著降低血清中MCP-1、IL-6、IL-1β、TNF-α浓度（P<0.05,P<0.01）；温肾通督方+DFO组可显著降低血清中MCP-1和IL-1β浓度（P<0.01）。与温肾通督方组比较，温肾通督方+DFO组显著提高MCP-1、IL-6及IL-1β的浓度（P<0.01）。与模型组比较，DFO、温肾通督方、温肾通督方+DFO组能够显著降低脊髓组织中MCP-1、IL-6、IL-1β（除温肾通督方组）和TNF-α浓度（P<0.05,P<0.01）;3D激光共聚焦结果表明，DFO组和温肾通督方组可促进MECs吞噬和清理髓鞘碎片。结论温肾通督方可能通过减轻铁过载促进MECs吞噬髓鞘碎片，改善炎性微环境，促进脊髓损伤修复。

关键词：脊髓损伤温肾通督方微血管内皮细胞髓鞘碎片铁过载中药复方

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猪腹膜间皮细胞的分离培养及初步应用

畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 1249-1256页

作者：黄媛媛王佳陈嘉瑜甘源袁厅冯志新邵国青王先炜熊祺琰南京农业大学动物医学院南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300

本研究旨在建立猪原代腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cell, PMC)的分离和体外培养方法,并将其初步应用于猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)体外感染细胞模型。采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化猪大网膜组织分离猪PMC细胞,通过形态学... 详细信息

本研究旨在建立猪原代腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cell, PMC)的分离和体外培养方法,并将其初步应用于猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)体外感染细胞模型。采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化猪大网膜组织分离猪PMC细胞,通过形态学、免疫学方法鉴定细胞。使用Mhr感染PMC细胞,观察细胞形态变化,并利用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)法检测细胞活性损伤情况。结果显示,倒置相差显微镜观察显示,分离培养的细胞早期呈拉网状,5~8 d后生长可达融合状态,细胞大小均一,呈多边形铺路石状;间接免疫荧光试验结果显示,细胞波形蛋白、角蛋白-18抗原呈阳性,第Ⅷ因子相关抗原、白细胞CD45抗原呈阴性;扫描电镜下可见细胞表面微绒毛。结果证实分离培养的细胞为猪PMC细胞,纯度达95%以上。Mhr感染后,光镜下可观察到细胞发生明显皱缩,感染组细胞的LDH释放量较对照组细胞显著升高。本研究成功建立了猪原代PMC细胞的分离培养方法,并初步用于Mhr体外感染,为研究Mhr等引起浆膜炎的病原与宿主的互作机制提供了体外细胞模型。

关键词：腹膜间皮细胞原代培养猪猪鼻支原体

仙连解毒方调节肠道菌群与CD8T细胞免疫反应抗结直肠癌效应

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：庄育培周洪立梁雨薇郑明悦袁伟琛程海波周红光南京中医药大学第一临床医学院江苏省中医药防治肿瘤协同创新中心南京中医药大学药学院

目的：探究仙连解毒方调控肠道菌群介导的CD8+T细胞抗肿瘤免疫反应对结直肠癌(CRC)的影响。方法：30只雄性BALB/c小鼠分为正常组、模型组、奥沙利铂组(8×10-3g·kg-1·3d-1)、仙连解毒方高剂量组(12.9 g·kg-1·d-1)、仙连解毒方低剂量... 详细信息

目的：探究仙连解毒方调控肠道菌群介导的CD8+T细胞抗肿瘤免疫反应对结直肠癌(CRC)的影响。方法：30只雄性BALB/c小鼠分为正常组、模型组、奥沙利铂组(8×10-3g·kg-1·3d-1)、仙连解毒方高剂量组(12.9 g·kg-1·d-1)、仙连解毒方低剂量(6.45 g·kg-1·d-1)，通过皮下注射CT-26细胞构建CRC移植瘤模型，分别给予相应干预。另一方面，取10只雄性BALB/c小鼠分为仙连解毒方粪菌移植组(XFMT)以及模型粪菌移植组(MFMT)，通过四联抗生素混合溶液清除小鼠肠道定植菌，然后通过皮下注射CT-26细胞构建伪无菌CRC移植瘤小鼠。收集上述模型组和仙连解毒方高剂量组的小鼠粪便用于制备粪菌液。XFMT组灌胃仙连解毒方高剂量组治疗后CRC小鼠的粪菌液，MFMT组灌胃模型组CRC小鼠的粪菌液。观察记录小鼠肿瘤体积变化；苏木素-伊红(HE)染色评估小鼠肿瘤组织的病理形态学改变；通过PacBio全长多样性测序分析肠道菌群的变化；流式细胞术和免疫荧光染色评估肿瘤组织中T细胞浸润变化；ELISA检测肿瘤组织中IFN-γ的含量差异。结果：与模型组比较，奥沙利铂组、仙连解毒方高剂量组以及仙连解毒方低剂量组小鼠的移植瘤体积均显著减小(均P4.0)分析结果显示Alistipes、Helicobacteraceae、Helicobacter、Helicobacter pylori BU、Bacteroides acidifaciens、Campylobacterales、Kineothrix、Kineothrix alysoides、Acetatifactor sp 900066365、Faecalimonas、Faecalimonas umbilicata、Acetatifactor、Lachnospiraceae、Clostridia、Eubacteriales、Firmicutes在模型组中富集；而Verrucomicrobia、Verrucomicrobia、Verrucomicrobiales、Akkermansiaceae、Akkermansia、Akkermansia muciniphila、Bacteroidales、Bacteroidia、Bacteroidetes、Parabacteroides、Tannerellaceae、Muribaculum、Parabacteroides gordonii在仙连解毒方高剂量组中富集。此外，与模型组比较，仙连解毒方高剂量组肿瘤组织中CD8+T细胞比例以及IFN-γ含量均明显升高(P4.0)分析结果显示，Muribaculum sp002492595、Acetatifactbr sp90

关键词：肠道菌群肿瘤免疫结直肠癌仙连解毒方中医药

土壤源Penicillium ludwigii X-16的筛选鉴定及其有机-无机氮源利用特征

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应用与环境生物学报 2024年第2期30卷 301-308页

作者：刘欣刘冉苏怡睿姜允斌邓欢张银萍韩成钟文辉南京师范大学地理科学学院南京210023 江苏省物质循环与污染控制重点实验室南京210023 南京师范大学环境学院南京210023 南京师范大学分析测试中心南京210023

将除作物吸收氮外的化学氮肥尽可能固持在土壤中,有助于提升化学氮肥利用率、减少化学氮肥施用量及降低环境氮素污染.以无机氮作为唯一氮源进行富集培养,从酸性旱地红壤中分离筛选出一株无机氮固持真菌菌株X-16,经菌株形态观测及真菌IT... 详细信息

将除作物吸收氮外的化学氮肥尽可能固持在土壤中,有助于提升化学氮肥利用率、减少化学氮肥施用量及降低环境氮素污染.以无机氮作为唯一氮源进行富集培养,从酸性旱地红壤中分离筛选出一株无机氮固持真菌菌株X-16,经菌株形态观测及真菌ITS基因同源性分析,鉴定为路德维希青霉菌(Penicillium ludwigii).进一步监测菌株在不同有机或无机氮源液体培养基中的生长状况,发现菌株X-16能利用无机氮源、氨基酸氮源和复杂有机氮源(玉米醇溶蛋白)进行生长,尤其偏爱利用复杂有机氮源.X-16在玉米醇溶蛋白氮源处理下产生了最大的微生物生物量(1.93±0.50 g/L)、最高的无机氮固持速率(0.57±0.10 mg L^(-1)h^(-1))和有机氮矿化速率(0.57±0.13 mg L^(-1)h^(-1)).相比于不接种处理,接种菌株X-16显著提升土壤化学氮肥固持速率,提升量为0.78±0.06 mg kg^(-1)d^(-1),提升幅度达492%.本研究从酸性旱地红壤中筛选出优势无机氮固持真菌菌株,该菌株能有效提升土壤无机氮固持能力,而且能将复杂有机氮源矿化后再利用,可为化肥源无机氮素固持研究及土壤源有机氮素释放研究提供理论依据和菌种资源.(图6参58)

关键词：青霉菌属氮源化学氮肥无机氮固持有机氮矿化

仙连解毒方通过调控血管生成抗结直肠癌复发的疗效机制

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：徐燕茹陶李蕙苹钱景阳沈卫星谭佳妮余成涛范旻旻徐长亮赖岳阳李柳孙东东程海波南京中医药大学第一临床医学院江苏省中医药防治肿瘤协同创新中心

目的：探究仙连解毒方抗结直肠癌（CRC）复发的作用，并探讨相关机制。方法：25只Balb/c小鼠通过腋下注射CT26细胞并切除99%、残留1%皮下瘤的方法建立术后复发模型，随机分为模型组、仙连解毒方低剂量（XLJDP-L）组(6.45 g·kg-1·d-1)... 详细信息

目的：探究仙连解毒方抗结直肠癌（CRC）复发的作用，并探讨相关机制。方法：25只Balb/c小鼠通过腋下注射CT26细胞并切除99%、残留1%皮下瘤的方法建立术后复发模型，随机分为模型组、仙连解毒方低剂量（XLJDP-L）组(6.45 g·kg-1·d-1)、仙连解毒方中剂量（XLJDP-M）组(12.9 g·kg-1·d-1)、仙连解毒方高剂量（XLJDP-H）组(25.8 g·kg-1·d-1)、5-氟脲嘧啶（5-FU）组(1×10-3g·kg-1·d-1)，连续干预14天后处死小鼠，剥取复发瘤组织。苏木素-伊红（HE）染色观察复发瘤组织病理形态学变化；免疫组化（IHC）评估复发瘤组织内增殖细胞核抗原（Ki67）、血管内皮生长因子（VEGF）、血小板-内皮细胞粘附分子（CD31）的表达；免疫蛋白印迹法（Western Blot）检测复发瘤组织内血管生成素-2（ANG-2）、VEGF、磷酸化-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B（p-Akt）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B（Akt）、磷酸化-磷脂酰肌醇激酶（p-PI3K）、磷脂酰肌醇激酶（PI3K）蛋白表达水平。结果：在治疗前，与模型组比较，仙连解毒方低、中、高组、5-FU组小鼠的瘤体体积、瘤重、体质量均无统计学差异（均P＞0.05），模型稳定。在治疗后，与模型组相比，仙连解毒方低、中、高剂量组和5-FU组小鼠的瘤体体积、瘤重均显著降低（均P＜0.01），且存在一定剂量依赖。同时，与模型组比较，仙连解毒方低、中、高剂量组小鼠的体质量均未见显著差异，差异无统计学意义（均P＞0.05）。HE染色显示，与模型组相比，仙连解毒方低、中、高剂量组、5-FU组肿瘤组织内细胞排列松散，间隙增大，胞核小而皱缩、浅染，核分裂象及异型核细胞减少，坏死区域增多。IHC显示，与模型组比较，仙连解毒方低、中、高剂量组和5-FU组复发瘤组织内Ki67、VEGF、CD31的阳性率明显减少（均P<0.01），且呈剂量依赖性。Western Blot结果显示，与模型组比较，仙连解毒方低、中、高剂量组及5-FU组小鼠复发瘤组织内ANG-2（均P＜0.01）、VEGF（P<0.05，P<0.01，P<0.01，P<0.01）蛋白表达显著下调，p-Akt/Akt（P<0.05，P<0.01，P<0.01，P<0.01）、p-PI3K/PI3K（均P＜0.01）蛋白比值显著降低，且随剂量的增加而降低。结论：仙连解毒方具有显著抑制CRC小鼠皮下瘤术后复发的作用，其机制可能是通过调控PI3K/Akt通路，下调ANG-2、VEGF、CD31等血管生成的关键蛋白表达。

关键词：仙连解毒方结直肠癌术后复发血管生成疗效机制

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“E骨骨”—反肩置换术一站式术前规划系统

南方医科大学学报 2024年

作者：李穆米昀沈世文吴心远严静东陈滨曹蕾南方医科大学第一临床医学院南京大学医学院附属金陵医院(东部战区总医院)骨科南方医科大学南方医院骨科-创伤骨科南方医科大学生物医学工程学院//广东省医学图像处理重点实验室//广东省医学成像与诊断技术工程实验室南方医科大学南方医院信息中心

目的为提高反肩置换术术前规划的精准度和效率，本研究开发了“E骨”—反肩置换术一站式术前规划系统。方法利用nnU-net深度神经网络进行肩胛骨分割，获得精确的肩胛骨分割结果；结合骨密度、上下倾角和入钉长度3个关键因素自动定位... 详细信息

目的为提高反肩置换术术前规划的精准度和效率，本研究开发了“E骨”—反肩置换术一站式术前规划系统。方法利用nnU-net深度神经网络进行肩胛骨分割，获得精确的肩胛骨分割结果；结合骨密度、上下倾角和入钉长度3个关键因素自动定位基座，并计算出手术规划所需定量参数；结合关节盂形态和基座定位信息生成个性化导板；编写系统界面，将各部分功能模块化组装便于使用，提供交互操作与规划结果显示的功能。结果构建出“E骨”术前规划系统。本系统与Mimics系统相比，减少了规划过程中繁琐的手动调整，平均入钉长度规划结果长于Mimics系统，且规划时间缩短86%。本系统肩胛骨分割精度达到99.93%，较Mimics更高。结论本研究为反肩置换术提供了一套一站式的高效、精准的术前规划方案，具有广泛的临床应用前景。

关键词：一站式反肩置换术术前规划系统肩胛骨分割基座定位

基于小鼠谱系追踪的围着床期子宫内膜上皮-间质转化探究

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生殖医学杂志 2024年第3期33卷 355-364页

作者：唐心怡曹志文王晓莹周继东张阳岳秋玲姜瑞伟李朝军颜桂军孙海翔南京大学医学院附属鼓楼医院生殖医学中心南京210008 南京医科大学生殖医学与子代健康全国重点实验室南京211116

目的利用Ltf cre Rosa26^(mT/mG)小鼠模型,进行围着床期子宫内膜上皮-间质转化(EMT)的谱系追踪研究,寻找子宫内膜EMT的直接形态学证据。方法收集8周龄雌性Ltf cre Rosa26^(mT/mG)小鼠子宫组织进行冰冻切片,分别与上皮细胞、间质细胞、... 详细信息

目的利用Ltf cre Rosa26^(mT/mG)小鼠模型,进行围着床期子宫内膜上皮-间质转化(EMT)的谱系追踪研究,寻找子宫内膜EMT的直接形态学证据。方法收集8周龄雌性Ltf cre Rosa26^(mT/mG)小鼠子宫组织进行冰冻切片,分别与上皮细胞、间质细胞、免疫细胞的标志物E-cadherin、Vimentin、CD45共染后,激光共聚焦荧光显微镜(confocal)观察成像。围着床期研究:8周龄的Ltf cre Rosa26^(mT/mG)雌鼠与可育雄鼠按1:1合笼,以见栓当日上午为0.5 dpc,收集2.5 dpc、3.5 dpc、4.0 dpc、4.5 dpc的小鼠子宫进行冰冻切片,分析胚胎种植对子宫内膜EMT的影响。雌孕激素序贯刺激模型:8周龄的雌性Ltf cre Rosa26^(mT/mG)小鼠进行卵巢切除术,2周后进行雌激素(E_(2))、孕激素(P 4)序贯刺激,在不同处理后收集小鼠子宫组织,分析雌孕激素对子宫内膜EMT的影响。结果Ltf cre Rosa26^(mT/mG)小鼠子宫内膜间质中零星分布着增强绿色荧光蛋白阳性(EGFP+)细胞,与E-cadherin、Vimentin、CD45共染后,confocal结果显示,部分EGFP+细胞表现为Vimentin+,这部分Vimentin+EGFP+细胞即为由上皮细胞EMT形成的间质细胞。围着床期研究:围着床期中,与2.5 dpc、4.0 dpc相比,3.5 dpc时子宫内膜间质中EGFP+细胞个数显著降低(P<0.01)。雌孕激素序贯刺激模型:与卵巢切除后相比,E_(2)刺激后间质中EGFP+细胞数量显著降低,休息2 d后间质中EGFP+细胞数量显著增加,P 4刺激后间质中EGFP+细胞数量又显著降低(P<0.05)。结论子宫内膜中存在上皮细胞EMT形成的间质细胞,子宫内膜EMT在非胚胎植入时期就已经存在,且受到雌孕激素的严格调控。

关键词：上皮-间质转化胚胎种植谱系追踪