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子宫内膜异位症微生态改变及其对生育力影响的研究进展

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中华生殖与避孕杂志 2023年第6期43卷 646-649页

作者：许艳红侯振冒韵东南京医科大学第一附属医院生殖医学中心、生殖医学国家重点实验室南京210029

子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)是妇科常见疾病,常发生于育龄期妇女,主要表现为盆腔疼痛、不孕等,严重困扰女性的身心健康。人体各部位存在着种类众多、数量庞大的微生物群,通过微生物群落本身或代谢产物在生殖的各个阶段发挥重要... 详细信息

子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)是妇科常见疾病,常发生于育龄期妇女,主要表现为盆腔疼痛、不孕等,严重困扰女性的身心健康。人体各部位存在着种类众多、数量庞大的微生物群,通过微生物群落本身或代谢产物在生殖的各个阶段发挥重要作用。近年研究显示,EMS患者各部位微生物群组成发生改变,EMS对女性生育力的影响与人体微生态环境失衡有着密不可分的关系。本文对女性微生物群落和EMS之间的相互作用,及微生态环境改变与EMS患者不良妊娠结局的关系进行综述。

关键词：子宫内膜异位症微生物群生育力

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蜡样透明带卵母细胞患者临床助孕结局分析

中华生殖与避孕杂志 2022年第7期42卷 729-733页

作者：孟慧董娟韩乐夏梦刘嘉茵蔡令波南京医科大学第一附属医院生殖医学中心生殖医学国家重点实验室南京210029

目的探讨蜡样透明带卵母细胞与正常形态卵母细胞临床助孕结局的差异。方法回顾性队列研究分析2015年1月至2019年12月期间在南京医科大学第一附属医院生殖医学中心行辅助生殖助孕的93个卵胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm inject... 详细信息

目的探讨蜡样透明带卵母细胞与正常形态卵母细胞临床助孕结局的差异。方法回顾性队列研究分析2015年1月至2019年12月期间在南京医科大学第一附属医院生殖医学中心行辅助生殖助孕的93个卵胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)周期,根据卵母细胞的形态和授精方式分为三组:正常形态卵母细胞组(A组,n=52),蜡样透明带卵母细胞常规ICSI组(B组,n=30);蜡样透明带卵母细胞补救ICSI组(C组,n=11)。比较三组间的实验室和临床结局。结果三组的获卵率、正常受精率、临床妊娠率、种植率差异均没有统计学意义(均P>0.05)。A、B组的优质胚胎率[62.50%(250/400),59.07%(114/193)]均高于C组[40.85%(29/71)],差异有统计学意义(P=0.001,P=0.006)。A组的囊胚形成率[64.78%(160/247)]高于C组[37.14%(13/35)],差异有统计学意义(P=0.002)。另外,A组的流产率[2.44%(1/41)]低于B组和C组[21.05%(4/19),P=0.031;44.44%(4/9),P=0.002],累积妊娠率[82.69%(43/52)]高于B组和C组[56.67%(17/30),P=0.009;45.45%(5/11),P=0.014],差异有统计学意义。结论蜡样透明带样的卵母细胞采用常规ICSI授精可获得与正常形态卵母细胞相当的优质胚胎率和囊胚形成率,但总体的临床结局仍低于正常形态卵母细胞。建议蜡样透明带的异常卵母细胞直接采用ICSI授精方式,可以获得较为理想的临床结局。

关键词：精子注射,细胞质内胚胎发育蜡样透明带卵母细胞累积妊娠率

高雄激素促进人胚胎干细胞向男性原始生殖细胞分化的研究

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中华男科学杂志 2020年第6期26卷 487-498页

作者：曹孟刘菡文宁松刘嘉茵覃莲菊崔毓桂南京医科大学第一附属医院临床生殖医学中心/生殖医学国家重点实验室江苏南京210029

目的:多囊卵巢综合征(PCOS)母亲孕早期的高雄激素可能影响其男性子代成年后的生育力。本研究利用人胚胎干细胞(hESCs)体外分化的实验模型,观察不同浓度睾酮对hESCs向早期雄性生殖细胞分化的影响,探讨孕早期高雄激素暴露对男性子代原始... 详细信息

目的:多囊卵巢综合征(PCOS)母亲孕早期的高雄激素可能影响其男性子代成年后的生育力。本研究利用人胚胎干细胞(hESCs)体外分化的实验模型,观察不同浓度睾酮对hESCs向早期雄性生殖细胞分化的影响,探讨孕早期高雄激素暴露对男性子代原始生殖细胞储备及成年后生育力的潜在影响。方法:2μmol/L视黄酸(RA)体外诱导hESCs(46,XY)向雄性生殖细胞分化,同时添加0 mol/L、3×10^-7 mol/L、5×10^-7 mol/L、15×10^-7 mol/L、45×10^-7 mol/L、135×10^-7 mol/L睾酮,在分化的第0、4、7、14天收集细胞样品,分析不同分化阶段雄性生殖细胞特异基因的表达,比较分化进程、分化效率。结果:不同浓度睾酮处理的hESCs,同一分化阶段细胞形态无差异。原始生殖细胞的标志基因DAZL的表达峰值出现在分化的第4天,15×10^-7 mol/L、45×10^-7 mol/L、135×10^-7 mol/L睾酮处理组的DAZL的表达量与3×10^-7 mol/L睾酮处理组对比明显增加(P﹤0.01)。减数分裂期早期生殖细胞特异基因SCP3的表达在分化的第4天开始上调,45×10^-7 mol/L睾酮处理组与3×10^-7 mol/L、5×10^-7 mol/L睾酮处理组比较,SCP3的表达均明显上调(P﹤0.01);SCP3的表达在分化的第7天达到峰值,15×10^-7 mol/L、45×10^-7 mol/L、135×10^-7 mol/L睾酮处理组与3×10^-7 mol/L睾酮处理组相比,SCP3明显高表达(P﹤0.01)。免疫荧光、流式细胞分析结果显示,各组间分化第4天DAZL、分化第7天SCP3及VASA的表达量随着睾酮浓度升高而有升高趋势。分化第4天,雄激素受体(AR)的表达开始升高,并且可维持至分化第14天;在相同分化阶段,睾酮较高浓度组hESCs的AR表达量高于睾酮较低浓度组(但P>0.05)。结论:hESCs向早期雄性生殖细胞分化过程中高雄激素处理,诱导雄激素受体的提前表达,使hESCs向早期雄性生殖细胞分化提前,可能导致PCOS患者男性子代雄性原始生殖细胞储备不足,进而影响其成年后的生育力。hESCs可作为体外模型研究PCOS患者宫内高雄激素暴露对其男性子代生育力影响研究的新工具,并有益于男性不育症病因机制的研究。

关键词：多囊卵巢综合征高雄激素人胚胎干细胞生殖细胞男性不育

妊娠早期自然流产组织染色体异常情况及其相关因素分析

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中华妇产科杂志 2019年第12期54卷 797-802页

作者：沈鉴东孙方西瞿殿云谢佳孜高莉仇茜高超吴畏吴春香汪道武刁飞杨刘嘉茵南京医科大学第一附属医院生殖医学中心生殖医学国家重点实验室 210029

目的分析早孕期自然流产组织的染色体异常情况及其相关因素。方法收集2015年6月至2018年8月在南京医科大学第一附属医院生殖医学中心就诊的早孕期自然流产患者的流产绒毛或胎儿组织831例,通过二代测序技术(NGS)行染色体拷贝数分析,通过... 详细信息

目的分析早孕期自然流产组织的染色体异常情况及其相关因素。方法收集2015年6月至2018年8月在南京医科大学第一附属医院生殖医学中心就诊的早孕期自然流产患者的流产绒毛或胎儿组织831例,通过二代测序技术(NGS)行染色体拷贝数分析,通过统计学方法分析染色体异常与女方年龄、是否体外受精-胚胎移植(IVF-ET)妊娠、既往自然流产次数、既往有无活产分娩史之间的关系。结果在831例早孕期自然流产组织样本中,发现染色体异常461例(55.5%,461/831)。其中女方年龄(OR=1.107,95%CI为1.070~1.145)和活产分娩史(OR=1.909,95%CI为1.182~3.083)是早孕期自然流产组织染色体异常的正相关因素,既往自然流产次数(OR=0.807,95%CI为0.702~0.928)和IVF-ET妊娠(OR=0.554,95%CI为0.404~0.760)是早孕期自然流产组织染色体异常的负相关因素。结论胚胎染色体异常是早孕期自然流产的重要病因。女方年龄增加、有活产分娩史者染色体异常率增加,而既往自然流产次数增加、IVF-ET妊娠者染色体异常率下降。

关键词：染色体异常早孕期生殖医学中心活产早期自然流产分娩史胎儿组织流产次数

高通量遗传检测技术在早发性卵巢功能不全遗传学病因研究中的应用

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中华生殖与避孕杂志 2020年第5期40卷 427-433页

作者：沈鉴东冒韵东刘嘉茵南京医科大学第一附属医院生殖医学中心生殖医学国家重点实验室 210029

早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)是一类临床较常见的严重危害女性生殖健康的疾病,其病因复杂,遗传因素被认为是其重要致病因素之一。随着高通量遗传检测技术的应用,POI的遗传学病因鉴定迎来新的契机和挑战。... 详细信息

早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)是一类临床较常见的严重危害女性生殖健康的疾病,其病因复杂,遗传因素被认为是其重要致病因素之一。随着高通量遗传检测技术的应用,POI的遗传学病因鉴定迎来新的契机和挑战。染色体微阵列芯片分析(chromosome microarray analysis,CMA)用于鉴别基因组拷贝数变异(copy number variation,CNV)和POI的关系。全基因组关联研究(genome-wide association studies,GWAS)用于POI的遗传致病或易感位点的鉴定。目前CMA和GWAS在POI中的研究相对较少、样本量小,没有发现明确高度相关的、可重复的CNV或遗传易感位点。全外显子组测序(whole exome sequencing,WES)对于鉴定POI新致病基因具有独特优势。靶向二代测序(targeted next generation sequencing,targeted NGS)通过捕获多个靶向基因(panel)制备文库,可以同时对已知POI致病基因进行快速、高通量的筛查,具有更高临床应用价值,有望提高POI基因诊断率。本文就高通量遗传检测技术在POI病因研究中的应用进行综述。

关键词：高通量核苷酸测序微阵列分析全基因组关联研究全外显子组测序早发性卵巢功能不全

血清外泌体miR-17-5p对早发性卵巢功能不全患者Treg细胞的作用及机制研究

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中华生殖与避孕杂志 2024年第3期44卷 263-271页

作者：谭容容杨锐贺宇恒王慧源浦丹华吴洁南京医科大学第一附属医院妇产科、生殖医学国家重点实验室南京210036

目的探索早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)患者血清外泌体miR-17-5p与调节性T(regulatory T,Treg)细胞的关系及其在POI发生中的机制。方法采用病例对照研究,收集2019年1月至2020年12月期间于南京医科大学第一... 详细信息

目的探索早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)患者血清外泌体miR-17-5p与调节性T(regulatory T,Treg)细胞的关系及其在POI发生中的机制。方法采用病例对照研究,收集2019年1月至2020年12月期间于南京医科大学第一附属医院妇科内分泌门诊确诊的32例中国汉族特发性POI患者为POI组,32例同期行健康体检且月经规律的中国汉族女性作为正常组。应用实时定量PCR验证血清外泌体miR-17-5p相对表达量。收集健康成年女性外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)与提取的POI患者或正常组女性血清外泌体共培养72 h及转染miR-17-5p模拟物72 h(记为miR-17-5p模拟物组),同时以PBS为阴性对照,应用流式细胞术检测PBMC中Th1、Th17和Treg细胞比例。通过miR-17-5p模拟物/抑制剂转染体外诱导诱导型Treg(induced Treg,iTreg)细胞,应用流式细胞仪检测细胞增殖/凋亡情况,生物信息分析miR-17-5p的靶基因。结果与正常组相比,POI组血清外泌体miR-17-5p的相对表达量明显升高(P0.05)。过表达/抑制miR-17-5p均不影响iTreg细胞的诱导效率(均P>0.05)。过表达miR-17-5p后iTreg细胞凋亡比例[(16.31±1.27)%]显著高于阴性对照组[(13.01±1.80)%,P=0.035]。与miR-17-5p抑制物阴性对照组[(11.42±0.23)%、(87.60±0.70)%]相比,miR-17-5p抑制物组iTreg细胞凋亡比例[(7.97±0.71)%,P=0.001]显著降低,iTreg细胞增殖比例[(88.83±0.25)%,P=0.045]显著增加。生物信息分析提示转换生长因子受体2基因可能是miR-17-5p的靶基因。结论POI的血清外泌体miR-17-5p表达明显上调,其可能通过抑制iTreg细胞增殖、促进iTreg细胞凋亡导致外周血中Treg细胞比例下降,参与POI的发生。

关键词：外泌体早发性卵巢功能不全调节性T细胞 miR-17-5p

基于微阵列比较基因组杂交技术的胚胎植入前遗传学诊断和筛查在不同阶段胚胎中的临床应用结局分析

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中华妇产科杂志 2017年第12期52卷 828-834页

作者：沈鉴东吴畏舒黎蔡令波谢佳孜马龙孙雪萍崔毓桂刘嘉茵南京医科大学第一附属医院生殖医学中心生殖医学国家重点实验室 210029

目的探讨微阵列比较基因组杂交（array-CGH）技术在胚胎植入前遗传学诊断或胚胎植入前遗传学筛查（PGD/PGS）中的应用效果及不同胚胎阶段活检的临床结局的差异.方法回顾性分析2011年7月至2015年8月在南京医科大学第一附属医院进行PGD/... 详细信息

目的探讨微阵列比较基因组杂交（array-CGH）技术在胚胎植入前遗传学诊断或胚胎植入前遗传学筛查（PGD/PGS）中的应用效果及不同胚胎阶段活检的临床结局的差异.方法回顾性分析2011年7月至2015年8月在南京医科大学第一附属医院进行PGD/PGS治疗的381个周期,其中, PGD 320个周期,采用卵裂期活检156个周期、囊胚期活检164个周期;PGS 61个周期,采用卵裂期活检23个周期、囊胚期活检38个周期.活检标本采用单细胞全基因组扩增结合array-CGH技术行染色体拷贝数分析.所有移植周期均采用单胚胎移植,以活产率作为主要临床结局的评价指标.结果array-CGH技术在PGD/PGS中的明确诊断胚胎比例达96.9%~99.1%.PGD活检周期中,卵裂期活检的每移植周期活产率和每活检周期活产率分别为50.0%（58/116）、37.2%（58/156）,而囊胚期活检者分别为67.5%（85/126）、51.8%（85/164）,分别比较,差异均有统计学意义（P均〈0.01）.PGS活检周期中,卵裂期活检的每移植周期活产率和每活检周期活产率均为34.8%（8/23）,而囊胚期活检者均为42.1% （16/38）,分别比较,差异均无统计学意义（P均〉0.05）.结论 array-CGH技术在PGD/PGS中的应用具有高诊断率,基于array-CGH技术的PGD/PGS可获得理想的临床活产率.在PGD周期中,囊胚期活检比卵裂期活检具有更高的活产率.

关键词：植入前诊断比较基因组杂交微阵列分析分裂期卵囊胚活组织检查胚胎植入前遗传学筛查

人胚胎干细胞向下丘脑神经祖细胞的诱导分化受高雄激素影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2020年第9期40卷 1252-1262页

作者：李真真覃莲菊宁松崔毓桂马翔刘嘉茵南京医科大学第一附属医院临床生殖医学中心生殖医学国家重点实验室江苏南京210029

目的:研究体外诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)向下丘脑神经祖细胞分化,并以此为细胞模型,观察不同浓度雄激素对下丘脑神经祖细胞分化的影响。方法:鉴定hESC细胞株CCRM22,体外诱导CCRM22向下丘脑神经祖细胞分化,对其... 详细信息

目的:研究体外诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)向下丘脑神经祖细胞分化,并以此为细胞模型,观察不同浓度雄激素对下丘脑神经祖细胞分化的影响。方法:鉴定hESC细胞株CCRM22,体外诱导CCRM22向下丘脑神经祖细胞分化,对其进行初步的细胞生物学鉴定;在分化培养基中添加1×10-8mol/L、1×10-7mol/L睾酮(以无水乙醇为助溶剂对照),收集不同分化时期细胞,比较分化效率;利用RT-qPCR、流式细胞术、免疫荧光检测等方法鉴定分化细胞,并检测生殖功能调控相关基因的表达。结果:CCRM22分化为下丘脑神经祖细胞的效率超过85%,但睾酮处理降低其分化效率;分化细胞表达神经细胞标志物NESTIN以及下丘脑神经祖细胞特异性标志物NKX2.1,同时表达KISS1和雄激素受体(androgen receptor,AR),且AR的表达水平与睾酮浓度呈正相关。结论:成功诱导hESC分化形成下丘脑神经祖细胞,高浓度睾酮处理抑制hESC向下丘脑神经祖细胞分化,该细胞模型可应用于后续体外研究多囊卵巢综合征女性孕早期高雄激素环境对后代下丘脑神经细胞分化和发育的影响。

关键词：多囊卵巢综合征高雄激素人胚胎干细胞诱导分化下丘脑神经祖细胞

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卵子冷冻保存现状与进展

山东大学学报（医学版） 2022年第9期60卷 19-23页

作者：马翔赵飞燕南京医科大学第一附属医院生殖医学科生殖医学国家重点实验室江苏南京210029

卵子冷冻保存至今已有30多年发展历史。卵子冷冻主要适用于肿瘤患者放化疗前、或非肿瘤患者和因个人因素延迟生育的人群可采用的生育力保存方式;此外还适用于因辅助生殖实施过程中,由于男方特殊的因素无法提供精子的一种补救方式。目前... 详细信息

卵子冷冻保存至今已有30多年发展历史。卵子冷冻主要适用于肿瘤患者放化疗前、或非肿瘤患者和因个人因素延迟生育的人群可采用的生育力保存方式;此外还适用于因辅助生殖实施过程中,由于男方特殊的因素无法提供精子的一种补救方式。目前常用的卵子冷冻保存方式包括慢速冻存和玻璃化冻存,且随着技术的日趋成熟及对卵子保存的研究进展,玻璃化冷冻现已逐渐取代慢速程序化冷冻,成为一种成熟的生育力保存方式。目前大部分研究结果表明,使用冻存卵子与新鲜卵子进行胚胎移植,患者临床妊娠率、产科和围产期结局未见显著差异。

关键词：卵子冷冻临床应用卵母细胞玻璃化冻存有效性安全性