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蜱在非洲猪瘟传播中的作用及对中国的潜在威胁

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病毒学报 2024年第3期40卷 658-670页

作者：王振忠李金明胡永新齐传翔吴晓东钱莺娟王志亮南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏省外国专家工作室南京210095 中国动物卫生与流行病学中心青岛266000

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染家猪和欧亚野猪引起的一种传染性强、死亡率高的病毒性疾病。2018年,ASF传入中国,短时间内在中国的多个省份暴发和流行,给中国养猪业造成重... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染家猪和欧亚野猪引起的一种传染性强、死亡率高的病毒性疾病。2018年,ASF传入中国,短时间内在中国的多个省份暴发和流行,给中国养猪业造成重大损失。经过几年的时间,ASF在中国得到有效控制。ASFV是目前已知的唯一的虫媒DNA病毒,软蜱在ASF的传播过程中起重要作用。国外已有ASFV在软蜱体内复制并将病毒传染给猪的报道,中国尚缺乏这方面的系统研究,其给ASF防控带来的风险有待评估。本文将就蜱在ASF传播中的作用和中国的蜱感染并传播ASF的潜在能力进行分析,以期为我国ASF的综合防控提供参考。

关键词：非洲猪瘟蜱病毒传播风险评估

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牛结节性皮肤病免疫抗体监测的Meta分析

畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3649-3658页

作者：沈鹏王艺任炜杰杨永春宋厚辉王志亮浙江农林大学动物科技学院·动物医学院杭州311300 中国动物卫生与流行病学中心青岛266000 南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏省外国专家工作室南京210095

疫苗接种是预防牛结节性皮肤病(lumpy skin disease, LSD)的重要措施,但是疫苗接种后诱导的体液免疫应答水平参差不齐,目前尚缺乏评价疫苗免疫效果的有效手段。本文使用R软件利用Meta分析对已发表的LSD免疫抗体监测结果进行统计,并进行... 详细信息

疫苗接种是预防牛结节性皮肤病(lumpy skin disease, LSD)的重要措施,但是疫苗接种后诱导的体液免疫应答水平参差不齐,目前尚缺乏评价疫苗免疫效果的有效手段。本文使用R软件利用Meta分析对已发表的LSD免疫抗体监测结果进行统计,并进行亚组分析,综合评价免疫抗体监测的意义。通过计算机分别检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普中文科技期刊数据库、PubMed、Web of science等中英文数据库,检索时限截止至2023年7月,收集LSD免疫抗体监测的相关文献,根据制定的文献纳入与排除标准,共纳入符合筛选条件的文献24篇,涉及羊痘疫苗的文献共有13篇,涉及LSD疫苗的文献共有13篇,其中2篇文献同时涉及羊痘疫苗和LSD疫苗,包含8 638例样本,其中阳性样本2 782份,结局指标为免疫抗体阳性率。Meta分析结果显示,羊痘疫苗的免疫抗体水平为41%(95%CI:27%~55%),LSD疫苗的免疫抗体水平为73%(95%CI:64%~86%),各文献间的同质性较低,两种疫苗之间无显著性差异(P=0.59),与羊痘疫苗接种(P=0.12)和LSD疫苗接种(P=0.077)相关的文献均提示未存在明显发表偏移;按养殖环境和检测方法分类进行亚组分析,不同养殖环境(P=0.84)和检测方法(P=0.40)均无显著性差异,两亚组均非异质性的主要来源。本文结果提示,使用免疫抗体监测方法评价免疫效果存在较大的不确定性,在实际工作中需要综合分析研判。

关键词：牛结节性皮肤病羊痘疫苗免疫抗体监测 Meta分析

非洲猪瘟病毒p30和pK205R双抗原间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2024年

作者：何佳依邹艳丽王燕刘珊苗雨润任炜杰王振忠白昀陈欢贾红郑龙三吴晓东冯志新钱莺娟中国农业科学院北京畜牧兽医研究所南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部动物细菌学重点实验室中国动物卫生与流行病学中心国家非洲猪瘟参考实验室江苏省农业科学院兽医研究所

为建立一种可靠、快速的血清学检测方法，以非洲猪瘟病毒（ASFV）结构蛋白p30和非结构蛋白pK205R作为包被抗原，建立了一种双抗原间接ELISA方法，用于检测ASFV抗体。结果表明，该方法与伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪肺炎支原... 详细信息

为建立一种可靠、快速的血清学检测方法，以非洲猪瘟病毒（ASFV）结构蛋白p30和非结构蛋白pK205R作为包被抗原，建立了一种双抗原间接ELISA方法，用于检测ASFV抗体。结果表明，该方法与伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪肺炎支原体、猪圆环病毒和猪瘟病毒等常见猪源病原阳性血清无交叉反应；对ASFV阳性血清的敏感性能达到1︰12800；批内变异系数为7.95%，批间变异系数为9.18%，均小于10%。利用该方法与***商品化ELISA试剂盒分别检测130份临床猪血清，其阳性符合率为92.19%，阴性符合率为86.36%，总符合率为89.23%。综上所述，本研究成功建立了ASFV p30和pK205R双抗原间接ELISA检测方法，为检测猪血清中ASFV特异性抗体提供了新的技术支持。

关键词：非洲猪瘟病毒 p30蛋白 pK205R蛋白间接ELISA

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犬细小病毒样颗粒的制备及免疫原性分析

中国兽医科学 2024年第1期54卷 19-25页

作者：王傲陈欢苗雨润赵普李家俊郑龙三戴建君印春生钱莺娟南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏省外国专家工作室江苏南京210095 中国兽医药品监察所北京100081

犬细小病毒病是由犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)引起犬的一种急性、高度传染性和致死性的病毒性疾病。该病主要通过接种疫苗预防,没有特效治疗方法。为了制备犬细小病毒样颗粒(virus like particles,VLPs),本研究通过杆状病毒表达... 详细信息

犬细小病毒病是由犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)引起犬的一种急性、高度传染性和致死性的病毒性疾病。该病主要通过接种疫苗预防,没有特效治疗方法。为了制备犬细小病毒样颗粒(virus like particles,VLPs),本研究通过杆状病毒表达系统表达CPV VP2蛋白。将表达后的蛋白经过蔗糖密度梯度离心法纯化后,负染色处理置于透射电子显微镜下观察。结果显示VP2蛋白组装成直径25 nm左右的六边形或圆形样VLPs。血凝试验表明,该VLPs可以凝集猪红细胞,血凝价为27。进一步将该VLPs经弗氏佐剂乳化后免疫小鼠,血凝抑制试验结果显示VLPs可诱导小鼠产生211的血凝抑制抗体。因此,通过杆状病毒表达系统表达VP2蛋白,VP2蛋白可在细胞内组装成与病毒粒子类似的VLPs,该VLPs可以诱导小鼠产生血凝抑制抗体,为CPV VLPs疫苗的制备奠定了基础。

关键词：犬细小病毒 VP2蛋白杆状病毒病毒样颗粒

长角血蜱Ykt6蛋白抗东方泰勒虫感染的生物学效应

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中国兽医科学 2024年第3期54卷 386-392页

作者：罗金赵帅阳车丽妍严若锋宋小凯任巧云关贵全殷宏刘光远李祥瑞南京农业大学动物医学院、教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095 中国农业科学院、兰州兽医研究所、动物疫病防控全国重点实验室、甘肃省动物寄生虫病重点实验室、农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为了解Ykt6基因在蜱体中影响东方泰勒虫感染的生物学效果,通过长角血蜱实验室培养株和野外株,评估Ykt6蛋白对东方泰勒虫侵染长角血蜱过程中蜱的存活率、繁殖率以及对东方泰勒虫感染率等指标的生物学效果。结果显示,Ykt6基因参与了东方... 详细信息

为了解Ykt6基因在蜱体中影响东方泰勒虫感染的生物学效果,通过长角血蜱实验室培养株和野外株,评估Ykt6蛋白对东方泰勒虫侵染长角血蜱过程中蜱的存活率、繁殖率以及对东方泰勒虫感染率等指标的生物学效果。结果显示,Ykt6基因参与了东方泰勒虫与长角血蜱之间的宿主-寄生虫相互作用。Ykt6基因的表达水平与东方泰勒虫在长角血蜱体内的存活和繁殖能力密切相关,当该基因表达水平降低时,东方泰勒虫的存活率和繁殖能力显著下降。进一步的研究发现,Ykt6基因的变异可能影响东方泰勒虫与长角血蜱之间的相互作用。一些野外长角血蜱个体具有Ykt6基因的突变,导致东方泰勒虫在长角血蜱体内的存活和繁殖能力显著下降。这一发现提示,Ykt6基因的变异可能是东方泰勒虫入侵长角血蜱的一个关键因素。总之,Ykt6基因对东方泰勒虫入侵长角血蜱具有重要影响。通过研究Ykt6基因的功能和变异,可以深入了解东方泰勒虫与长角血蜱之间的相互作用,为控制东方泰勒虫入侵提供新的思路和方法。这将有助于保护人畜健康和生态环境的平衡。

关键词：长角血蜱东方泰勒虫 Ykt6蛋白感染生物学效果

稳定表达猪德尔塔冠状病毒N蛋白的Vero细胞系的建立及鉴定

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中国动物传染病学报 2024年第1期32卷 56-61页

作者：钱炳旭薄宗义白雪雁张成成郭梦娇李梦娇廖凯薛峰吴艳涛张小荣扬州大学兽医学院江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225000 南京农业大学动物健康与食品安全国际合作实验室南京210095 扬州大学农业科技发展研究院教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225000

为获得稳定表达猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)核衣壳(N)蛋白的非洲绿猴肾(Vero)细胞系,本研究将PDCoV-N基因克隆入慢病毒载体中,获得重组质粒pLVX-PDCoV-N,利用慢病毒包装系统转染293T细胞,包装成表达N蛋白的慢病毒颗粒,慢病毒感染Vero细胞,... 详细信息

为获得稳定表达猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)核衣壳(N)蛋白的非洲绿猴肾(Vero)细胞系,本研究将PDCoV-N基因克隆入慢病毒载体中,获得重组质粒pLVX-PDCoV-N,利用慢病毒包装系统转染293T细胞,包装成表达N蛋白的慢病毒颗粒,慢病毒感染Vero细胞,嘌呤霉素加压筛选目的细胞。RT-PCR扩增N基因和测序表明细胞系基因组中存在N蛋白编码序列,Western blot和IFA试验表明N蛋白可在细胞系中稳定表达。应用制备的细胞系对临床PDCoV阳性血清样品进行检测,与ELISA检测结果符合率达到100%。本研究成功建立了稳定表达PDCoV N蛋白的Vero细胞系,为PDCoV N蛋白生物学特性研究和PDCoV的临床检测、流行病学调查奠定了基础。

关键词：猪德尔塔冠状病毒核衣壳(N)蛋白慢病毒稳转细胞系

W/O/W佐剂添加两种免疫增强剂对口蹄疫灭活疫苗的影响

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中国兽医科学 2024年第3期54卷 300-307页

作者：周宇杰卢宇许泽玉唐健中钱莺娟邓碧华南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏省外国专家工作室江苏南京210095 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心江苏泰州225300 江苏大学药学院江苏镇江212013

为进一步提高口蹄疫灭活疫苗的免疫效果,本研究在水包油包水(W/O/W)佐剂配方上添加免疫增强剂,一种是天然化合物维生素E(VE),另一种是人工合成的咪喹莫特衍生物(IMQ-Chol)。每种免疫增强剂设低中高三种不同剂量,加入到基础配方中制备成... 详细信息

为进一步提高口蹄疫灭活疫苗的免疫效果,本研究在水包油包水(W/O/W)佐剂配方上添加免疫增强剂,一种是天然化合物维生素E(VE),另一种是人工合成的咪喹莫特衍生物(IMQ-Chol)。每种免疫增强剂设低中高三种不同剂量,加入到基础配方中制备成不同的佐剂,然后与口蹄疫灭活病毒进行配伍。观察各组疫苗的外观并检测其稳定性、黏度、粒径和多分散系数(PDI)以确定其理化性质;称量小鼠体重、检测血常规、血液生化和组织学变化来评估免疫增强剂的安全性;检测小鼠血清中的特异性抗体、抗体亚型、细胞因子水平以及小鼠脾T淋巴细胞的分化情况,评价免疫增强剂对疫苗免疫效果的影响。结果显示,配制的疫苗均为乳白色W/O/W乳液,37℃放置9周疫苗未出现分层现象,黏度均在16 cp以下,粒径在270 nm~370 nm之间,PDI在0.34~0.42之间;不同剂量的免疫增强剂对小鼠体重没有影响(P>0.05),血常规、血液生化及组织学切片结果表明两种免疫增强剂的生物安全性良好;添加VE或IMQ-Chol的免疫组与基础配方免疫组相比,特异性抗体水平均显著提高(P安全性,并且添加高剂量的VE或低剂量的IMQ-Chol更能有效地提高口蹄疫灭活疫苗的免疫效果。

关键词：口蹄疫 W/O/W佐剂免疫增强剂维生素E 咪喹莫特

PRRSV Nsp4基因突变株对β2M表达的影响

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南京农业大学学报 2024年第3期47卷 507-514页

作者：康磊刘珂王建忠尹才邱亚峰魏建超李蓓蓓邵东华李宗杰粟硕马志永南京农业大学动物医学院免疫学研究所/教育部动物卫生与食品安全国际联合研究实验室/江苏省动物免疫学工程实验室江苏南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 苏州市相城区农业技术综合服务中心江苏苏州215131 宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心宁夏银川750011

[目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp... 详细信息

[目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测,在其DomainⅡ和DomainⅢ分别筛选出3个和5个不同的氨基酸位点,并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变,再将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒,将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞,并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M表达方面发挥作用。[结果]成功拯救出PRRSV D2-5(Nsp4-A80L)突变毒株,并且在Marc-145细胞上的生长动力学特性与野生毒株SH2020相似;而Nsp4基因其余位点突变则会导致PRRSV生长受到显著抑制从而无法进行试验。Western blot和RT-qPCR试验结果证实PRRSV D2-5毒株能够显著促进β2M在Marc-145和PAM细胞的表达,而野生毒株SH2020则表现出了对β2M表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M表达方面发挥重要作用,并且Nsp4-A80L突变能够显著促进β2M的表达。

关键词： PRRSV Nsp4 β2M 反向遗传平台突变毒株

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PRRSV Nsp4突变毒株对β2M分子表达的影响

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南京农业大学学报 2024年

作者：康磊刘珂王建忠尹才邱亚峰魏建超李蓓蓓邵东华李宗杰粟硕马志永南京农业大学动物医学院免疫学研究所教育部动物卫生与食品安全国际联合研究实验室江苏省动物免疫学工程实验室中国农业科学院上海兽医研究所苏州市相城区农业技术综合服务中心宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心

[目的]本次试验探究PRRSV＿Nsp4基因是否在抑制β2M分子表达方面发挥关键性作用，为进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制打下了基础。[方法]本次试验首先建立了PRRSV的反向遗传平台，并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。随后根据之... 详细信息

[目的]本次试验探究PRRSV＿Nsp4基因是否在抑制β2M分子表达方面发挥关键性作用，为进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制打下了基础。[方法]本次试验首先建立了PRRSV的反向遗传平台，并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。随后根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测，在其Domain II和Domain III区域分别筛选了3个和5个不同的氨基酸位点，并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变，随后将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒。最后将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞，并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV＿Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M分子表达方面发挥的作用。[结果]只有D2-5重组PRRSV毒株在不影响病毒复制能力的同时能够高效的在Marc-145和PAM细胞上促进β2M分子的表达，而野生毒株SH2020表现出了对β2M分子表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M分子表达方面发挥重要作用，并且Nsp4＿A80L突变能够显著促进β2M分子的表达。

关键词： Nsp4 β2M 反向遗传平台突变毒株