稳定表达猪德尔塔冠状病毒N蛋白的Vero细胞系的建立及鉴定

作     者：钱炳旭 薄宗义 白雪雁 张成成 郭梦娇 李梦娇 廖凯 薛峰 吴艳涛 张小荣 QIAN Bingxu;BO Zongyi;BAI Xueyan;ZHANG Chengcheng;GUO Mengjiao;LI Mengjiao;LIAO Kai;XUE Feng;WU Yantao;ZHANG Xiaorong

作者机构：扬州大学兽医学院江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225000 南京农业大学动物健康与食品安全国际合作实验室南京210095 扬州大学农业科技发展研究院教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225000 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2024年第32卷第1期

页      面：56-61页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：扬州大学高端人才支持计划 江苏高校优势学科建设工程资助项目 

主　　题：猪德尔塔冠状病毒 核衣壳(N)蛋白 慢病毒 稳转细胞系 

摘      要：为获得稳定表达猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)核衣壳(N)蛋白的非洲绿猴肾(Vero)细胞系,本研究将PDCoV-N基因克隆入慢病毒载体中,获得重组质粒pLVX-PDCoV-N,利用慢病毒包装系统转染293T细胞,包装成表达N蛋白的慢病毒颗粒,慢病毒感染Vero细胞,嘌呤霉素加压筛选目的细胞。RT-PCR扩增N基因和测序表明细胞系基因组中存在N蛋白编码序列,Western blot和IFA试验表明N蛋白可在细胞系中稳定表达。应用制备的细胞系对临床PDCoV阳性血清样品进行检测,与ELISA检测结果符合率达到100%。本研究成功建立了稳定表达PDCoV N蛋白的Vero细胞系,为PDCoV N蛋白生物学特性研究和PDCoV的临床检测、流行病学调查奠定了基础。