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靶向鸡糖皮质激素受体基因的microRNA预测与鉴定

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南京农业大学学报 2024年第3期47卷 489-496页

作者：赵敏蝶刘杰赵茹茜南京农业大学动物医学院/农业农村部动物生理生化重点实验室江苏南京210095

[目的]本文旨在预测和筛选靶向调控鸡糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达的microRNA。[方法]用TargetScan、PicTar和miRDB软件分别预测靶向鸡GR 3′UTR microRNA并取交集;构建包含鸡GR 3′UTR的重组质粒及突变质粒,通过双... 详细信息

[目的]本文旨在预测和筛选靶向调控鸡糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达的microRNA。[方法]用TargetScan、PicTar和miRDB软件分别预测靶向鸡GR 3′UTR microRNA并取交集;构建包含鸡GR 3′UTR的重组质粒及突变质粒,通过双荧光素酶试验鉴定microRNA和鸡GR 3′UTR的靶向性;用TargetScan和miRDB软件分别预测候选microRNA的靶基因,用DAVID软件对预测出的共同靶基因进行GO功能分析;用Western blot检测过表达候选microRNA对鸡DF1细胞GR蛋白表达的影响。[结果]miR124-3p、miR142-3p、miR204/211、miR183、miR18-5p和miR181a/181b是3种软件预测靶向GR 3′UTR的交集microRNA;双荧光素酶试验结果表明miR142-3p、miR204/211和miR18-5p靶向结合GR 3′UTR。2种软件预测3个候选microRNA的靶基因中都有GR且富集分子功能不同;在DF1细胞中过表达3个候选microRNA后,miR142-3p和miR204/211显著降低GR蛋白的表达水平(P<0.05)。[结论]miR142-3p、miR204/211和miR18-5p靶向结合鸡GR 3′UTR,且miR142-3p和miR204/21可以降低鸡DF1细胞中GR蛋白的表达水平。

关键词：鸡糖皮质激素受体 microRNA 靶向基因

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大豆黄酮影响青春期小鼠乳腺发育的潜在机制

南京农业大学学报 2024年第1期47卷 36-43页

作者：谢娜娜黄心河张亚锋张源淑韩正康南京农业大学动物医学院/农业农村部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

[目的]以大豆黄酮(DZ)作用于青春期雌性小鼠,探讨其通过上调雌二醇(E2)水平和雌激素受体β(ERβ)受体表达影响青春期小鼠乳腺发育的机制,为DZ及其他植物雌激素类在畜牧生产和临床应用提供依据。[方法]选取48只2周龄C57BL/6雌性小鼠,随... 详细信息

[目的]以大豆黄酮(DZ)作用于青春期雌性小鼠,探讨其通过上调雌二醇(E2)水平和雌激素受体β(ERβ)受体表达影响青春期小鼠乳腺发育的机制,为DZ及其他植物雌激素类在畜牧生产和临床应用提供依据。[方法]选取48只2周龄C57BL/6雌性小鼠,随机均分为3组:对照组,腹腔注射无菌的PBS;DZ处理组,腹腔注射DZ(100 mg·kg^(-1));阳性对照组,腹腔注射E2(0.2 mg·kg^(-1)),每组16只。分别在饲养至21和28 d,每组随机选取8只,采集血液,测定血液中E2含量,处死后摘取乳腺,测定乳腺指数并检测乳腺组织中E2含量。取同侧部位乳腺制作组织学切片,免疫组化检测核增殖抗原蛋白(PCNA)的表达,Western blot法分析乳腺组织内细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和D3(cyclin D3)、ERβ蛋白表达水平。[结果]与对照组相比,DZ处理显著增加饲养21~28 d小鼠体重及采食量;增加21 d小鼠血液和乳腺组织中E2含量,但未达到显著水平(P>0.05);显著增加28 d小鼠血液和乳腺组织中E2含量(P<0.05);E2处理血液中E2含量均极显著增加。DZ处理对饲养21 d小鼠乳腺指数影响较小,显著增加饲养28 d小鼠乳腺指数(P<0.05);E2处理具有相同趋势(P<0.05)。HE染色结果显示,DZ和E2处理均极显著增加饲养21和28 d小鼠乳腺组织小叶内的导管数(P<0.01)和乳腺组织PCNA阳性细胞数(P<0.01)。Western blot结果显示,DZ及E2处理均可上调小鼠乳腺组织cyclinD1、cyclinB1、ERβ蛋白的表达,显著上调饲养28 d小鼠cyclinD1、cyclinB1、ERβ蛋白的表达(P<0.05)。[结论]DZ处理可促进青春期小鼠乳腺发育,促进乳腺细胞增殖和分裂,这种作用可能与内源性E2水平升高及ERβ受体有关。

关键词：大豆黄酮(DZ) 雌二醇(E2) 青春期小鼠乳腺发育细胞周期

饲喂胆汁酸对亚急性瘤胃酸中毒山羊回肠黏膜形态、菌群组成和IFN-γmRNA相对表达量的影响

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草业学报 2024年

作者：陈悦宋品侯曼曼杨笑然刘丽萍倪迎冬南京农业大学动物医学院农业农村部动物生理生化重点实验室

为探讨饲喂胆汁酸对高精料日粮诱导的亚急性瘤胃酸中毒（SARA）山羊回肠黏膜结构、菌群组成和抗炎因子mRNA相对表达量的影响，本试验选取15头3月龄雄性山羊（18.19±2.83 kg），手术安置永久性瘤胃瘘管，2周恢复期后随机分为3组：对照组... 详细信息

为探讨饲喂胆汁酸对高精料日粮诱导的亚急性瘤胃酸中毒（SARA）山羊回肠黏膜结构、菌群组成和抗炎因子mRNA相对表达量的影响，本试验选取15头3月龄雄性山羊（18.19±2.83 kg），手术安置永久性瘤胃瘘管，2周恢复期后随机分为3组：对照组（CON），亚急性瘤胃酸中毒组（SARA），亚急性瘤胃酸中毒加胆汁酸组（SARA+BA），每组5只羊。CON组每天饲喂精粗比为3∶7的日粮，SARA组和SARA+BA组饲喂精粗比为7∶3的日粮，SARA+BA组每天通过瘤胃瘘管灌注饲喂3 g胆汁酸，饲喂期为6周。试验结束后采集回肠上皮组织观察形态结构、上皮内杯状细胞和潘氏细胞数量，并检测黏膜中干扰素γ(IFN-γ)及受体的mRNA相对表达量和回肠内容物中菌群组成。结果表明：与CON组相比，SARA组山羊回肠上皮刷状缘呈锯齿状不规则形态，表明有一定程度的损伤，但绒毛和隐窝处杯状细胞和潘氏细胞数量无显著差异（P>0.05），回肠黏膜中IFN-γ和受体IfnGR1 mRNA相对表达量有下降的趋势（0.050.05），但潘氏细胞显著增多（P<0.05）；黏膜中IFN-γ mRNA相对表达量有上调的趋势（0.05

关键词：胆汁酸亚急性瘤胃酸中毒回肠黏膜菌群组成山羊

衣康酸二甲酯对H_(2)O_(2)诱导的AML-12细胞线粒体功能障碍的调节作用及机制研究

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南京农业大学学报 2024年第1期47卷 28-35页

作者：闫巍元张锐马海田南京农业大学动物医学院/农业农村部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

[目的]本文主要探究衣康酸二甲酯(dimethyl itaconate,DMI)对小鼠肝细胞线粒体功能障碍的调节作用及其机制,旨在为衣康酸二甲酯作为一种生理调节剂用于防控畜禽因线粒体功能障碍引发的相关疾病提供理论依据。[方法]以小鼠肝细胞系(AML-1... 详细信息

[目的]本文主要探究衣康酸二甲酯(dimethyl itaconate,DMI)对小鼠肝细胞线粒体功能障碍的调节作用及其机制,旨在为衣康酸二甲酯作为一种生理调节剂用于防控畜禽因线粒体功能障碍引发的相关疾病提供理论依据。[方法]以小鼠肝细胞系(AML-12细胞)为研究对象,试验分为对照组(NC)、0.5 mmol·L^(-1)DMI处理组、150μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理组和0.5 mmol·L^(-1)DMI+150μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理组。分别检测AML-12细胞中ATP含量、线粒体DNA(mtDNA)拷贝数、线粒体活性氧(mROS)水平和线粒体膜电位(MMP)等生化指标,并用免疫印迹法检测AMP-依赖性蛋白激酶(AMPK)信号通路关键因子蛋白的表达水平。[结果]0~0.5 mmol·L^(-1)DMI和0~150μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)对细胞活力无显著影响。DMI处理显著抑制H_(2)O_(2)诱导的AML-12细胞中mROS水平升高以及MMP的异常下降,以及ATP含量和mtDNA拷贝数的下降(P<0.01)。DMI处理极显著抑制H_(2)O_(2)诱导的小鼠肝细胞中p-AMPK、NAD-依赖性去乙酰化酶1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(Nrf1)和线粒体转录因子A(TFAM)蛋白水平的下降(P<0.01),而AMPK抑制剂Compound C预处理则可逆转这一效应。[结论]DMI通过激活AMPK-SIRT1-PGC1α信号通路缓解H_(2)O_(2)诱导的AML-12细胞线粒体功能障碍。

关键词：衣康酸二甲酯线粒体功能障碍 AMPK-SIRT1-PGC1α信号轴

干扰素基因刺激因子在金黄色葡萄球菌感染引起线粒体功能障碍中的作用研究

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南京农业大学学报 2024年

作者：吴斌凤高兴孙乃岩仇亚伟张金秋苗晋锋南京农业大学动物医学院/农业农村部动物生理生化重点开放实验室

[目的]本文主要探究干扰素基因刺激因子（Stimulator of interferon gene，STING）对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S. aureus）感染引起线粒体功能障碍的影响，为S. aureus引起的乳腺炎的防控提供理论支撑。[方法]以小鼠乳... 详细信息

[目的]本文主要探究干扰素基因刺激因子（Stimulator of interferon gene，STING）对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S. aureus）感染引起线粒体功能障碍的影响，为S. aureus引起的乳腺炎的防控提供理论支撑。[方法]以小鼠乳腺上皮细胞系（EpH4-Ev）、S. aureus（ATCC 29213）为研究对象，细胞试验分为对照组（Control、STING抑制剂C-176单独处理和线粒体分裂抑制剂Mdivi-1单独处理）、感染组（S. aureus）、处理组（C-176+S. aureus和Mdivi-1+S. aureus）。分别检测乳腺上皮细胞中STING通路的激活、线粒体功能相关蛋白的表达水平、线粒体DNA（mtDNA）拷贝数、线粒体活性氧（mROS）水平和线粒体膜电位（MMP）以及线粒体形态的变化等。动物试验分为对照组（C57BL/6野生型WT小鼠和C57BL/6 STING基因敲除STING KO小鼠）、感染组（WT+S. aureus和STING KO+S. aureus），分别检测肝脏组织和乳腺组织中的总抗氧化能力（Total antioxidant capacity，T-AOC）、N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶（N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase，NAGase）和丙二醛（Malondialdehyde，MDA）等生化指标。[结果]S. aureus感染乳腺上皮细胞导致STING通路激活，线粒体动力相关蛋白1（Dynamin-related protein 1，Drp1）Ser616位点磷酸化水平升高（P<0.05），线粒体融合蛋白1（Mitofusion 1，Mfn1）和线粒体融合蛋白2（Mitofusion 2，Mfn2）表达量降低（P<0.05），C-176和Mdivi-1处理均降低了Drp1 Ser616的磷酸化水平（P<0.01），恢复了Mfn1和Mfn2的表达量（P<0.05），缓解S. aureus引起的线粒体碎片化。同时，C-176和Mdivi-1处理均显著抑制S. aureus感染诱导的乳腺上皮细胞中mROS水平升高和MMP的异常下降（P<0.05），以及mtDNA拷贝数的下降（P<0.05）。此外，缺失STING基因可以恢复S. aureus感染引起的小鼠肝脏和乳腺中T-AOC水平（P<0.01），降低NAGase活性与MDA含量（P<0.05）。[结论]抑制STING可以改善S. aureus感染乳腺上皮细胞诱导的线粒体功能障碍，缺失STING基因可以缓解S. aureus感染引起小鼠肝脏和乳腺的组织损伤和氧化应激。

关键词：奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌 STING 线粒体功能障碍

乳房链球菌感染对乳腺上皮细胞中氨基酸代谢的影响

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畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1766-1776页

作者：卢劲晔高亚兵韩心茹刘钰臻赵家玉江苏农牧科技职业学院泰州225300 南京农业大学动物医学院/农业部动物生理生化重点开放实验室南京210095

代谢是一切生理活动的基石,氨基酸代谢作为三大物质代谢之一,参与机体的多种生理活动,与宿主免疫细胞的功能有密切关系,在疾病的发展中具有不可替代的作用。为探究乳房链球菌(Streptococcus uberis,***)感染对乳腺上皮细胞中氨基酸代谢... 详细信息

代谢是一切生理活动的基石,氨基酸代谢作为三大物质代谢之一,参与机体的多种生理活动,与宿主免疫细胞的功能有密切关系,在疾病的发展中具有不可替代的作用。为探究乳房链球菌(Streptococcus uberis,***)感染对乳腺上皮细胞中氨基酸代谢的影响,本研究以***和乳腺上皮细胞系(EpH4-Ev)为研究对象,采用靶向氨基酸代谢组学技术对细胞中的氨基酸进行定量分析,并采用RT-qPCR和Western blot方法对关键氨基酸——精氨酸代谢通路关键酶进行验证。结果表明:***感染细胞后,细胞中甘氨酸、苏氨酸、鸟氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺的含量被显著上调(P1.2),天冬酰胺和谷氨酰胺两种生糖氨基酸显著上升(P<0.05),赖氨酸和亮氨酸两种生酮氨基酸含量显著下降(P<0.05)。进一步研究精氨酸分解代谢通路发现:***感染乳腺上皮细胞会显著上调精氨酸代谢关键酶NOS2的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),显著下调ARG1的表达水平(P<0.05)。与对照组相比,***感染乳腺后,显著上调了细胞中促炎因子IL-1β、TNF-α表达(P<0.05)。综上所述,***感染造成乳腺上皮细胞氨基酸代谢紊乱,加速细胞内精氨酸耗竭,诱发炎症反应。结果提示,精氨酸在宿主抵抗***感染过程中具有重要作用,可作为奶牛乳腺炎早期诊断和未来防治的突破口。

关键词：乳房链球菌氨基酸代谢精氨酸乳腺炎

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母猪妊娠后期热应激对仔猪肌纤维发育的影响

南京农业大学学报 2024年第5期47卷 916-922页

作者：栗艳飞刘洋姚文马文强杨晓静南京农业大学动物医学院/农业农村部动物生理生化重点实验室江苏南京210095 南京农业大学动物科技学院江苏南京210095

[目的]本文旨在探讨母猪妊娠后期热应激对子代骨骼肌分化、发育、凋亡等的影响。[方法]选取12头预产期相似的(大白×长白)母猪,在妊娠后期(妊娠84 d)随机分为热应激组(HS,28~32℃)和对照组(CON,18~22℃)。母猪分娩后,每窝取一头断奶仔... 详细信息

[目的]本文旨在探讨母猪妊娠后期热应激对子代骨骼肌分化、发育、凋亡等的影响。[方法]选取12头预产期相似的(大白×长白)母猪,在妊娠后期(妊娠84 d)随机分为热应激组(HS,28~32℃)和对照组(CON,18~22℃)。母猪分娩后,每窝取一头断奶仔猪采集背最长肌(LD),用Western blot检测样品中相关蛋白的表达情况。[结果]在母猪妊娠后期,热应激显著提高初乳中INF-γ和COR的含量(P0.05)。糖代谢相关蛋白检测结果表明,母猪妊娠后期热应激显著降低断奶仔猪LD中糖代谢相关蛋白PCK1和GLUT4的表达水平(P<0.05);凋亡相关蛋白检测结果表明,母猪妊娠后期热应激造成断奶仔猪LD中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05)。[结论]母猪妊娠后期热应激可以显著降低断奶仔猪的体重和LD重,可能与MyoD在断奶仔猪LD中表达水平降低和糖代谢水平降低有关。

关键词：热应激母猪背最长肌仔猪妊娠期

临床腹泻猪空肠组织中肾素-血管紧张素系统(RAS)的表达变化及与肠道炎症的关系

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 751-758页

作者：陈雪清李志强吴雨龙张崇昊张源淑南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室南京210095 南京晓庄学院食品科学学院南京211171

在现代生猪规模化养殖过程中,无论是断奶、换舍和换料等因素引起的应激反应还是细菌、病毒感染都极易影响消化道健康引起以腹泻为主要症状的肠道炎症。本文通过研究临床腹泻猪空肠组织中肾素-血管紧张素系统(renin-angiobensin system,R... 详细信息

在现代生猪规模化养殖过程中,无论是断奶、换舍和换料等因素引起的应激反应还是细菌、病毒感染都极易影响消化道健康引起以腹泻为主要症状的肠道炎症。本文通过研究临床腹泻猪空肠组织中肾素-血管紧张素系统(renin-angiobensin system,RAS)的表达变化,探讨其与肠道炎症的关系。以临床上出现腹泻症状的保育猪为研究对象,截取其空肠组织,采用组织病理学、Western blot和RT-qPCR等方法,观察其空肠组织病理变化,明确RAS组分特别是血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)的表达变化,探究其对猪肠道炎症损伤的影响。结果表明,临床腹泻保育猪的空肠组织中促炎性因子TNF-α、IL-1β显著升高,抗炎性因子IL-10无明显变化;组织病理学显示,空肠上皮绒毛脱落,腺体增生,存在大量出血点;ACE2、MasR mRNA和蛋白水平及Ang(1-7)含量均降低,ACE和AT1R蛋白水平及Ang II含量均升高。结果提示,临床腹泻保育猪空肠组织局部RAS被激活,ACE-Ang II-AT1R轴的活性远高于ACE2-Ang(1-7)-MasR轴,ACE2抗炎性损伤作用处于劣势。

关键词：肾素-血管紧张素系统保育猪空肠临床腹泻肠道炎症

日粮添加胆汁酸对亚急性瘤胃酸中毒山羊生长性能、瘤胃发酵和菌群结构的影响

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畜牧与兽医 2024年第5期56卷 51-57页

作者：宋品侯曼曼陈悦胡丹郝燕青吴晨倪迎冬南京农业大学动物医学院/农业农村部动物生理生化重点实验室江苏南京210095

旨在探究胆汁酸(BAs)对亚急性瘤胃酸中毒(subacute ruminal acidosis,SARA)山羊瘤胃发酵和菌群结构的影响。试验选取8只生长期雄性波杂山羊安装永久性瘤胃瘘管,康复后随机平均分为SARA组和SARA+BAs组,预饲期为2周,试验期8周,预饲期内由... 详细信息

旨在探究胆汁酸(BAs)对亚急性瘤胃酸中毒(subacute ruminal acidosis,SARA)山羊瘤胃发酵和菌群结构的影响。试验选取8只生长期雄性波杂山羊安装永久性瘤胃瘘管,康复后随机平均分为SARA组和SARA+BAs组,预饲期为2周,试验期8周,预饲期内由精粗比50∶50的日粮转为70∶30的高精料日粮诱导SARA,每只添加胆汁酸10 g/d,于试验期第1、14、28、42、56天晨饲后0、2、3、4和6 h进行瘤胃液pH值的动态监测,在第56天晨饲前采集瘤胃液,检测乳酸、挥发性脂肪酸及菌群结构。结果显示:SARA组山羊平均日增重显著升高(P<0.05),饲料转化率有降低的趋势(P<010);SARA组山羊瘤胃液pH<58的持续时间大于3 h,处于SARA状态;而SARA+BAs组瘤胃液pH<58的时间均少于3 h;与SARA组相比,SARA+BAs组瘤胃内乙酸浓度显著升高(P<0.05),而乳酸浓度显著降低(P<0.05)。菌群分类学分析显示,SARA+BAs组Chao1指数、Shannon指数和菌门数量均显著高于SARA组(P<0.05);在门水平上,SARA+BAs组脱硫菌门(Desulfobacterota)相对丰度显著升高(P<0.05),而疣微菌门(Verrucomicrobiota)、绿弯菌门(Chloroflexi)相对丰度显著降低(P<0.05);在属水平上,SARA+BAs组毛螺菌科_NK3A20群(Lachnospiraceae_NK3A20_group)、互营球菌属(Syntrophococcus)相对丰度显著降低(P<0.05),而瘤胃球菌科_NK4A214(Ruminococcaceae_NK4A214)、未分类的颤螺菌科(Norank_f_Oscillospiraceae)、韦荣球菌科UCG-001(Veillonellaceae_UCG-001)的相对丰度显著升高(P<0.05)。研究表明,日粮添加胆汁酸可提升山羊瘤胃菌群的丰富度和多样性,改善瘤胃发酵,从而缓解高精料日粮诱导的SARA。

关键词：胆汁酸: 亚急性瘤胃酸中毒: 瘤胃发酵: 菌群组成: 山羊