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槲皮素靶向CCR1、CXCR4促进人骨髓间充质干细胞的迁移

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中国组织工程研究 2024年第31期28卷 4945-4950页

作者：陈双席志鹏王楠房晓阳刘鑫康然谢林南京中医药大学附属中西医结合医院

背景：槲皮素在骨髓间充质干细胞增殖和分化中起重要作用，但关于其促进骨髓间充质干细胞迁移的机制研究较少。目的：通过体外实验研究槲皮素对人骨髓间充质干细胞迁移的影响，并探讨CCR1、CXCR4的调控作用。方法：选取人骨髓间充质干... 详细信息

背景：槲皮素在骨髓间充质干细胞增殖和分化中起重要作用，但关于其促进骨髓间充质干细胞迁移的机制研究较少。目的：通过体外实验研究槲皮素对人骨髓间充质干细胞迁移的影响，并探讨CCR1、CXCR4的调控作用。方法：选取人骨髓间充质干细胞作为实验对象。CCK-8法检测槲皮素对人骨髓间充质干细胞增殖活性的影响；细胞划痕实验和Transwell实验分别检测槲皮素处理后人骨髓间充质干细胞的体外侵袭和迁移能力；借助分子对接技术进一步展示槲皮素与CCR1、CXCR4之间的作用关系；Western blot和实时荧光定量PCR检测槲皮素处理后迁移相关趋化因子的表达。结果与结论：(1)5,10μmol/L槲皮素具有显著促进人骨髓间充质干细胞增殖的作用，且药物浓度在10μmol/L时，细胞增殖效率最高；(2)为更好地探索槲皮素影响人骨髓间充质干细胞迁移的量效关系，选取5,10μmol/L槲皮素进行后续实验，采用川芎嗪作为阳性对照药物，实验分为空白对照组、5μmol/L槲皮素组、10μmol/L槲皮素组和100μmol/L川芎嗪组；(3)槲皮素处理后人骨髓间充质干细胞的体外迁移和侵袭能力呈浓度依赖性提升，10μmol/L槲皮素组的迁移效果优于川芎嗪组；(4)分子对接结果提示槲皮素与CCR1、CXCR4之间存在强烈的相互作用；(5)槲皮素可以上调CCR1、CXCR4蛋白和mRNA的表达；(6)该研究在细胞水平上证实了槲皮素可以通过靶向CCR1、CXCR4促进人骨髓间充质干细胞的迁移。

关键词：骨髓间充质干细胞槲皮素迁移增殖分子对接

细针穿刺检测BRAF突变丰度与甲状腺乳头状癌临床病理特征的相关性

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重庆医科大学学报 2023年

作者：章双艳黄驰马丙娥钱涛武心萍徐书杭王建华南京中医药大学附属中西医结合医院内分泌科南京中医药大学附属中西医结合医院超声科南京中医药大学附属中西医结合医院甲乳外科

目的：探讨术前细针穿刺基因检测BRAFV600E突变丰度与甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)临床病理特征的关系。方法：回顾性统计2021年1月30日至2022年2月28日就诊于南京中医药大学附属中西医结合医院的301例患者临床资料，... 详细信息

目的：探讨术前细针穿刺基因检测BRAFV600E突变丰度与甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)临床病理特征的关系。方法：回顾性统计2021年1月30日至2022年2月28日就诊于南京中医药大学附属中西医结合医院的301例患者临床资料，术前细针穿刺基因检测示BRAFV600E突变(含突变丰度检测)，所有患者完成甲状腺癌根治术，术后病理证实为甲状腺乳头状癌，分析BRAFV600E基因突变丰度与临床病理特征的关系。结果：纳入301例患者，男91例，女210例，年龄42(33～51)岁，范围18～69岁。肿瘤直径>1 cm的患者BRAFV600E基因突变丰度高于肿瘤直径≤1 cm者[29.05(18.03～37.56) vs. 18.35(6.74～29.61),P1 cm(OR=2.257～11.927,P<0.001)与女性PTC患者颈部淋巴结转移有明显相关性(P<0.05)。结论：BRAFV600E突变丰度与PTC患者肿瘤直径、颈部淋巴结转移明显相关。BRAFV600E突变丰度≥25.68%的女性PTC患者颈部淋巴结转移率明显升高。

关键词：甲状腺乳头状癌 BRAF 基因突变丰度淋巴结转移

细针穿刺检测BRAF^(V600E)突变丰度与甲状腺乳头状癌临床病理特征的相关性

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重庆医科大学学报 2023年第4期48卷 398-403页

作者：章双艳黄驰马丙娥钱涛武心萍徐书杭王建华南京中医药大学附属中西医结合医院甲乳外科南京210028 南京中医药大学附属中西医结合医院超声科南京210028 南京中医药大学附属中西医结合医院内分泌科南京210028

目的:探讨术前细针穿刺基因检测BRAF^(V600E)突变丰度与甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)临床病理特征的关系。方法:回顾性统计2021年1月30日至2022年2月28日就诊于南京中医药大学附属中西医结合医院的301例患者临床资料,... 详细信息

目的:探讨术前细针穿刺基因检测BRAF^(V600E)突变丰度与甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)临床病理特征的关系。方法:回顾性统计2021年1月30日至2022年2月28日就诊于南京中医药大学附属中西医结合医院的301例患者临床资料,术前细针穿刺基因检测示BRAF^(V600E)突变(含突变丰度检测),所有患者完成甲状腺癌根治术,术后病理证实为甲状腺乳头状癌,分析BRAF^(V600E)基因突变丰度与临床病理特征的关系。结果:纳入301例患者,男91例,女210例,年龄42(33~51)岁,范围18~69岁。肿瘤直径>1 cm的患者BRAF^(V600E)基因突变丰度高于肿瘤直径≤1 cm者[29.05(18.03~37.56)vs.18.35(6.74~29.61),P1 cm(OR=2.257~11.927,P<0.001)与女性PTC患者颈部淋巴结转移有明显相关性(P<0.05)。结论:BRAF^(V600E)突变丰度与PTC患者肿瘤直径、颈部淋巴结转移明显相关。BRAF^(V600E)突变丰度≥25.68%的女性PTC患者颈部淋巴结转移率明显升高。

关键词：甲状腺乳头状癌 BRAF^(V600E)基因突变丰度淋巴结转移

基于IFNγ-STAT1、IL-4-STAT6信号通路探究复方五凤草液治疗结核性溃疡的作用机制

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中药药理与临床 2024年

作者：黄子慧钱佳燕洪练青郭丹丹马朝群南京中医药大学南京中医药大学附属南京市中西医结合医院南京中医药大学附属医院

目的：观察复方五凤草液治疗结核性溃疡的临床疗效，并基于干扰素-γ（interferon-γ，INF-γ）/信号转导和转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1，STAT1)、白细胞介素-4(interleukin-4，IL-4)/信号转导和转录激活因子6(signal transducer and activator of transcription 6，STAT6)信号通路和卡介苗（Bacillus Calmette Guerin，BCG）诱导巨噬细胞极化模型探讨其作用机制。方法：（1）临床试验：将135 例结核性溃疡患者分为观察组、中医对照组和西医对照组。在规范抗结核治疗基础上，观察组予复方五凤草液，中医对照组予康复新液，西医对照组予异烟肼液局部外用治疗，观察周期28 d。分别观察三组患者观察安全性指标、创面愈合总有效率、创面组织病理学形态及创面组织、血液中IFN-γ、IL-4、STAT1、STAT6的表达水平，填写中医评分量表(Traditional Chinese Medicine Syndrome Score Scale， TCMSSS）病例报告表(Case Report Form， CRF)。（2）细胞实验：建立BCG诱导THP-1巨噬细胞模型，分别予不同药物处理后分为BCG组、BCG+康复新液组、BCG+异烟肼液组、BCG+复方五凤草液组。镜下观察各组BCG菌落情况，收集细胞上清液并离心，蛋白质印迹（Western Blot）、实时荧光定量(Real Time Quantitative PCR，RT-qPCR）技术检测IFN-γ、IL-4、STAT1、STAT6的表达水平，流式细胞术检测药物对CD11b、CD86、CD163、CD206表达的影响。结果：（1）临床试验：治疗期间，3组患者安全性指标无明显差异；观察组总有效率（95.56%）高于中医对照组（82.22%）、西医对照组（75.56%）；治疗28 d后，与中、西医对照组比较，观察组创面组织病理学形态改善更为明显，观察组患者IFN-γ、STAT1的表达低于中、西医对照组，IL-4、STAT6的表达高于中、西医对照组；与中、西医对照组比较，观察组中医证候积分显著降低。（2）细胞实验：THP-1巨噬细胞在感染BCG后吞噬泡明显增多，自噬小体增多；各组药物干预后胞内结核分枝杆菌的存活率降低。Western blotting、RT-qPCR、流式实验结果显示与对照组相比，BCG组M1型巨噬细胞所占比例较多，另3组M2型巨噬细胞所占比例较多。其中，BCG+复方五凤草液组中M2巨噬细胞占比显著，高于其他3组。BCG+复方五凤草液组IFN-γ、STAT1表达降低，IL-4、STAT6表达增高，CD86表达明显下调，CD206的表达显著上调。结论：复方五凤草液治疗结核性溃疡临床疗效显著，其作用机制可能与抑制病原菌，干预IFN-γ/STAT1、IL-4/STAT6信号通路以介导M1/M2巨噬细胞极化平衡有关。

关键词：复方五凤草液结核性溃疡 IFN-γ/STAT1 IL-4/STAT6 BCG 巨噬细胞极化

从巨噬细胞角度探讨复方五凤草液干预结核性溃疡的机制

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中国实验方剂学杂志 2023年第4期29卷 86-96页

作者：钱佳燕黄子慧孙佳玥许费昀王裕玲余洋南京中医药大学附属南京市中西医结合医院江苏210014

目的:探讨复方五凤草液治疗结核性溃疡的临床疗效及对巨噬细胞极化的影响。方法:(1)临床实验。将南京市中西医结合医院145例结核性溃疡患者按随机数字表法分为观察组、对照Ⅰ组和对照Ⅱ组。3组均予以基础抗结核化学治疗的同时,观察组予... 详细信息

目的:探讨复方五凤草液治疗结核性溃疡的临床疗效及对巨噬细胞极化的影响。方法:(1)临床实验。将南京市中西医结合医院145例结核性溃疡患者按随机数字表法分为观察组、对照Ⅰ组和对照Ⅱ组。3组均予以基础抗结核化学治疗的同时,观察组予以复方五凤草液,对照Ⅰ组予以康复新液,对照Ⅱ组予以异烟肼液局部外用治疗,疗程4周。分别观察3组患者创面愈合总有效率、中医证候积分、创面组织病理学形态及创面组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arg-1)的表达水平。(2)细胞实验。RAW264.7细胞在完全培养基DMEM(10%的胎牛血清,1%青-链酶素溶液)于37℃、5%CO_(2)的细胞培养箱中培养。经佛波酯(PMA)诱导后向巨噬细胞分化,分别用脂多糖(LPS)诱导成M1巨噬细胞、白细胞介素-4(IL-4)诱导成M2巨噬细胞,分别予康复新溶液、异烟肼液、复方五凤草液处理以上细胞模型36 h,收集细胞上清液并离心,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、iNOS和Arg-1的蛋白量的表达,流式细胞术(FCM)检测药物对CD86、CD206表达的影响。结果:(1)临床实验。与对照Ⅰ组[87.5%(42/48),χ^(2)=3.962,P中医证候积分明显降低(P<0.05),复方五凤草液组创面组织病理学形态改善更为明显;免疫组化结果显示,治疗28 d后,与对照Ⅰ组、对照Ⅱ组比较,复方五凤草液组局部病灶组织样本中的iNOS表达量明显降低(P<0.05),Arg-1表达量显著升高(P<0.05,P<0.01)。(2)细胞实验。Western blot实验结果显示,与M0组比较,LPS组中iNOS、TNF-α表达升高(P<0.01)。与LPS组比较,LPS+异烟肼组、LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中iNOS、TNF-α表达下降(P<0.05);与LPS+异烟肼组比较,LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中iNOS表达下降(P<0.05,P<0.01),LPS+复方五凤草液组TNF-α水平显著下降(P<0.01);与LPS+康复新液组比较,LPS+复方五凤草液组中TNF-α表达下降(P<0.05)。与M0组比较,IL-4组中Arg-1、TGF-β表达升高(P<0.01)。与IL-4组比较,IL-4+异烟肼组、IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中Arg-1、TGF-β表达升高(P<0.05,P<0.01)。与IL-4+异烟肼组比较,IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中Arg-1、TGF-β表达升高(P<0.05,P<0.01);与IL-4+康复新液组比较,IL-4+复方五凤草液组中Arg-1、TGF-β表达升高(P<0.05,P<0.01)。流式细胞术结果显示,与M0组比较,LPS组CD86表达升高,IL-4组中CD206表达升高(P<0.01)。与LPS组比较,LPS+异烟肼组、LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中CD86表达下降(P<0.01);与LPS+异烟肼组比较,LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中CD86表达下降(P<0.01);与LPS+康复新液组比较,LPS+复方五凤草液组中CD86表达下降(P<0.01)。与IL-4组比较,IL-4+异烟肼组、IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中CD206表达升高(P<0.01);与IL-4+异烟肼组比较,IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中CD206表达升高(P<0.01);与IL-4+康复新液组比较,IL-4+复方五凤草液组中CD206表达升高(P<0.05)。结论:复方五凤草液能有效促进结核性溃疡愈合,其作用机制可能是通过抑制iNOS、TNF-α、CD86的表达并促进Arg-1、TGF-β、CD206的表达,从而调控M1/M2巨噬细胞极化平衡来完成。

关键词：复方五凤草液结核性溃疡巨噬细胞极化慢性创面

基于血清代谢组学研究左归丸与右归丸辨证治疗卵巢储备功能减退

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中国中药杂志 2023年第13期48卷 3664-3677页

作者：曹莹陈思陈玥周科达王佩娟宋清霞南京中医药大学附属中西医结合医院江苏南京210046 南京中医药大学附属苏州市中医医院江苏苏州215009

基于代谢组学系统分析左归丸与右归丸辨证治疗卵巢储备功能减退(DOR)的代谢物质基础,为中医辨证论治DOR提供科学依据。医院门诊收集DOR肾阴虚患者给予左归丸治疗12周,DOR肾阳虚患者给予右归丸治疗12周,基于非靶向代谢组学研究技术,筛选... 详细信息

基于代谢组学系统分析左归丸与右归丸辨证治疗卵巢储备功能减退(DOR)的代谢物质基础,为中医辨证论治DOR提供科学依据。医院门诊收集DOR肾阴虚患者给予左归丸治疗12周,DOR肾阳虚患者给予右归丸治疗12周,基于非靶向代谢组学研究技术,筛选左归丸治疗DOR肾阴虚和右归丸治疗DOR肾阳虚的潜在生物标志物,并对其进行代谢通路分析。分别记录和统计患者治疗后的妊娠率及血清激素基础水平[基础卵泡刺激素(bFSH)、基础黄体生成素(bLH)、基础雌二醇(bE_(2))、抗缪勒管激素(AMH)]、中医证型评分、Kupperman评分的改变。结果显示,共收集DOR肾阴虚患者23例,肾阳虚患者25例。左归丸回调DOR肾阴虚患者的左旋肉碱、乙酰辅酶A、辅酶A、辅酶Q_(10)(CoQ10)等26种差异代谢物,映射到12条代谢通路;右归丸回调DOR肾阳虚患者的己二酰辅酶A、L-赖氨酸、赖氨酸精氨酸、α-生育酚等22种差异代谢物,映射到11条代谢通路。DOR肾阴虚和肾阳虚患者治疗后bFSH、bLH均明显低于治疗前,差异有统计学意义(P中医证型评分和Kupperman评分均明显低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。

关键词：卵巢储备功能减退肾阴虚证肾阳虚证左归丸右归丸代谢组学

超声引导下微波消融治疗12例原发性甲状旁腺功能亢进症的疗效及安全性

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中华内科杂志 2021年第10期60卷 904-907页

作者：倪文婧褚晓秋陆晨雅陈国芳韩雪许洋武心萍王建华刘超徐书杭南京中医药大学附属中西医结合医院内分泌科 210028 南京中医药大学附属中西医结合医院超声科 210028 南京中医药大学附属中西医结合医院普外科 210028

为探讨微波消融(MWA)治疗原发性甲状旁腺功能亢进症(PHPT)的有效性和安全性,选择2019年5月至2021年2月在南京中医药大学附属中西医结合医院行MWA的PHPT患者12例,观察治疗前后及随访期的甲状旁腺激素(PTH)、血钙磷变化;比较术前及末次随... 详细信息

为探讨微波消融(MWA)治疗原发性甲状旁腺功能亢进症(PHPT)的有效性和安全性,选择2019年5月至2021年2月在南京中医药大学附属中西医结合医院行MWA的PHPT患者12例,观察治疗前后及随访期的甲状旁腺激素(PTH)、血钙磷变化;比较术前及末次随访病灶体积及体积缩小率。观察临床治愈率和技术成功率。末次随访时,PTH[66.60(42.21,80.03)ng/L比169.90(89.01,396.50)ng/L]和血钙[2.39(2.32,2.49)mmol/L比2.75(2.57,2.96)mmol/L]水平与术前相比均有显著下降(P值均<0.05)。6例PTH和血钙水平在正常范围内,4例仅血清PTH轻度高于正常参考范围上限。2例血清PTH和血钙均未恢复正常。临床治愈率50%。所有患者病灶体积较术前显著缩小(P<0.05),技术成功率92.3%。无患者出现严重并发症。超声引导下MWA治疗PHPT有效且安全。

关键词：甲状旁腺功能亢进症,原发性微波消融

蝎毒素BmK M2的分离鉴定及其电生理活性研究

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中国药科大学学报 2022年第4期53卷 498-506页

作者：桑明陈永根周谦曹鹏卢悟广南京中医药大学附属中西医结合医院南京210028 南京中医药大学药学院南京210023

从东亚钳蝎蝎毒中分离鉴定出新型的Na~+通道毒素,采用Sephadex-G-50分子筛、高效液相色谱、多肽指纹图谱及氨基酸测序等技术从野生东亚钳蝎毒液中分离鉴定了一种长链多肽毒素BmK M2,其相对分子质量为7 235.5,由64个氨基酸组成,包含4对... 详细信息

从东亚钳蝎蝎毒中分离鉴定出新型的Na~+通道毒素,采用Sephadex-G-50分子筛、高效液相色谱、多肽指纹图谱及氨基酸测序等技术从野生东亚钳蝎毒液中分离鉴定了一种长链多肽毒素BmK M2,其相对分子质量为7 235.5,由64个氨基酸组成,包含4对二硫键。序列比对显示,BmK M2的序列与已发现的Na~+通道毒素BmK M1、BmK M3、BmK M9等具有较高的序列和结构相似性,是一种潜在的新型Na~+通道调节剂。全细胞膜片钳实验结果显示,BmK M2可显著增强电压门控Na~+通道Nav1.7的激活,延迟Nav1.7的稳态失活及关闭状态失活,但对Nav1.8无活性。实验结果表明BmK M2可作为一种新型的Na~+通道探针,用于Nav1.7结构功能研究以及靶向药物的开发。

关键词：东亚钳蝎 BmK M2 Nav1.7 全细胞膜片钳电生理活性分离鉴定

基于HPLC指纹图谱和LC-Q-TOF/MS的加味黄芪桂枝五物汤化学成分研究

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中草药 2023年第3期54卷 711-721页

作者：汤书婉李新亮马莉郑云枫李存玉成小兰曹鹏彭国平南京中医药大学江苏南京210000 南京中医药大学附属中西医结合医院江苏南京210000

目的建立加味黄芪桂枝五物汤(Jiawei Huangqi Guizhi Wuwu Decoction,JHD)HPLC指纹图谱,鉴定其主要化学成分,并阐明指纹图谱共有峰的成分归属。方法HPLC指纹图谱检测采用Hypersil ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.2%甲... 详细信息

目的建立加味黄芪桂枝五物汤(Jiawei Huangqi Guizhi Wuwu Decoction,JHD)HPLC指纹图谱,鉴定其主要化学成分,并阐明指纹图谱共有峰的成分归属。方法HPLC指纹图谱检测采用Hypersil ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.2%甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1 mL/min,检测波长为250 nm,柱温为30℃;运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”进行相似度评价,并以高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,LC-Q-TOF/MS)方法对指纹图谱中化学成分进行分析,通过对照品、化合物质谱信息结合文献报道鉴定其结构,进一步通过药材指纹图谱阐明共有峰的成分归属。结果建立了JHD的HPLC指纹图谱,确定了20个共有峰,10批样品相似度为0.920~0.990。在此基础上共鉴定出JHD中70个化学成分,包括28个黄酮类、23个三萜类、5个单萜苷类、5个有机酸类、5个姜辣素类及4个其他类化合物。结论HPLC指纹图谱结合LC-Q-TOF/MS定性鉴别,能够体现JHD组分的整体特征,可为其质量控制研究奠定基础。

关键词：加味黄芪桂枝五物汤指纹图谱高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱法毛蕊异黄酮苷芒柄花苷桂皮醛芍药苷甘草酸