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大黄鱼C型凝集素受体Clec4e的分子鉴定及凝集特性

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水产学报 2024年第2期48卷 31-45页

作者：张鑫洛王永阳吴子良黄小红陈新华张伟妮海水养殖生物育种全国重点实验室福建省海洋生物技术重点实验室福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室

为了揭示硬骨鱼C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CTLR)的生物学功能，实验以从大黄鱼转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因(Clec4e)为研究对象，研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示，Lc... 详细信息

为了揭示硬骨鱼C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CTLR)的生物学功能，实验以从大黄鱼转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因(Clec4e)为研究对象，研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示，LcClec4e cDNA全长1 546 bp，开放阅读框(ORF)771 bp，编码254个氨基酸。LcClec4e的N端有一个跨膜区，无信号肽，C端含有一个糖识别结构域(CRD)，其中含有糖结合位点EPN和WFD以及6个可形成二硫键的保守半胱氨酸。系统发育分析表明，LcClec4e与多种鲈形目鱼类Clec4e具有较近的亲缘关系。荧光定量PCR结果显示，LcClec4e在所检测的10种组织中呈组成型分布，且在肝脏中表达量最高；LcClec4e在来源于大黄鱼头肾组织的原代巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞中均有表达，且在巨噬细胞中表达量最高；经灭活溶藻弧菌刺激后，LcClec4e在3种免疫细胞中的表达均极显著上调。原核表达的重组LcClec4e胞外段(recombinant LcClec4e-extracellular domain,rLcClec4e-ex)具有Ca2+依赖性的凝集活性，可凝集小鼠、家兔的红细胞，以及嗜水气单胞菌、变形假单胞菌、溶藻弧菌和坎氏弧菌等4种水产常见的革兰氏阴性菌。D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、D-麦芽糖、α-乳糖和脂多糖均可抑制rLcClec4e-ex对大黄鱼重要病原菌变形假单胞菌的凝集作用，说明LcClec4e可能与变形假单胞菌表面的糖类物质结合。上述结果提示，LcClec4e可能作为一种模式识别受体，通过结合病原菌表面的糖类病原体相关分子模式来识别病原，参与大黄鱼抗细菌感染的免疫防御。

关键词：大黄鱼 C型凝集素受体(CTLR) Clec4e 红细胞凝集细菌凝集

表达PRRSV GP5(GP5m)、M蛋白与猪IL-18的重组PRV的构建及对小鼠免疫特性分析

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中国兽医科学 2024年第10期54卷 1359-1367页

作者：石昂李双双张俊霞王永生高冬生王川庆陈陆国药集团动物保健股份有限公司河南农业大学动物医学院河南普华基因科技有限公司许昌市建安区农牧业服务中心

为获得有效预防猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）和猪伪狂犬病（PR）的重组活载体疫苗，以rPRV-gE-/TK-/GFP+为载体将猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染株ATCC-VR2332的GP5、修饰型GP5（GP5m）和M蛋白基因以及猪IL-18基因以不同组合方式... 详细信息

为获得有效预防猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）和猪伪狂犬病（PR）的重组活载体疫苗，以rPRV-gE-/TK-/GFP+为载体将猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染株ATCC-VR2332的GP5、修饰型GP5（GP5m）和M蛋白基因以及猪IL-18基因以不同组合方式插入至伪狂犬病病毒（PRV）TK基因位点，构建5种重组PRV（rPRV）:rPRV-gE-/TK-/GP5m+、rPRV-gE-/TK-/GP5m+/IL-18+、rPRV-gE-/TK-/GP5+/M+、rPRV-gE-/TK-/GP5+/M+/IL-18+和rPRV-gE-/TK-/IL-18+。免疫印迹结果显示rPRV可表达GP5、GP5m、M和IL-18。随后将5种rPRV分别进行小鼠免疫原性试验，rPRV-gE-/TK-/GP5+/M+、rPRV-gE-/T K-/GP5+/M+/IL-18+和rPRV-gE-/TK-/GP5m+/IL-18+可产生抗PRRSV和PRV的特异性中和抗体，并能刺激CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞增殖及IFN-γ、IL-4和IL-10细胞因子的表达。综上，rPRV-gE-/TK-/GP5+/M+、rPRV-gE-/TK-/GP5+/M+/IL-18+和rPRV-gE-/TK-/GP5m+/IL-18+可有效诱导小鼠产生抗PRRSV和PRV特异性全身免疫反应，为研发有效预防PRRS和PR的重组活载体疫苗奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒伪狂犬病病毒同源重组重组病毒黏膜免疫活载体疫苗

白屈菜碱对H_(2)O_(2)诱导的IPEC-J2细胞炎症损伤的预防作用

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中国兽医学报 2024年第1期44卷 128-134页

作者：林惠莹杨黎宇李家伟林福李健福建农林大学福建省兽医中药与动物保健重点实验室福建福州350002 福建福德农业发展有限公司福建福州350000

集约化养殖模式造成猪肠道炎症损伤日趋严重,致使小肠上皮屏障功能受损,影响猪群健康度。为研究白屈菜碱(chelidonine)对猪小肠上皮细胞炎症损伤的保护作用,本试验使用H_(2)O_(2)构建猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2 cells)炎症损伤模型,采用... 详细信息

集约化养殖模式造成猪肠道炎症损伤日趋严重,致使小肠上皮屏障功能受损,影响猪群健康度。为研究白屈菜碱(chelidonine)对猪小肠上皮细胞炎症损伤的保护作用,本试验使用H_(2)O_(2)构建猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2 cells)炎症损伤模型,采用MTT法筛选适宜的白屈菜碱浓度,采用ELISA法检测炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β1)以及NO含量,采用qPCR法和Western blot检测上述炎症因子及iNOS的mRNA和蛋白表达水平。结果发现,在2.5~100.0 mg/L质量浓度范围内,白屈菜碱对IPEC-J2细胞无毒性;2.5、5.0、10.0 mg/L白屈菜碱可显著恢复H_(2)O_(2)诱导的IPEC-J2细胞存活率下降(P<0.05)。经H_(2)O_(2)造模后,NO含量极显著升高(P<0.01)、IL-10含量显著降低(P<0.05)、其余炎症因子含量显著升高(P<0.05),iNOS及上述炎症因子的mRNA和蛋白表达水平均与ELISA检测结果趋势一致;而3个试验浓度的白屈菜碱均可显著地逆转以上变化。结果表明,白屈菜碱对H_(2)O_(2)诱导的IPEC-J2细胞炎症损伤具有显著的预防作用,具备开发成为防治猪肠炎药物的潜力。

关键词：白屈菜碱 H_(2)O_(2) 炎症损伤炎症因子

猫心肌病分类分期及匹莫苯丹治疗猫心肌病的研究进展

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现代畜牧兽医 2024年第3期 91-96页

作者：张俭伟张志红卢娜刘清彪胡静思李琪勃林格殷格翰动物保健(上海)有限公司上海200040 美联众合动物医院转诊中心北京100000

随着养猫数量增加,猫心肌病在宠物临床中越来越常见。匹莫苯丹是治疗犬充血性心力衰竭标准方案之一,近年来也逐渐应用于治疗猫心肌病和心力衰竭,对猫肥厚型心肌病(HCM)安全耐受性良好,且非梗阻性HCM患猫可从治疗中获益。为了更好地治疗... 详细信息

随着养猫数量增加,猫心肌病在宠物临床中越来越常见。匹莫苯丹是治疗犬充血性心力衰竭标准方案之一,近年来也逐渐应用于治疗猫心肌病和心力衰竭,对猫肥厚型心肌病(HCM)安全耐受性良好,且非梗阻性HCM患猫可从治疗中获益。为了更好地治疗猫心肌病,文章介绍了猫心肌病的分类分期,综述了匹莫苯丹在猫心肌病治疗中的应用,以期为猫心肌病的治疗方案优化更新提供参考。

关键词：猫心肌病猫肥厚型心肌病匹莫苯丹

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老龄犬猫尿石症的诊疗探讨

上海畜牧兽医通讯 2024年第4期 78-82页

作者：司钰歆施语上海动物保健宠物医院上海201103 上海爱达斯宠物医院上海200003

老龄犬猫患结石种类与宠主的饲养方式息息相关,近期发现尿石症患病犬/猫中的结石大多为草酸钙、尿酸铵结石。分别介绍了草酸钙结石1例、尿酸铵结石1例病例的诊治过程,旨在探讨老龄犬猫尿石症的形成条件,并强调预防和预后沟通的重要性。

关键词：老龄犬猫草酸钙尿酸铵 pH影响控制方式

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1例猫限制型心肌病继发急性肾衰的病例报告

现代畜牧兽医 2024年第10期 45-51页

作者：胡静思雷雪彬张俭伟勃林格殷格翰动物保健(上海)有限公司新瑞鹏集团广州中心医院

限制性心肌病（RCM）是一种以心肌僵硬、严重舒张功能障碍（限制性生理学变化）和总体预后不良为特征，表现为限制性充盈障碍的心肌疾病。心血管系统出现结构性或功能性损伤，可能会导致肾脏与心血管系统间的正常交互作用被破坏，最终... 详细信息

限制性心肌病（RCM）是一种以心肌僵硬、严重舒张功能障碍（限制性生理学变化）和总体预后不良为特征，表现为限制性充盈障碍的心肌疾病。心血管系统出现结构性或功能性损伤，可能会导致肾脏与心血管系统间的正常交互作用被破坏，最终导致肾脏功能的损伤或衰竭。同时，在使用利尿剂控制RCM引起的心衰时，可能引起脱水及肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）激活而继发肾损伤。文章对一例英国短毛猫RCM的诊断、治疗及在治疗过程中的变化进行描述探讨，为猫RCM的诊断与治疗提供参考。

关键词：猫限制性心肌病急性肾衰血栓心衰

不同IBD商品疫苗对国内新型变异株的免疫攻毒保护实验

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家禽科学 2024年第5期46卷 32-37,I0006,I0007页

作者：蒲兴党海斌吴荣春陈露徐阳南昌勃林格殷格翰动物保健有限公司江西南昌330096 勃林格殷格翰动物保健(中国)有限公司上海分公司上海200040 四川农业大学四川成都611130

传染性法氏囊病(IBD)是严重危害家禽业的疾病之一,该病目前呈全世界分布。近期我们进行的IBD流行病学调查结果显示,不同类型鸡群都存在一定比例的IBD野毒感染情况,包括经典毒株、超强毒株及新型变异株都有检出,其中又以新型变异株为主... 详细信息

传染性法氏囊病(IBD)是严重危害家禽业的疾病之一,该病目前呈全世界分布。近期我们进行的IBD流行病学调查结果显示,不同类型鸡群都存在一定比例的IBD野毒感染情况,包括经典毒株、超强毒株及新型变异株都有检出,其中又以新型变异株为主。我们筛选了两个具有代表性的毒株并命名为S1、S2,其与美国变异株在进化树上同属一个分支,氨基酸序列一致性为96.81%~98.24%。为了对IBD的防控提供最新的参考依据,我们在实验室条件下使用不同的商品IBD疫苗免疫SPF鸡后进行攻毒试验,由此来评估其对新型变异株的免疫保护效果。试验结果表明:针对目前国内普遍流行的IBDV变异株攻击导致的法氏囊组织萎缩,HVT-IBD载体疫苗较抗原抗体复合物疫苗、中等偏强毒力活疫苗以及VP2亚单位疫苗在保护力上都具有一定优势,且HVT-IBD载体疫苗单独免疫的保护效果也不比HVT-IBD载体疫苗与IBD活疫苗及HVT-IBD载体疫苗与VP2亚单位疫苗组合免疫的效果差。我们推荐在保证雏鸡具有较高水平的母源抗体的基础上1日龄免疫HVT+IBD载体疫苗,同时辅以良好的生物安全措施会取得比较理想的效果。

关键词：传染性法氏囊病免疫保护载体疫苗

禽腺病毒DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医学报 2024年第1期44卷 66-73页

作者：周珈羽朱春华陈珍程龙飞陈翠腾傅光华万春和施少华梁齐章陈红梅傅秋玲刘荣昌黄小红黄瑜福建农林大学动物科学学院福建省兽医中药与动物保健重点实验室福建福州350002 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

禽腺病毒属成员鸭腺病毒3型(duck adenovirus type 3,DAdV-3)和禽腺病毒4型(fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4)是养殖场主要流行的病原,对养禽业造成巨大的经济损失。目前尚未见可同时快速检测这2种病原的双重荧光定量PCR检测方法,本... 详细信息

禽腺病毒属成员鸭腺病毒3型(duck adenovirus type 3,DAdV-3)和禽腺病毒4型(fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4)是养殖场主要流行的病原,对养禽业造成巨大的经济损失。目前尚未见可同时快速检测这2种病原的双重荧光定量PCR检测方法,本研究基于DAdV-3 GDMM10毒株和FAdV-4 GDMZ毒株Fiber2基因序列比对及遗传进化分析,分别在Fiber2基因保守区设计特异性引物,建立了能同时鉴别临床上常见的DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR检测方法。结果表明,DAdV-3 GDMM10和FAdV-4 GDMZ Fiber2基因处于两个不同进化分支上,同源性为46.10%。建立的检测DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高,最低可检出45拷贝/μL的DAdV-3样品和17拷贝/μL的FAdV-4样品;且检测结果可直接通过Tm值差异进行判定,简化操作时间。利用该双重荧光定量PCR方法对2022年度临床上采集的34份肝炎-心包积液疑似样品进行检测,DAdV-3和FAdV-4检出率分别为17.65%和2.94%。为进一步开展禽源DAdV-3和FAdV-4的分子流行病学及共感染致病机制奠定了基础。

关键词：鸭腺病毒3型禽腺病毒4型 Fiber2基因实时定量PCR 临床检测

牛诺瓦病毒和牛轮状病毒双重RAA-LFD快速检测方法的建立及应用

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畜牧兽医学报 2024年第1期55卷 406-412页

作者：李惠惠董可儿刘馨博张春晓马超陈利苹钟旗姚刚马雪连新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 动物保健与畜产品质量安全研究实验室乌鲁木齐830052 乌鲁木齐市动物园乌鲁木齐830001 深圳市真瑞生物有限公司深圳518000 新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐830000

为建立能同时检测牛诺瓦病毒(bovine norovirus,BNoV)和牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)的重组酶辅助扩增-侧流层析试纸条(recombinase aided amplification-lateral flow dipstick,RAA-LFD)快速检测方法。本试验按照RAA引物探针设计原则,分别针对BNoV RdRp基因和BRV VP7基因的保守区设计引物和探针,制备标准重组质粒,建立并优化RAA-LFD反应体系,同时对该检测方法进行特异性、敏感性及重复性评估,用建立的RAA-LFD法与PCR法、qPCR法分别对采集的168份腹泻犊牛的临床样本进行平行检测。结果显示,该方法可在20 min,39℃的条件下扩增目标片段,对BNoV和BRV敏感度均为103 copies·μL^(-1),与PCR的检测结果基本一致,且与牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)和牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)无交叉反应,虽低于qPCR检测结果,但可通过肉眼直接观察试纸条的检测结果。综上所述,RAA-LFD法灵敏度较高、且简便、快速、同时不依赖于仪器、专业操作人员,适用于现场检测。

关键词：牛诺瓦病毒牛轮状病毒重组酶介导扩增侧向流试纸条