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鳡和翘嘴鲌精子诱导彭泽鲫雌核发育子代的异精效应研究

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水产学报 2023年第1期47卷 195-206页

作者：操文杰张静蓉张庆飞赵玉华王卫民华中农业大学水产学院农业农村部淡水生物繁育重点实验室

为探究鳡和翘嘴鲌精子在诱导彭泽鲫雌核发育子代中的异精效应，实验分别以鳡和翘嘴鲌精子激活彭泽鲫卵的胚胎发育获得子二代(F2)群体：P×G (彭泽鲫♀×鳡♂)和P×Q(彭泽鲫♀×翘嘴鲌♂)，以P×P (彭泽鲫♀×彭泽鲫♂)F2为对照，比较各... 详细信息

为探究鳡和翘嘴鲌精子在诱导彭泽鲫雌核发育子代中的异精效应，实验分别以鳡和翘嘴鲌精子激活彭泽鲫卵的胚胎发育获得子二代(F2)群体：P×G (彭泽鲫♀×鳡♂)和P×Q(彭泽鲫♀×翘嘴鲌♂)，以P×P (彭泽鲫♀×彭泽鲫♂)F2为对照，比较各群体的染色体核型、DNA含量、形态学特征以及生长等。结果显示，P×G、P×Q和P×P的核型分别为3n=150=45m+66sm+27st+12t、3n=150=54m+51sm+39st+6t和3n=150=51m+48sm+45st+6t，与父本鳡的核型(2n=48=10m+24sm+12st+2t)和翘嘴鲌的核型(2n=48=16m+26sm+6st)明显不同；P×G和P×Q的DNA含量与P×P比值在95%的置信区间内(均为0.97)；上述结果表明，P×G和P×Q的F2群体均为雌核发育子代。基于形态学参数的主成分分析显示，P×G和P×Q与P×P散点分布区域基本无重叠；P×G和P×Q与P×P间能通过判别函数进行初步判别(准确率达97.8%)，即存在显著的形态学差异；这表明P×Q和P×G子代存在异精效应。与P×P相比，P×G和P×Q的F2群体各日龄的平均体重、平均体长、增重率和增长率均表现出优势，且P×G优势显著。综上所述，鳡和翘嘴鲌精子均能诱导彭泽鲫卵的雌核发育，且不同的精子源诱导对雌核发育子代的影响不同，存在典型的“异精效应”。

关键词：彭泽鲫雌核发育异精效应核型形态学生长性能

团头鲂tf和tfr1a基因启动子克隆及转录调控分析

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水产学报 2020年第4期44卷 528-538页

作者：王济秀张锋王卫民刘红华中农业大学水产学院农业农村部淡水生物繁育重点实验室

为探索鱼类转铁蛋白基因tf和转铁蛋白受体基因tfr1a的转录调控机制,本实验以团头鲂为研究对象,在其全基因组数据库中获取tf和tfr1a基因序列,对2个基因候选启动子区转录因子结合位点及CpG岛进行预测,通过PCR方法克隆得到tf和tfr1a基因近... 详细信息

为探索鱼类转铁蛋白基因tf和转铁蛋白受体基因tfr1a的转录调控机制,本实验以团头鲂为研究对象,在其全基因组数据库中获取tf和tfr1a基因序列,对2个基因候选启动子区转录因子结合位点及CpG岛进行预测,通过PCR方法克隆得到tf和tfr1a基因近端启动子区不同长度片段,连接至pGL3-Basic/pEGFP-1载体,瞬时转染入Hela细胞,并采用双荧光素酶报告基因检测系统进行检测。结果发现,团头鲂tf基因启动子区无CpG岛位点,而tfr1a基因启动子区有2个CpG岛位点。成功构建9个tf和10个tfr1a不同长度启动子片段的重组质粒,经双荧光素酶报告基因系统检测发现,tf启动子核心区域为-268～+56 bp,且-1 308～-1 102 bp片段可能存在正调控该基因表达的转录因子结合位点;tfr1a启动子核心区域为-224～+48 bp,且+48～+92 bp可能存在抑制该基因转录的负调控元件,而-1 229～-1 219 bp区域可能存在促进tfr1a基因表达的正调控转录因子结合位点。

关键词：团头鲂 tf基因 tfr1a基因启动子转录调控

miR-462-731对草鱼线粒体功能的影响

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中国水产科学 2024年第1期31卷 51-58页

作者：宋安康孙甜甜林钧曌刘红王焕岭华中农业大学水产学院农业农村部淡水生物繁育重点实验室

硬骨鱼特有的miR-462与miR-731位于同一基因簇(简写为miR-462-731),在低氧环境中表达量会显著上调。为了进一步研究miR-462-731簇的作用,本研究以草鱼(Ctenopharyngodon idella)肝脏细胞为对象,分析miR-462与miR-731过表达对细胞线粒体... 详细信息

硬骨鱼特有的miR-462与miR-731位于同一基因簇(简写为miR-462-731),在低氧环境中表达量会显著上调。为了进一步研究miR-462-731簇的作用,本研究以草鱼(Ctenopharyngodon idella)肝脏细胞为对象,分析miR-462与miR-731过表达对细胞线粒体生物学功能的影响。结果显示miR-462与miR-731过表达后三羧酸循环中关键基因mdh、ogdh、cs的mRNA表达水平以及ATP含量均显著降低,线粒体膜电位下降;细胞中活性氧(reactiveoxygen species,ROS)的含量显著增加,同时总抗氧化能力(totalantioxidantcapacity,T-AOC)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性显著下降,而丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量升高;电子显微镜观察发现miR-462与miR-731过表达后细胞线粒体结构损伤。由此推测,miR-462-731簇可通过影响细胞线粒体膜电位、代谢及氧化应激等参与线粒体活动,研究结果可为草鱼及其他硬骨鱼类低氧调节机制提供基础资料。

关键词：草鱼 miR-462-731 能量代谢线粒体膜电位氧化应激细胞超微结构

黄颡鱼细胞因子信号传导抑制因子SOCS1的原核表达及多克隆抗体制备

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水产学报 2020年第4期44卷 523-527页

作者：叶汉梅魏晓雷谭肖英华中农业大学水产学院农业农村部淡水生物繁育重点实验室

细胞因子信号传导抑制因子(suppressor of cytokine signaling, SOCS)是一类由细胞产生的胞内蛋白,能够反馈性阻断细胞因子信号传导过程的负性调控因子。为深入研究黄颡鱼细胞因子信号传导的发生过程和机制,实验从黄颡鱼cDNA中克隆获得5... 详细信息

细胞因子信号传导抑制因子(suppressor of cytokine signaling, SOCS)是一类由细胞产生的胞内蛋白,能够反馈性阻断细胞因子信号传导过程的负性调控因子。为深入研究黄颡鱼细胞因子信号传导的发生过程和机制,实验从黄颡鱼cDNA中克隆获得561 bp的黄颡鱼SOCS1(PfSOCS1)基因编码序列,成功构建了重组质粒pET32a(+)-PfSOCS1,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在不同温度、IPTG浓度、诱导时间等条件下进行表达,确定最佳表达条件。本实验采用包涵体纯化的方法得到纯度较高的重组SOCS1蛋白;以重组PfSOCS1蛋白免疫Balb/C小鼠,制备多克隆抗体。通过Western blot鉴定了PfSOCS1抗血清可以特异性识别重组PfSOCS1蛋白。蛋白水平的组织分布显示,黄颡鱼SOCS1蛋白在肝脏中表达水平较高。

关键词：黄颡鱼 SOCS1 原核表达多克隆抗体制备蛋白表达

太湖流域湖荡湿地沉积物砷汞的空间分布及污染评价

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长江流域资源与环境 2013年第5期22卷 626-632页

作者：徐泽新张敏华中农业大学水产学院、农业部淡水生物繁育重点实验室湖北武汉430070

以太湖流域湖荡湿地表层沉积物作为研究对象,用双道氢化物原子荧光光谱法分析了太湖流域湖荡湿地沉积物中重金属砷(As)和汞(Hg)的空间分布特征,用地累积指数法(Geoaccumulation Index,Igeo)对太湖流域湖荡湿地As和Hg的污染状况进行了分... 详细信息

以太湖流域湖荡湿地表层沉积物作为研究对象,用双道氢化物原子荧光光谱法分析了太湖流域湖荡湿地沉积物中重金属砷(As)和汞(Hg)的空间分布特征,用地累积指数法(Geoaccumulation Index,Igeo)对太湖流域湖荡湿地As和Hg的污染状况进行了分析和评价。结果表明:湖州和无锡地区湖荡湿地沉积物As的含量相对较高,且高于太湖流域As的环境背景值,各研究区域湖荡湿地沉积物均未受到As的污染;常州地区湖荡湿地沉积物中Hg的含量相对较低,0部区域(如无锡,湖州)有增加的趋势,表明人类活动的干扰可能是太湖流域湖荡沉积物中Hg和As含量增加的主要因素。

关键词：湖荡湿地沉积物砷汞污染评价太湖流域

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黄颡鱼溶酶体酸性脂肪酶基因的cDNA序列、启动子及其转录调控分析

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水生生物学报 2022年第1期46卷 98-105页

作者：谌芳仲崇超陈姝为张电光吕武宏谭肖英华中农业大学水产学院农业农村部淡水生物繁育重点实验室武汉430070

通过分子结构、组织表达及启动子结构功能分析,探讨黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)溶酶体酸性脂肪酶(Lysosmal acid lipase,lal)基因的分子特征及转录调控,为lal在鱼类脂质代谢和转录水平的调控提供新的视野。实验采用RT-PCR和RACE克... 详细信息

通过分子结构、组织表达及启动子结构功能分析,探讨黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)溶酶体酸性脂肪酶(Lysosmal acid lipase,lal)基因的分子特征及转录调控,为lal在鱼类脂质代谢和转录水平的调控提供新的视野。实验采用RT-PCR和RACE克隆lal基因的cDNA全长序列,其长度为1802 bp,5′上游启动子长度为2052 bp,其中ORF长度为1197 bp,编码398个氨基酸,理论蛋白分子量大小为45.42 kD,等电点为7.70,含有23个残基的信号肽、5个糖基化位点(Asn^(35)-Ile^(36)-Ser^(37)、Asn^(101)-Thr^(102)-Ser^(103)、Asn^(273)-Met^(274)-Thr^(275)、Asn^(320)-Gln^(321)-Ser^(322)、Lys^(161)-Thr^(162)-Thr^(163))、3个半胱氨酸(Cys^(257)、Cys^(265)、Cys^(284))、催化三元体(Ser^(174)、Asp^(344)、His^(373))、一个“帽子”(Thr^(205)-Val^(329))和一个“盖子”(Phe^(233)-Leu^(272))结构域。氨基酸序列对比和系统发育树分析显示,黄颡鱼的lal与斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)亲缘关系最近。组织表达分析显示,lal基因的mRNA在脾脏、肠和精巢表达量最高。黄颡鱼lal启动子上存在Sp1、STAT3、PPARα、FOXO1、PPARγ及HNF4α等转录位点,启动子活性实验表明,–1507 bp/–1016 bp区域负调控启动子活性,–1016 bp/+51 bp区域正调控启动子活性。研究对黄颡鱼溶酶体酸性脂肪酶(lal)基因序列的分子特征进行了解析,有助于了解鱼类lal的结构和功能,为进一步研究鱼类脂质代谢的调控机制奠定基础。

关键词：黄颡鱼 lal 分子特征组织表达启动子

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大豆球蛋白对克氏原螯虾肠道菌群和抗菌相关基因的影响

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水生生物学报 2024年第8期48卷 1300-1314页

作者：王思如矣林圆杨慧君许乾袁勇超华中农业大学水产学院农业农村部淡水生物繁育重点实验室武汉430070

实验旨在探究不同水平的大豆球蛋白对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)肠道菌群和抗菌相关基因的影响。在饲料中添加0 (G0组,作为对照组)、1.82%(GL组)、3.64%(GH1组)、5.46%(GH2组)和7.28%(GH3组)五种不同水平的大豆球蛋白饲喂克氏原螯... 详细信息

实验旨在探究不同水平的大豆球蛋白对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)肠道菌群和抗菌相关基因的影响。在饲料中添加0 (G0组,作为对照组)、1.82%(GL组)、3.64%(GH1组)、5.46%(GH2组)和7.28%(GH3组)五种不同水平的大豆球蛋白饲喂克氏原螯虾(平均体重约为4.3 g) 4周。养殖实验结束后测定肠道微生物的组成和抗菌相关基因的表达。结果显示:(1)饲料中的大豆球蛋白对克氏原螯虾肠道菌群的Alpha多样性没有显著性影响,但改变了其肠道菌群组成。GL组Cloacibacterium、沙曼气单胞菌(Aeromonas sharmana)等菌群的相对丰度显著高于其他4组。与G0组相比,红杆菌属(Rhodobacter)、副球菌属(Paracoccus)、丙酸杆菌属(Propionicimonas)和生丝微菌属(Hyphomicrobium)等益生菌及亨氏柄杆菌(Caulobacter henricii)的相对丰度在GH2或GH3组中显著下降;而GH3组壤霉菌属(Agromyces)、巴氏微杆菌(Microbacterium barkeri)、假黄色单胞菌属(Pseudoxanthomonas)和军团杆菌属(Legionella)等潜在病原菌的相对丰度显著高于G0组。(2)随着大豆球蛋白水平的升高,各组肠道抗菌相关基因的表达水平呈现一次线性和二次响应的变化趋势。与G0组相比,GL组抗脂多糖因子(alf)、甲壳素(cru)和血蓝蛋白(hem)基因的表达水平显著下降;除组织蛋白酶-B (cst-b)外,GH1、GH2和GH3组其他抗菌相关基因的表达水平随着饲料中大豆球蛋白水平的升高而显著上升;GH2组cst-b的表达水平显著高于其余4组。(3)斯皮尔曼相关分析结果表明肠道菌群和抗菌相关基因之间存在显著的相关关系。cru、alf、C型凝集素(lec-c)、溶菌酶(lys)、白细胞介素增强因子结合子-2 (iebf-2)、hem、热休克蛋白-70 (hsp-70)和cst-b的表达水平与亨氏柄杆菌、副球菌属、红杆菌属、丙酸杆菌属、Desulfovibrio putealis、Thermomonas dokdonensis、沙曼气单胞菌和气单胞菌属、Chitinilyticum aquatile、台湾几丁质杆菌、Cloacibacterium和生丝微菌属等菌群的相对丰度具有显著的负相关关系;而与壤霉菌属、产气荚膜梭杆菌(Clostridium Perfringens)、巴氏微杆菌、乳球菌(Lactococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、类诺卡氏菌属(Nocardioides)和Peredibacter starrii等菌群的相对丰度具有显著的正相关关系。综上所述,饲料中低水平的大豆球蛋白(1.82%)在一定程度上能够促进肠道中益生菌的生长,改善肠道菌群健康,同时下调抗菌相关基因的表达;而高水平的大豆球蛋白(≥3.64%)可能抑制了益生菌的生长,导致病原菌的增殖,从而破坏了肠道菌群稳态,并且上调了抗菌相关基因的表达。相关分析结果表明抗菌相关基因与肠道菌群之间可能存在一定的互作关系。

关键词：大豆球蛋白肠道菌群抗菌相关基因克氏原螯虾

氨和空气暴露对大鳞副泥鳅组织中谷氨酰胺含量的影响

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中国水产科学 2017年第5期24卷 1115-1122页

作者：张云龙张海龙王凌宇顾贝易樊启学安徽农业大学动物科技学院华中农业大学水产学院农业部淡水生物繁育重点实验室

为研究氨对大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)(体重1825 g)生理指标的影响,将其暴露于30 mmol/L NH4Cl溶液和空气中0 h,6 h,12 h,24 h,48 h,72 h,以研究体外和体内氨对其体组织中谷氨酰胺含量、谷氨酰胺合成酶和谷氨酸脱氢酶活性的... 详细信息

为研究氨对大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)(体重1825 g)生理指标的影响,将其暴露于30 mmol/L NH4Cl溶液和空气中0 h,6 h,12 h,24 h,48 h,72 h,以研究体外和体内氨对其体组织中谷氨酰胺含量、谷氨酰胺合成酶和谷氨酸脱氢酶活性的影响。研究发现,氨和空气暴露下,随着暴露时间的延长,大鳞副泥鳅肝脏和肌肉组织中谷氨酰胺含量有明显累积的趋势,脑、肝脏和肠道组织中谷氨酰胺合成酶活性均显著上升。氨和空气暴露显著影响大鳞副泥鳅脑和肠道组织中谷氨酸脱氢酶活性,但对肝脏组织中谷氨酸脱氢酶活性并没有显著性影响。结果表明,大鳞副泥鳅可通过体组织中累积谷氨酰胺来应对体外或体内氨浓度的上升,氨暴露和空气暴露可刺激体内谷氨酰胺的合成,将氨转化为无毒性的谷氨酰胺。肠道中谷氨酸脱氢酶活性显著上升,可能在鱼类应对氨氮毒性中,肠道谷氨酸脱氢酶比谷氨酰胺合成酶有更重要的作用。而大鳞副泥鳅肝脏组织中谷氨酸脱氢酶活性并不受氨和空气暴露的影响,这可能是由于肝脏组织中转氨酶催化生成了足量的谷氨酸。

关键词：大鳞副泥鳅谷氨酰胺氨暴露空气暴露

鱼类早期发育阶段异速生长及核酸、消化酶变化的研究进展

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中国水产科学 2017年第3期24卷 648-656页

作者：张云龙张海龙王凌宇顾贝易樊启学安徽农业大学动物科技学院华中农业大学水产学院农业部淡水生物繁育重点实验室

鱼类早期发育阶段是其生活史中的关键时期之一,生理、形态学变化剧烈,死亡率极高。研究鱼类早期发育阶段的生长规律及其生理特性,可为了解鱼类早期阶段的致死因子提供理论依据,有助于提高苗种阶段的生长率和成活率,也对制定合理的早期... 详细信息

鱼类早期发育阶段是其生活史中的关键时期之一,生理、形态学变化剧烈,死亡率极高。研究鱼类早期发育阶段的生长规律及其生理特性,可为了解鱼类早期阶段的致死因子提供理论依据,有助于提高苗种阶段的生长率和成活率,也对制定合理的早期培育策略具有重要的指导意义。异速生长模式对确定仔鱼的养殖模式有重要的指示作用,鱼类在早期阶段会优先发育与生命活动关系较密切的器官,以期达到较高的早期成活率。RNA/DNA是评价鱼类早期发育阶段生长率的有效指标,也可用于评价仔稚鱼的生长潜力、营养状况、饲料营养水平以及确定关键期。研究仔稚鱼消化酶的发生和演变有助于深入了解鱼类在个体发育早期的消化生理,有助于选择适口饵料和制定投喂策略。因此,本文综述了鱼类早期发育阶段的异速生长模式、核酸及蛋白含量变化规律以及消化酶的发生和变化,为鱼类早期阶段健康养殖的发展提供依据。

关键词：早期阶段异速生长核酸消化酶演变