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重组人乳头瘤病毒58型L1蛋白在Sf9细胞中的表达条件优化

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国际生物制品学杂志 2010年第3期33卷 128-133页

作者：于世荣孙丽媛刘君丁军颖李军张夕燕张振龙北京生物制品研究所中试一室 100024

目的采用昆虫细胞-杆状病毒表达系统扩增人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）58型L1蛋白基因,确定L1蛋白表达的最佳条件.方法取处于埘数生长期的S19细胞以不同的感染复数（MOI）值扩增病毒,用噬斑试验检测病毒滴度,确定扩增重... 详细信息

目的采用昆虫细胞-杆状病毒表达系统扩增人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）58型L1蛋白基因,确定L1蛋白表达的最佳条件.方法取处于埘数生长期的S19细胞以不同的感染复数（MOI）值扩增病毒,用噬斑试验检测病毒滴度,确定扩增重组病毒的最适条件用间接免疫荧光法判断目的蛋白表达情况通过蛋白印迹法测定不同的表达时间和MOI值条件下目的蛋白表达量,确定目的蛋白的最佳表达条件.结果处于对数生长期的细胞以MOI值为0.5表达48 h条件下扩增含HPV58 LI基因的重组杆状病毒,滴度最高,可达5×108pfu/ml 以MOI值为5.0表达72 h获得最佳的目的蛋白表达量.结论确定了扩增病毒和表达相应目的蛋白的最佳条件.

关键词：人乳头瘤病毒基因表达重组蛋白质类

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人乳头瘤病毒预防性疫苗临床研究进展

国际生物制品学杂志 2010年第4期33卷 176-179页

作者：于世荣(综述) 张振龙(审校) 北京生物制品研究所中试一室 100024

人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）持续感染是妇女发生宫颈癌的重要原因之一.目前已鉴定出100多个HPV基因型,它们可分为高危型和低危型两类.在亚洲地区,HPV 16、18、58型与宫颈癌关系最密切.目前已上市的HPV预防性疫苗有Cervari... 详细信息

人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）持续感染是妇女发生宫颈癌的重要原因之一.目前已鉴定出100多个HPV基因型,它们可分为高危型和低危型两类.在亚洲地区,HPV 16、18、58型与宫颈癌关系最密切.目前已上市的HPV预防性疫苗有Cervarix^TM和Gardasil疫苗.此文对HPV的基因结构和功能以及已上市的预防性疫苗的安全性和免疫原性做一系统阐述.

关键词：乳头瘤病毒疫苗安全性免疫原性

重组脑膜炎球菌P64K蛋白的表达、纯化及载体作用

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国际生物制品学杂志 2010年第2期33卷 61-65页

作者：谷春霞张振龙北京生物制品研究所中试一室 100024

目的表达并纯化重组脑膜炎球菌P64K蛋白，观察其载体作用。方法利用基因工程技术在大肠杆菌中表达P64K蛋白，用硫酸铵盐析沉淀和两步层析纯化P64K蛋白。以重组P64K蛋白为载体蛋白，以已二酰肼为连接剂，在碳化二亚胺的作用下，将P64K蛋... 详细信息

目的表达并纯化重组脑膜炎球菌P64K蛋白，观察其载体作用。方法利用基因工程技术在大肠杆菌中表达P64K蛋白，用硫酸铵盐析沉淀和两步层析纯化P64K蛋白。以重组P64K蛋白为载体蛋白，以已二酰肼为连接剂，在碳化二亚胺的作用下，将P64K蛋白与活化的A群脑膜炎球菌多糖（group A meningococcal polysaccharide, GAMP）结合，制备GAMP-P64K结合物。免疫BALB／c小鼠，间接ELISA法测定血清特异性抗P64K蛋白和GAMPIgG抗体，分析P64K蛋白的免疫原性。结果重组P64K蛋白在大肠杆菌中主要以可溶性形式表达，表达量约占菌体总蛋白的35％。动物实验证明，重组P64K蛋白具有较强的免疫原性，表明P64K蛋白具有载体蛋白作用。结论在大肠杆菌中成功表达了重组P64K蛋白，以重组P64K蛋白为载体制备的GAMP—P64K结合物具有良好的免疫原性。这为以重组P64K蛋白为蛋白载体制备其他结合疫苗奠定了实验基础。

关键词：细菌外膜蛋白质类载体蛋白类疫苗结合奈瑟球菌脑膜炎血清A群 P64K 蛋白

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细菌性疫苗研究的新策略

中华微生物学和免疫学杂志 2009年第7期29卷 671-674页

作者：武振华许洪林北京生物制品研究所病毒一室 100024

目前人用细菌性疫苗主要包括灭活疫苗、减毒活疫苗、多糖疫苗、多糖蛋白结合疫苗、基因工程蛋白疫苗和类毒素等。蛋白保护性抗原在细菌的不同血清型／群间具有较好的保守性，更适合用作广谱细菌性疫苗的候选抗原。研制细菌性蛋白疫苗的... 详细信息

目前人用细菌性疫苗主要包括灭活疫苗、减毒活疫苗、多糖疫苗、多糖蛋白结合疫苗、基因工程蛋白疫苗和类毒素等。蛋白保护性抗原在细菌的不同血清型／群间具有较好的保守性，更适合用作广谱细菌性疫苗的候选抗原。研制细菌性蛋白疫苗的一个重要前提是筛选获得具有应用前景的细菌蛋白保护性抗原。

关键词：细菌性疫苗多糖蛋白结合疫苗保护性抗原蛋白疫苗减毒活疫苗灭活疫苗多糖疫苗基因工程

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不可分型流感嗜血杆菌蛋白D研究进展

国际生物制品学杂志 2010年第4期33卷 205-208页

作者：陈祥鹏(综述) 王健(综述) 张振龙(审校) 北京生物制品研究所中试一室 100024

流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae,Hi）蛋白D（Protein D,PD）是高度保守的表面脂蛋白,相对分子质量42 000,存在于所有的可分型Hi和不可分型Hi（nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi）中,是一种具有甘油磷酸二酯酶活性的细菌... 详细信息

流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae,Hi）蛋白D（Protein D,PD）是高度保守的表面脂蛋白,相对分子质量42 000,存在于所有的可分型Hi和不可分型Hi（nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi）中,是一种具有甘油磷酸二酯酶活性的细菌毒力因子,能导致宿主上皮细胞释放磷酸胆碱,在Hi引起呼吸道感染过程中起重要作用.以NTHi PD作为载体蛋白的肺炎链球菌多糖结合疫苗,不但能预防肺炎链球菌性耳炎,而且对NTHi引起的急性中耳炎也具有预防作用.PD是迄今为止第一种能在人类机体中诱导保护性应答的NTHi抗原,也是最具潜力的多糖结合疫苗候选载体蛋白.

关键词：嗜血菌,流感载体蛋白质类抗原蛋白D

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载体蛋白研究进展

国际生物制品学杂志 2009年第3期32卷 146-149页

作者：谷春霞(综述) 张振龙(综述) 北京生物制品研究所中试一室 100024

现代生物技术的飞速发展，使传统的疫苗生产方式发生了根本的变化。疫苗研究领域变得异常活跃，从而使新型载体蛋白不断被发现，其作用机制得到全面研究。寻找安全、有效的载体蛋白是目前疫苗领域的课题之一。近年来的初步研究结果为载... 详细信息

现代生物技术的飞速发展，使传统的疫苗生产方式发生了根本的变化。疫苗研究领域变得异常活跃，从而使新型载体蛋白不断被发现，其作用机制得到全面研究。寻找安全、有效的载体蛋白是目前疫苗领域的课题之一。近年来的初步研究结果为载体蛋白的应用展现了广阔的前景。此文阐述了载体蛋白的作用机制和几种常用的载体蛋白。

关键词：载体蛋白类疫苗结合细菌外膜蛋白类 HSP70热休克蛋白类

155位Cys突变成Ser对IFN-ε纯化结果的影响

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国际生物制品学杂志 2008年第3期31卷 101-103页

作者：李莉莉刘君张振龙北京生物制品研究所中试一室

目的比较重组人干扰素ε（recombinant human interferon-ε,rhIFN-ε）Cys;和 rhIFN-εSer;两种蛋白质的回收率和抗病毒活性,以研究155位 Cys 突变成 Ser 对 IFN—ε纯化和生物学活性的影响。方法对 rhIFN-ε Cys;和 rhIFN-εSer（155... 详细信息

目的比较重组人干扰素ε（recombinant human interferon-ε,rhIFN-ε）Cys;和 rhIFN-εSer;两种蛋白质的回收率和抗病毒活性,以研究155位 Cys 突变成 Ser 对 IFN—ε纯化和生物学活性的影响。方法对 rhIFN-ε Cys;和 rhIFN-εSer（155）两种蛋白质分别进行纯化和抗病毒活性鉴定,并进行数据比对。结果得到 rhIFN-εCys（155）和 rhIFN-εSer（155）两种活性蛋白,回收率分别为15.41%和29.18%,抗病毒活性分别为（1.293±0.268）×10;IU/mg 和（1.026±0.172）×10;IU/mg。结论两种蛋白质相比,突变样品回收率明显高于未突变样品,但氨基酸突变对 rhIFN-ε的抗病毒活性没有明显影响。

关键词：干扰素类突变分离和提纯活性

IL-17与炎性反应的关系及其重要的抗感染作用

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国际生物制品学杂志 2009年第4期32卷 201-204页

作者：晁华(综述) 丁军颖(审校) 北京生物制品研究所中试一室 100024

白细胞介素17（interleukin-17，IL-17）是促炎细胞因子，通过诱导细胞因子和趋化因子使粒细胞分化和迁移。IL一17还参与抗感染的保护性免疫，并通过调节细胞介导的免疫应答或诱导抗微生物肽来参与宿主防御。

关键词：白细胞介素17 炎症细胞因子类

不可分型流感嗜血杆菌的特性及抗原筛选研究进展

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国际生物制品学杂志 2009年第3期32卷 142-145页

作者：陈祥鹏(综述) 王健(综述) 张振龙(综述) 北京生物制品研究所中试一室 100024

不可分型流感嗜血杆菌（nontypeable Haemophilus influenzae，NTHi）是一类没有荚膜的革兰阴性球杆菌，常寄居于人类上呼吸道，是重要的机会致病菌，能引起人类中耳炎、肺炎及反复发作的呼吸道感染等。目前还没有一种预防这种病原菌感... 详细信息

不可分型流感嗜血杆菌（nontypeable Haemophilus influenzae，NTHi）是一类没有荚膜的革兰阴性球杆菌，常寄居于人类上呼吸道，是重要的机会致病菌，能引起人类中耳炎、肺炎及反复发作的呼吸道感染等。目前还没有一种预防这种病原菌感染的疫苗，随着近几年抗生素的滥用，细菌的耐药性问题越发突出，这就使开发一种安全有效的疫苗显得尤为重要。此文对NTHi的致病性、菌株特点及其抗原筛选的研究进展作一概述。

关键词：嗜血菌,流感细菌外膜蛋白类抗原脂多糖类