重组脑膜炎球菌P64K蛋白的表达、纯化及载体作用

作     者：谷春霞 张振龙 GU Chun-xia;ZHANG Zhen-long

作者机构：北京生物制品研究所中试一室100024 

出 版 物：《国际生物制品学杂志》 (International Journal of Biologicals)

年 卷 期：2010年第33卷第2期

页      面：61-65页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主　　题：细菌外膜蛋白质类 载体蛋白类 疫苗 结合 奈瑟球菌 脑膜炎 血清A群 P64K 蛋白 

摘      要：目的表达并纯化重组脑膜炎球菌P64K蛋白，观察其载体作用。方法利用基因工程技术在大肠杆菌中表达P64K蛋白，用硫酸铵盐析沉淀和两步层析纯化P64K蛋白。以重组P64K蛋白为载体蛋白，以已二酰肼为连接剂，在碳化二亚胺的作用下，将P64K蛋白与活化的A群脑膜炎球菌多糖（group A meningococcal polysaccharide, GAMP）结合，制备GAMP-P64K结合物。免疫BALB／c小鼠，间接ELISA法测定血清特异性抗P64K蛋白和GAMPIgG抗体，分析P64K蛋白的免疫原性。结果重组P64K蛋白在大肠杆菌中主要以可溶性形式表达，表达量约占菌体总蛋白的35％。动物实验证明，重组P64K蛋白具有较强的免疫原性，表明P64K蛋白具有载体蛋白作用。结论在大肠杆菌中成功表达了重组P64K蛋白，以重组P64K蛋白为载体制备的GAMP—P64K结合物具有良好的免疫原性。这为以重组P64K蛋白为蛋白载体制备其他结合疫苗奠定了实验基础。