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磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯对人肾小管上皮细胞HKC的毒性效应及凋亡机制研究

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毒理学杂志 2023年第2期37卷 93-98,107页

作者：丰一兴杨奕李明施嘉琛邵兵北京市疾病预防控制中心食物中毒诊断溯源技术北京市重点实验室北京100013

目的探讨磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯[tris(1,3-dichloro-2-propyl) phosphate, TDCPP]对人肾小管上皮细胞(human renal tubular epithelial cells, HKC)的凋亡作用,并基于线粒体凋亡途径探讨其效应机制。方法选取HKC作为受试细胞,经TDCPP(0、25、50、75和100μmol/L)染毒48 h后,利用CCK-8方法检测HKC的细胞存活率,通过高内涵成像系统观察细胞形态,采用基于细胞成像的多参数分析技术,检测TDCPP对线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP)、细胞凋亡及线粒体凋亡途径相关蛋白表达量的影响。结果随着TDCPP暴露浓度的增加,HKC存活率明显降低(F=54.671;P<0.05)。TDCPP浓度高于75μmol/L时,细胞形态发生明显改变,MMP明显降低(F=24.923;P<0.05),细胞凋亡率增加(F=29.303;P<0.01),线粒体凋亡途径相关蛋白,包括Bcl-2相关X蛋白(B_(ax))、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞色素c和活化的半胱氨酸蛋白酶(cleaved Caspase-3)的表达量以及B_(ax)/Bcl-2的比值均明显增加(F_(B_(ax))=21.152,PB_(ax)<0.01;FBcl-2=118.788,PBcl-2<0.05;F细胞色素c=40.576,P细胞色素c<0.01;F_(caspase-3)=70.067,P_(caspase-3)<0.01;F_(B_(ax))/Bcl-2=12.192,P_(B_(ax)/Bcl-2)<0.01;)。结论 TDCPP可引起HKC线粒体受损,MMP下降,细胞凋亡率增加,线粒体凋亡途径在TDCPP引起的肾细胞凋亡中起到一定的调控作用。

关键词：磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯人肾细胞细胞凋亡线粒体凋亡途径

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药食同源物质蜂蜜急性毒性和致突变性研究

毒理学杂志 2023年第2期37卷 115-120页

作者：聂燕敏张维李子南谭壮生张文静齐丽娟郑珊张鹏魏洪鑫郝丽丽高珊北京市疾病预防控制中心食物中毒诊断溯源技术北京市重点实验室北京100013

目的通过体内、体外及模式生物等方法,初步研究蜂蜜的急性毒性和潜在的致突变性。方法采用小鼠霍恩氏法、CCK-8(细胞计数试剂)法和秀丽隐杆线虫3种模式,对蜂蜜进行急性毒性研究。通过组合实验(哺乳动物红细胞微核试验、体外哺乳类细... 详细信息

目的通过体内、体外及模式生物等方法,初步研究蜂蜜的急性毒性和潜在的致突变性。方法采用小鼠霍恩氏法、CCK-8(细胞计数试剂)法和秀丽隐杆线虫3种模式,对蜂蜜进行急性毒性研究。通过组合实验(哺乳动物红细胞微核试验、体外哺乳类细胞TK基因突变试验和细菌回复突变试验)研究蜂蜜的致突变性。结果蜂蜜小鼠急性经口毒性半数致死剂量LD_(50)及95%可信区间为雌性小鼠LD_(50)92.6 g/kg·bw(63.6~135.0 g/kg·bw);雄性小鼠LD_(50)92.6 g/kg·bw(57.0~150.0 g/kg·bw);蜂蜜人肾上皮细胞系293(HEK293)细胞急性毒性半数致死浓度LC50为464.2 g/L;秀丽隐杆线虫急性半数致死浓度LC50为176.9 g/L。7.5、15.0和30.0 g/kg·bw蜂蜜剂量组的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率与阴性对照组相比,差异均无统计学意义(χ^(2)=0.22,χ^(2)=0.00,χ^(2)=0.39,χ^(2)=0.18,χ^(2)=0.00,χ^(2)=0.00,P>0.05);1.25、2.50和5.00 mg/ml蜂蜜处理小鼠淋巴瘤细胞(L5178Y)总突变频率(T-MF值)与阴性对照组相比未见明显增加,增加倍数均在1倍以内;在加与不加S9混合液的条件下,8、40、200、1 000和5 000μg/皿5个浓度组的5种菌株(TA97a、TA98、TA100、TA102和TA1535)的回复突变菌落数与自发回复突变菌落数相近,致变比(MR值)均小于2。结论依据食品安全国家标准,蜂蜜急性毒性分级判定为实际无毒;哺乳动物红细胞微核试验、体外哺乳类细胞TK基因突变试验和细菌回复突变试验均为阴性;应用体外细胞及秀丽隐杆线虫,初步得到急性毒性参考值;在本实验条件下,药食同源物质蜂蜜未见明显的急性毒性及致突变性。

关键词：药食同源蜂蜜急性毒性致突变性

毛细管电泳技术在疾病预防控制领域的应用、发展与挑战

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色谱 2020年第9期38卷 999-1012页

作者：林长缨丁晓静北京市疾病预防控制中心食物中毒溯源技术北京市重点实验室北京市预防医学研究中心北京100013

自1989年出现商品化的仪器以来,毛细管电泳(CE)技术在多个应用领域都取得了长足的进步与发展,重复性和准确性方面也有很大提升。能力验证样品分析的满意结果也显示了CE具备法规要求的准确定量能力。在疾病预防控制领域(简称“疾控”)CE... 详细信息

自1989年出现商品化的仪器以来,毛细管电泳(CE)技术在多个应用领域都取得了长足的进步与发展,重复性和准确性方面也有很大提升。能力验证样品分析的满意结果也显示了CE具备法规要求的准确定量能力。在疾病预防控制领域(简称“疾控”)CE也展现出很多独具特色的应用,成为不可或缺的技术之一。在聚合酶链式反应产物分析、核酸序列测定、DNA变异和分型分析、食源性致病微生物分析及疫苗分析等工作中CE发挥了重要作用。应对突发疫情或公共卫生事件如食物中毒时,除了通过非靶标分析尽快锁定目标物外,还需要对大量样品做出快速而准确的分析,高通量和高灵敏的CE就十分适合解决这一问题。在公共卫生理化检验以确保食品、保健食品、特殊医学用途食品、化妆品和消毒产品等的安全中,CE也发挥了不可或缺的作用。作为一种使用较少危险化学品的环境友好方法,在需要按照标准或规范进行的疾控实验室常规检测中,CE仍受制于标准方法的缺失,未能发挥其应有的作用。但简单、快速、经济、耐用、高效的CE分离一旦与高灵敏通用检测器联用,必将更加从容地应对疾控领域中的各种挑战,发挥更大的作用。本文综述了2010~2019年CE在疾控领域的应用,分析了CE在疾控领域发展的机遇和挑战,对CE在疾控领域的发展前景进行了展望。

关键词：毛细管电泳核酸病原微生物疫苗疾病预防控制能力验证食物中毒应急分析

常用食品添加剂脱氢乙酸钠的急性毒性效应研究

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毒理学杂志 2022年第4期36卷 292-296,303页

作者：杜宏举谭壮生张楠高珊敬海明张鹏李国君北京市疾病预防控制中心北京市食物中毒诊断溯源技术重点试验室北京100013 首都医科大学公共卫生学院北京100069

目的采用体内和体外试验,研究常用食品添加剂脱氢乙酸钠(DHA-S)的急性毒性效应。方法(1)昆明种小鼠单次经口灌胃4640、2150、1000和464 mg/kg·bw剂量的DHA-S,观察中毒症状和死亡情况,确定半数致死量(LD_(50))。(2)秀丽隐杆线虫(野生型N... 详细信息

目的采用体内和体外试验,研究常用食品添加剂脱氢乙酸钠(DHA-S)的急性毒性效应。方法(1)昆明种小鼠单次经口灌胃4640、2150、1000和464 mg/kg·bw剂量的DHA-S,观察中毒症状和死亡情况,确定半数致死量(LD_(50))。(2)秀丽隐杆线虫(野生型N2)L4期幼虫,分别用0~100 mg/ml DHA-S染毒24 h,计数各剂量组线虫死亡率(%)。(3)体外培养的中国仓鼠肺细胞(CHL),分别用0~5.0 mg/ml DHA-S染毒24 h,计算各剂量组细胞相对增殖率(%)。结果(1)雌性、雄性小鼠急性经口LD_(50)分别为1470和2000 mg/kg·bw,均属低毒级。(2)线虫的LC_(50)为1.53 mg/ml时,具有毒性。(3)细胞LC_(50)为1.78 mg/ml,毒性分级为3级,属中等毒性。结论不同剂量DHA-S急性染毒可对试验动物、模式生物及哺乳动物细胞产生明显的毒性效应。

关键词：脱氢乙酸钠急性毒性食品添加剂防腐剂

C57小鼠与C57-ras转基因小鼠模型杂交1代及其同窝阴性鼠的主要生物学特征比较

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毒理学杂志 2023年第5期37卷 403-408页

作者：刘晶晶张楠李红冯颖敬海明北京市疾病预防控制中心北京市食物中毒诊断溯源技术重点实验室北京100013

目的应用人源性ras转基因小鼠进行26周短期致癌试验前,需要做1个4周剂量探索试验,可选的实验动物有ras转基因小鼠CB6F1(+)、同窝阴性鼠CB6F1(-)以及具有相同遗传背景的C57小鼠,本研究旨在比较3种小鼠特定阶段的主要生物学特征。方法选用... 详细信息

目的应用人源性ras转基因小鼠进行26周短期致癌试验前,需要做1个4周剂量探索试验,可选的实验动物有ras转基因小鼠CB6F1(+)、同窝阴性鼠CB6F1(-)以及具有相同遗传背景的C57小鼠,本研究旨在比较3种小鼠特定阶段的主要生物学特征。方法选用5~6周龄的3种实验小鼠各20只,雌雄各半,比较4周内体重、摄食量与食物利用率的变化,以及检测4周末血常规及血清生化指标等。结果与相应性别的CB6F1(+)小鼠相比,雌性CB6F1(-)小鼠的WBC、RBC、HGB、ALB、TP和CHOL较高,以上差异均有统计学意义(F=7.283、4.349、6.081、91.577、21.670和11.673,P食物利用率较低,差异具有统计学意义(F=15.662,P食物利用率与HCT、PLT、NEUT%、GLU、CREA较低,以上差异均有统计学意义(F=2.512、24.573、10.995、5.931、8.926、4.628、39.916和6.311,P食物利用率与PLT、NEUT%、GLU较低,以上差异均有统计学意义(F=16.546、109.173、18.724、7.694、23.728和24.680,P实验动物,而应用C57小鼠时需适当地考虑种属差异。

关键词： C57-ras转基因小鼠 C57小鼠生物学特征

三重串联四极杆电感耦合等离子体质谱法测定植源性中药材中总硫含量

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光谱学与光谱分析 2016年第2期36卷 527-531页

作者：王晓伟刘景富关红王小艳邵兵张晶刘丽萍张妮娜北京市疾病预防控制中心与北京市预防医学研究中心食物中毒诊断溯源技术北京市重点实验室北京100013 中国科学院生态环境研究中心环境化学与生态毒理学国家重点实验室北京100085 北京市顺义区疾病预防控制中心北京101300

针对日益严重的植源性中药材中二氧化硫(SO_2)浓度超标问题,研究基于最新的三重串联四极杆电感耦合等离子体质谱(ICP-MS/MS)技术建立了一种快捷、准确的二氧化硫检测方法。该方法可以有效地降低背景中多原子离子的干扰,提高检测灵敏度... 详细信息

针对日益严重的植源性中药材中二氧化硫(SO_2)浓度超标问题,研究基于最新的三重串联四极杆电感耦合等离子体质谱(ICP-MS/MS)技术建立了一种快捷、准确的二氧化硫检测方法。该方法可以有效地降低背景中多原子离子的干扰,提高检测灵敏度与标准曲线的线性范围。使用氧气作为反应气,对^(32)S^(16) O_4^(2-)和^(34)S^(16) O_4^(2-)的检出限分别为5.48和9.76μg·L^(-1),线性范围0.02~100mg·L^(-1)(r>0.999)。0.5g中药样品加入6mL硝酸和2mL双氧水,使用微波消解方式对样品进行消解。选用柑橘叶标准参考物质对方法的可靠性进行考察,样品平行处理测定6次后所得浓度值在标准值范围内。结果表明,本方法可以实现中草药中SO_2浓度的准确测定,样品处理过程以及样品中背景元素不会对定量结果的准确性产生干扰。

关键词：三重串联四极杆电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS/MS) 中草药二氧化硫微波消解硫磺熏蒸

2014—2018年北京市人源性肠致病性大肠埃希菌耐药特征及分子特征研究

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中国食品卫生杂志 2019年第4期31卷 371-374页

作者：王丽丽张寻陈倩北京市疾病预防控制中心食物中毒诊断溯源技术北京市重点实验室北京100013 北京市预防医学研究中心北京100013

目的了解北京市门诊腹泻病例肠致病性大肠埃希菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)分离株抗生素敏感性情况及分子分型特征。方法采用微量肉汤稀释法对2014—2018年北京市门诊腹泻病例EPEC分离株进行8类14种抗生素敏感性检测。参... 详细信息

目的了解北京市门诊腹泻病例肠致病性大肠埃希菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)分离株抗生素敏感性情况及分子分型特征。方法采用微量肉汤稀释法对2014—2018年北京市门诊腹泻病例EPEC分离株进行8类14种抗生素敏感性检测。参照PulseNet中非O157大肠埃希菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法,对不同区县不同采样时间分离的菌株采用随机抽样原则,对140株菌基因组经限制性内切酶XbaⅠ酶切后进行分子分型和聚类分析。结果2014—2018年北京市门诊腹泻病例EPEC分离株总耐药率为84.8%(391/461),氨苄西林、四环素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐药率较高,分别为66.4%(294/443)、54.0%(249/461)、45.6%(210/461)。461株菌分为200种耐药谱,耐3类及3类以上抗生素的菌株数达249株(54.0%),有1株菌对7类12种抗生素耐药。常见耐药谱为萘啶酸耐药,占4.3%(20/461)。环丙沙星、萘啶酸、四环素、亚胺培南耐药率和耐药谱种类呈逐年缓慢上升趋势。其中140株菌共产生136种PFGE带型,带型分布较为分散,无优势带型,菌株之间的相似系数为53.3%~100.0%。结论2014—2018年北京市腹泻病例EPEC耐药情况严重,耐药谱复杂广泛,多重耐药菌株及耐药谱种类呈逐年增多趋势。菌株的基因型呈多态性分布。

关键词：患者肠致病性大肠埃希菌耐药性脉冲场凝胶电泳分子分型

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比格犬致命鹅膏急性肝毒性实验研究

中华急诊医学杂志 2016年第12期25卷 1263-1268页

作者：孙健张宏顺牛宇敏张驭涛李海蛟周静马沛滨孙承业中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所中毒控制室北京100050 北京市疾病预防控制中心北京市预防医学研究中心食物中毒诊断溯源技术北京市重点实验室北京100013

目的建立比格犬致命鹅膏（Amanita exitialis）急性肝毒性模型，探讨含鹅膏肽类毒素蘑菇急性中毒性肝功能衰竭的特点，以期为含鹅膏肽类毒素的蘑菇中毒实验研究提供帮助。方法UPLC-MS／MS（超高效液相色谱串联质谱）法测定致命鹅膏干粉... 详细信息

目的建立比格犬致命鹅膏（Amanita exitialis）急性肝毒性模型，探讨含鹅膏肽类毒素蘑菇急性中毒性肝功能衰竭的特点，以期为含鹅膏肽类毒素的蘑菇中毒实验研究提供帮助。方法UPLC-MS／MS（超高效液相色谱串联质谱）法测定致命鹅膏干粉中鹅膏肽类毒素含量，胶囊喂饲比格犬60mg／kg体质量致命鹅膏干粉，观察其变化，通过检测凝血及肝肾功能、肝脏病理以及血浆和尿液中鹅膏肽类毒素含量，用于比格犬致命鹅膏急性肝毒性模型观测指标。结果本研究所用致命鹅膏干粉中鹅膏肽类毒素总含量为（3482．6±124．94）mg／kg。模型犬在12～48h出现呕吐、腹泻等症状，染毒后24h，模型犬ALT、AST、TBIL、ALP、PT和APTT水平出现明显升高，染毒后36h，ALT、AST、PT和Am水平达到峰值[（ALT（283．2±112．9），AST（223．9±93．8），PT（132．9±152．6）s，Am（131．4±153．9）s，染毒后48h，TBIL和ALP值达到峰值[（TBIL（23．3±14．6）μmol／L，ALP（274．5±115．5）U／L]，模型犬TBIL、TP和Am在染毒后1周恢复至正常水平，ALT、AST和ALP在染毒后3周恢复至正常水平。染毒后24～72h死亡3只，肝脏病理检查显示弥漫性肝细胞出血性坏死。染毒后24h内，血浆中可检测到鹅膏肽类毒素；染毒后96h内，尿液中可检测到鹅膏肽类毒素。结论鹅膏肽类毒素可引起肝细胞出血性坏死，导致急性肝功能衰竭，该模型符合含鹅膏肽类毒素蘑菇致中毒性肝功能衰竭临床病理生理特点，可应用于含鹅膏肽类毒素蘑菇中毒的诊断和治疗研究。

关键词：蘑菇中毒致命鹅膏鹅膏肽类毒素比格犬肝毒性肝细胞出血性坏死急性肝功能衰竭毒素检测模型

免疫亲和柱净化-高效液相色谱-串联质谱法测定母乳中的五氯苯酚

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食品安全质量检测学报 2023年第7期14卷 235-240页

作者：韩沐珂尹杰温凯邵兵首都医科大学公共卫生学院北京100069 北京市疾病预防控制中心食物中毒诊断溯源技术北京市重点实验室北京100013 中国农业大学动物医学院北京100000

目的构建复合免疫亲和柱净化,高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, HPLC-MS/MS)测定母乳中五氯苯酚残留的分析方法。方法母乳样品用5%三乙胺乙腈水(7:3, V/V)提取,经免疫亲和... 详细信息

目的构建复合免疫亲和柱净化,高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, HPLC-MS/MS)测定母乳中五氯苯酚残留的分析方法。方法母乳样品用5%三乙胺乙腈水(7:3, V/V)提取,经免疫亲和柱特异性净化,以含0.05%氟化铵的甲醇和含0.05%氟化铵的超纯水为流动相,梯度洗脱, ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱分离,多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式检测,内标法定量分析。结果五氯苯酚在0.02~20.00μg/L范围内呈现良好线性关系,相关系数达0.9998;在低、中、高3个不同加标浓度下,回收率在98.72%~106.95%之间,相对标准偏差小于6.09%,基质效应在94.45%~101.61%之间;方法的检出限为0.008μg/L,定量限为0.02μg/L。免疫亲和柱在该实验条件下至少可重复使用8次,降低87%以上的实验成本。结论本方法基于免疫亲和柱对样品进行特异性净化,重现性好、准确度高,能够有效地分离和检测母乳中的五氯苯酚残留,可应用于母乳样品中五氯苯酚的定性定量检测。

关键词：高效液相色谱-串联质谱法五氯苯酚免疫亲和柱母乳