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促癌基因SNORA72对结直肠癌细胞放射敏感性的作用研究

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国际放射医学核医学杂志 2024年第2期48卷 99-113页

作者：张文成邓佳荣刘鑫张宏王治东沈丽萍军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京市放射生物学重点实验室北京100850

目的探索核仁小RNA(snoRNA)SNORA72基因在不同癌症特别是结直肠癌(CRC)中的表达模式及其对CRC细胞的生长及放射敏感性的影响。方法应用开放的癌症数据库分析SNORA72在不同癌症组织和CRC组织中的表达水平。构建过表达或敲低SNORA72的CRC... 详细信息

目的探索核仁小RNA(snoRNA)SNORA72基因在不同癌症特别是结直肠癌(CRC)中的表达模式及其对CRC细胞的生长及放射敏感性的影响。方法应用开放的癌症数据库分析SNORA72在不同癌症组织和CRC组织中的表达水平。构建过表达或敲低SNORA72的CRC细胞株HT29,将HT29细胞株分为过表达SNORA72组(LV-SNORA72)及其阴性对照组(LV-NC)、敲低SNORA72表达组(ASO-SNORA72)及其阴性对照组(ASO-NC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HT29细胞中SNORA72表达情况。分别检测在体外过表达或敲低SNORA72后,对细胞增殖、细胞克隆形成、细胞凋亡、细胞周期的影响。对LV-SNORA72组及LV-NC组的HT29细胞进行不同剂量60Coγ射线照射,检测各组细胞的存活分数(SF)和凋亡率。采用转录组学分析法探讨SNORA72影响HT29细胞生长可能的作用机制。两组间的比较采用独立样本t检验。结果癌症数据库分析发现SNORA72在包括CRC在内的多种癌症组织中高表达,且差异均有统计学意义(均P学意义(t=16.570,P学意义(t=4.355,P细胞增殖检测结果显示,在实验的第3、4、5天,LV-SNORA72组的吸光度值明显高于LV-NC组[(0.79±0.05)对(0.51±0.09)、(1.78±0.04)对(1.22±0.05)、(3.30±0.05)对(2.19±0.06)],且差异均有统计学意义(t=8.582、16.400、31.200,均P学意义(t=3.957、6.147、8.471,均P细胞克隆形成实验结果显示,LV-SNORA72组的克隆形成率明显高于LV-NC组[(40.87±1.70)%对(26.60±0.40)%],且差异有统计学意义(t=14.140,P学意义(t=8.910,P细胞凋亡检测结果显示,LV-SNORA72组的细胞凋亡率明显低于LV-NC组[(1.89±0.16)%对(2.64±0.15)%],且差异有统计学意义(t=6.115,P细胞凋亡率明显高于ASO-NC组[(6.44±0.54)%对(3.92±0.37)%],且差异有统计学意义(t=6.644,P细胞克隆形成实验结果显示,在经1、2、4、6 Gyγ射线照射后,LV-SNORA72组细胞的SF均较LV-NC组增加[(0.89±0.05)对(0.81±0.03)、(0.64±0.10)对(0.47±0.01)、(0.16±0.04)对(0.09±0.01)、(0.04±0.01)对(0.02±0.01)],且差异均有统计学意义(t=4.063、8.802、4.045、2.937,均P细胞凋亡结果显示,在4 Gy照射后48 h和72 h,与LV-NC组相比,LV-SNORA72组细胞凋亡率明显降低[(8.14±0.12)%对(9.86±0.22)%、(11.26±0.52)%对(15.83±1.54)%],且差异均有统计学意义(t=3.470、9.208,均P细胞凋亡率明显降低[(13.29±0.17)%对(14.88±0.58)%、(19.82±0.56)%对(23.7±0.6)%],且差异均有统计学意义(t=3.201、7.819,均P<0.05);在12 Gy照射后48 h和72 h,与LV-

关键词： RNA 小核仁结直肠肿瘤辐射耐受性基因表达调控 SNORA72基因

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基于专利引文网络的输血领域主路径分析

中国新药杂志 2024年第18期33卷 1866-1874页

作者：张婷徐东紫杨潇逸严舒潘黎姿欧阳昭连中国医学科学院/北京协和医学院医学信息研究所/图书馆北京100020

目的:基于专利引文网络探索输血领域的主路径。方法:本研究通过构建输血领域的专利引文网络,采用搜索路径连接数算法(search path link count,SPLC)计算遍历权重,通过全局搜索与局部搜索2种方式,对输血领域的全局主路径、全局关键路径... 详细信息

目的:基于专利引文网络探索输血领域的主路径。方法:本研究通过构建输血领域的专利引文网络,采用搜索路径连接数算法(search path link count,SPLC)计算遍历权重,通过全局搜索与局部搜索2种方式,对输血领域的全局主路径、全局关键路径主路径、局部前向主路径、局部后向主路径及局部关键路径主路径进行分析,探索该领域的技术发展轨迹。结果:输血领域共有专利申请5176项,包含专利引文22099件;专利申请数量逐年增长,技术创新活跃,预计到2025和2030年专利申请数量将分别达到1735和3773项;技术创新聚焦于血液采集及输血装置、血液成分处理方法等方向;美国既是重要的技术输出国,也是重要的技术输入国;输血领域借鉴了血液疾病的相关科学基础研究,包括血液净化、造血干细胞、多能干细胞及造血微环境。输血领域的主路径分析显示,局部关键路径主路径与全局主路径一致,该路径上的专利数量最多,有9件,其中包含1条技术路线,与输血评估方法的技术发展路径有关;局部前向主路径、局部后向主路径与全局关键路径主路径一致,有7件专利,包含1条技术路线,与失血监测和估算方法的技术发展路径有关。结论:本研究通过对输血领域的主路径进行分析,识别技术发展轨迹,从情报学角度为输血研究提供信息支撑。

关键词：输血专利引文网络主路径分析搜索路径连接数全局搜索局部搜索

微量样本蛋白质组前处理流程的建立及衰老小鼠单个窦卵泡蛋白质组图谱的绘制

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中国药理学与毒理学杂志 2024年

作者：张新帅李红超付斌贺福初王晓文李杨军事科学院军事医学研究院医学蛋白质组全国重点实验室北京蛋白质组研究中心国家蛋白质科学中心(北京) 中国医学科学院蛋白质组学驱动的肿瘤精准医学创新单元

目的建立一种针对微量样本(1×104细胞)的蛋白质组前处理流程并用于衰老小鼠单个窦卵泡的蛋白质组图谱绘制。方法利用293T细胞系，通过对比不同的裂解液、酶切条件、超声处理方式等，建立针对1×104数量级细胞样本(约1μg数量级蛋白质... 详细信息

目的建立一种针对微量样本(1×104细胞)的蛋白质组前处理流程并用于衰老小鼠单个窦卵泡的蛋白质组图谱绘制。方法利用293T细胞系，通过对比不同的裂解液、酶切条件、超声处理方式等，建立针对1×104数量级细胞样本(约1μg数量级蛋白质)的蛋白质组前处理流程。通过与商业化的样本前处理试剂盒(iST试剂盒、Ex极微量试剂盒)进行对比，从蛋白质和肽段鉴定重叠性、蛋白质整体亲/疏水性、蛋白质理论等电点以及蛋白质分子质量4方面对本研究所建立的样本前处理流程进行评估。以100,1000和10 000 3种数量级小鼠原代脾和肝细胞样本对样本前处理流程的样本适用性进行评估。基于该样本前处理流程，结合timsTOF Pro 2超灵敏质谱仪，绘制青年(2月龄)、中年(12月龄)和老年(22月龄)小鼠的单个窦卵泡的蛋白质组图谱。通过差异表达蛋白质分析与蛋白质表达时间序列分析，寻找与年龄因素显著相关的蛋白质，解析窦卵泡的衰老图谱。结果本研究建立了一套针对1×104数量级细胞样本的蛋白质组学前处理流程，该流程仅需一步操作完成裂解和还原烷基化，酶切过程无需超声。即对于1×104数量级细胞样本，将裂解液中的脱氧胆酸钠浓度由1%提升至10%，可以使蛋白质平均鉴定种类从4089种增加到4389种，具有更佳的裂解效果(P细胞数量增加，鉴定的蛋白质种类显著增加(100、1000和10000个细胞样本中，小鼠脾原代细胞分别鉴定到蛋白质525、1650和3210种，小鼠肝原代细胞分别鉴定到蛋白质366、1160和3590种，P研究通过主成分分析发现，不同年龄阶段的窦卵泡在蛋白质表达状态上表现出明显差异，证实了年龄是影响卵泡生理状态的关键因素。此外，在衰老小鼠的卵泡中，发现与染色体分离相关的蛋白显著下调(P研究共识别出739种与年龄显著相关的蛋白质，其中378种正相关，361种负相关。结论本研究为微量样本提供了一种低成本、易操作、高通量、高灵敏度的蛋白质组样本前处理流程；构建了不同年龄阶段小鼠单个窦卵泡的蛋白质组动态变化图谱，为卵泡衰老基础研究提供了高质量的数据资源，为探索卵巢衰老的潜在治疗靶标和促进生殖力提升的药物开发提供了新的研究思路。

关键词：蛋白质组学样本前处理流程卵巢衰老窦卵泡

POLQ基因敲除293T细胞系的构建及其在外源基因定点整合中的应用

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中国生物工程杂志 2024年第5期44卷 40-55页

作者：王瑶姜志洋蔡军雨樊榕榕贾姗姗冯健男石艳春王晶郑源强内蒙古医科大学内蒙古自治区分子生物学重点实验室呼和浩特010058 军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所国家安全特需药品全国重点实验室北京100850

目的:利用CRISPR/Cas9技术构建POLQ基因敲除293T细胞系,并探讨该敲除细胞系在外源基因定点整合方面的应用。方法:构建靶向POLQ基因的pX330-sgRNA打靶载体,通过T7EI酶切验证,选取打靶效率最高的载体,转染293T细胞;利用流式细胞分选术、... 详细信息

目的:利用CRISPR/Cas9技术构建POLQ基因敲除293T细胞系,并探讨该敲除细胞系在外源基因定点整合方面的应用。方法:构建靶向POLQ基因的pX330-sgRNA打靶载体,通过T7EI酶切验证,选取打靶效率最高的载体,转染293T细胞;利用流式细胞分选术、稳定单细胞克隆培养、TA克隆测序及蛋白质印迹等方法验证POLQ敲除情况;利用靶向AAVS1和FBL位点的含GFP/mCherry报告基因同源打靶载体,评估敲除的293T POLQ-/-细胞系在外源基因定点整合效率的变化,并通过测序方式验证供体报告载体是否定点整合到基因组中;最后分析POLQ敲除对293T细胞增殖和存活率的影响。结果:成功在293T细胞中稳定敲除POLQ基因;通过报告基因实验验证,敲除细胞系中外源基因定点整合效率平均提高2~7倍,且敲除POLQ基因对293T细胞系增殖和存活率没有明显影响。结论:成功利用CRISPR/Cas9技术构建具有高效定点整合能力的POLQ基因稳定敲除293T细胞系,为进一步利用该细胞系高效制备稳定整合外源基因(包括抗体基因)工程化细胞系奠定基础。

关键词： CRISPR/Cas9 POLQ 293T细胞基因敲除定点整合

杜氏高生熊虫HdNINJ1基因的克隆鉴定及抗辐射功能研究

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基因组学与应用生物学 2024年第4期43卷 616-626页

作者：葛正平李磊张令强青岛大学基础医学院免疫学系青岛266071 军事科学院军事医学研究院北京102206

缓步动物(Tardigrades),俗称“熊虫”,是一类可以耐受超强辐射的小型无脊椎动物,但是目前对其抗辐射机制的认识仍十分匮乏。本研究旨在寻找潜在抗辐射基因,为研究缓步动物耐辐射提供新的认识。本研究在杜氏高生熊虫(Hypsibius dujardini... 详细信息

缓步动物(Tardigrades),俗称“熊虫”,是一类可以耐受超强辐射的小型无脊椎动物,但是目前对其抗辐射机制的认识仍十分匮乏。本研究旨在寻找潜在抗辐射基因,为研究缓步动物耐辐射提供新的认识。本研究在杜氏高生熊虫(Hypsibius dujardini)中发现了人类神经损伤诱导蛋白(nerve injury-induced protein,Ninjurin)同源的新基因,命名为HdNINJ1。本研究以杜氏高生熊虫cDNA为模板,采用PCR技术克隆得到HdNINJ1基因的编码区(coding sequence,CDS)序列,利用生物信息学方法分析其序列特征,并通过克隆形成实验、碱性彗星试验以及免疫荧光实验鉴定了该蛋白的抗辐射功能。结果显示,HdNINJ1基因CDS全长675 bp,编码224个氨基酸,包含1个Ninjurin结构域。细胞增殖实验结果表明,表达HdNINJ1基因的人U2OS细胞受4 Gy X射线辐照后其细胞存活率与对照组相比增加了50.9%;彗星试验和免疫荧光实验结果表明表达HdNINJ1基因的人U2OS细胞在分别受10 Gy和2 Gy X射线辐照后其DNA损伤分别减少了21.0%和22.9%,且结果具有统计学意义。研究结果表明,HdNINJ1可以促进人U2OS细胞的DNA损伤修复并提高其辐射耐受性。

关键词：杜氏高生熊虫 HdNINJ1基因生物信息学分析抗辐射

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参附配伍对心肌细胞减毒增效作用

中国药物警戒 2024年第6期21卷 601-605页

作者：李鸿昌葛运炫王宁宁周维王宇光马增春高月海军青岛特勤疗养中心山东青岛266071 军事医学研究院辐射医学研究所北京100850

通过从化学基础、药代动力学、药物代谢、成分间相互作用、生物学机制等方面进行叙述,揭示了参附方配伍的科学内涵。基于用药剂量和分子作用途径发现了参附方的“量-毒-时-效”关系,药效作用主要通过能量代谢途径实现,毒性作用主要是钙... 详细信息

通过从化学基础、药代动力学、药物代谢、成分间相互作用、生物学机制等方面进行叙述,揭示了参附方配伍的科学内涵。基于用药剂量和分子作用途径发现了参附方的“量-毒-时-效”关系,药效作用主要通过能量代谢途径实现,毒性作用主要是钙超载。分析乌头碱毒效转换窗口,利用基于生理的药代动力学与反向剂量学预测药物组分在体内的毒性阈值,预测中药早期毒性剂量、药物代谢酶和转运体对药物体内过程影响以及药物相互作用等。参附配伍通过药代机制降低乌头碱的浓度,通过毒理机制对抗毒性靶点,起到“七情和合”中的相畏相杀作用。研究初步阐明了参附配伍减毒增效的科学内涵,发展和完善了“七情和合”配伍理论。

关键词：参附配伍减毒增效乌头碱心肌细胞药物代谢酶七情和合

寨卡病毒E蛋白和NS1蛋白关键氨基酸突变可促进病毒在小鼠睾丸中的复制

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科学通报 2024年第19期69卷 2827-2834页

作者：李凯闫秀丽贺梦娇娄雅楠黄星耀孙梦许李晓峰军事科学院军事医学研究院病原微生物生物安全全国重点实验室北京100071 安徽医科大学基础医学院合肥230032

寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是一种蚊媒黄病毒,也可通过性传播,同时还能感染睾丸组织并导致损伤.探究寨卡病毒在睾丸内持续复制过程中病毒基因的变化规律,发现潜在的睾丸适应性突变位点,可为寨卡病毒变异的风险评估提供重要参考.为此,本... 详细信息

寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是一种蚊媒黄病毒,也可通过性传播,同时还能感染睾丸组织并导致损伤.探究寨卡病毒在睾丸内持续复制过程中病毒基因的变化规律,发现潜在的睾丸适应性突变位点,可为寨卡病毒变异的风险评估提供重要参考.为此,本研究以寨卡病毒株FSS13025为研究对象,通过将其在A129小鼠睾丸中连续传代10轮后获得适应性传代毒株,将原始株(WT)、第5代(P5)和第10代(P10)病毒经腹腔接种A129小鼠后发现,睾丸中P5和P10的RNA载量较WT分别提高4.6和3.8倍;进一步通过深度测序分析P5和P10的基因组变异情况,结果显示二者的包膜蛋白(envelope,E)和非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1)分别出现H401Y和K146E突变.在此基础上,以寨卡病毒FSS13025株为基因骨架,利用反向遗传学技术构建拯救携带上述突变的重组病毒H401Y+K146E,并评价其在细胞和小鼠体内的复制能力,结果显示病毒感染睾丸细胞15P-1和TM3后第48 h,细胞培养上清中的重组病毒RNA含量分别是WT的5.2和2.1倍;经腹腔途径感染A129小鼠后的第3和6天,睾丸中重组病毒RNA载量较WT分别提高97.5和58.4倍.上述结果表明,H401Y+K146E联合突变显著增强了寨卡病毒在睾丸细胞中的复制能力,同时明显提升了其对睾丸的嗜性和侵袭力,上述位点可作为寨卡病毒变异风险预警的监测靶点.

关键词：寨卡病毒睾丸适应性突变包膜蛋白非结构蛋白1

附子中次乌头碱调控miR-134对心肌细胞hERG通道的影响

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中国药物警戒 2024年第6期21卷 606-610页

作者：葛运炫王宇光张卓马增春高月北京工业大学环境与生命学部北京100124 军事医学研究院辐射医学研究所北京100850

目的从miRNA-hERG途径探索双酯型生物碱对心肌细胞毒性的调控机制。方法采用全细胞膜片钳技术测定hERG电流,实时荧光定量PCR测定基因表达水平,蛋白质免疫印迹实验测定蛋白表达。结果3种双酯型生物碱均可降低hERG蛋白和基因表达水平,抑... 详细信息

目的从miRNA-hERG途径探索双酯型生物碱对心肌细胞毒性的调控机制。方法采用全细胞膜片钳技术测定hERG电流,实时荧光定量PCR测定基因表达水平,蛋白质免疫印迹实验测定蛋白表达。结果3种双酯型生物碱均可降低hERG蛋白和基因表达水平,抑制心肌细胞hERG通道开放率,次乌头碱抑制作用最为显著且呈剂量依赖性。次乌头碱促进miR-134表达量上升最明显,抑制miR-134表达后hERG蛋白基因表达水平显著上升,hERG蛋白基因表达抑制率降低。结论通过对miRNA表达进行修饰,次乌头碱可抑制hERG蛋白基因表达水平及hERG通道开放,此抑制效果可能是附子心脏毒性的重要组成部分。

关键词：附子次乌头碱心肌细胞心肌毒性 hERG通道 miRNA miR-134 蛋白基因表达

甲型肝炎病毒细胞适应株在Ⅰ型干扰素受体缺失小鼠体内的感染特征

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军事医学 2024年第9期48卷 650-655页

作者：高敏马青青李剑阮若彤秦成峰赵慧军事科学院军事医学研究院病原微生物生物安全全国重点实验室清华大学药学院中国医学科学院北京协和医学院自然疫源性疾病发现与溯源创新单元

目的研究甲型肝炎病毒（HAV）细胞适应株在Ⅰ型干扰素（IFN）受体缺失的小鼠模型中的感染特征。方法采用间接免疫荧光、蛋白免疫印迹和实时定量RT-PCR方法对HAV细胞适应株HM175/18f在细胞水平上的病毒蛋白表达以及病毒复制特征进行鉴... 详细信息

目的研究甲型肝炎病毒（HAV）细胞适应株在Ⅰ型干扰素（IFN）受体缺失的小鼠模型中的感染特征。方法采用间接免疫荧光、蛋白免疫印迹和实时定量RT-PCR方法对HAV细胞适应株HM175/18f在细胞水平上的病毒蛋白表达以及病毒复制特征进行鉴定。以尾静脉注射的方式将HM175/18f感染缺失Ⅰ型IFN受体的A129小鼠，通过检测病毒血症、粪便排毒、肝脏中的病毒RNA载量、血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、肝脏病理分析和IgG抗体水平，确定HM175/18f在A129小鼠中感染和复制的动态变化及其诱导的机体免疫反应。结果 HM175/18f感染的A129小鼠未出现明显的临床症状，ALT水平未见明显上调。但病毒RNA在感染小鼠肝脏中可持续存在，直至感染后42 d。感染小鼠肝脏组织有淋巴细胞和中性粒细胞的局灶性浸润，但未见局灶性坏死表现。值得重视的是，HM175/18f感染引起了明显的病毒血症和持续的粪便排毒。此外，在A129小鼠中HM175/18f诱导了显著的HAV特异性体液免疫应答。结论本研究揭示了HAV细胞适应株HM175/18f在Ⅰ型IFN受体缺失小鼠中的感染性，明确了HM175/18f的减毒特征，这不仅有助于加深对HAV致病机制的理解，也能拓展Ⅰ型IFN受体缺失小鼠模型在甲型肝炎研究中的应用。

关键词：甲型肝炎甲型肝炎病毒细胞适应株 Ⅰ型干扰素受体缺失小鼠小鼠模型