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双重核酸纸条快速检测单核细胞增生李斯特菌prfA和hly毒素基因方法的建立及试剂盒的研制

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南方医科大学学报 2025年

作者：刘岩杨建宇周钰娇丁文博张先宇高林然潘蓓珍杨继飞赵云冬北华大学医学技术学院临床生化及分子生物学检验教研室

目的基于聚合酶链反应和胶体金技术相结合的双重核酸试纸条方法快速检测单核细胞增生李斯特菌prfA和hly两种毒素基因。方法采用加热煮沸法提取单核细胞增生李斯特菌DNA，以单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly为靶基因，分别用6-FAM标记p... 详细信息

目的基于聚合酶链反应和胶体金技术相结合的双重核酸试纸条方法快速检测单核细胞增生李斯特菌prfA和hly两种毒素基因。方法采用加热煮沸法提取单核细胞增生李斯特菌DNA，以单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly为靶基因，分别用6-FAM标记prfA上游引物5'端，Biotin标记prfA下游引物5'端，Digoxin标记hly上游引物5'端和Biotin标记hly下游引物5'端，建立单核细胞增生李斯特菌的毒素基因检测方法，通过克隆转化、测序分析，克隆阳性对照品，研发试剂盒并对试剂盒特异性、灵敏度、复现性及稳定性进行评价，并通过样品检测对试剂盒进行验证。结果水煮法提取的单核细胞增生李斯特菌浓度为148.81±0.97 ng/μL,A260/A280在1.8～2.0范围内；PCR产物经克隆转化、测序对比，与GenBank数据库中基因序列的同源性均为100%；特异性检测，仅单核细胞增生李斯特菌为阳性结果，与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、蜡样芽胞杆菌无交叉反应；灵敏度检测，最低检测限为10-2 ng/μL，比琼脂糖凝胶电泳高10倍；复现性检测，不同实验室不同人员分别对核酸试纸条进行验证，结果一致；稳定性检测，在第6、9、12月对核酸试纸条进行验证，稳定性较好。样品检测结果显示，本试剂盒可准确快速的检出样品中单核细胞增生李斯特菌。结论本研究所研发的单核细胞增生李斯特菌双重毒素检测试剂盒可同时检测单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly毒素基因，具有特异性强、灵敏度高、复现性好、稳定性好等优点，对保障食品安全具有现实意义。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 prfA hly 双重核酸试纸条

万里征途远,秣马再起程——贺《中国生物化学与分子生物学报》创刊40周年

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中国生物化学与分子生物学报 2025年第1期41卷 11-12页

作者：周春燕北京大学基础医学院生物化学与分子生物学系北京100091 《中国生物化学与分子生物学报》

2025年是《中国生物化学与分子生物学报》(以下简称《学报》)创刊40周年。40年前,时任中国生物化学会(现更名为“中国生物化学与分子生物学会”)常务理事、北京医学院生化系创建人之一的张昌颖教授在全国学术大会上提出“传播和普及科... 详细信息

2025年是《中国生物化学与分子生物学报》(以下简称《学报》)创刊40周年。40年前,时任中国生物化学会(现更名为“中国生物化学与分子生物学会”)常务理事、北京医学院生化系创建人之一的张昌颖教授在全国学术大会上提出“传播和普及科技的新概念、新理论、新技术是当务之急,学会应创建《生物化学杂志》”。这一提议获得了北京大学等全国大多数高校、医科院、军科院生化界前辈的响应,也得到了当时的彭瑞骢书记和马旭院长等校领导的鼎立支持,使得《学报》成功创刊。

关键词：《学报》北京医学院《中国生物化学与分子生物学报》中国生物化学创建人军科院张昌颖创刊

双重核酸纸条快速检测单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly毒素基因

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南方医科大学学报 2025年第2期45卷 387-394页

作者：刘岩杨建宇周钰娇丁文博张先宇高林然潘蓓珍杨继飞赵云冬北华大学医学技术学院临床生化及分子生物学检验教研室吉林吉林132013

目的基于聚合酶链反应和胶体金技术相结合的双重核酸试纸条方法快速检测单核细胞增生李斯特菌prfA和hly两种毒素基因。方法采用加热煮沸法提取单核细胞增生李斯特菌DNA,以单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly为靶基因,分别用6-FAM标记prfA... 详细信息

目的基于聚合酶链反应和胶体金技术相结合的双重核酸试纸条方法快速检测单核细胞增生李斯特菌prfA和hly两种毒素基因。方法采用加热煮沸法提取单核细胞增生李斯特菌DNA,以单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly为靶基因,分别用6-FAM标记prfA上游引物5'端,Biotin标记prfA下游引物5'端,Digoxin标记hly上游引物5'端和Biotin标记hly下游引物5'端,建立单核细胞增生李斯特菌的毒素基因检测方法,通过克隆转化、测序分析,克隆阳性对照品,研发试剂盒并对试剂盒特异性、灵敏度、复现性及稳定性进行评价,并通过样品检测对试剂盒进行验证。结果水煮法提取的单核细胞增生李斯特菌浓度为148.81±0.97ng/μL,A_(260)/A_(280)在1.8~2.0范围内;PCR产物经克隆转化、测序对比,与GenBank数据库中基因序列的同源性均为100%;特异性检测,仅单核细胞增生李斯特菌为阳性结果,与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、蜡样芽胞杆菌无交叉反应;灵敏度检测,最低检-2测限为10 ng/μL,比琼脂糖凝胶电泳高10倍;复现性检测,不同实验室不同人员分别对核酸试纸条进行验证,结果一致;稳定性检测,在第6、9、12月对核酸试纸条进行验证,稳定性较好。样品检测结果显示,本试剂盒可准确快速的检出样品中单核细胞增生李斯特菌。结论本剂盒可同时检测单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly毒素基因,具有特异性强、灵敏度高、复现性好、稳定性好等优点,对保障食品安全具有现实意义。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 prfA hly 双重核酸试纸条

“TCA”课程思政模式的育人评价量规体系构建及应用

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中国生物化学与分子生物学报 2025年第1期41卷 53-67页

作者：王郢吕灵慧魏仁吉张翔茹懿阎博沈岚孙茂梁亮赵晶武汉大学课程思政教学研究示范中心武汉430072 空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室西安710032

高等教育“新医科”建设迫切需要科学评价课程育人效果。本文前期建立基础医学课程通用的“TCA”思政模式,以生物化学名词三羧酸循环中的“TCA”(三羧酸)类比育人的“一心三力”(T-思考力与合作力、C-鉴别力、A-敬畏心),引导学生建立正... 详细信息

高等教育“新医科”建设迫切需要科学评价课程育人效果。本文前期建立基础医学课程通用的“TCA”思政模式,以生物化学名词三羧酸循环中的“TCA”(三羧酸)类比育人的“一心三力”(T-思考力与合作力、C-鉴别力、A-敬畏心),引导学生建立正确的认知观、科学观和生命观。据此,本文进一步探讨如何科学评价“一心三力”育人效果,以反馈“TCA”思政建设质效。针对大班课个体差异化、学习反馈碎片化、元认知升维难测的育人评价难点,采用增值性评价、矩阵化评价、可迁移性评价策略,从思考质量、思维创造性、合作能力、思维迭代性、思维辩证性和岗位责任6个方面评价“一心三力”。通过借鉴和改造教育学和心理学中18个成熟的评价工具,构建包含30个一级指标的评价量规体系(11个新设计、10个部分改构、9个直接采用),同时列出49个二级指标和98个三级指标增强评价过程的可操作性。上述整套“一心三力”评价量规应用于空军军医大学五年制本科生物化学教学,可视化评价魔力生化圈创意作品中体现的思考力与合作力、大班互动双师课堂中体现的鉴别力、高阶虚拟仿真实验任务中体现的敬畏心,结果显示,生化教学对学生的改变不仅有知识的积累,更包括价值观和认知观等育人性目标的实现。课程中加入创意性表现评价、合作学习和临床病例等教学创新,能够使学生人际交往能力、合作能力、思考质量、思维创造性、思维迭代性和思维辩证性等在不同程度上得到提升。生化课程育人的效果具有长效性,能够对学生长远的认知方式和生活方式产生良性变化。由此,借助科学的育人评价量规,教师能够及时知晓教学效果,促进教学决策的进一步优化。

关键词： TCA思政模式量规体系量化评价质性评价思考力合作力鉴别力敬畏心

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豚鼠器官中缩醛磷脂公布的研究

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1996年第2期28卷 210-213页

作者：吕灿群蔡镇潮皖南医学院生物化学教研室加拿大玛尼托巴大学医学院生化与分子生物学系

豚鼠器官中缩醛磷脂公布的研究吕灿群，蔡镇潮（皖南医学院生物化学教研室，芜湖２４１００１）（加拿大玛尼托巴大学医学院生化与分子生物学系）关键词缩醛磷脂；缩醛磷脂酰乙醇胺；薄层层析；豚鼠缩醛磷脂（Ｐｌａｓｍａｌｏｇｅｎ）... 详细信息

豚鼠器官中缩醛磷脂公布的研究吕灿群，蔡镇潮（皖南医学院生物化学教研室，芜湖２４１００１）（加拿大玛尼托巴大学医学院生化与分子生物学系）关键词缩醛磷脂；缩醛磷脂酰乙醇胺；薄层层析；豚鼠缩醛磷脂（Ｐｌａｓｍａｌｏｇｅｎ）是存在于哺乳动物组织内含有烯醚键的...

关键词：缩醛磷脂缩醛磷脂酰乙醇胺薄层层析豚鼠

U2 snRNP：肿瘤发生发展中的关键介质

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南京医科大学学报(自然科学版) 2025年第03期 418-425页

作者：李建璋张洁贞周琳长沙医学院医学检验学院临床生化教研室

U2小核糖核蛋白（small ribonucleoprotein,snRNP）是一种在人体细胞核剪切过程中发挥关键作用的剪接体。mRNA的成熟，包括5′和3′末端的加工、剪接和转运，都与U2 snRNP密切相关。在剪接体组装中，U2 snRNP对内含子分支位点序列进行... 详细信息

U2小核糖核蛋白（small ribonucleoprotein,snRNP）是一种在人体细胞核剪切过程中发挥关键作用的剪接体。mRNA的成熟，包括5′和3′末端的加工、剪接和转运，都与U2 snRNP密切相关。在剪接体组装中，U2 snRNP对内含子分支位点序列进行识别。在机体内U2 snRNP维持了人体内必需修复因子的转录。另外其可防止转录位点形成R环结构并直接促进DNA修复。研究表明，U2 snRNP在多种人类肿瘤组织中存在，并且其主要特征是核心成分基因的突变和核心组分的表达水平升高。这些变化进一步影响了肿瘤细胞的迁移、增殖、侵袭等，是肿瘤发生发展的关键因素。鉴于U2 snRNP在肿瘤中的分子调控作用，其有望成为临床诊治和药物治疗的新靶点。文章旨在全面回顾U2 snRNP在癌症中的作用机制。

关键词： U2 snRNP 肿瘤剪接体突变信号通路

PI3K信号通路通过Skp2、p27调节肝癌细胞的增殖

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生物化学与生物物理进展 2008年第11期35卷 1263-1269页

作者：傅奕方征宇王丽影李增霞杨勇查锡良复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系上海200032 扬州大学医学院生化教研室扬州225001

探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调节肝癌细胞增殖的机制.用LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,人肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖明显被抑制.RT-PCR及蛋白质印迹结果显示,LY294002增加了p27蛋白的表达,但不影响p27的mRNA表达.在LY29400... 详细信息

探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调节肝癌细胞增殖的机制.用LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,人肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖明显被抑制.RT-PCR及蛋白质印迹结果显示,LY294002增加了p27蛋白的表达,但不影响p27的mRNA表达.在LY294002处理的细胞中转入p27的RNAi质粒以干扰p27蛋白的表达后,肝癌细胞的增殖能力可部分恢复.放线菌酮(Chx)处理实验表明,阻断PI3K信号通路使p27蛋白的半衰期延长,稳定性增加.进一步研究发现,LY294002可抑制介导p27蛋白降解的关键分子Skp2的mRNA表达,还可缩短Skp2蛋白的半衰期,降低Skp2蛋白的稳定性.但在SMMC-7721中分别转染PI3K下游重要靶分子Akt的持续激活和失活突变体,却并不影响p27蛋白的表达.这些结果表明,PI3K信号通路在转录及翻译后水平调节Skp2的表达而影响p27蛋白的降解,从而调节肝癌细胞的增殖,但Akt并没有参与这种调节.

关键词： P13K 信号通路 p27 Skp2 Akt 蛋白质降解

豚鼠不同组织亚细胞组分中缩醛磷脂酶活性的比较研究

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生物化学杂志 1995年第2期11卷 231-234页

作者：吕灿群蔡镇潮皖南医学院生物化学教研室加拿大玛尼托巴大学医学院生物化学与分子生物学系

豚鼠不同组织亚细胞组分中缩醛磷脂酶活性的比较研究吕灿群蔡镇潮（皖南医学院生物化学教研室，芜湖２４１００１）（加拿大玛尼托巴大学医学院生物化学与分子生物学系）缩醛磷脂（Ｐｌａｓｍａｎｏｇｅｎ）是存在于哺乳动物组织内含有... 详细信息

豚鼠不同组织亚细胞组分中缩醛磷脂酶活性的比较研究吕灿群蔡镇潮（皖南医学院生物化学教研室，芜湖２４１００１）（加拿大玛尼托巴大学医学院生物化学与分子生物学系）缩醛磷脂（Ｐｌａｓｍａｎｏｇｅｎ）是存在于哺乳动物组织内含有烯醚键（Ｖｉｎｙｌｅｔｈｅｒｂｏｎ...

关键词：豚鼠缩醛磷脂酶酶活性

PKB的PH结构域在原核表达及其纯化和活性

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复旦学报（医学版） 2002年第6期29卷 423-427页

作者：施冬云魏廉黄伟达刘珊林徐伯赢申宗侯复旦大学医学院生化与分子生物学系上海200032 复旦大学生命科学学院生化系上海200433

目的　利用原核系统表达原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶B(PKB)的PH结构域 ,为进一步研究其结构和功能奠定基础。方法　我们构建了PKB的PH结构域的表达质粒 ,在大肠杆菌中表达出PH结构域 ,并利用蛋白N端加入的组氨酸标签进行亲和层析及离子交... 详细信息

目的　利用原核系统表达原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶B(PKB)的PH结构域 ,为进一步研究其结构和功能奠定基础。方法　我们构建了PKB的PH结构域的表达质粒 ,在大肠杆菌中表达出PH结构域 ,并利用蛋白N端加入的组氨酸标签进行亲和层析及离子交换层析纯化蛋白。结果　在大肠杆菌中表达的PH结构域以包涵体形式存在 ,经变性和复性后成为具有天然构象的可溶性蛋白 ,经亲和层析和离子交换层析纯化的PH结构域具有与磷脂酰肌醇PI 4 ,5 P2 的结合能力 ,证明其具有生物学活性。结论　本方法成功表达纯化了PKB的PH结构域 ,可用作PH结构域结构和功能的进一步研究。

关键词：丝苏氨酸蛋白激酶B PH结构域原核表达蛋白纯化