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稀有鮈鲫精子超低温冷冻保存

水生生物学报 2024年第10期48卷 1745-1757页

作者：李鑫叶欢何勇凤余乐程佩琳杜浩吴金明中国水产科学研究院长江水产研究所农业农村部淡水生物多样性保护重点实验室武汉430223 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 中国科学院水生生物研究所武汉430072 武汉轻工大学动物科学与营养工程学院武汉430023

为建立稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)精子超低温冷冻保存技术,研究了稀有鮈鲫精子在不同种类和浓度稀释液与抗冻剂、降温程序中的冷冻保存效果,并开展授精实验,以期建立稀有鮈鲫精子超低温冷冻保存方法。首先,比较了5种精子稀释液对稀有... 详细信息

为建立稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)精子超低温冷冻保存技术,研究了稀有鮈鲫精子在不同种类和浓度稀释液与抗冻剂、降温程序中的冷冻保存效果,并开展授精实验,以期建立稀有鮈鲫精子超低温冷冻保存方法。首先,比较了5种精子稀释液对稀有鮈鲫精子活力的影响,发现在BSMIS(Buffered Sperm Motility-inhibiting Solution)稀释液中,精子活力最高(95.55±2.35)%,精子曲线运动速度(VCL)、直线运动速度(VSL)和平均路径速度(VAP)分别为(103.00±29.82)、(84.00±26.21)和(126.67±27.57)μm/s,寿命(37.67±0.58)s,与鲜精无显著差异(P>0.05);其次,筛选了不同浓度的6种渗透性抗冻剂,发现当BSMIS稀释液含有10%甲醇时,精子活力最高(22.33±2.08)%;再次,筛选和优化了不同浓度的非渗透性抗冻剂,发现当BSMIS稀释液含有8%甲醇和90 mmol/L葡萄糖时,精子活力最高(46.00±4.00)%,且VCL、VSL和VAP分别为(125.02±7.42)、(107.10±4.92)和(116.99±6.34)μm/s,寿命(32.67±2.52)s,其中VSL、VAP与鲜精相比无显著差异(P>0.05)。最后,比较了4种液氮蒸气中平衡高度和3个液氮蒸气中平衡时间对稀有鮈鲫精子冷冻保存效果的影响,发现液氮蒸气中平衡高度为3 cm且平衡时间为10min时,精子活力显著高于其他实验组。采用流式细胞仪检测冻精质膜完整性、线粒体活性和DNA完整性,分别为(55.78±2.13)%、(56.18±0.64)%和(55.07±2.00)%。进一步通过授精实验评估冻精质量,冻精受精率和孵化率分别为(87.31±1.38)%和(98.84±1.02)%,与鲜精无显著性差异(P>0.05)。上述结果表明,稀有鮈鲫精液以BSMIS稀释液、8%甲醇和90 mmol/L葡萄糖为抗冻保护液,液氮蒸气中3 cm处平衡10min后置于液氮的超低温冷冻保存效果最好。研究初步建立稀有鮈鲫精子超低温冷冻保存技术,为其种质资源的长期保存提供技术支撑。

关键词：精子冷冻保存精子质量流式细胞仪稀有鮈鲫

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氨氮和微囊藻毒素-LR联合作用对斑马鱼肠道免疫和菌群的影响

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生态毒理学报 2024年第3期19卷 287-305页

作者：况宇何亚欧阳康杨慧王良牟李大鹏李莉华中农业大学水产学院武汉430070 长江经济带大宗水生生物产业绿色发展教育部工程研究中心武汉430070 池塘健康养殖湖北省工程实验室武汉430070 淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心武汉430070

氨氮和微囊藻毒素-LR(MCLR)是水生环境中普遍存在的污染物。为探讨两者对斑马鱼肠道潜在的协同效应,实验将成年雌性斑马鱼分别暴露于氨氮(30 mg·L^(-1))、MCLR(10μg·L^(-1))以及两者混合(30 mg·L^(-1)+10μg·L^(-1))的环境中,持续3... 详细信息

氨氮和微囊藻毒素-LR(MCLR)是水生环境中普遍存在的污染物。为探讨两者对斑马鱼肠道潜在的协同效应,实验将成年雌性斑马鱼分别暴露于氨氮(30 mg·L^(-1))、MCLR(10μg·L^(-1))以及两者混合(30 mg·L^(-1)+10μg·L^(-1))的环境中,持续30 d。组织病理学分析显示:氨氮暴露导致肠绒毛面积减少;MCLR暴露导致肠道绒毛破裂,空泡化面积增加;而联合暴露对肠组织损伤更为严重。这些变化伴随着肠道中溶菌酶和β-防御素的含量及相关基因表达的显著降低,表明斑马鱼肠道免疫功能受到抑制。此外,氨氮和MCLR的单独及联合处理还激活NOD1/2和TLR4a/4b信号通路,导致促炎因子IL-1β和TNF-α的表达水平和蛋白含量上升,进而可能诱发肠道炎症反应。肠道菌群分析结果进一步显示,氨氮和MCLR处理显著改变斑马鱼肠道内菌群的平衡,即氨氮增加厚壁菌门(Firmicutes)丰富度,MCLR增加放线菌门(Actinobacteria)丰富度但降低变形菌门(Proteobacteria)丰富度,而氨氮和MCLR联合作用增加肠道致病菌群假单胞菌属(Pseudomonas)和分枝杆菌属(Mycobacterium)丰富度。进一步,两者联合暴露还导致肠道中产生短链脂肪酸的菌群丰度和短链脂肪酸含量显著降低。综上所述,氨氮和MCLR联合处理对斑马鱼肠道免疫及菌群稳态产生了协同的负面影响,其对水生动物和水生态系统的健康构成了不容忽视的潜在风险。

关键词：氨氮微囊藻毒素-LR 斑马鱼肠道菌群肠道免疫

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瓦氏雅罗鱼3个养殖群体种质差异分析

淡水渔业 2024年第5期54卷 81-91页

作者：艾克达·热合曼黄晶邹宇婷张立民常玉梅中国水产科学研究院黑龙江水产研究所淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室农业农村部淡水水产生物技术与遗传育种重点实验室黑龙江省特殊生境鱼类种质特性与抗逆育种重点实验室哈尔滨150070 大连海洋大学水产与生命学院辽宁大连116023 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

对国内3个不同养殖群体瓦氏雅罗鱼的生长可量性状、抗氧化酶活性、肌肉营养成分、群体遗传多样性和遗传结构,采用凯氏定氮、索氏抽提和水解氨基酸等现行国家标准进行分析与评价,旨在为瓦氏雅罗鱼优异种质的筛选、新品种选育及池塘养殖... 详细信息

对国内3个不同养殖群体瓦氏雅罗鱼的生长可量性状、抗氧化酶活性、肌肉营养成分、群体遗传多样性和遗传结构,采用凯氏定氮、索氏抽提和水解氨基酸等现行国家标准进行分析与评价,旨在为瓦氏雅罗鱼优异种质的筛选、新品种选育及池塘养殖提供数据支撑。结果表明,3个养殖群体的瓦氏雅罗鱼生长情况良好,且在平均体重、平均体长和平均全长无明显差异;在抗氧化酶活方面,肇东(ZD)群体过氧化氢酶活性(CAT)和总抗氧化能力(T-AOC)均高于呼兰(HL)和沈阳(SY)群体,说明酶活性受不同养殖环境、喂食的饲料以及种质因素的影响;各种质群体水分(73.9~76.3%)、灰分(1.17~1.37%)、粗蛋白含量(16.70~19.57%)和粗脂肪含量(1.90~7.70%)有显著差异;3个群体瓦氏雅罗鱼中共检测出17种氨基酸,总量(TAA)为13.96%~15.76%;ZD群体EAAI指数(64.83)、AAS(6.5)和CS(4.82)评分均高于HL和SY群体;23种脂肪酸中包括7种饱和脂肪(SFA)、6种单不饱和脂肪酸(MUFA)和10种多不饱和脂肪酸(PUFA),其含量分别为0.39%~1.36%、0.71%~3.74%、0.48%~2.08%;通过全基因组测序(WGS),在全基因组水平检测SNP,进而计算群体遗传学参数,用以评估群体遗传多样性水平。研究结果表明,3个养殖群体瓦氏雅罗鱼的遗传多样性水平较低,应针对此现象采取科学有效的措施,加强瓦氏雅罗鱼渔业资源的保护和修复。综上所述,3个群体瓦氏雅罗鱼肌肉营养成分较均衡,符合FAO/WHO标准,均为符合人们营养需求的优质蛋白质,其中ZD和HL群体的瓦氏雅罗鱼肉质更鲜美多汁,可作为瓦氏雅罗鱼繁育以及新品种培育的优质资源。

关键词：瓦氏雅罗鱼(Leuciscus waleckii) 抗氧化酶活性肌肉营养成分遗传多样性

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养殖克氏原螯虾体内白斑综合征病毒的绝对定量分析

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水产学报 2016年第3期40卷 318-325页

作者：兰江风代云佳林蠡华中农业大学水产学院农业部淡水生物繁育重点实验室

近年来克氏原螯虾的养殖受到WSSV的威胁,病毒在宿主组织中的绝对定量对于了解病毒的致病性具有重要意义,但克氏原螯虾组织中WSSV的绝对定量分布还有待研究。实验调查了湖北省5个主养区克氏原螯虾WSSV的感染率,结果表明80%以上克氏原螯... 详细信息

近年来克氏原螯虾的养殖受到WSSV的威胁,病毒在宿主组织中的绝对定量对于了解病毒的致病性具有重要意义,但克氏原螯虾组织中WSSV的绝对定量分布还有待研究。实验调查了湖北省5个主养区克氏原螯虾WSSV的感染率,结果表明80%以上克氏原螯虾都携带有WSSV。采用WSSV-VP28蛋白特异性抗体对克氏原螯虾提取蛋白进行Western Blot检测,在WSSV-PCR阳性样品中可检测到VP28特异性条带,在WSSV-PCR阴性样品中没有检测到相应条带。采用实验室建立的WSSV绝对定量PCR方法,对携带病毒的克氏原螯虾6个组织(鳃、胃、肠、血淋巴细胞、肝胰腺和心脏)进行检测。结果表明,在鳃、胃和肠可检测到较多病毒量(约108拷贝/mg),其次是血淋巴细胞(107拷贝/mg)、肝胰腺(106拷贝/mg),在心脏中病毒的含量最低(103拷贝/mg),表明病毒的复制存在组织特异性。结果显示WSSV主要存在于消化系统中,预示着克氏原螯虾可能主要在摄食过程中感染WSSV;不同地区克氏原螯虾组织病毒携带量表现出一定差异,预示着WSSV感染可能受到环境因素的影响。

关键词：克氏原螯虾白斑综合征病毒感染率组织分布

皮质醇(COR)介导的氨氮抑制团头鲂免疫功能

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淡水渔业 2024年第3期54卷 60-68页

作者：郭红会王勋伟葛恒王羽慧李怡雯李欣月邹桂伟梁宏伟李莉中国水产科学研究院长江水产研究所武汉430223 湖北省水产技术推广总站(湖北省水产良种引进繁育中心) 武汉430060 华中农业大学水产学院武汉430070

高浓度氨氮始终被视为水产养殖中最具危害的环境因子,严重影响鱼类的免疫抗性,导致死亡率升高,因此氨氮对鱼类免疫功能影响的机理亟需阐明。高浓度氨氮引发鱼类应激反应,导致肾间组织中皮质醇(COR)分泌激增以及免疫指标的下降。高浓度CO... 详细信息

高浓度氨氮始终被视为水产养殖中最具危害的环境因子,严重影响鱼类的免疫抗性,导致死亡率升高,因此氨氮对鱼类免疫功能影响的机理亟需阐明。高浓度氨氮引发鱼类应激反应,导致肾间组织中皮质醇(COR)分泌激增以及免疫指标的下降。高浓度COR通常抑制机体免疫功能。为了阐明COR在氨氮抑制鱼类免疫功能中的作用,本实验设置对照、氨氮暴露、COR注射、米非司酮(RU486)注射以及RU486注射+氨氮暴露5个处理组,处理团头鲂(Megalobrama amblycephala)幼鱼[(2.63±0.33)g]48 h。结果显示,氨氮暴露与注射COR对团头鲂作用效果类似,均导致团头鲂血清COR含量显著升高,表明急性氨氮暴露和注射COR均能导致团头鲂应激反应。氨氮暴露与注射COR均显著抑制了团头鲂血清溶菌酶和补体C3水平以及头肾免疫相关基因(tnf-α、il-1β、il-6、tlr1、tlr2、tlr3、tlr4、tlr5、myd88、traf6、nf-κb1和nf-κb2)表达水平。此外,RU486可以有效地阻断氨氮对免疫指标的抑制作用,表明急性氨氮暴露可通过COR/TLR/MyD88信号通路抑制团头鲂免疫功能。综上所述,COR介导了氨氮抑制团头鲂免疫功能,为开发降应激措施来管理与预防氨氮胁迫以及培育抗氨氮鱼类新品种提供了科学依据。

关键词：氨氮皮质醇免疫功能应激团头鲂(Megalobrama amblycephala)

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健康与患病河蟹池塘底泥微生物群落特征差异

土壤 2024年第2期56卷 358-366页

作者：陈友明葛家春李建刚夏爱军马行空董元华土壤与农业可持续发展重点实验室(中国科学院) 南京210008 中国科学院大学北京100049 江苏省淡水水产研究所南京210017

本研究采集了江苏省扬中地区健康与患病河蟹池塘表层(0~5 cm)和深层(5~10 cm)的底泥,分析了不同池塘底泥的微生物群落特征和主要影响因子。结果表明,患病组底泥的pH(7.77)和全钾(1.78 g/kg)显著低于健康组(7.91和1.95 g/kg),而水溶性盐... 详细信息

本研究采集了江苏省扬中地区健康与患病河蟹池塘表层(0~5 cm)和深层(5~10 cm)的底泥,分析了不同池塘底泥的微生物群落特征和主要影响因子。结果表明,患病组底泥的pH(7.77)和全钾(1.78 g/kg)显著低于健康组(7.91和1.95 g/kg),而水溶性盐总量(1.50 g/kg)显著高于健康组(1.05 g/kg)。在0~10 cm深度范围的底泥中,健康组深层微生物多样性(Shannon)显著高于表层(P生物丰富度(ACE和Chao)、多样性(Shannon)均显著高于表层(P生物中的优势菌群均为变形菌门(Proteobacteria)、绿弯菌门(Chloroflexi)和酸杆菌门(Acidobacteriota)。两种池塘存在包括芽孢杆菌属(Bacillus)在内的多种差异菌群。RDA分析结果表明,全氮是影响河蟹池塘底泥微生物群落的主要环境因子。此外,决定健康池塘底泥微生物群落的环境因子还有水溶性盐、碳酸钙和全硫,而决定患病池塘底泥微生物群落的环境因子为有机质和p H。因此,底泥中芽孢杆菌和pH等可能是潜在影响河蟹健康的关键因素。本研究结果可为养殖河蟹池塘的微生态调控提供理论参考。

关键词：河蟹底泥理化性质微生物群落相关性分析

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斑鳠精巢及精子结构研究

水产学杂志 2024年

作者：杨帅王艺舟郑娜王桢璐余科叶欢张小雪邵俭中国水产科学研究院长江水产研究所农业农村部淡水生物多样性保护重点实验室中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室贵州大学特种水产研究所贵州省黔南州农业科学研究院畜牧水产所贵州大学动物科学学院/高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室

为深入了解斑鳠（Mystus guttatus）生殖生理基本特征，运用组织切片和扫描电镜技术观察了体长12.8～52.6 cm（29.3±13.8）cm、体质量26.8～1576.4 g（436.3±532.8）g人工养殖的斑鳠精巢和精子的结构，探究其精巢和精子结构的特征。... 详细信息

为深入了解斑鳠（Mystus guttatus）生殖生理基本特征，运用组织切片和扫描电镜技术观察了体长12.8～52.6 cm（29.3±13.8）cm、体质量26.8～1576.4 g（436.3±532.8）g人工养殖的斑鳠精巢和精子的结构，探究其精巢和精子结构的特征。结果显示：斑鳠精巢为小叶型，具有高度发达的指状分枝。斑鳠精巢发育分为6个时期，精子发生过程中共经历精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子等五个阶段。斑鳠精子由头部、中部、尾部三部分构成，精子平均长度为（23.992±2.998）μm。精子头部较小，形状近似圆形，中部较短且形状不规则，与头部相连半围绕鞭毛形成“半袖套”结构，两侧伴有不规则的侧鳍。本研究丰富了斑鳠生殖生物学资料，可为其人工繁育及资源增殖提供基础参考。

关键词：斑鳠精巢精子显微结构超显微结构

鳡和翘嘴鲌精子诱导彭泽鲫雌核发育子代的异精效应研究

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水产学报 2023年第1期47卷 195-206页

作者：操文杰张静蓉张庆飞赵玉华王卫民华中农业大学水产学院农业农村部淡水生物繁育重点实验室

为探究鳡和翘嘴鲌精子在诱导彭泽鲫雌核发育子代中的异精效应，实验分别以鳡和翘嘴鲌精子激活彭泽鲫卵的胚胎发育获得子二代(F2)群体：P×G (彭泽鲫♀×鳡♂)和P×Q(彭泽鲫♀×翘嘴鲌♂)，以P×P (彭泽鲫♀×彭泽鲫♂)F2为对照，比较各... 详细信息

为探究鳡和翘嘴鲌精子在诱导彭泽鲫雌核发育子代中的异精效应，实验分别以鳡和翘嘴鲌精子激活彭泽鲫卵的胚胎发育获得子二代(F2)群体：P×G (彭泽鲫♀×鳡♂)和P×Q(彭泽鲫♀×翘嘴鲌♂)，以P×P (彭泽鲫♀×彭泽鲫♂)F2为对照，比较各群体的染色体核型、DNA含量、形态学特征以及生长等。结果显示，P×G、P×Q和P×P的核型分别为3n=150=45m+66sm+27st+12t、3n=150=54m+51sm+39st+6t和3n=150=51m+48sm+45st+6t，与父本鳡的核型(2n=48=10m+24sm+12st+2t)和翘嘴鲌的核型(2n=48=16m+26sm+6st)明显不同；P×G和P×Q的DNA含量与P×P比值在95%的置信区间内(均为0.97)；上述结果表明，P×G和P×Q的F2群体均为雌核发育子代。基于形态学参数的主成分分析显示，P×G和P×Q与P×P散点分布区域基本无重叠；P×G和P×Q与P×P间能通过判别函数进行初步判别(准确率达97.8%)，即存在显著的形态学差异；这表明P×Q和P×G子代存在异精效应。与P×P相比，P×G和P×Q的F2群体各日龄的平均体重、平均体长、增重率和增长率均表现出优势，且P×G优势显著。综上所述，鳡和翘嘴鲌精子均能诱导彭泽鲫卵的雌核发育，且不同的精子源诱导对雌核发育子代的影响不同，存在典型的“异精效应”。

关键词：彭泽鲫雌核发育异精效应核型形态学生长性能

团头鲂tf和tfr1a基因启动子克隆及转录调控分析

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水产学报 2020年第4期44卷 528-538页

作者：王济秀张锋王卫民刘红华中农业大学水产学院农业农村部淡水生物繁育重点实验室

为探索鱼类转铁蛋白基因tf和转铁蛋白受体基因tfr1a的转录调控机制,本实验以团头鲂为研究对象,在其全基因组数据库中获取tf和tfr1a基因序列,对2个基因候选启动子区转录因子结合位点及CpG岛进行预测,通过PCR方法克隆得到tf和tfr1a基因近... 详细信息

为探索鱼类转铁蛋白基因tf和转铁蛋白受体基因tfr1a的转录调控机制,本实验以团头鲂为研究对象,在其全基因组数据库中获取tf和tfr1a基因序列,对2个基因候选启动子区转录因子结合位点及CpG岛进行预测,通过PCR方法克隆得到tf和tfr1a基因近端启动子区不同长度片段,连接至pGL3-Basic/pEGFP-1载体,瞬时转染入Hela细胞,并采用双荧光素酶报告基因检测系统进行检测。结果发现,团头鲂tf基因启动子区无CpG岛位点,而tfr1a基因启动子区有2个CpG岛位点。成功构建9个tf和10个tfr1a不同长度启动子片段的重组质粒,经双荧光素酶报告基因系统检测发现,tf启动子核心区域为-268～+56 bp,且-1 308～-1 102 bp片段可能存在正调控该基因表达的转录因子结合位点;tfr1a启动子核心区域为-224～+48 bp,且+48～+92 bp可能存在抑制该基因转录的负调控元件,而-1 229～-1 219 bp区域可能存在促进tfr1a基因表达的正调控转录因子结合位点。

关键词：团头鲂 tf基因 tfr1a基因启动子转录调控