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肠上皮细胞分离纯化及鉴定的研究进展

内蒙古农业大学学报(自然科学版) 2024年

作者：曹佳龙蔺雅楠云斯琴方心兰杜明苏少锋刘源壹王娜白东义赵一萍农业农村部马属动物种业创新重点实验室/内蒙古自治区马属动物科学研究与技术创新重点实验室/马属动物研究中心内蒙古农业大学动物科学学院内蒙古自治区农牧业科学院

肠上皮细胞（IEC）是肠道黏膜屏障的重要组成部分，它可以通过分泌各种抗菌抗病毒的物质及调节免疫反应来防御肠道炎症反应。基于IEC在调节炎症反应中的重要作用，分离和培养高质量、高纯度的IEC可以作为研究肠道炎症相关机制的重要细... 详细信息

肠上皮细胞（IEC）是肠道黏膜屏障的重要组成部分，它可以通过分泌各种抗菌抗病毒的物质及调节免疫反应来防御肠道炎症反应。基于IEC在调节炎症反应中的重要作用，分离和培养高质量、高纯度的IEC可以作为研究肠道炎症相关机制的重要细胞模型。随着技术的不断发展和成熟，对IEC的研究应用范围也在不断扩大。因此，本文总结了IEC的主要功能及研究中常用的分离、纯化及鉴定方法，以期为利用动物IEC开展肠道疾病领域的相关研究提供参考。

关键词：肠上皮细胞分离纯化鉴定

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家马不同毛色遗传特性研究综述

畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3297-3308页

作者：安塔娜韩海格陶克涛宝音德力格尔李文博芒来内蒙古农业大学动物科学学院内蒙古自治区马属动物科学研究与技术创新重点实验室呼和浩特010018

家马的毛色是识别马匹和进行品种登记的主要内容及依据。古DNA研究表明,最先出现的家马毛色是骝色,在后续的演化过程中出现黑色和栗色,这3种毛色统称为基础毛色。与其他哺乳动物一样,家马的色素细胞通过真黑素和棕黑素的不同组合产生不... 详细信息

家马的毛色是识别马匹和进行品种登记的主要内容及依据。古DNA研究表明,最先出现的家马毛色是骝色,在后续的演化过程中出现黑色和栗色,这3种毛色统称为基础毛色。与其他哺乳动物一样,家马的色素细胞通过真黑素和棕黑素的不同组合产生不同毛色。本文系统地总结了家马的13种不同毛色分类,综述了近三十年内关于家马不同毛色形成的候选基因研究进展,为深入解析家马不同毛色形成遗传机理、减少相关遗传疾病的发生以及后续的系谱登记和选种选育工作提供理论参考和依据。

关键词：家马毛色多样性候选基因黑色素

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剪接体在细胞生命活动领域中的研究进展

黑龙江畜牧兽医 2024年第9期 22-29,117页

作者：王国庆特日格乐翁雅娟宋代玲李蓓芒来内蒙古农业大学动物科学学院内蒙古自治区马属动物科学研究与技术创新重点实验室/农业农村部马属动物遗传育种与繁殖科学观测实验站/内蒙古农业大学马属动物研究中心呼和浩特010018

RNA剪接是一种重要的后转录修饰过程,它可以将基因组mRNA前体(pre-mRNA)中的内含子剪切掉,并将外显子连接成一个连续的转录本,该过程涉及数百种蛋白质和几种小核RNA(snRNA)的精确控制以适应细胞生理需要,通过RNA剪切,剪接体活动以基因... 详细信息

RNA剪接是一种重要的后转录修饰过程,它可以将基因组mRNA前体(pre-mRNA)中的内含子剪切掉,并将外显子连接成一个连续的转录本,该过程涉及数百种蛋白质和几种小核RNA(snRNA)的精确控制以适应细胞生理需要,通过RNA剪切,剪接体活动以基因表达调控为手段,对细胞的发育、分化及环境变化的适应等过程产生影响。一些剪接体因子的表达还受到细胞周期阶段的调控,甚至在不同的细胞周期阶段正确地剪接不同的mRNA,当细胞面临各种应激时,剪接体能够调整其活动以适应环境的变化,而异常的剪接体活动还与多种疾病相关,包括癌症、神经系统疾病及遗传性疾病。文章从细胞增殖、凋亡、周期、侵袭和迁移等方面综述了可变剪接和剪接体对细胞生命活动的影响及调控作用,旨在探索剪接体的调控机制,揭示细胞生存奥秘。

关键词：剪接体可变剪接剪接因子基因表达调控 mRNA

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马脐静脉内皮细胞分离培养及其功能验证

中国畜牧兽医 2024年第7期51卷 2953-2962页

作者：赵比力格温鑫伊敏娜才文道力玛神英超斯琴照伦其其格任宏芒来格日乐其木格内蒙古农业大学动物科学学院内蒙古自治区马属动物科学研究与技术创新重点实验室呼和浩特010020

【目的】建立一种简便且高效的体外马脐静脉内皮细胞(equine umbilical vein endothelial cells,eUVECs)分离和培养方法,并提供一个可靠的细胞模型,用于研究马的血管生成功能。【方法】在无菌条件下,从马脐带中分离静脉,并用PBS液彻底... 详细信息

【目的】建立一种简便且高效的体外马脐静脉内皮细胞(equine umbilical vein endothelial cells,eUVECs)分离和培养方法,并提供一个可靠的细胞模型,用于研究马的血管生成功能。【方法】在无菌条件下,从马脐带中分离静脉,并用PBS液彻底冲洗。使用0.2%Ⅰ型胶原酶对脐静脉进行消化25~30 min后,收集分离的eUVECs进行培养。每12 h使用倒置显微镜观察eUVECs的生长状况。使用CCK-8法测定第1代(P1)和P3代eUVECs在7 d内的D450 nm值,并绘制生长曲线。通过免疫荧光染色方法鉴定内皮细胞标记物CD31和CD34的表达情况。使用间充质干细胞成脂和成骨分化诱导试剂诱导eUVECs,以验证其是否具有分化特性。确定内皮细胞后,添加梯度上升浓度(5、10、15、20、25 ng/mL)的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激eUVECs,使用CCK-8法检测细胞活性,观察细胞形态变化。使用Matrigel法培养eUVECs,用ImageJ软件分析数据,并统计新生血管的4个指标:成管交叉点、成管长度、成管数和成管面积。寻找体外血管生成能力的最佳TNF-α刺激浓度。【结果】使用0.2%Ⅰ型胶原酶消化法分离的eUVECs 4~5 d内的汇合度达到90%。在倒置显微镜下观察,这些细胞生长良好并呈铺路石状排列。通过免疫荧光染色确认了CD31和CD34在eUVECs中的阳性表达;并且eUVECs表现出薄弱的成脂和成骨分化能力。在Matrigel法培养条件下,20 ng/mL TNF-α处理组的成管交叉点数、成管长度、成管数和成管面积等血管形成能力指标最高,且极显著高于对照组(P研究血管生成的细胞模型。

关键词：马脐静脉内皮细胞 Ⅰ型胶原酶消化法培养鉴定 TNF-α 血管新生

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绵羊肺腺瘤病毒致病机制研究进展

病毒学报 2024年

作者：段续接张培刘淑英内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物临床诊疗技术重点实验室内蒙古自治区基础兽医学重点实验室

绵羊肺腺瘤病毒（Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV）是绵羊肺腺瘤（ovine pulmonary adenomatosis,OPA）的病原，属于反转录病毒科，正反转录病毒亚科，β反转录病毒属，作为致癌性反转录病毒可引起绵羊发生不可逆的慢性传染性肺肿瘤... 详细信息

绵羊肺腺瘤病毒（Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV）是绵羊肺腺瘤（ovine pulmonary adenomatosis,OPA）的病原，属于反转录病毒科，正反转录病毒亚科，β反转录病毒属，作为致癌性反转录病毒可引起绵羊发生不可逆的慢性传染性肺肿瘤疾病。JSRV的癌基因env所编码的囊膜蛋白（envelope,Env）诱导多种类型的细胞发生恶性转化及体内肿瘤生成。OPA常被视为人鳞屑样生长型肺腺癌（lepidic predominant adenocarcinoma,LPA）研究的理想模型。本文针对JSRV相关致病机制的最新热点研究展开综述。

关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白肿瘤生成致病机制

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哺乳动物毛囊发生发育调控机制研究进展

中国农业大学学报 2024年第5期29卷 40-55页

作者：马荣杜海东曹彦龙赵占强尚方正王瑞军张燕军内蒙古农业大学动物科学学院/农业农村部肉羊遗传育种重点实验室/内蒙古自治区羊遗传育种与繁殖重点实验室/内蒙古自治区高校动物遗传育种与繁殖重点实验室/内蒙古自治区山羊遗传育种工程技术研究中心呼和浩特010018 宁夏中卫山羊选育场宁夏中卫755006

胚胎期毛囊的发生发育是决定毛囊数量、毛被类型和毛品质的关键阶段,挖掘该阶段的重要基因是育种工作者的重要内容之一。近年来,关于毛囊发生发育相关重要基因的鉴定方面有一定的研究进展,但由于毛囊结构复杂、细胞组成多样且细胞分化... 详细信息

胚胎期毛囊的发生发育是决定毛囊数量、毛被类型和毛品质的关键阶段,挖掘该阶段的重要基因是育种工作者的重要内容之一。近年来,关于毛囊发生发育相关重要基因的鉴定方面有一定的研究进展,但由于毛囊结构复杂、细胞组成多样且细胞分化快等问题致使研究人员在完整毛囊细胞系的建立、主效基因的挖掘和基因功能的确定等方面进展缓慢。因此,了解毛囊的基本结构、发育过程以及在该过程中发挥重要作用的信号途径/基因,是解决以上问题关键所在。本文对哺乳动物毛囊形态结构及其在胚胎期发生发育过程(以小鼠为例)进行了系统的介绍,归纳总结了与毛囊发生发育相关的关键信号通路以及目前已发现的重要遗传因子。结果表明:1)胚胎期真皮成纤维细胞、上皮细胞可进一步分化为各类毛囊细胞,因此适时诱导/阻滞其分化是成功构建细胞群的关键。2)在毛囊发生发育调控过程中,同一信号通路中不同信号途径存在不同程度的偏向,如Wnt信号通路偏向于Wnt/β-catenin信号途径、Edar信号通路偏向于Eda-A1/Edar/Edaradd信号途径,而TGF-β/BMP信号通路则偏向于Smads依赖性信号途径。3)毛囊发生发育过程中涉及多条信号通路和多个遗传因子共同调控,其中Wnt、Edar信号是毛囊基板正常形成过程中不可或缺的信号通路,而TGF-β信号通路是毛囊各类细胞分化和毛囊向下生长过程关键信号通路之一。综上,对哺乳动物毛囊发生发育过程和机制有清晰地认识和理解,是进一步挖掘与毛囊发育相关重要基因的重要基础,其可为提高毛用型经济动物的生产性能提供重要理论依据。

关键词：毛囊发生发育信号通路非编码RNA

基于多性状模型内蒙古绒山羊早期生长性状基因组预测准确性研究

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遗传 2024年第5期46卷 421-430页

作者：高林豫许琦何钰霄习海娇刘一帆张涛李金泉张燕军王瑞军吕琦梅步俊苏蕊王志英内蒙古农业大学动物科学学院呼和浩特010018 农业农村部肉羊遗传育种重点实验室呼和浩特010018 内蒙古自治区羊遗传育种与繁殖重点实验室呼和浩特010018 河套学院农学系巴彦淖尔015000

内蒙古绒山羊是经过长期自然选择和人工选育后形成的优良家畜品种,是目前世界一流的绒肉兼用山羊。多性状动物模型被认为可以显著提高畜禽遗传评估的准确性,实现性状间的间接选择。本文基于内蒙古绒山羊个体的系谱、基因型、环境以及早... 详细信息

内蒙古绒山羊是经过长期自然选择和人工选育后形成的优良家畜品种,是目前世界一流的绒肉兼用山羊。多性状动物模型被认为可以显著提高畜禽遗传评估的准确性,实现性状间的间接选择。本文基于内蒙古绒山羊个体的系谱、基因型、环境以及早期生长性状的表型记录,建立多性状动物模型,利用ABLUP、GBLUP、ssGBLUP三种方法进行早期生长性状(初生重、断乳重、断乳前平均日增重、周岁重)遗传参数及基因组育种值的估计,进一步利用五倍交叉验证方法评价基因组育种值估计准确性和可靠性。结果显示,3种方法估计的初生重遗传力为0.13~0.15,断乳重遗传力为0.13~0.20,日增重遗传力为0.11~0.14,周岁重遗传力为0.09~0.14,均属于中等偏低遗传力;断乳重和日增重、日增重和周岁重之间存在强的正遗传相关,相关系数分别为0.77~0.79和0.56~0.67,表型相关发现同样的规律;ABLUP、GBLUP和ssGBLUP法估计的初生重育种值准确性分别为0.5047、0.6694、0.7156,断乳重分别为0.6207、0.6456、0.7254;日增重分别为0.6110、0.6855、0.7357,周岁重分别为0.6209、0.7155、0.7756。综上所述,内蒙古绒山羊早期生长性状属于中等偏低遗传力,对其进行遗传选育改良速度相对较慢;通过对断乳重的选择可以实现其他生长性状的遗传改良;ssGBLUP方法估计内蒙古绒山羊早期生长性状基因组育种值的准确性和可靠性均最高,且显著高于ABLUP法,说明该方法是内蒙古绒山羊早期性状基因组选育的最佳方法。

关键词：内蒙古绒山羊早期生长性状多性状动物模型基因组育种值估计准确性

自然感染绵羊肺腺瘤病毒羊肺组织线粒体自噬分子表达分析

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中国农业大学学报 2024年第8期29卷 147-156页

作者：梁浚哲段续接杜晓悦张良李慧萍刘淑英内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物临床诊疗技术重点实验室/内蒙古自治区基础兽医学重点实验室呼和浩特010018

为分析自然感染绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)羊肺组织中线粒体的质量及自噬相关蛋白表达的变化,本研究将自然感染JSRV羊的肺组织作为研究对象,利用病理组织学、PCR和免疫组化法对自然感染JSRV羊肺组织进行鉴定。... 详细信息

为分析自然感染绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)羊肺组织中线粒体的质量及自噬相关蛋白表达的变化,本研究将自然感染JSRV羊的肺组织作为研究对象,利用病理组织学、PCR和免疫组化法对自然感染JSRV羊肺组织进行鉴定。利用透射电镜技术观察病羊肺组织中线粒体形态结构变化,分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(WB)检测感染组羊肺组织中线粒体相关因子线粒体外膜蛋白20(Outer membrane translocase 20,TOMM20)、线粒体内膜蛋白(Inner membrane translocase 23,TIMM2(3)、热休克蛋白60(Heat shock proteins 60,HSP60)的mRNA和蛋白水平的相对表达量,利用WB检测病羊肺组织线粒体蛋白中自噬相关因子Beclin1、LC3和选择性自噬受体p62蛋白水平的相对表达量。结果表明:(1)PCR扩增的目的条带与JSRV env预期扩增片段大小一致。光镜下可见肺组织中肺泡Ⅱ型上皮细胞呈乳头状生长,且伸入肺泡中,同时免疫组化结果显示在增生的肺泡Ⅱ型细胞中检测到JSRV Env大量表达,而阴性对照组未检出。(2)与健康对照组相比,透射电镜观察到感染组羊组线粒体大量损伤,并且出现双层膜结构的线粒体自噬体包裹损伤的线粒体,TOMM20、TIMM23和HSP60的mRNA相对表达水平和蛋白相对表达水平(P研究发现自然感染JSRV羊肺组织中线粒体损伤严重并出现线粒体自噬现象,为JSRV的致病机制提供新的研究方向。

关键词：绵羊肺腺瘤病毒绵羊肺组织线粒体损伤线粒体自噬

基于CA-TM融合蛋白的梅迪-维斯纳病毒胶体金免疫层析检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2024年第8期54卷 1002-1009页

作者：陈思旭包磊李慧萍张良刘淑英内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古自治区基础兽医学重点实验室

旨在建立一种快速、准确的梅迪-维斯纳病毒（MVV）抗体的胶体金免疫层析检测方法。利用本实验室的重组CA-TM融合蛋白（r CA-TM）标记检测线，以鸡Ig Y抗体标记质控线，以重组链球菌蛋白（r-SPG）与鸡Ig Y用于胶体金标记。经各条件优化建... 详细信息

旨在建立一种快速、准确的梅迪-维斯纳病毒（MVV）抗体的胶体金免疫层析检测方法。利用本实验室的重组CA-TM融合蛋白（r CA-TM）标记检测线，以鸡Ig Y抗体标记质控线，以重组链球菌蛋白（r-SPG）与鸡Ig Y用于胶体金标记。经各条件优化建立MVV胶体金免疫层析快速检测方法，并通过特异性、敏感性、稳定性以及临床应用对其检测效果进行评价。结果显示，成功表达、纯化并获得了r CA-TM；成功建立的胶体金免疫层析法特异性试验结果显示不能检测除MVV以外的如口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、绵羊肺炎支原体、布鲁菌等绵羊常见病原；敏感性试验结果显示最低可检出2 400倍稀释的MVV阳性血清；稳定性试验结果显示在模拟6个月避光常温密封保存后的试纸条仍具有良好的检测性能。利用建立的MVV胶体金检测法和广泛应用于MVV检测的进口商品化MVV抗体ELISA检测试剂盒对40份疑似病例血清样品进行对比检测，结果显示：用胶体金检测方法检出MVV抗体阳性血清17份，阴性血清23份；用进口商品化MVV抗体ELISA检测试剂盒检出阳性血清16份，阴性血清24份，二者相比整体符合率为97.5%。综上，成功建立了MVV胶体金免疫层析快速检测方法，该方法研制的检测试纸条性能良好、便于储存、适合现场快速检测和批量检测，对MVV的监测、防控有重要意义，为内蒙古地区MVV的净化提供了新的检测方案。

关键词：梅迪-维斯纳病毒原核表达融合蛋白胶体金免疫层析