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3种食源性致病菌共增菌及三重PCR检测

卫生研究 2022年第3期51卷 470-475页

作者：易青宁喜斌上海海洋大学食品学院上海201306 农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室(上海) 国家淡水水产品加工技术研发分中心(上海)上海201306

目的建立沙门菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌三重PCR检测方法。方法3株菌在本实验室自行研制的共增菌培养基(SSV培养基)混合培养16h,分别对沙门菌invA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、副溶血性弧菌collagenase基因设计特异性引物,建立... 详细信息

目的建立沙门菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌三重PCR检测方法。方法3株菌在本实验室自行研制的共增菌培养基(SSV培养基)混合培养16h,分别对沙门菌invA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、副溶血性弧菌collagenase基因设计特异性引物,建立三重PCR体系,通过对引物浓度、退火温度及循环次数进行优化,从而建立最优体系,并从特异性、重复性、灵敏性3个方面对体系进行评价。结果三重PCR体系中,invA、nuc、collagenase引物浓度分别为10、12.5和12.5 nmol/L;最佳退火温度为55.6℃;目标菌的引物特异性好,且体系的检测灵敏度高,3株菌在三重PCR体系中的灵敏度都在10^(2) CFU/mL以上。结论建立的三重PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好。

关键词：沙门菌金黄色葡萄球菌副溶血性弧菌共增菌三重PCR

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溶剂法制备降血糖肽固体分散体及其稳定性

精细化工 2022年第5期39卷 956-962页

作者：陈百科李慧金素莱曼包海蓉上海海洋大学食品学院上海201306 上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心上海201306 农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室(上海) 上海201306

以降血糖肽为模型,尤特奇L-100(EL-100)为载体,羟丙基甲基纤维素(HPMC)为释放调节剂,采用溶剂法制备了降血糖肽固体分散体,并对其稳定性和体外释放进行了研究。以降血糖肽固体分散体2h的累积释放率和二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制率为评价... 详细信息

以降血糖肽为模型,尤特奇L-100(EL-100)为载体,羟丙基甲基纤维素(HPMC)为释放调节剂,采用溶剂法制备了降血糖肽固体分散体,并对其稳定性和体外释放进行了研究。以降血糖肽固体分散体2h的累积释放率和二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制率为评价指标,对肠溶载体和释放调节剂配比进行了优化,利用SEM、FTIR和TEM对降血糖肽固体分散体进行了表征,并考察了降血糖肽固体分散体不同储存时间和储存温度下的稳定性。结果表明,在m(降血糖肽)∶m(EL-100)∶m(HPMC)=1∶2∶0.2条件下制备的降血糖肽固体分散体2h的累积释放率达到93.54%,且DPP-Ⅳ抑制率具有较高水平。SEM和TEM分析表明,降血糖肽分散在固体分散体中;FTIR表明,降血糖肽二级结构的构象发生了变化。降血糖肽固体分散体能显著增强降血糖肽的稳定性,常温(25℃)储存10 d后累积释放率仍高达90.32%,在高温环境下也表现出较强的稳定性。

关键词：降血糖肽固体分散技术累积释放率稳定性 DPP-Ⅳ抑制率医药原料

超声对高浓度大豆分离蛋白结构和酶解产物抗氧化活性的影响

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食品工业科技 2023年第24期44卷 95-102页

作者：徐晨晨杨志艳祝宝华李晓晖上海海洋大学食品学院上海201306 上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心上海201306 农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室(上海) 上海201306

本文探究超声技术对高浓度大豆分离蛋白(soybean protein isolate,SPI)结构及其酶解产物抗氧化活性的影响。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、傅里叶变换红外光谱、荧光光谱和荧光探针分析超声对高浓度下大豆分离蛋白分子结构的影... 详细信息

本文探究超声技术对高浓度大豆分离蛋白(soybean protein isolate,SPI)结构及其酶解产物抗氧化活性的影响。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、傅里叶变换红外光谱、荧光光谱和荧光探针分析超声对高浓度下大豆分离蛋白分子结构的影响,以及对酶解产物中多肽含量和分子量、游离氨基酸组成及抗氧化活性的影响。结果表明,在一定超声条件下,SPI一级结构不变,但高浓度(16%)SPI经超声处理后会引起蛋白其他结构特性的改变。二级结构中β-折叠含量增加,α-螺旋含量减少;内源荧光发射波长发生了明显红移,表面疏水性显著(P<0.05)增加,进而影响超声对SPI酶解效果。随着SPI浓度增加,与未超声相比,超声处理提高了酶解产物中多肽含量,当浓度16%时,多肽含量最高达84.27%,且浓度8%~16%时,分子量为200~2000 Da多肽占比增加。此外,超声处理显著(P<0.05)提高了SPI酶解产物中游离疏水性氨基酸的含量,并且当浓度16%时,酶解产物的DPPH自由基清除率、羟自由基清除率显著(P<0.05)提升,还原能力明显增强,表现出更高地抗氧化活性。可见,超声处理对高浓度SPI的改性效果有助于制备具有高抗氧化活性酶解产物,在制备多肽方面具有良好应用前景。

关键词：超声大豆分离蛋白蛋白浓度分子结构酶解抗氧化活性

接种S. simulans ZSJ6和添加芹菜粉对发酵香肠中亚硝酸盐及生物胺含量的影响

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浙江农业学报 2023年

作者：赵赛赛宁喜斌农业农村部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室(上海) 上海海洋大学食品学院国家淡水水产品加工技术研发中心(上海)

以接种模仿葡萄球菌(StaphylococcussimulansZSJ6)和芹菜粉作为天然亚硝酸盐来源代替人工添加亚硝酸盐。以菌株S.simulansZSJ6和芹菜粉接种发酵香肠为实验组，添加150 mg·kg-1亚硝酸钠和不添加亚硝酸钠的发酵香肠分别作为对照组，测定... 详细信息

以接种模仿葡萄球菌(StaphylococcussimulansZSJ6)和芹菜粉作为天然亚硝酸盐来源代替人工添加亚硝酸盐。以菌株S.simulansZSJ6和芹菜粉接种发酵香肠为实验组，添加150 mg·kg-1亚硝酸钠和不添加亚硝酸钠的发酵香肠分别作为对照组，测定发酵香肠的pH 值、水分活度(Aw)、色差、硫代巴比妥酸反应物值、菌落总数、亚硝酸盐和生物胺含量来探究S. simulans ZSJ6对发酵香肠品质及安全的影响。结果表明，接种菌株S. simulans ZSJ6的发酵剂组能够显著降低发酵香肠中的pH值(P安全性。

关键词：模仿葡萄球菌天然发酵剂发酵香肠亚硝酸盐生物胺

上海市养殖水产品及环境中副溶血性弧菌的流行、毒力及耐药性分析

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食品与发酵工业 2023年第4期49卷 250-257页

作者：刘军军刘单阳李达容王慧赵勇孙晓红上海海洋大学食品学院上海201306 农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室上海201306 上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心上海201306

为了解上海市养殖水产品中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)污染、毒力、血清型、耐药性及遗传关系。2020—2021年,采集上海市不同养殖场中南美白对虾、草鱼、鲫鱼、河蟹及养殖水和底泥,参考GB 4789.7—2013分离V.parahaemolytic... 详细信息

为了解上海市养殖水产品中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)污染、毒力、血清型、耐药性及遗传关系。2020—2021年,采集上海市不同养殖场中南美白对虾、草鱼、鲫鱼、河蟹及养殖水和底泥,参考GB 4789.7—2013分离V.parahaemolyticus,采用PCR法特异性扩增tlh、tdh、trh和pirA基因,多重PCR检测血清型,微量肉汤稀释法检测耐药性,肠杆菌基因间重复序列(enterobacterial repetitive intergenic consensus sequence,ERIC)-PCR分析V.parahaemolyticus遗传关系。结果表明,234份样本中V.parahaemolyticus总污染率为30.8%,南美白对虾污染最严重(78.4%)。V.parahaemolyticus污染受季节温度影响,夏季污染率最高(51.4%)。V.parahaemolyticus均未检出毒力基因,血清群呈多样分布,O1群占优势(66.7%)。72株V.parahaemolyticus对氨苄西林和磺胺甲恶唑100%耐药,对头孢唑啉和红霉素耐药率高于70%,对复方新诺明耐药率为18.1%。对亚胺培南、头孢噻肟、头孢吡肟、氯霉素和卡那霉素中介耐药/耐药率低于5%。ERIC-PCR聚类群组分散,遗传多样性高。该研究结果为上海市养殖水产品的质量安全提供数据支撑。

关键词：副溶血性弧菌水产养殖血清型耐药性遗传多样性

沙门菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的选择性共增菌培养基的研制

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中国食品卫生杂志 2023年第4期35卷 510-516页

作者：易青宁喜斌上海海洋大学食品学院上海201306 农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室上海201306 国家淡水水产品加工技术研发分中心上海201306

目的研制一种可同时对沙门菌、金黄色葡萄球菌及副溶血性弧菌进行富集的共增菌培养基SSV,达到同时检测3种食品中常见的食源性致病菌的目的。方法根据3株菌的营养需求,选择不同的培养基组分进行单因素实验,确定选择性共增菌培养基的配方... 详细信息

目的研制一种可同时对沙门菌、金黄色葡萄球菌及副溶血性弧菌进行富集的共增菌培养基SSV,达到同时检测3种食品中常见的食源性致病菌的目的。方法根据3株菌的营养需求,选择不同的培养基组分进行单因素实验,确定选择性共增菌培养基的配方,通过OD_(600 nm)、受损菌复苏、多重聚合酶链式反应(PCR)、培养基选择性4个方面对SSV培养基进行验证。结果确定增菌培养基的成分为:蛋白胨10.0 g、KH_(2)PO_(4)1.5 g、NaCl 15.0 g、LiCl 1.0 g,Na_(2)S_(2)O_(3)5.0 g、去氧胆酸钠0.05 g、甘露醇1.0 g、丙酮酸钠5.0 g,蒸馏水1000 mL。SSV培养基能同时富集以上3株菌,37℃培养16 h后,3株菌的菌体浓度均达到107 CFU/mL及以上;SSV培养基对于受损的目标菌有良好的复苏效果,复苏后OD_(600 nm)较于复苏前增长了3倍;同时多重PCR、培养基选择性也得到很好的验证。结论共增菌培养基SSV可用于同时培养沙门菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌,培养基配制简易,节约成本。后续可与多重PCR检测方法联用,提高检测率和准确性。

关键词：共增菌培养基沙门菌金黄色葡萄球菌副溶血性弧菌受损菌复苏

基于GR-5脱氧核酶和催化发夹组装信号放大策略的比色传感体系无酶、免标记检测Pb^(2+)

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分析试验室 2022年第4期41卷 373-377页

作者：喻甜凤陈贺郑洋孙孟吴继魁上海海洋大学食品学院上海201306 上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心上海201306 农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室(上海) 上海201306

以GR-5脱氧核酶(GR-5S)为Pb^(2+)特异性识别探针,催化发夹DNA组装技术(CHA)为信号放大策略,构建了一种新型的无酶、免标记比色检测Pb^(2+)的传感体系。Pb^(2+)的特异性识别激发GR-5E催化活性,从而对其底物(GR-5S)进行切割,释放出目标链... 详细信息

以GR-5脱氧核酶(GR-5S)为Pb^(2+)特异性识别探针,催化发夹DNA组装技术(CHA)为信号放大策略,构建了一种新型的无酶、免标记比色检测Pb^(2+)的传感体系。Pb^(2+)的特异性识别激发GR-5E催化活性,从而对其底物(GR-5S)进行切割,释放出目标链T;T与亚稳态且含有目标识别区域的发夹H1结合而释放出部分DNA序列,该序列进一步与发夹H2杂交,形成稳定的H1-H2的复合物并释放出目标链T;目标链T进入下一个CHA循环,而H1-H2复合物一端裸露的G4-DNA序列与血红素(hemin)组装成G-四联体,进一步促进H_(2)O_(2)-ABTS催化氧化,从而产生明显的可见吸收信号。在优化实验条件下,该传感体系能够在50 min内完成Pb^(2+)检测,线性范围是1~50 nmol/L,检测限为0.03 nmol/L。该方法用于实际水样中的Pb^(2+)检测,样品加标回收率为90.8%~108.5%。

关键词： Pb^(2+) 脱氧核酶催化发夹组装无酶

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咖啡渣粉末及其提取液对罗非鱼的脱腥作用

食品与发酵工业 2023年第9期49卷 244-251页

作者：胡苑施文正卢瑛上海海洋大学食品学院上海201306 上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心上海201306 农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室上海201306

为了改善罗非鱼腥味,以废弃咖啡渣为原材料,分别探究咖啡渣粉末及其提取液对罗非鱼的脱腥效果。通过GC-MS对咖啡渣粉末处理后的罗非鱼体表挥发性化合物分析发现,处理后的罗非鱼体表腥味强度降低,体表中12种与腥味有关的气味活性成分含... 详细信息

为了改善罗非鱼腥味,以废弃咖啡渣为原材料,分别探究咖啡渣粉末及其提取液对罗非鱼的脱腥效果。通过GC-MS对咖啡渣粉末处理后的罗非鱼体表挥发性化合物分析发现,处理后的罗非鱼体表腥味强度降低,体表中12种与腥味有关的气味活性成分含量下降74.09%,而回收的咖啡渣粉末中腥味化合物增加,结合扫描电镜分析,认为咖啡渣粉末借助吸附作用实现了体表脱腥。结合感官评定和GC-MS分析咖啡渣提取液对冷藏罗非鱼肉风味的影响,发现咖啡渣提取液处理组中腥味化合物的累积速度得到有效控制,相较于对照组,整体风味更佳。采用HPLC分析发现,咖啡渣提取液中含有丰富的绿原酸,且根据脂肪氧化酶活性的下降和咖啡渣提取液处理组中硫代巴比妥酸值的增速减缓,说明咖啡渣提取液对冷藏鱼肉的风味改良主要在于抑制了脂肪氧化酶活性,延缓鱼肉脂肪氧化。

关键词：咖啡罗非鱼脱腥气相色谱-质谱法(GC-MS) 挥发性风味化合物

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海洋生物来源免疫调节活性肽的研究进展

食品与发酵工业 2022年第8期48卷 289-295页

作者：杨志艳惠婷婷李燕李晓晖上海海洋大学食品学院上海201306 上海水产品及加工及贮藏工程技术研究中心上海201306 农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室上海201306

海洋生物含有丰富的蛋白质资源,是获得生物活性肽的重要来源。免疫调节活性肽作为保护人体免受病原体入侵的有益健康因子发挥着重要作用,增强机体免疫力产品成为当今人们普遍关注的热点之一,因此免疫调节活性肽产品的研究并应用于保健... 详细信息

海洋生物含有丰富的蛋白质资源,是获得生物活性肽的重要来源。免疫调节活性肽作为保护人体免受病原体入侵的有益健康因子发挥着重要作用,增强机体免疫力产品成为当今人们普遍关注的热点之一,因此免疫调节活性肽产品的研究并应用于保健食品和医药产业领域具有重要意义及价值。该文从海洋生物免疫调节活性肽的来源、制备方法与分离纯化、结构鉴定、特征分析等方面进行综述,以期为开发利用海洋生物资源免疫活性肽提供参考。

关键词：海洋生物免疫活性肽制备分离纯化鉴定