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长链非编码RNAMALAT1调控星形胶质细胞增殖和凋亡及对MAPK/ERK1,2信号通路的影响

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军事医学 2024年第5期48卷 347-354页

作者：胡辉王雪吴雨涵董华丰张玲韦爱君谢方赵云孙兆炜钱令嘉军事科学院军事医学研究院北京100850

目的探讨肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)的表达对星形胶质细胞(C8-D1A)增殖和凋亡,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK1,2)通路的影响。方法通过慢病毒载体和质粒载体在C8-D1A细胞中分别敲低及过表达MALAT1基因,用实... 详细信息

目的探讨肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)的表达对星形胶质细胞(C8-D1A)增殖和凋亡,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK1,2)通路的影响。方法通过慢病毒载体和质粒载体在C8-D1A细胞中分别敲低及过表达MALAT1基因,用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测敲低及过表达效率、细胞增殖相关标志物Ki67、微染色体维持蛋白2(MCM2)、细胞核增殖抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达变化,CCK-8、流式细胞术检测敲低及过表达MALAT1后对C8-D1A细胞增殖和凋亡的影响。免疫荧光染色法检测Caspase-3和Ki67蛋白表达,Western印迹法检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2及ERK1/2、p-ERK1/2、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达变化情况。结果与对照组相比,过表达MALAT1抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡,其G0/G1期、G2/M期比例升高,S期比例降低,Caspase-3蛋白表达升高,p-ERK1/2蛋白表达降低,Ki67、PCNA mRNA表达量降低;而敲低MALAT1后细胞增殖显著增加并抑制细胞凋亡,其S期比例增高、G2/M期比例降低,Caspase-3、Bax蛋白表达降低,p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表达升高,Ki67、MCM2、PCNA mRNA表达量增加(P<0.05)。结论MALAT1基因可能通过调控MAPK/ERK1,2信号通路进而促进星形胶质细胞凋亡并抑制其增殖。

关键词：肺腺癌转移相关转录本1 星形胶质细胞丝裂原活化蛋白激酶细胞外信号调节激酶细胞凋亡细胞增殖

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基于文献调研的生物武器历史回顾与分析

军事医学 2024年第4期48卷 288-293页

作者：李大广田德桥军事科学院军事医学研究院北京100071

防范生物武器是生物安全的重要组成部分,《中华人民共和国生物安全法》设立有“防范生物恐怖与生物武器威胁”专章。了解生物武器历史,对于有效防范生物武器具有积极意义。该文基于国内外公开出版的图书及期刊文献,回顾并分析了生物武... 详细信息

防范生物武器是生物安全的重要组成部分,《中华人民共和国生物安全法》设立有“防范生物恐怖与生物武器威胁”专章。了解生物武器历史,对于有效防范生物武器具有积极意义。该文基于国内外公开出版的图书及期刊文献,回顾并分析了生物武器历史,以供生物安全相关领域人员参考。

关键词：生物武器历史生物防御生物安全文献调研

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组织蛋白酶B基因敲除抑制布鲁菌胞内感染

军事医学 2024年第5期48卷 362-368页

作者：陆菁菁许荷玲张琦黄芳李山虎军事科学院军事医学研究院北京100850

目的研究组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)在布鲁菌感染中的作用。方法利用CRISPR/Cas9技术构建ctsb基因敲除的人宫颈癌HeLa细胞株,并检测ctsb敲除对细胞增殖的影响。通过CCK-8法和胞内菌计数检测布鲁菌感染中ctsb敲除对细胞增殖活性和细... 详细信息

目的研究组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)在布鲁菌感染中的作用。方法利用CRISPR/Cas9技术构建ctsb基因敲除的人宫颈癌HeLa细胞株,并检测ctsb敲除对细胞增殖的影响。通过CCK-8法和胞内菌计数检测布鲁菌感染中ctsb敲除对细胞增殖活性和细菌胞内存活的影响,并通过Western印迹检测揭示ctsb调控布鲁菌感染的分子机制。结果成功构建了ctsb基因敲除细胞株;CCK-8结果表明敲除ctsb不影响布鲁菌感染前后的细胞增殖率;胞内菌计数结果显示KO细胞感染4 d后胞内布鲁菌数量显著减少;Western印迹检测结果提示KO细胞在布鲁菌长期感染中自噬相关蛋白表达水平显著下调。结论ctsb基因敲除能够抑制长期感染中布鲁菌的胞内存活,为慢性布鲁菌病的治疗提供了潜在的靶点。

关键词：布鲁菌组织蛋白酶B 自噬 CRISPR/Cas9基因编辑

CRISPR-Cas12a在食源性致病菌检测中的应用研究进展

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军事医学 2024年第6期48卷 474-480页

作者：兰紫舒陈天姣李君文金敏杨栋军事科学院军事医学研究院天津300050

食源性致病菌是影响食品安全的重要因素,部队官兵在军事行动和日常军事生活中也面临着感染风险,迫切需要高效灵敏的快速检测技术。近年随着规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR)技术的发展,具有反式切割活性的CRISPR-Cas体系越来越受到... 详细信息

食源性致病菌是影响食品安全的重要因素,部队官兵在军事行动和日常军事生活中也面临着感染风险,迫切需要高效灵敏的快速检测技术。近年随着规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR)技术的发展,具有反式切割活性的CRISPR-Cas体系越来越受到关注。该文系统阐述了基于CRISPR-Cas12a检测技术的基本原理和常规信号读出技术,对其在食源性致病菌检测中的应用现状和发展趋势进行了综述,讨论了面临挑战和未来发展趋势。

关键词： CRISPR-Cas12a 食源性致病菌水和食品安全现场检测

磷脂酶A2-重活化剂复合物治疗有机磷中枢中毒的研究

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军事医学 2024年第6期48卷 414-420页

作者：曹文缤王淋隋昕骆媛杨军王永安军事科学院军事医学研究院北京100850

目的利用磷脂酶A2(PLA2)开放血脑屏障(BBB)的特性,促使抗毒药物酰胺磷定(HI-6)进入中枢起效,为治疗中枢神经系统中毒提供新的研究思路。方法通过体外释放和体外稳定性实验等方法,对复合物(PLA2+HI-6)的组分进行物理性质表征。利用荧... 详细信息

目的利用磷脂酶A2(PLA2)开放血脑屏障(BBB)的特性,促使抗毒药物酰胺磷定(HI-6)进入中枢起效,为治疗中枢神经系统中毒提供新的研究思路。方法通过体外释放和体外稳定性实验等方法,对复合物(PLA2+HI-6)的组分进行物理性质表征。利用荧光素钠模拟水溶性药物进行荧光染色,通过评价脑组织荧光病理,定性考察复合物的中枢递送能力。通过激光共聚焦显微镜下碘化丙啶染色,定性观察PLA2对细胞膜通透性的影响。通过建立梭曼染毒小鼠模型,评价复合物对抗有机磷中枢中毒效果:(1)测定小鼠脑乙酰胆碱酯酶重活化率;(2)观察小鼠脑组织病理切片;(3)统计不同处理组小鼠生存时间。分别从细胞水平和动物水平评价PLA2的安全性。结果体外释放和体外稳定性实验结果表明,加入PLA2并不影响HI-6的释放和降解。在动物水平,PLA2有助于荧光素钠进入脑组织被细胞摄取,表现出良好的中枢递送能力。PLA2与HI-6药物组合将染毒小鼠脑内乙酰胆碱酯酶的重活化率提升至50%,相比于单独给药HI-6,提高约12倍。小鼠脑组织病理结果显示,复合物能有效对抗神经毒剂中毒引起的中枢神经系统损伤,并在3倍染毒致死剂量下显著延长小鼠存活时间,同时明显缓解中枢中毒症状。递送机制研究发现,复合物通过增加细胞膜通透性,经跨细胞途径实现中枢递送。细胞水平和动物水平的安全性实验表明,PLA2在该研究中的使用剂量安全可靠,未造成不良反应。结论该研究以PLA2为开放材料和小分子药物HI-6组合,成功构建一种能够有效穿透BBB的复合物PLA2-HI-6。该复合物具备一定中枢靶向性,能显著提高神经毒剂中毒后脑中乙酰胆碱酯酶重活化率,为解决有机磷中枢中毒救治难题提供了参考。

关键词：神经性毒剂有机磷化合物磷脂酶A2 乙酰胆碱酯酶重活化

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铁超载对小鼠肝脏原代细胞凋亡的影响

军事医学 2024年第6期48卷 445-452页

作者：苏贤王博李东东王蕾祁凤英付秋霞阎少多军事科学院军事医学研究院北京100850

目的建立稳定的小鼠肝脏原代细胞同步分离技术,研究铁超载对肝脏原代细胞凋亡的影响。方法通过胶原酶消化、percoll密度梯度离心和CD146磁珠分选等步骤,同步分离纯化小鼠肝实质细胞、肝窦内皮细胞和枯否细胞,并使用流式细胞术、免疫荧... 详细信息

目的建立稳定的小鼠肝脏原代细胞同步分离技术,研究铁超载对肝脏原代细胞凋亡的影响。方法通过胶原酶消化、percoll密度梯度离心和CD146磁珠分选等步骤,同步分离纯化小鼠肝实质细胞、肝窦内皮细胞和枯否细胞,并使用流式细胞术、免疫荧光染色等鉴定细胞类型。体外培养各类型细胞,使用0、25、50、100μmol/L的柠檬酸铁铵刺激24 h建立铁超载模型,通过普鲁士蓝染色观察细胞铁含量,流式细胞术测定细胞存活率和线粒体膜电位水平。结果肝脏原代细胞同步分离技术效率稳定,肝实质细胞得率为(4.0±0.5)×107细胞/只,存活率为(76.33±0.67)%;肝窦内皮细胞得率为(5.0±1.0)×106细胞/只,存活率和纯度分别为(93.63±0.25)%和(93.40±0.46)%;枯否细胞得率为(1.5±0.5)×106细胞/只,存活率和纯度分别为(98.33±0.12)%和(88.30±2.02)%。获得的细胞数量多、活力好、纯度高,能满足后续实验要求。与空白对照组相比,柠檬酸铁铵处理的3种类型细胞中铁含量显著增加。在柠檬酸铁铵的刺激下,肝实质细胞的存活率从(73.97±5.54)%下降至(54.10±1.68)%,JC-1聚合物平均荧光强度从326.33±30.37下降至155.00±6.56,JC-1单体平均荧光强度从1700.00±144.04上升至3713.33±81.82;肝窦内皮细胞的存活率从(90.60±1.74)%下降至(78.03±2.15)%,JC-1聚合物平均荧光强度从502.33±5.51下降至372.33±4.04,JC-1单体平均荧光强度从750.00±67.51上升至1340.00±36.39;枯否细胞的存活率从(94.23±1.44)%下降至(88.37±1.56)%,JC-1聚合物平均荧光强度从652.67±25.66下降至478.00±12.49,JC-1单体平均荧光强度从1984.33±80.65上升至3062.33±245.20。结论建立了稳定的小鼠肝脏原代细胞同步分离技术,并证实铁超载可增加肝实质细胞、肝窦内皮细胞和枯否细胞的凋亡。

关键词：铁超载肝实质细胞肝窦内皮细胞枯否细胞细胞凋亡

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中美传染病防治药物储备现状比较与展望

军事医学 2024年第7期48卷 543-548页

作者：宋亚彬赵晓冬王保刚赵瑾军事科学院军事医学研究院北京100071

近年来,重大传染病疫情引发公共卫生事件,给全球人类健康与经济社会发展带来深远影响。做好传染病防治药物储备对提升公共卫生事件应对能力具有重要意义和作用。当前我国传染病防治药物储备体系仍有待完善之处。该文比较了中美传染病防... 详细信息

近年来,重大传染病疫情引发公共卫生事件,给全球人类健康与经济社会发展带来深远影响。做好传染病防治药物储备对提升公共卫生事件应对能力具有重要意义和作用。当前我国传染病防治药物储备体系仍有待完善之处。该文比较了中美传染病防治药物储备发展状况,结合我国当前实际,提出对策建议,以期为提高我国传染病防治药物储备水平提供参考。

关键词：传染病防治药物储备公共卫生事件疫情防控比较

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光对秋水仙碱稳定性的影响及光稳定剂筛选

军事医学 2024年第5期48卷 376-381页

作者：杨国宝董静龚伟杨美燕高春生王玉丽杨阳军事科学院军事医学研究院北京100850

目的提高秋水仙碱(COL)在制剂缓释微丸中的光稳定性。方法对COL光化降解动力学进行研究,了解其降解规律,通过添加光稳定剂屏蔽光线以抑制COL发生光化降解,并考察了光稳定剂种类、颜色、用量、位置对COL缓释微丸光稳定性的影响。结果以... 详细信息

目的提高秋水仙碱(COL)在制剂缓释微丸中的光稳定性。方法对COL光化降解动力学进行研究,了解其降解规律,通过添加光稳定剂屏蔽光线以抑制COL发生光化降解,并考察了光稳定剂种类、颜色、用量、位置对COL缓释微丸光稳定性的影响。结果以中间独立层的方式,用载药微丸重量4%的红氧化铁作为保护层制备的缓释微丸光照10 d,COL光化降解产物含量未见增长。结论COL缓释微丸中使用红氧化铁作为光稳定剂,能够有效避免COL发生光化降解。

关键词：秋水仙碱缓释微丸光化降解光稳定性光稳定剂氧化铁

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热熔挤出技术在制药行业中的应用研究进展

医药导报 2024年

作者：杨兵赵朋帅思祎洪晓轩李聪慧张慧刘楠王增明温嘉郑爱萍河北大学药学院军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所

热熔挤出(HME)技术利用热力学与动力学原理，将药用聚合物与结晶态药物在高温下混合并挤出，能使药物分子镶嵌于高分子聚合物中形成固体分散体。由于其无溶剂性、能够实现一步成型、支持连续化操作等特点，近年来在制药行业获得了极大... 详细信息

热熔挤出(HME)技术利用热力学与动力学原理，将药用聚合物与结晶态药物在高温下混合并挤出，能使药物分子镶嵌于高分子聚合物中形成固体分散体。由于其无溶剂性、能够实现一步成型、支持连续化操作等特点，近年来在制药行业获得了极大的关注。该文介绍了HME技术的基本原理、发展历程与其上市药品，综述了HME技术在改善药物溶解性、掩味、缓控释、定位释放、口腔分散薄膜、植入制剂、半固体制剂及3D打印制剂等方面的研究进展。同时，总结了HME技术的优势和发展的局限性，并展望了其发展前景。

关键词：热熔挤出制药聚合物固体分散体药物制剂