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口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗Vero细胞DNA残留量检测方法的建立及验证

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微生物学免疫学进展 2025年

作者：房世娣刘映彤金红燕强鹏侠郑环环韦钦钦夏丽冯德杰兰州生物制品研究所有限责任公司质量检定室甘肃省疫苗技术创新中心

目的建立口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗中Vero细胞DNA残留量的检测方法，并对该方法进行验证及初步应用。方法以磁珠法提取口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗Vero细胞的残留DNA，将试剂盒自带的定量参考品进行梯度稀释绘制标准曲线，... 详细信息

目的建立口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗中Vero细胞DNA残留量的检测方法，并对该方法进行验证及初步应用。方法以磁珠法提取口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗Vero细胞的残留DNA，将试剂盒自带的定量参考品进行梯度稀释绘制标准曲线，通过参考品循环阈值和浓度对数值之间的线性关系，对供试品的残留DNA进行定量分析。考察该方法的专属性、准确度、精密度、定量限、线性和范围、耐用性，并使用该方法对不同工艺阶段样品的DNA残留量及片段大小进行分析。结果 CHO细胞DNA参考品对试验无干扰，准确度验证：加标供试品的回收率在64.3%～134.4%之间，重复性和中间精密度验证样品加标检测值的RSD均＜30%，定量限为0.003 pg/10 μL，参考品的检测范围：0.030～3 000.000 pg/μL，标准曲线的R2均＞0.99，斜率在-3.1～-3.8，Vero细胞残留DNA检测试剂盒在冻融第1次、冻融第2次、冻融第3次后，供试品加标检测值的RSD分别为8.3%、12.3%、11.6%，验证项目的各项参数均符合可接受标准。结论成功建立了口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗中Vero细胞DNA残留量的检测方法，磁珠法结合荧光定量PCR能够快速、准确地对疫苗生产过程中宿主细胞残留DNA进行准确定量，适用于疫苗不同工艺阶段及成品的质量控制。

关键词：口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗宿主细胞残留DNA 磁珠法荧光定量PCR

伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗中2-苯氧乙醇浓度筛选及抑菌效力的研究

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微生物学免疫学进展 2025年

作者：陈亚黎卢雪蕊刘富强李盈范金鹏李慧清李国晏兰州生物制品研究所有限责任公司质量检定室甘肃省疫苗技术创新中心国药集团兰州生物制药有限公司血源部

目的评估伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗中防腐剂2-苯氧乙醇（2-Phenoxyethanol， 2-PE）的抑菌效力，初步确定添加2-PE的最佳浓度。方法选取不含2-PE、含8 mg/mL 2-PE、含10 mg/mL 2-PE和含12 mg/mL 2-PE共4种防腐剂配方的伤寒Vi多糖蛋白结... 详细信息

目的评估伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗中防腐剂2-苯氧乙醇（2-Phenoxyethanol， 2-PE）的抑菌效力，初步确定添加2-PE的最佳浓度。方法选取不含2-PE、含8 mg/mL 2-PE、含10 mg/mL 2-PE和含12 mg/mL 2-PE共4种防腐剂配方的伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗，采用《中华人民共和国药典》2020版（四部）（简称《中国药典》）方法向疫苗中加入规定浊度的标准测试菌（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉），在加入后6 h、24 h、7 d、14 d、28 d取样进行标准测试菌的计数，对标准测试菌落数取对数值，与抑菌效力标准比较对数值减少情况，确定配伍防腐剂的最佳浓度。结果含8 mg/mL 2-PE的伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗对铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉的抑制作用均达到了《中国药典》规定的“B级别”标准，但对金黄色葡萄球菌的抑制作用未达到《中国药典》规定的最低标准。含10 mg/mL 2-PE和含12 mg/mL 2-PE的伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗抑菌效力均能满足《中国药典》中注射剂抑菌效力的标准，且对真菌的抑制效果完全满足抑菌效力“A级别”标准。结论伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗制剂配方中防腐剂2-PE添加的最佳浓度为10 mg/mL。

关键词：防腐剂 2-苯氧乙醇抑菌效力伤寒结合疫苗浓度筛选方法适用性真菌细菌平板菌落计数法菌悬液

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冻干机制冷系统常见故障分析及维保建议

机电信息 2025年第1期 70-73,77页

作者：李学烨付启亮吴博涛李苗兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃兰州730046

真空冷冻干燥技术在制药领域有重要应用,对于粉剂生物制品的冻干生产,冻干机的稳定运行至关重要。制冷系统是冻干机核心部件,直接影响生产。现以LYO-20型冻干机为例,列举制冷系统中常见的故障,提出相应的维修方法。同时分析使用过程中... 详细信息

真空冷冻干燥技术在制药领域有重要应用,对于粉剂生物制品的冻干生产,冻干机的稳定运行至关重要。制冷系统是冻干机核心部件,直接影响生产。现以LYO-20型冻干机为例,列举制冷系统中常见的故障,提出相应的维修方法。同时分析使用过程中的维修实例,对冻干机的维修及保养提出了一些建议,旨在提高设备使用效率,延长其使用寿命,从而保证药品生产质量。

关键词：冻干机压缩机制冷故障维修

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创伤性脑损伤大鼠皮质神经元中Lnx1表达及参与继发性脑损伤的机制

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中国组织工程研究 2025年第1期29卷 24-30页

作者：马艳霞杨严伟马宇航李迪王晓燕邹明明韦善文苏州大学附属第一医院骨科江苏省苏州市215000 苏州大学骨科研究所江苏省苏州市215006 苏州大学附属第二医院江苏省苏州市215004 苏州大学附属张家港市第一人民医院江苏省张家港市215600 兰州生物制品研究所有限责任公司质量鉴定室甘肃省兰州市730046 解放军总医院第一医学中心神经外科医学部北京市100853

背景:细胞凋亡在继发性脑损伤中发挥重要作用。探究创伤性脑损伤后促进神经细胞存活的病理生理机制,将为防治创伤性脑损伤提供新的方向和理论依据。目的:探究Lnx1分子在哺乳动物脑损伤后皮质神经元中的表达变化及参与继发性脑损伤的可... 详细信息

背景:细胞凋亡在继发性脑损伤中发挥重要作用。探究创伤性脑损伤后促进神经细胞存活的病理生理机制,将为防治创伤性脑损伤提供新的方向和理论依据。目的:探究Lnx1分子在哺乳动物脑损伤后皮质神经元中的表达变化及参与继发性脑损伤的可能机制。方法:80只成年SD大鼠平均分成假手术组和创伤性脑损伤组,每组雌雄各20只。采用重物坠落方法建立创伤性脑损伤大鼠模型,分别在脑损伤后6,12,24,48,72 h,通过RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色等技术分析相关分子在受损皮质神经元中的表达情况。结果与结论:(1)创伤性脑损伤组大鼠损伤部位脑组织出血,可观察到明显的组织损伤,脑组织含水量升高;(2)与假手术组相比,创伤性脑损伤组皮质神经元中Lnx1表达在损伤24 h开始显著升高;(3)创伤性脑损伤后与Lnx1相结合的PBK和BCR蛋白表达降低,促存活因子ctgf的表达升高;(4)结果表明:脑损伤后神经元中Lnx1表达上调,其通过降低靶分子PBK和BCR的表达,进一步上调促成活因子ctgf的表达,对受损神经元具有保护作用。

关键词：创伤性脑损伤继发性脑损伤神经元 SD大鼠 Lnx1 PBK BCR ctgf

改良间羟基联苯法用于测定肺炎球菌荚膜多糖中糖醛酸含量

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中国新药杂志 2018年第6期27卷 644-649页

作者：任珍芸刘爱萍陈晓航王玺刘倩张轶张新庄沈荣甘肃省兰州生物制品研究所有限责任公司第一研究室甘肃省疫苗工程技术研究中心兰州730046

目的:建立并验证可测定肺炎球菌荚膜多糖中糖醛酸含量的改良间羟基联苯法。方法:优化间羟基联苯和氨基磺酸盐的工作体积;并对改良间羟基联苯法进行线性范围、精密度以及准确度的验证;比较改良间羟基联苯法与咔唑法测定样品结果的差异。... 详细信息

目的:建立并验证可测定肺炎球菌荚膜多糖中糖醛酸含量的改良间羟基联苯法。方法:优化间羟基联苯和氨基磺酸盐的工作体积;并对改良间羟基联苯法进行线性范围、精密度以及准确度的验证;比较改良间羟基联苯法与咔唑法测定样品结果的差异。结果:间羟基联苯和氨基磺酸盐的最佳工作体积分别为80和10μL。标准品D-葡萄糖醛酸在4~40μg·mL^(-1),其质量浓度与吸光值呈良好的线性关系,R^2>0.99;2型(160603批)、5型(161001批)、9V型(160901批)和22F型(160303批)荚膜多糖批内及批间CV值分别为1.47%~3.11%和4.44%~8.47%;D-葡萄糖醛酸分别以5,10和20μg·mL^(-1)的浓度加入以上几个型别的荚膜多糖后,其回收率为92.11%~103.46%。用改良间羟基联苯法和咔唑法测定出的肺炎球菌荚膜多糖的糖醛酸含量有差异(P一致性。结论:改良间羟基联苯法可检测肺炎球菌荚膜多糖中糖醛酸含量,其精密度和准确度良好,可用于肺炎链球菌荚膜多糖疫苗及多糖蛋白结合疫苗的质量控制。

关键词：肺炎球菌荚膜多糖糖醛酸咔唑法改良间羟基联苯法氨基磺酸盐

结核分枝杆菌Rv2626c蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定

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中国热带医学 2024年第4期24卷 472-477页

作者：张光磊孙田华吴智远张婷婷胡丽娜王婷李会蒋保余李朋伟焦磊兰州生物制品研究所有限责任公司第三研究室甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046

目的构建结核分枝杆菌Rv2626c蛋白的重组表达载体,在大肠埃希菌(Escherichia coli,***)中表达、纯化后研究Rv2626c重组蛋白的抗原性。方法将GenBank公布的结核分枝杆菌H37Rv株Rv2626c蛋白的氨基酸序列(登录号:CCP45424.1)按***密码子偏... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌Rv2626c蛋白的重组表达载体,在大肠埃希菌(Escherichia coli,***)中表达、纯化后研究Rv2626c重组蛋白的抗原性。方法将GenBank公布的结核分枝杆菌H37Rv株Rv2626c蛋白的氨基酸序列(登录号:CCP45424.1)按***密码子偏好转换为对应的DNA序列,合成该DNA序列并克隆至pET24a(+)质粒上,构建pET24a(+)-Rv2626c重组质粒,转化至*** BL21(DE3)中,以不同的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactopyranoside,IPTG)浓度、温度和时间条件下诱导表达Rv2626c蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)对Rv2626c重组蛋白进行鉴定。利用镍螯合亲和层析法纯化Rv2626c重组蛋白并将其免疫青紫蓝兔,制备抗Rv2626c抗血清,采用Western Blot和酶联免疫吸附法分别检测抗血清的特异性和效价。结果pET24a(+)-Rv2626c重组质粒构建成功。SDS-PAGE检测显示:转入该重组质粒的***经IPTG诱导后表达Rv2626c重组蛋白,分子量约14500,大小与预期相符;Rv2626c重组蛋白的最佳诱导表达条件为31℃1.0 mmol/L IPTG诱导表达6 h,目的蛋白主要以可溶性形式存在,与Western Blot检测结果一致。Rv2626c重组蛋白免疫青紫蓝兔获得的高免血清特异性良好,经酶联免疫吸附法测定该血清效价为1∶256000。结论在***中成功表达结核分枝杆菌Rv2626c蛋白,且纯化的Rv2626c重组蛋白具有较好的纯度和抗原活性,为进一步揭示其生物学功能奠定基础。

关键词：结核分枝杆菌 Rv2626c重组蛋白抗原活性鉴定

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13个血清型肺炎球菌荚膜多糖稳定性考察

中国生物制品学杂志 2018年第10期31卷 1075-1083页

作者：任珍芸刘倩张轶陈晓航刘爱萍王玺熊明郁沈荣兰州生物制品研究所有限责任公司第一研究室甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046

目的考察13个血清型肺炎球菌荚膜多糖在-60℃以下储存60个月的稳定性。方法将13个血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F型)各3批共39批次原料多糖,-60℃以下条件储存,每隔6个月取样,分别对多糖成分基团含量、分... 详细信息

目的考察13个血清型肺炎球菌荚膜多糖在-60℃以下储存60个月的稳定性。方法将13个血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F型)各3批共39批次原料多糖,-60℃以下条件储存,每隔6个月取样,分别对多糖成分基团含量、分布系数(K_D)、分子质量分布激光图谱和多糖抗原活性进行测定。检测时长为60个月。结果 60个月内39批次多糖的成分基团含量及K_D均符合质量标准;分子质量分布激光图谱并无明显变化;抗原活性良好。结论 -60℃储存条件下,13个血清型肺炎球菌原料多糖在60个月内稳定性良好。

关键词：肺炎球菌荚膜多糖稳定性有效期

13价肺炎球菌结合疫苗多糖含量速率比浊检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2020年第10期33卷 1170-1175,1180页

作者：刘倩任珍芸杜娇李献林张钰奇杨淼周海飞罗树权兰州生物制品研究所有限责任公司第一研究室甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046

目的建立速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗(13-valent pneumococcal conjugate vaccine,PCV13)中各型多糖含量,并进行验证及应用。方法对NaOH-柠檬酸解吸附方法进行优化及稳定性考察,并对建立的方法进行线性、特异性、精密度、准确... 详细信息

目的建立速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗(13-valent pneumococcal conjugate vaccine,PCV13)中各型多糖含量,并进行验证及应用。方法对NaOH-柠檬酸解吸附方法进行优化及稳定性考察,并对建立的方法进行线性、特异性、精密度、准确度验证及应用。结果NaOH与柠檬酸的最佳浓度均为0.3 mol/L,摩尔比为2∶1。在此条件下,各型多糖与磷酸铝佐剂得到最大程度的解吸附,且解吸附后的溶液较稳定,48 h内检测显示多糖含量基本无变化。方法的各项验证结果均符合常规质量控制要求;用不同来源的血清分别检测2个厂家来源的6批次PCV13的各型多糖含量结果差异均无统计学意义(P>0.05)。结论建立的速率比浊法简便、快速,可准确检测PCV13中各型多糖含量。

关键词： 13价肺炎球菌结合疫苗速率比浊法多糖含量解吸附

多重PCR法用于脑膜炎奈瑟菌血清群分群鉴定的适用性

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中国生物制品学杂志 2020年第12期33卷 1414-1420页

作者：张丽芝白贵杰杨英英任克明刘方蕾罗树权沈荣兰州生物制品研究所有限责任公司第一研究室甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046

目的应用多重PCR法鉴定脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)A、B、C、W135、Y 5个血清群,验证在基因水平鉴定疫苗用菌种血清群的适用性,并与实验室经典细菌培养法和血清凝集试验进行比对。方法提取标准Nm血清群A、B、C、W135、Y的... 详细信息

目的应用多重PCR法鉴定脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)A、B、C、W135、Y 5个血清群,验证在基因水平鉴定疫苗用菌种血清群的适用性,并与实验室经典细菌培养法和血清凝集试验进行比对。方法提取标准Nm血清群A、B、C、W135、Y的基因组DNA,针对5个血清群Nm荚膜多糖合成基因上的特异序列,应用多重PCR方法对目的片段进行扩增,根据PCR扩增产物的碱基片段大小不同区分这5个血清群;采用PCR方法鉴定7株Nm分离菌种的血清群;并与实验室传统细菌培养法和血清玻片凝集试验比对。结果多重PCR方法能够鉴定Nm,并同时完成血清分群鉴定。该方法特异性和灵敏度(最低检测限为基因组DNA 0.1 ng)均较高。7株Nm分离菌种PCR检测结果与实验室经典培养法和血清玻片凝集试验结果一致,其中1株为血清群A群,1株B群,2株C群,1株W135群,2株Y群。结论多重PCR方法对Nm检测的特异性和灵敏度均优于传统细菌培养法和血清玻片凝集试验,可同时检测Nm菌种的种特异基因和群特异基因,提高了分群鉴定的准确性。此外,试验结果客观,且可长期保存和追溯性查询,有利于疫苗用菌种的质量控制。

关键词：多重PCR 脑膜炎奈瑟菌基因分群