检索结果-南通市图书馆

作者：汪秀文四川大学

学位级别：硕士

目的:本实验以C57BL/6小鼠和TNF-α基因全身敲除(TNF-αKO)小鼠为对象,研究酒精对骨代谢的影响及TNF-α在此过程中的病理作用。材料和方法:1.8周雄性C57BL/6(WT)小鼠随机分为2组:标准饮食组(SD),酒精饮食组(ETOH),每组各10只。饮食干预... 详细信息

目的:本实验以C57BL/6小鼠和TNF-α基因全身敲除(TNF-αKO)小鼠为对象,研究酒精对骨代谢的影响及TNF-α在此过程中的病理作用。材料和方法:1.8周雄性C57BL/6(WT)小鼠随机分为2组:标准饮食组(SD),酒精饮食组(ETOH),每组各10只。饮食干预4周后取血清、肝、骨等组织;μCT研究骨微结构的变化;骨组织病理学检测骨小梁变化、骨髓脂肪累积情况和破骨细胞的形成情况;提取骨组织RNA,q RT-PCR检测小鼠干骺端骨组织相关基因的表达水平;小鼠骨髓间充质干细胞系OP9细胞在体外诱导成脂肪细胞,在酒精干预下研究酒精在OP9细胞分化过程中的作用;小鼠原代骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外分别诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,在酒精干预下研究酒精在BMSCs分化过程中的作用。2.8周龄WT和TNF-αKO雄鼠随机分为4组:WT标准饮食组(WT-SD),WT酒精饮食组(WT-ETOH),TNF-αKO标准饮食组(TNF-αKO-SD),TNF-αKO酒精饮食组(TNF-αKO-ETOH),每组各10只。饮食干预4周后取血清、骨、附睾脂肪等组织;μCT研究骨微结构的变化;骨组织病理学检测骨小梁变化、骨髓脂肪累积情况;提取骨组织RNA,q RT-PCR检测小鼠干骺端骨组织相关基因的表达水平;分离小鼠BMA和BMS,检测BMS中TNF-α的水平;提取小鼠e WAT和BMA中的总RNA,检测小鼠e WAT和BMA中脂肪细胞特异性基因和炎症基因的m RNA水平;两种品系小鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,在酒精干预下研究TNF-α在骨髓间充质干细胞分化过程中的作用。结果:1.在WT小鼠中,ETOH组小鼠较SD组小鼠股骨松质骨骨量及骨小梁数量显著减少,骨髓脂肪细胞显著增多,破骨细胞数目无显著差异,成骨分化能力减弱。2.体外酒精干预下,WT小鼠BMSCs成骨诱导后的ALP阳性区域显著减少,酒精干预后WT小鼠BMSCs的成骨相关基因表达降低;OP9细胞及WT小鼠BMSCs成脂诱导后的油红O阳性区域显著增加,成脂相关基因和炎性因子表达增加。***-αKO-SD组小鼠较WT-SD组小鼠股骨松质骨骨量、骨小梁数目及成骨相关基因表达无明显差异;WT-ETOH组小鼠股骨松质骨骨量、骨小梁数目及成骨相关基因表达较WT-SD组显著降低;TNF-αKO-ETOH组小鼠股骨松质骨骨量、骨小梁数目及成骨相关基因表达较TNF-αKO-SD组无明显差异;TNF-αKO-ETOH组小鼠股骨松质骨骨量、骨小梁数目及成骨相关基因表达较WT-ETOH组小鼠均显著增加。4.体外酒精干预下,WT小鼠BMSCs成骨诱导后的ALP阳性区域、成骨相关基因表达较WT非酒精干预组显著降低;体外酒精干预下,TNF-αKO小鼠BMSCs成骨诱导后的ALP阳性区域、成骨相关基因表达较TNF-αKO非酒精干预组无明显变化;体外酒精干预下,TNF-αKO小鼠BMSCs成骨诱导后的ALP阳性区域、成骨相关基因表达较WT酒精干预组显著增加;体外酒精干预下,WT小鼠BMSCs成脂诱导后的油红O阳性区域、成脂相关基因及炎性因子表达较WT非酒精干预组显著增加;体外酒精干预下,TNF-αKO小鼠BMSCs成脂诱导后的油红O阳性区域、成脂相关基因及炎性因子表达较TNF-αKO非酒精干预组无明显变化;体外酒精干预下,TNF-αKO小鼠BMSCs成脂诱导后的油红O阳性区域、成脂相关基因及炎性因子表达较WT酒精干预组显著降低。5.酒精饮食下,WT小鼠胫骨BMA的数量明显增加,而TNF-αKO小鼠没有明显改变。与WT-ETOH小鼠相比,TNF-αKO-ETOH小鼠胫骨BMA的数量显著下降。6.酒精饮食诱导WT小鼠骨髓中的TNF-α水平增加。7.酒精饮食诱导WT小鼠e WAT中表达的脂肪细胞特异性基因显著下降;TNF-αKO小鼠的e WAT中表达的部分脂肪细胞特异性基因下降。与WT-ETOH小鼠相比,TNF-αKO-ETOH小鼠e WAT中表达的部分脂肪细胞特异性基因显著增加。8.酒精饮食诱导WT小鼠与TNF-αKO小鼠中BMA表达的部分脂肪细胞特异性基因显著增加。与WT-ETOH小鼠相比,TNF-αKO-ETOH小鼠BMA中表达的部分脂肪细胞特异性基因显著减少。9.酒精饮食诱导WT小鼠e WAT中表达的炎症因子显著增加。酒精饮食下TNF-αKO小鼠的e WAT中表达的炎症因子无明显变化。与WT-ETOH小鼠相比,TNF-αKO-ETOH小鼠e WAT中表达的炎症因子显著下降。10.酒精饮食诱导WT小鼠BMA中表达的炎症基因显著增加。酒精饮食下TNF-αKO小鼠的BMA中表达的炎症基因无明显差异。与WT-ETOH小鼠相比,TNF-αKO-ETOH小鼠BMA中表达的炎症因子显著下降。结论:1

关键词：酒精肿瘤坏死因子-α 骨质疏松症骨髓脂肪骨髓间充质干细胞

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三氧化二砷诱导IκBα表达和抑制哮喘小鼠模型核因子κB激活的作用

三氧化二砷诱导IκBα表达和抑制哮喘小鼠模型核因子κB激活的作用

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第七次全国中西医结合呼吸病学术交流大会

作者：周林福殷凯生朱自路姚欣解卫平朱毅毛辉吴剑卿南京医科大学第一附属医院呼吸内科南京医科大学生化与分子生物学系

目的:哮喘系多基因参与的具有遗传易感性的慢性气道炎症性疾病,其中嗜酸细胞(EOS)浸润是最为显著的病理特征。研究三氧化二砷(AsO)对哮喘小鼠肺组织核因子κB(NF-κB)激活及其抑制蛋白IκBα表达的影响作用,进一步探讨AsO抗炎作用的可... 详细信息

目的:哮喘系多基因参与的具有遗传易感性的慢性气道炎症性疾病,其中嗜酸细胞(EOS)浸润是最为显著的病理特征。研究三氧化二砷(AsO)对哮喘小鼠肺组织核因子κB(NF-κB)激活及其抑制蛋白IκBα表达的影响作用,进一步探讨AsO抗炎作用的可能机制。方法:BALB/c小鼠36只随机分为对照组6只、哮喘组24只(分为卵蛋白末次激发后1h,4h、12h和24h时间点各6只)和AsO治疗组(4mg/kg)6只。采用Diff-Quick染色、电泳迁移率实验(EMSA)和免疫印迹实验(Western blot)分别检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中EOS募集、肺组织NF-κB活性和IκBα表达水平。结果:对照组BALF中EOS募集、肺组织NF-κB活性和IrBα表达分别为(0.56±0.22)%、51.47±4.53和0.80±0.25;与对照组比较,哮喘组BALF中EOS募集和肺组织NF-κB活性显著增加(P均<0.01),而肺组织IκBα表达显著减少(P<0.01),其中NF-κB活性于1h显著增加(P<0.01)、4h达到峰值(P<0.01)而12h(P<0.01)至24h(P<0.05)显著减少;与哮喘组比较,治疗组BALF中EOS募集和肺组织NF-κB活性显著减少(P均<0.01),而肺组织IκBα表达显著增加(P<0.01),并且BALF中EOS募集与肺组织IκBα表达、肺组织NF-κB活性与肺组织IκBα表达之间均呈显著性负相关(r=-0.82和-0.94,P<0.01)。结论:肺组织NF-κB过度激活可能是哮喘慢性气道炎症持续存在的基础;诱导肺组织IκBα表达和抑制NF-κB激活,可能是AsO发挥抗炎作用的重要机制。

关键词：哮喘三氧化二砷嗜酸细胞核因子κB IκBα

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随机森林算法在泌尿外科AIDS患者康复规划中的应用

随机森林算法在泌尿外科AIDS患者康复规划中的应用

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作者：曾瑜民广东工业大学

学位级别：硕士

AIDS是一种需要全球重视的危害性极大的传染病,触发后容易造成人体并发各种感染,并极易导致恶性肿瘤。广东省的AIDS专科医院中,泌尿外科的AIDS患者数量在近几年来也有明显增加的趋势。因此,如何为日益增多的AIDS泌尿外科病患提供更专业... 详细信息

AIDS是一种需要全球重视的危害性极大的传染病,触发后容易造成人体并发各种感染,并极易导致恶性肿瘤。广东省的AIDS专科医院中,泌尿外科的AIDS患者数量在近几年来也有明显增加的趋势。因此,如何为日益增多的AIDS泌尿外科病患提供更专业的患者关怀问题应运而生。患者关怀计划包括疾病确诊、手术控制、情绪管理、病毒监测及恢复估计等多个方面。本文从大型三甲医院泌尿外科取得了一手的临床数据3443条,内容包括:情况分析、术前准备、手术方式、术中管理、术后处理以及康复计划6大环节数据。本文重点结合患者疾病、手术及伤口愈合的相关数据进行研究,最终形成患者关怀计划的合理建议。本文从机器学习方面入手,借助数据挖掘软件Weka系统平台对临床数据进行研究分析。由于Weka系统对中文字符的处理能力较弱,因此首先对数据进行了必要的预处理。对于数据中交叉重复的特征进行了合并,对于错填或者漏填的特征进行了补充,对于原始数据中的中文信息内容采用字母结合数字的字符串加以转换。由于数据维度较多,人工处理复杂,本次采用Python语言编写了一个小程序辅助将数据处理成一个大型矩阵,以便于导入Weka系统进行数据挖掘。鉴于维数过多,导致大型矩阵中存在较多的噪音,因此在实验1中使用随机属性算法对数据进行了降维处理,提取出主成份属性,利于后续的隐含知识发掘。实验2对泌尿外科术后伤口愈合情况进行了分类预测,通过比对IBk、神经网络及随机森林三种算法的优劣选定了随机森林作为基础分类模型,接着通过参数微调提升了模型的性能并良好地完成分类测试。实验3采用FPGrowth算法对AIDS类病患的常见病症进行了相关性分析,通过关联规则的解读发现了AIDS类病患与肾结石疾病之间的一个具有统计意义上的关联现象。本文通过对一线临床数据的深度挖掘,找到了一个有效地预测伤口愈合模型,并发现了一个隐含的相关规则,可以为泌尿外科AIDS患者全流程的个性化患者关怀提供更多的决策支撑。

关键词：人工智能数据挖掘 Weka AIDS 泌尿外科

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一例由于ζ-珠蛋白高表达而存活的Hb Bart’s水肿综合征患者的遗传学研究 ——一批血友病患者的int22倒位突变的分型鉴定

一例由于ζ-珠蛋白高表达而存活的Hb Bart’s水肿综合征患者的遗...

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作者：梁敏南方医科大学

学位级别：硕士

第一部分一例由于ζ-珠蛋白高表达而存活的Hb Bart’s水肿综合征患者的遗传学研究背景α-地中海贫血是一种遗传性常染色体隐性遗传疾病,是世界人口中最常见的单基因病,其特征是小细胞性低色素性贫血。α-珠蛋白链的减少或缺失会导致过... 详细信息

第一部分一例由于ζ-珠蛋白高表达而存活的Hb Bart’s水肿综合征患者的遗传学研究背景α-地中海贫血是一种遗传性常染色体隐性遗传疾病,是世界人口中最常见的单基因病,其特征是小细胞性低色素性贫血。α-珠蛋白链的减少或缺失会导致过多的未配对的β样珠蛋白链形成不溶的同型四聚体,从而导致细胞内沉淀,无效造血和严重的急性溶血性贫血。地中海贫血的特征在于血红蛋白的α-珠蛋白链产生不足。当单个染色体上影响α-珠蛋白基因的突变并伴有轻度贫血的个体被称为具有“沉默”的α-地中海贫血（如果涉及一个基因）或α-地中海贫血性状（当涉及两个基因时）,而表达中度至重度溶血性贫血的复合杂合子或纯合子被称为患有HbH病。在成人体内过量的β样球蛋白链形成的非功能性β链四聚体（β4四聚体）称为HbH,在胎儿期形成称为Hb Bart’s的γ链四聚体（γ4四聚体）。α-地中海贫血的最严重形式是无α基因表达的疾病,被称为巴氏水肿胎（Hb Bart’s Hydrops Fetalis）综合征。Hb Bart’s胎儿水肿综合征绝大多数于妊娠期30～40周（平均34周）时,胎儿死于宫内或娩出后短期内死亡。全身重度水肿,腹水,呈蛙腹,少数病例无水肿及腹水。本研究中,我们发现了一例重型α地中海贫血患者,其父母均为--SEA/携带者,该患者同时遗传了父母的α大片段缺失基因成为纯合子。本文通过家系研究对患者ζ-珠蛋白表达进行定量检测,分析其表达上调的调控机制及其对患者表型的影响。材料与方法1.研究对象:先证者是来自湖南的一位9岁女性,因缺氧而早产,未出现水肿,从出生后第15天第一次接受输血,被诊断为重型地中海贫血。2岁时接受HBA基因测序显示为--SEA/纯合子,先证者的父母和弟弟均为该大片段缺失基因的携带者。2.实验方法:通过MLPA检测大片段缺失,并根据Gap-PCR的原理和方法,PCR扩增出特异性产物进行Sanger测序鉴定大片段缺失位置,从而确定家系成员基因型。通过定量PCR检测其mRNA水平,同时用Western Blot,反相液相色谱相对定量实验组及对照组ζ-珠蛋白表达水平。对先证者全基因组进行二代测序,推测影响其能够存活的基因中可能的调控位点。结果先证者被临床诊断为α-重型地中海贫血（Thalassemia Major,TM）,基因型为--SEA/--SEA,无法正常产生α-珠蛋白。其珠蛋白的mRNA水平和蛋白表达量均高于正常人和其他--SEA/携带者,在双重免疫荧光实验中可见ζ-珠蛋白荧光强度明显强于对照组样本,珠蛋白的表达上调导致了该患者的存活。先证者在宫内的各时期超声指标及出生后的生长发育数据均处于正常人群标准值的三倍标准差范围内。结论1.本研究报道了一个幸存的Hb Bart’s综合征患者,分析可知其在未经任何宫内干预治疗的情况下得以生存是由于ζ-珠蛋白代偿性表达上调。2.ζ-珠蛋白能够在患者出生后仍然持续表达,具体的调控机制和原因还有待于进一步探究分析。第二部分一批血友病患者的int22倒位突变的分型鉴定背景血友病A（hemophilia A,HA）是一种遗传性出血性疾病,是最常见的X连锁隐形遗传病,男性发病率约为1/5000。血友病患者可能在任意部位发生出血,而多数出血部位为关节肌肉,其他部位的出血包括黏膜出血,如鼻出血、口腔出血、消化道出血、泌尿道出血等;严重者可发生内脏出血和颅内出血等,直接威胁到生命。重型患者的症状尤为明显,且往往没有任何诱因;轻型患儿仅表现为出血倾向。血友病A按照基因突变涉及范围可分3类:第一类基因突变是涉及少量碱基突变,主要是碱基替换,包括错义突变、无义突变、剪接突变、基因多态性等;第二类基因突变涉及染色体结构变化,常累及1 kb至3 Mb大小的基因片段;第三类是大片段缺失和重复序列。在大约40～50%的重型血友病A患者中,已知最常见的突变类型是22号内含子倒位突变。当22号内含子中的F8A（Int22h-1）基因内基因与F8基因的两个同源区域（Int22h-2或Int22h-3）之一发生同源重组时,以及Int22h-2和Int22h-3之间先发生倒位后再分别与Int22h-1同源重组,会相应产生四种不同的倒位类型。在本研究中,我们收集了103个来自南方医院的A型血友病患者,且基因变异类型均为int22倒位,通过对其倒位类型进行分型,并进行基因型表型相关性分析。材料与方法1.研究对象:收集来自南方医院的103例int22倒位患者的DNA样本。2.研究方法:采用LD-PCR对所有样本进行基因型的分型。同时收集所有患者的表型信息,进行基因型-表型的分析。研究结果通过对103例倒位突变患者样本进行LD-PCR分型鉴定,发现基因型分别为Inv22-Ⅰ共98例,占95.15%,Inv22-Ⅱ共5例,占4.85%。卡方检验结果显示两种基因型

关键词： α-地中海贫血 --SEA/大片段缺失 ζ珠蛋白 A型血友病 int22倒位

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黑色素瘤相关抗原-A3在肺癌中的表达及临床意义的研究

黑色素瘤相关抗原-A3在肺癌中的表达及临床意义的研究

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作者：李玉枫南方医科大学

学位级别：硕士

肺癌是全世界范围内最常见的恶性肿瘤,也是全球癌症死亡的首要原因,严重威胁人类健康。在美国,肺癌在男性和女性的恶性肿瘤中的病死率均居第一位。2009年约有219440例肺癌新发病例,并有159390例肺癌患者死亡。在发展中国家,特别是中国,... 详细信息

肺癌是全世界范围内最常见的恶性肿瘤,也是全球癌症死亡的首要原因,严重威胁人类健康。在美国,肺癌在男性和女性的恶性肿瘤中的病死率均居第一位。2009年约有219440例肺癌新发病例,并有159390例肺癌患者死亡。在发展中国家,特别是中国,肺癌的发生率一直呈上升趋势。如果不积极控制吸烟和空气污染,到2025年我国每年肺癌患者将超过100万,成为世界第一肺癌大国。非小细胞肺癌(non small cell lung cancer, NSCLC)占全部肺癌约85%。尽管诊断方法及治疗手段的不断更新,NSCLC的治疗在过去的几十年并未取得突破性的进展,即使I期的NSCLC患者,其5年生存率也只有50%,II期患者,5年生存率只有30%,晚期患者,5年生存率仍然不到15%,肿瘤侵袭以及转移是肺癌患者死亡的主要原因。随着分子生物学技术的发展,分子标志物在NSCLC的辅助诊断、判断预后以及评估疗效中发挥着日益重要的作用。因此,大量的实验研究都在寻求敏感性和特异性都较高的分子标记物,可以早期诊断肺癌,评估疗效和判断预后。黑色素瘤相关抗原E-A3(melanoma-associated antigen-A3, MAGE-A3)是一种肿瘤-睾丸抗原,首先发现于黑素瘤细胞。它作为人类已经发现并鉴定的肿瘤特异性抗原,广泛表达于人体的多种肿瘤组织及细胞,如黑色素瘤、头颈部鳞癌、肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌等,而在正常组织中(除睾丸和胎盘外)不表达。有研究显示,30%～50%的NSCLC患者表达MAGE-A3,表明MAGE-A3在人类肿瘤形成、发展和转移的病理过程中可能起着非常重要的作用。研究目的： 1.研究MAGE-A3在肺癌患者外周血中的表达规律,并分析其与肺癌临床病理特征的关系,初步探讨MAGE-A3在肺癌中的辅助诊断价值。 2.判断MAGE-A3在肺癌疗效评估和预后判断中的价值。 3.构建重组慢病毒载体PLV-MAGE-A3-GFP,并检测其在人肺癌细胞系A549的表达情况。材料与方法： 1.研究对象(分为两部分)：第一部分：肺癌患者,分三组第二部分：非小细胞肺癌细胞株A549 肺癌组：共120例,选自2009年6月到2011年9月于南京军区南京总医院住院的患者,均为肺癌患者,未经治疗并计划接受至少1周期标准一线含铂的两药联合的化疗。入组的标准：(1)经细胞学或组织学证实为肺癌;(2)按照2009年国际肺癌研究协学会(International Association for the Study of Lung Cancer, IASLC)公布修订的UICC7th分期标准进行分期,I-IV期NSCLC患者以及小细胞肺癌患者;(3)按ECOG PS评分为0-2分;(4)肝肾功能及血常规无明显异常,无其他并发病或并存病。肺良性病变组：共39例,为同期连续选取南京军区南京总医院住院患者。所有病例均经临床、影像学或病理学诊断为肺良性病变,其中肺炎25例,肺结核1例,发热菌血症1例,肺不张2例,间质性肺炎1例,慢性阻塞性肺疾病6例,支气管扩张伴感染3例。正常对照组：共32例,来自于南京军区南京总医院健康体检者,均无心、肝、肺和肾等重要器官疾病,肝肾功能,血常规以及其他辅助检查均无明显异常者。 2.实验方法 (1)外周血标本的采集：抽取健康志愿者及肺良性病变患者空腹外周静脉血5m1,肺癌患者在第1及第3个周期化疗前分别抽取空腹外周静脉血5ml。所有血样抽取后30min内进行离心(室温,2000RPM,10min),吸出上清,留取下层血细胞沉淀,储存于-80℃深低温冰箱备用。采用TRIzol法提取外周血标本的总RNA,用酶标仪检测所提取总RNA浓度及质量,检测合格者采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法反转录成cDNA,试剂盒均购自Formentas Life Sciences公司(美国)。采用实时聚合酶链式反应(real time PCR)方法的荧光染料法(SYBR Green)检测外周血中MAGE-A3的表达水平,选用Takara公司提供的SYBR Green试剂,上述实验严格按照试剂盒的使用说明书进行操作。(2)利用DNA重组技术将黑色素瘤相关抗原-A3(MAGE-A3)基因克隆到带GFP的慢病毒表达载体质粒PLV中,经限制性酶切和测序鉴定真核重组载体。将重组慢病毒载体PLV-MAGE-A3-GFP与包装质粒pCMV-dR8.91及pCMV-VSV-G共转染人胚肾上皮细胞株293TAB,包装重组慢病毒LV-MAGE-A3-GFP,并感染人肺癌细胞株A549,观察绿色荧光状态,并采用Western blot法检测MAGE-A3蛋白的表达情况。 3.客观疗效评价标准所有肺癌患者于第1及3周

关键词：肺癌黑色素瘤相关抗原-A3 诊断疗效评价预后

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吉林省卫生计生委消化内科重点专科

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吉林医学信息 2014年第10期30卷 41-41页

吉林省消化内科重点专科隶属于吉林大学中日联谊医院消化内科,是卫生部'211工程'重点建设学科的组成科室。2004年学科下设的研究室被评为吉林省消化系疾病重点实验室,2007年学科被评为吉林省卫生计生委重点专科。学术带头人王江滨担任... 详细信息

吉林省消化内科重点专科隶属于吉林大学中日联谊医院消化内科,是卫生部'211工程'重点建设学科的组成科室。2004年学科下设的研究室被评为吉林省消化系疾病重点实验室,2007年学科被评为吉林省卫生计生委重点专科。学术带头人王江滨担任专科主任。该专科现有医生18人,其中教授4人、副教授8人、主治医师3人、医师3人。13人拥有或正在攻读博士学位,多人先后留学于欧洲、美国、日本及瑞典。已培养博士研究生35人,硕上研究生70余人。本专科占地约300平方米。

关键词：重点专科博士研究生消化系疾病学术带头人王江生化室博士学位重点项目细胞室慢性丙肝

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吉林省卫生计生委泌尿外科重点专科

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吉林医学信息 2015年第12期31卷 41-41页

吉林大学中日联谊医院泌尿外科创建于1949年,是我省成立最早、规模最大、专科技术最齐全的泌尿外科,现为省、市、院级重点学科。教授孔祥波现任重点专科主任。目前科室开放床位150张,拥有博士生导师3人,硕士生导师4人,副高级以上专家8... 详细信息

吉林大学中日联谊医院泌尿外科创建于1949年,是我省成立最早、规模最大、专科技术最齐全的泌尿外科,现为省、市、院级重点学科。教授孔祥波现任重点专科主任。目前科室开放床位150张,拥有博士生导师3人,硕士生导师4人,副高级以上专家8人。专科拥有吉林省肾脏移植与血液净化研究中心,吉林省前列腺疾病防治中心,吉林省卫生计生委泌尿系肿瘤重点实验室等研究中心,并设立博士后流动站,在综合专业技术水平、微创腔镜技术、

关键词：重点专科泌尿外科肾脏移植泌尿系肿瘤硕士生导师专科技术研究中心腔镜技术副高级重点学科

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山西太原淋球菌多抗原序列分型以及mtrR、porB1b耐药基因的研究

山西太原淋球菌多抗原序列分型以及mtrR、porB1b耐药基因的研究

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作者：吴丹山西医科大学

学位级别：硕士

目的:1.研究山西太原地区淋球菌临床分离株对头孢曲松、头孢克肟、阿奇霉素、环丙沙星、大观霉素、四环素、青霉素七种药物的敏感性;2.采用NG-MAST初步探索山西太原地区淋球菌的基因型,把握本地区淋球菌不同基因型的流行状况,为疾病防... 详细信息

目的:1.研究山西太原地区淋球菌临床分离株对头孢曲松、头孢克肟、阿奇霉素、环丙沙星、大观霉素、四环素、青霉素七种药物的敏感性;2.采用NG-MAST初步探索山西太原地区淋球菌的基因型,把握本地区淋球菌不同基因型的流行状况,为疾病防控提供理论依据。3.分析山西太原地区淋球菌头孢菌素敏感性改变和耐药基因mtrR和porB1b的关系。方法:1.收集2017年9月-2018年12月间,山西医科大学第二医院皮肤科、泌尿外科、药敏室、山西疾病预防控制中心的淋球菌61株,用琼脂稀释法检测头孢曲松、头孢克肟、阿奇霉素、环丙沙星、大观霉素、四环素、青霉素七种药物的药敏。2.提取其DNA,对por和tbpB基因片段进行扩增并测序,并在NG-MAST官网中分析每株菌的por和tbpB对应的等位基因号,以及NG-MAST基因序列,用MegaX软件对por和tbpB基因序列做进化树,用Bootstrap法对进化树的可靠性进行检验,分析序列的同源性。3.对药敏中的头孢曲松和头孢克肟低敏和耐药的菌株和其中一株敏感的菌株的DNA进行提取,扩增mtrR和porB1b基因片段并测序,对比分析其潜在突变。结果:1.头孢曲松、头孢克肟、阿奇霉素、四环素、大观霉素、环丙沙星、青霉素的耐药率分别为0、0、4.92%、34.43%,9.8%,100%,100%。2.(1)61株淋球菌经测序分析,por一共得到44种等位基因,其中基因型por1132,por2001,por6993,por581是山西地区por的优势基因型。(2)tbpB一共得到26种等位基因型,其中tbpB4,tbpB186,tbpB1058,tbpB566是山西地区的优势菌型。(3)一共发现49种NG-MAST基因分型,其中新的基因型别有21种一共22株,而NG-MAST3305、NG-MAST2083是山西地区流行的MAST基因型。3.(1)9株低敏株中都发现了mtrR启动子位置的33位A的删失,A39T、G45D、H105Y氨基酸置换在低敏株中不完全发现,而敏感株中没有发现此突变。(2)9株低敏株和低敏株的porB1b氨基酸序列中全存在M18T、Q143K、S258R的置换,而A121D、A121G以及G120K只在低敏株中发现,在215位点所有菌株都存在置换。结论:1.四环素、大观霉素、环丙沙星、青霉素已不再适合山西地区淋球菌治疗,而头孢曲松、头孢克肟和阿奇霉素仍可用于山西太原地区淋球菌的治疗。2.(1)por等位基因号90、5692、1123可能为短链上同一来源基因型。(2)淋球菌的tbpB的进化图可以发现tbpB4、1601、446、75、447、156、1058的亲缘关系比较近,它们可能是短链上来源相同的基因型。(3)山西太原淋球菌新的基因型别较多,山西地区的淋球菌基因分型需要持久的监测。3.(1)mtrR启动子区第33位A的缺失与淋球菌药物敏感性降低可能有关,而A39T、G45D以及H105Y氨基酸的置换与淋球菌药物敏感性降低可能没有关系;(2)porB1b第120、121位点氨基酸序列突变可能影响淋球菌对头孢菌素的药物敏感性。

关键词：淋球菌多抗原序列分型药物敏感性

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TREX1突变的Aicardi-Goutières综合征诱导多能干细胞模型的建立

TREX1突变的Aicardi-Goutières综合征诱导多能干细胞模型的建立

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作者：刘晓遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:建立和鉴定TREX1基因突变的Aicardi-Goutières综合征患者来源的诱导多能干细胞,获得特异性AGS-i PSCs模型,为该疾病的发病机制及药物筛选提供平台。方法:2020年12月中山市人民医院收治了一名Aicardi-Goutières综合征的3岁男性患... 详细信息

目的:建立和鉴定TREX1基因突变的Aicardi-Goutières综合征患者来源的诱导多能干细胞,获得特异性AGS-i PSCs模型,为该疾病的发病机制及药物筛选提供平台。方法:2020年12月中山市人民医院收治了一名Aicardi-Goutières综合征的3岁男性患儿,在家属知情同意下,收集患者5ml外周血标本并分离单个核细胞。利用仙台病毒将OCT3/4、SOX2、c-Myc和Klf4四种转录因子转导外周血单个核细胞(PBMCs),将其重编程为诱导多能干细胞。对挑选的i PS克隆进行扩大培养,通过RT-PCR、免疫荧光检测,确定细胞多能干细胞标志物的表达,采用形态学、碱性磷酸酶染色及体内外分化成三个胚层实验来确定得到的hi PS细胞株是完全重编程的hi PS细胞系。将传代获取的AGS-i PSCs细胞通过核型分析,检测细胞内染色体异常情况。结果:成功获得患者Aicardi-Goutières综合征外周血单个核细胞,利用非整合性仙台病毒构建诱导性多能干细胞(AGS-i PSCs)。显示出典型的胚胎干细胞样形态,同时RT-PCR呈现出干细胞标志物的m RNA表达,经过多次传代后AP染色阳性,OCT4、SOX2、NANOG、SSEA4、TRA-1-81和TRA-1-60多能性标记蛋白均为强阳性表达。将1×10个AGS-i PSCs注射植入8周龄NCG小鼠体内,约12周左右形成畸胎瘤,做成组织切片进行一系列染色,镜下表明i PSCs具有分化为外胚层、中胚层和内胚层的能力。AGS-i PSCs体外悬浮培养形成EB自然分化也可以得到三胚层样的细胞。核型分析证实了i PSCs仍保持原有核型(46,XY)。结论:本研究利用仙台病毒将Aicardi-Goutières综合征患者的外周血单个核细胞成功重编程为特异性诱导多能干细胞,获得了类似于人类胚胎干细胞性状的AGS-i PSC系。该细胞系可在体外扩增、培养、冻存及复苏,并表达胚胎干细胞标志,具有多向分化潜能,保持正常核型。对后续Aicardi-Goutières综合征的发生,发展,寻求治疗方法提供了理想的细胞模型。

关键词： Aicardi-Goutières综合征 TREX1基因仙台病毒外周血单核细胞诱导多能干细胞

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原代与永生化犬脂肪间充质干细胞系对糖尿病疗效对比及安全性评估

原代与永生化犬脂肪间充质干细胞系对糖尿病疗效对比及安全性评估

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作者：程薛迪西北农林科技大学

学位级别：硕士

糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是伴侣动物中常见的代谢性内分泌疾病之一,多发生在中、老龄犬中。其发生的原因与肥胖、免疫、药物、胰腺炎和环境因素相关,典型的临床症状包括多饮、多食、多尿和体重降低等。目前的治疗手段包括注射胰岛... 详细信息

糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是伴侣动物中常见的代谢性内分泌疾病之一,多发生在中、老龄犬中。其发生的原因与肥胖、免疫、药物、胰腺炎和环境因素相关,典型的临床症状包括多饮、多食、多尿和体重降低等。目前的治疗手段包括注射胰岛素或将干细胞诱导成为胰岛素分泌型细胞以恢复胰岛功能,但这些方法仍存在成本高昂或难以规模化制备的问题,故而在宠物临床糖尿病治疗中,迫切需要一种价格低廉且方便有效的治疗方法来解决如今的困惑。脂肪间充质干细胞(Adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)由中胚层发育而来,具有自我更新和多向分化潜力以及归巢能力,同时ADSCs还具有低免疫原性的特征,且相对容易从体内分离进行离体培养、扩增,与骨髓、脐带血、牙髓等来源的间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)相比,ADSCs在多种疾病研究中表现出极强的取材优势和治疗潜力,因此,ADSCs的应用对细胞移植治疗的发展产生了巨大的推动作用。尽管ADSCs来源丰富,免疫原性低,但也存在着诸多问题,如分离步骤繁琐、易污染、供体差异、代次差异、细胞衰老等,这些都严重影响细胞治疗疾病时发挥的作用及其广泛应用。永生化细胞是一类稳定均一、性状一致且具有无限增殖能力的细胞,是一种可以替代原代细胞进行疾病治疗的新兴种子细胞。目前为止,关于永生化细胞系对疾病的治疗效果报道尚少。此前,本课题组成功建立了永生化犬ADSCs(Immortalized-Canine Mesenchymal Stem Cells,I-cADSCs)的细胞系,基于此,本研究以小鼠和犬为对象建立了糖尿病疾病模型,并使用原代犬ADSCs(Canine Mesenchymal Stem Cells,cADSCs)和永生化犬 ADSCs 对实验动物进行静脉移植,以探究原代与永生化犬ADSCs在糖尿病中的治疗效果,并对比不同细胞系的差异,以期选择合适的细胞及剂型,进行有效性和安全性评价,为宠物临床应用奠定基础。本研究中,我们将cADSCs与I-cADSCs在体外进行复苏和传代培养,后通过静脉移植至DM模型动物体内。昆白(KunMing,KM)小鼠共24只及中华田园犬8只,随机分为4组:正常对照组、DM组、cADSCs细胞治疗组、I-cADSCs细胞治疗组。除对照组外,其余3个试验组分别利用高脂饲喂联合链脉佐菌素(Streptozocin,STZ)建立DM模型,对照组则使用正常饲料饲喂并接受等剂量柠檬酸钠缓冲液注射。模型建立后第0天、第7天、第14天分别进行细胞移植(小鼠采用尾静脉单剂量注射,犬采用头静脉单剂量注射),正常对照组及DM组动物接受等量生理盐水注射。另选取18只KM小鼠和3只犬进行安全性评价。对实验动物的血糖、生化指标和病理组织进行检测,得到以下结果:(1)模型评价:连续腹腔注射STZ后,小鼠与犬血糖升高,体重减轻,精神萎靡,随机血糖大于11.1 mmol/L满足DM的标准,DM模型小鼠及犬肝脏和胰腺组织有明显的损伤特征,表明成功建立了DM模型。小鼠模型成功率为86.7%,犬模型成功率100%。(2)疗效评价:对比各项数据,ADSCs移植后,小鼠与犬血糖均降低,小鼠葡萄糖耐量与胰岛素耐量显著恢复,生化指标有所改善,小鼠和犬的组织损伤明显减轻。cADSCs对血糖的调控能力显著优于I-cADSCs。对于组织结构修复和生化指标的调节能力,两种细胞作用相当。结果显示,虽然I-cADSCs增殖速度快、批次稳定、能无限传代,但其在治疗糖尿病的过程中对血糖调节能力较原代细胞效果差,对于组织损伤修复与生化指标调节能力与cADSCs相差不大,证明静脉输注两种细胞系均有不同程度的疗效。(3)安全性评价:本研究对比了 cADSCs与I-cADSCs的安全性,通过在第0天、第7天和第14天对正常小鼠和犬静脉输注cADSCs和I-cADSCs,获取小鼠肝脏、胰腺和腹股沟脂肪进行组织学检测,结果显示组织形态均正常。检测犬的各项生化指标后未见明显异常,小鼠与犬均安全存活,存活率100%,表明静脉输注两种细胞系均为安全的。本研究证明了永生化ADSCs具备更强的稳定传代和明显的生长、增殖能力,通过使用cADSCs与I-cADSCs治疗DM动物模型,cADSCs显示出对DM更强的血糖调节能力,而I-cADSCs对组织修复和生化指标的恢复与cADSCs作用相当。此外,本研究证明了两种细胞系均是安全的。本研究为永生化cADSCs用于临床犬DM治疗提供了效果判定和安全性检测,为永生化ADSCs的广泛应用提供了一定的试验依据和应用基础。

关键词：脂肪间充质干细胞永生化细胞系犬糖尿病

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