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华支睾吸虫成虫转录辅激活因子基因在原核细胞中的克隆、表达及其生物功能分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第1期23卷 18-23页

作者：张咏莉余新炳吴德吴忠道毕惠祥中山大学基础医学院病原生物学部寄生虫教研室广州510089

目的　构建华支睾吸虫成虫转录辅激活因子 (transcriptionalcoactivator ,TC)基因 (TC基因 )原核重组质粒 ,进行原核表达、鉴定及生物功能分析。　方法　根据TC基因已知序列设计 1对引物 ,从华支睾吸虫成虫cDNA文库中扩增TC基因片段 ;... 详细信息

目的　构建华支睾吸虫成虫转录辅激活因子 (transcriptionalcoactivator ,TC)基因 (TC基因 )原核重组质粒 ,进行原核表达、鉴定及生物功能分析。　方法　根据TC基因已知序列设计 1对引物 ,从华支睾吸虫成虫cDNA文库中扩增TC基因片段 ;将目的基因进行聚合酶链反应 (PCR) ,其产物和空质粒 pGEX 4T 1、pET3 0a (+ )同时用限制性内切酶BamHⅠ、SalⅠ双酶切 ,纯化回收后连接并转化大肠埃希菌 (E .coliBL2 1)。将构建的重组质粒pGEX 4T 1 TC和 pET3 0a (+ ) TC分别经双酶切、PCR及测序鉴定后在大肠埃希菌BL2 1中诱导表达。用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹法 (Westernblotting)鉴定其表达效果 ,用亲和层析法纯化重组质粒pET3 0a (+ ) TC表达产生的组氨酸重组蛋白 (His TC)。　结果　构建了TC基因原核重组质粒pGEX 4T 1 TC和 pET3 0a (+ ) TC。SDS PAGE结果表明TC基因在大肠埃希菌BL2 1系统获得高效表达 ,其重组蛋白分子量与理论值相符。Westernblotting结果表明重组质粒 pGEX 4T 1 TC表达的谷胱甘肽硫转移酶 (GST)重组蛋白(GST TC)可被华支睾吸虫免疫兔血清识别 ,具有免疫反应性。纯化的TC基因的组氨酸 (His)重组蛋白 (His TC)经SDS PAGE显示单一条带。

关键词：华支睾吸虫 TC 基因 ET 大肠埃希菌表达重组质粒辅激活因子转录重组蛋白

华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白的纯化、酶学活性及免疫学研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第4期23卷 231-235页

作者：张咏莉吴德余新炳广东药学院基础学院生物教研室广州510224 中山大学基础医学院病原生物学部寄生虫教研室广州510089

目的体外制备华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白(CsGAPDH),分析其酶学活性及免疫学特性。方法常规表达重组质粒pGEX-4T-1-GAPDH,用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和纯化试剂盒纯化重组蛋白,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAG... 详细信息

目的体外制备华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白(CsGAPDH),分析其酶学活性及免疫学特性。方法常规表达重组质粒pGEX-4T-1-GAPDH,用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和纯化试剂盒纯化重组蛋白,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),用凝血酶和纯化柱酶切、纯化的CsGAPDH免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。ELISA检测抗IgG抗体滴度,浓缩型S-P免疫组化3步法检测CsGAPDH抗原在免疫小鼠体内的分布和表达。蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定其抗血清的特异性。建立酶反应体系测定重组蛋白CsGAPDH的酶催化活性。结果纯化蛋白样品呈单一条带。免疫动物获取CsGAPDH抗血清,在免疫过程中抗体滴度呈连续上升趋势。CsGAPDH抗原分布和表达于小鼠肌细胞膜部位。免疫小鼠血清具有抗CsGAPDH特异性抗体。重组蛋白CsGAPDH具有酶生理活性,其酶活力单位为2 872 U ***-1。结论制备的重组蛋白CsGAPD H具有较好的酶活性和免疫原性。

关键词：华支睾吸山 3-磷酸甘油醛脱氢酶蛋白质印迹法免疫原性

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海南省福寿螺系统发育分析及种群遗传学研究

热带医学杂志 2024年第4期24卷 451-459,F0002页

作者：吕鑫 Jitrawadee Intirach 黄萍张帆高素真焦惠生舒畅周云飞吕志跃海南医学院公共卫生学院海南海口571199 海南省人民医院海南医学院附属海南医院科研部海南海口570100 海南医学院热带医学与检验医学院海南海口571199 苏州大学医学院病原生物学教研室江苏苏州215031 海南医学院基础医学与生命科学学院海南海口571199 中山大学热带病防治教育部重点实验室广东广州510080

目的对海南省福寿螺进行分子鉴定,完成遗传多样性和亲缘关系研究,为识别和防控福寿螺的持续扩散提供依据。方法基于线粒体细胞色素c氧化酶I(COI)和16S核糖体脱氧核糖核酸(16S rDNA)基因,对海南省18个县市61个采样点采集的福寿螺样本,进... 详细信息

目的对海南省福寿螺进行分子鉴定,完成遗传多样性和亲缘关系研究,为识别和防控福寿螺的持续扩散提供依据。方法基于线粒体细胞色素c氧化酶I(COI)和16S核糖体脱氧核糖核酸(16S rDNA)基因,对海南省18个县市61个采样点采集的福寿螺样本,进行系统发育分析及种群遗传学研究。采集1050只福寿螺,随机对其中632只和577只进行COI和16S rDNA基因测序。从GenBank数据库下载序列构建数据库,COI和16S rDNA数据库分别有1465和641条序列。使用MEGA X和DnaSP软件进行系统发育和遗传多样性分析。结果小管福寿螺为海南省优势种(79.9%)。小管福寿螺和隐秘福寿螺在海南17个市县同时存在。基于COI基因,小管福寿螺分为A支(与来自日本和中国福寿螺亲缘关系密切)、B支(与来自日本、菲律宾、马来西亚和中国福寿螺亲缘关系接近)和C支(与来自马来西亚、日本、阿根廷、巴布亚新几内亚、缅甸、智利和中国福寿螺亲缘关系近)。基于16S rDNA基因,小管福寿螺分为A支和B支系(与来自马来西亚、阿根廷、菲律宾、美国和中国福寿螺亲缘关系较近)。单倍型网络分析表明,基于小管福寿螺的COI和16S rDNA基因,分别有4个和3个单倍型。隐秘福寿螺只表现出单一的COI单倍型。保亭黎族苗族自治县的福寿螺样本单倍型和核苷酸多样性最高(Hd=0.679,π=0.053),而琼海市和屯昌县之间的种群分化最大(F_(ST)=0.63)。小管福寿螺和隐秘福寿螺的遗传多样性较低。结论海南省小管福寿螺的COI和16S rDNA序列具有多态性。福寿螺可能被多次引入海南,其中隐秘福寿螺在海南省首次得到确认,尚未记录到斑点福寿螺的分布。海南省小管福寿螺和隐秘福寿螺的遗传多样性较低。

关键词：遗传多样性系统发育分析单倍型福寿螺海南省

日本血吸虫FKBP12基因的克隆及其免疫组织定位

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中国人兽共患病学报 2006年第3期22卷 236-239,262页

作者：李孜余新炳吴忠道胡旭初广州医学院病原生物学教研室中山大学基础医学院寄生虫学教研室广州510180 中山大学基础医学院寄生虫学教研室

目的克隆日本血吸虫(Sj)FKBP12基因全长cDNA,并进行免疫组织定位。方法从成虫RNA中RT-PCR扩增SjFKBP12基因完整的编码阅读框后,将其分别克隆入pGEX-4T-1和pEGFP-N1载体中;DNA免疫后制备抗血清,间接免疫荧光法对FKBP12进行组织定位。结果... 详细信息

目的克隆日本血吸虫(Sj)FKBP12基因全长cDNA,并进行免疫组织定位。方法从成虫RNA中RT-PCR扩增SjFKBP12基因完整的编码阅读框后,将其分别克隆入pGEX-4T-1和pEGFP-N1载体中;DNA免疫后制备抗血清,间接免疫荧光法对FKBP12进行组织定位。结果将SjFKBP12基因成功克隆入pGEX-4T-1和pEGFP-N1载体中;FKBP12定位于Sj成虫的被膜上。结论成功克隆了SjFKBP12基因,并对FKBP12蛋白在Sj成虫中进行组织定位,为将其进行疫苗等研究打下了基础。

关键词：日本血吸虫中国大陆株 FKBP12 克隆免疫定位

日本血吸虫精氨酸酶新基因的鉴定及作为疫苗的保护性研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第2期24卷 86-91页

作者：李孜余新炳吴忠道胡旭初广州医学院病原生物学教研室广州510182 中山大学基础医学院病原生物学教研室广州510180

目的识别和鉴定日本血吸虫(Sj)精氨酸酶(ARG)新基因,并研究纯化的重组SjARG对Sj感染小鼠的保护性。方法通过巢式PCR,从日本血吸虫尾蚴cDNA文库特异扩增ARG基因cDNA序列的5′端,并用生物信息学进行鉴定;将ARG的完整编码序列(CDS)克隆到pE... 详细信息

目的识别和鉴定日本血吸虫(Sj)精氨酸酶(ARG)新基因,并研究纯化的重组SjARG对Sj感染小鼠的保护性。方法通过巢式PCR,从日本血吸虫尾蚴cDNA文库特异扩增ARG基因cDNA序列的5′端,并用生物信息学进行鉴定;将ARG的完整编码序列(CDS)克隆到pET30a(+)载体,表达并纯化表达产物后,以鸟氨酸-茚三酮法鉴定酶活性;用蛋白质印迹法(Westernblotting)比较重组ARG蛋白与Sj天然ARG蛋白的免疫学特性,间接免疫荧光法对ARG在Sj成虫中的分布进行组织定位;用纯化重组ARG蛋白免疫小鼠(PBS和SjGST作对照),Sj尾蚴攻击感染后,检测SjARG作为疫苗的免疫保护力。结果扩增并鉴定SjARG基因的完整CDS长为1095bp;重组SjARG具有酶活性,并具有与Sj天然ARG蛋白相同的免疫学特性;ARG定位于Sj成虫的肠壁和生殖器官。重组SjARG蛋白免疫后的减虫率和减卵率分别为55.8%和48.8%。SjGST蛋白免疫后的减虫率和减卵率分别为28.6%和6.89%。结论获取并鉴定了SjARG新基因;SjARG比SjGST具有更高的疫苗保护性。

关键词：日本血吸虫精氨酸酶生物学活性疫苗

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医学留学生“寄生虫学”一流课程建设探索

医学教育研究与实践 2024年第2期32卷 177-180页

作者：司开卫王渊刘建新吴锋李小其王军阳程彦斌西安交通大学医学部基础医学院病原生物学与免疫学系陕西西安710061 西安交通大学医学部人才培养处陕西西安710061 西安交通大学医学部医学教育研究所陕西西安710061 西安交通大学医学部基础医学院神经生物学研究所陕西西安710061 西安交通大学医学部研究生实验教学中心陕西西安710061

一流课程是建设“双一流”大学的基石。2019年教育部启动“双万计划”,提出一流课程建设的评价体系,各个高校开展了一流课程建设的高潮。本研究结合留学生医学寄生虫学教学的现状及其专业特点,分析和探讨了西安交通大学建设留学生医学... 详细信息

一流课程是建设“双一流”大学的基石。2019年教育部启动“双万计划”,提出一流课程建设的评价体系,各个高校开展了一流课程建设的高潮。本研究结合留学生医学寄生虫学教学的现状及其专业特点,分析和探讨了西安交通大学建设留学生医学寄生虫学一流课程的目标和方法,通过师资队伍建设、英文教材建设、教学方法提升和评价体系改革等措施,以期提高留学生教学质量、树立良好品牌形象,为西安交通大学的“双一流”建设做出贡献。

关键词：一流课程来华留学生医学寄生虫学

纳米孔测序在病原微生物检测中的应用专家共识

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中国药房 2024年第14期35卷 1673-1682页

作者：张述耀侯铁英黎小妍钟诗龙伍俊妍黄彬中国药理学会治疗药物监测研究专业基层委员会广东省药学会临床治疗精准用药专家委员会《纳米孔测序在病原微生物检测中的应用专家共识》编写组暨南大学附属广州红十字会医院临床精准治疗中心广州510240 华中科技大学协和深圳医院(南山医院) 广东深圳518101 中山大学附属第六医院药学部广州510510 广东省人民医院药学部广州519041 中山大学孙逸仙纪念医院药学部广州510120 中山大学附属第一医院检验科广州510080 不详

目的提高危重症感染性疾病的诊断及救治水平,规范纳米孔测序的临床应用,促进该技术的良性发展。方法由中国药理学会治疗药物监测研究专业基层委员会和广东省药学会临床治疗精准用药专家委员会发起并组织多学科专家,采用名义群体法讨论... 详细信息

目的提高危重症感染性疾病的诊断及救治水平,规范纳米孔测序的临床应用,促进该技术的良性发展。方法由中国药理学会治疗药物监测研究专业基层委员会和广东省药学会临床治疗精准用药专家委员会发起并组织多学科专家,采用名义群体法讨论确定共识编写大纲,形成共识初稿;采用德尔菲法进行专家咨询,对专家意见进行分析和修订,形成共识。结果与结论最终制定的《纳米孔测序在病原微生物检测中的应用专家共识》涵盖了靶向测序、宏基因组测序和全基因组测序等方向,对纳米孔测序的样本采集与保存、检测过程、生物信息学分析、报告解读等全流程进行了规范,并对其中的关键问题给出了推荐意见。

关键词：第三代测序纳米孔测序病原微生物危重症感染临床检验微生物学诊断

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食源性寄生虫病流行趋势、研究与发展方向

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第6期33卷 436-442页

作者：黄艳余新炳中山大学中山医学院病原生物学教研室广州510080

随着经济发展、生态环境改变、人口和物资流动日趋频繁,饮食来源和方式多样化,食源性寄生虫病流行呈现新的特点,已成为影响食品安全和人民健康的主要因素之一,成为我国及全球亟待解决的重要公共卫生问题之一。本文综述了我国及全球较为... 详细信息

随着经济发展、生态环境改变、人口和物资流动日趋频繁,饮食来源和方式多样化,食源性寄生虫病流行呈现新的特点,已成为影响食品安全和人民健康的主要因素之一,成为我国及全球亟待解决的重要公共卫生问题之一。本文综述了我国及全球较为重要的一些食源性寄生虫病的流行情况,总结了目前食源性寄生虫病流行的特点、趋势,以及食源性寄生虫病的防控技术研究、致病机制研究的现状与缺陷。此外,也对食源性寄生虫病的诊断与检测、基础机制、传播阻断技术及防治策略研究的发展方向和需求提出了一些看法。

关键词：食源性寄生虫流行病学诊断疫苗检测

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华支睾吸虫表膜相关抗原重组表达载体的构建

中国公共卫生 2004年第10期20卷 1156-1158页

作者：何东苟余新炳吴忠道徐劲吴德胡旭初陈守义中山大学基础医学院病原生物学部广州510089 广州医学院病原生物学教研室

目的　通过筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因 ,并构建 2 0 8kDa华支睾吸虫表膜相关抗原(CSTA2 0 8)重组表达载体 ,为进一步研究其功能及其应用奠定基础。方法　对华支睾吸虫cDNA文库进行筛选 ,通过NCBI和ExPasy网站的Blast程序进行... 详细信息

目的　通过筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因 ,并构建 2 0 8kDa华支睾吸虫表膜相关抗原(CSTA2 0 8)重组表达载体 ,为进一步研究其功能及其应用奠定基础。方法　对华支睾吸虫cDNA文库进行筛选 ,通过NCBI和ExPasy网站的Blast程序进行序列比对 ,识别华支睾吸虫新基因 ,并应用Motifscan、NCBIConservedDo mainSearch等程序对其进行结构域分析。将所发现的华支睾吸虫表膜相关抗原基因编码区定向克隆到原核及真核表达载体PGEX - 4T - 1和PcDNA3上 ,构建的PGEX - 4T - 1-CSTA2 0 8、PcDNA3-CSTA2 0 8重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实。结果　发现华支睾吸虫表膜相关抗原基因 ,完整阅读框含 5 5 5个碱基 ,编码 184个氨基酸 ,理论分子量为 2 0 8kDa ,理论pI为 4 33。序列分析表明 ,华支睾吸虫CSTA2 0 8编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性 ,CSTA2 0 8具有完整的钙结合蛋白保守功能域。所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符。结论　发现华支睾吸虫表膜相关抗原基因。

关键词：华支睾吸虫表膜相关抗原克隆