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重组蛋白质制品注射液渗透压摩尔浓度值测定的能力验证

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中国新药杂志 2019年第20期28卷 2482-2485页

作者：秦玺丁有学张河战赵萌刘兰史新昌饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:评价国内实验室重组蛋白制品注射液渗透压检验检测能力。方法:模拟重组蛋白制品设计并制备渗透压摩尔浓度参考品,组织来自不同省(市)、自治区的34家实验室进行协作检测,以2015年版《中华人民共和国药典》四部通则0632方法为检测方... 详细信息

目的:评价国内实验室重组蛋白制品注射液渗透压检验检测能力。方法:模拟重组蛋白制品设计并制备渗透压摩尔浓度参考品,组织来自不同省(市)、自治区的34家实验室进行协作检测,以2015年版《中华人民共和国药典》四部通则0632方法为检测方法,汇总结果后进行技术分析和统计分析,评估结果用基于Robust统计量的Z比分数对结果进行评价和报告。结果:各实验室检测均值|Z|分数值>3的实验室有1家(占2.9%,n=34);各实验室全部检测值|Z|分数值>3的有1家。总体上讲,多数实验室(33/34)检测结果良好,但有1家实验室(1/34,编号444)检测结果偏离较大。结论:多数实验室的能力验证结果令人满意,可以准确地给出检测值,并且与其他实验室的数据基本保持一致,本次能力验证为重组蛋白制品检验能力普及奠定基础。

关键词：能力验证渗透压统计分析技术评价

重组白介素-15融合蛋白成像毛细管等电聚焦电泳谱图分析

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中国药学杂志 2020年第9期55卷 745-754页

作者：史新昌李响于雷郭莹李永红裴德宁饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的通过对成像毛细管等电聚焦电泳谱图分析探讨重组白介素-15融合蛋白糖链类型和构成比例。方法通过建立相应的数学模型,分析重组白介素-15融合蛋白的等电聚焦电泳检测谱图、去唾液酸等电聚焦电泳检测谱图和去N糖链等电聚焦电泳检测谱... 详细信息

目的通过对成像毛细管等电聚焦电泳谱图分析探讨重组白介素-15融合蛋白糖链类型和构成比例。方法通过建立相应的数学模型,分析重组白介素-15融合蛋白的等电聚焦电泳检测谱图、去唾液酸等电聚焦电泳检测谱图和去N糖链等电聚焦电泳检测谱图,并根据各峰面积和等电点的相互关系,用最小二乘法进行组成拟合分析,明确峰面积和等电点分布相互关系。结果确认间隔1个峰模型的合理性,并根据该模型获得一系列基础相关数据,包括该蛋白的表观m值25.53个基准(R);该蛋白的表观n值28.83R;唾液酸的表观m值0.86(0.855)R,表观n值0.12(0.119)R;N乙酰氨基葡萄糖(未区分与N乙酰半乳糖胺的不同)表观n值0.06(0.061)R;去N糖链后形成的羧基表观m值0.19(0.186)R。该蛋白质糖构成的相关信息,包括唾液酸化度为;摩尔比约1.83;蛋白原型占比约8.3%、含N糖链单修饰占比约19.8%、含N糖链双修饰约28.4%、含N糖链三修饰占比约23.7%;带唾液酸O糖链修饰占比19.8%;主要糖型为G0(海藻糖F)、G1(F)、G2(F)、G1A1(F)和G2A1(F)。结论糖链的结构复杂,但也有一定重复性和规律性,希望通过本实验的研究,可以快速勾勒出糖蛋白糖链轮廓,增进对糖蛋白认识和对蛋白相互作用的研究。

关键词：成像毛细管等电聚焦电泳重组IL-15 融和蛋白等电点异质性等电点异构体 N-糖基化修饰 O-糖基化修饰唾液酸

流感疫苗生产用新型细胞基质 MDCK细胞的质量控制研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2013年第12期33卷 943-949页

作者：吴雪伶冯建平樊金萍李秀华付瑞孟淑芳中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的：对流感疫苗生产用新型细胞基质MDCK细胞进行全面地质量控制检测，并对检测项目及结果进行汇总和分析。方法根据《中国药典》三部，对待检MDCK细胞进行细胞鉴别、内、外源因子和致瘤性检测，同时根据国际新要求对MDCK细胞的裂解物... 详细信息

目的：对流感疫苗生产用新型细胞基质MDCK细胞进行全面地质量控制检测，并对检测项目及结果进行汇总和分析。方法根据《中国药典》三部，对待检MDCK细胞进行细胞鉴别、内、外源因子和致瘤性检测，同时根据国际新要求对MDCK细胞的裂解物及细胞DNA的致癌性进行检测。结果待检MDCK细胞为贴壁、上皮样细胞形态，犬细胞来源，平均染色体数为80±1；未发现细菌、真菌、支原体污染，内、外源病毒的污染检测结果显示，待检细胞中未发现有致细胞病变、产生血吸附、血凝或致动物死亡的非特异性病毒，逆转录病毒、牛源性病毒和犬特异性病毒检测均为阴性；取107个活细胞接种每只裸鼠，观察12周后，接种部位未发现结节，大体解剖显示主要脏器亦未出现结节，病理检查显示与对照组无明显差异，细胞未显示具有致瘤性。以等量细胞的裂解物和细胞DNA接种裸鼠，均未致裸鼠产生结节，病理检查结果与对照组无明显差异，提示细胞未显示致癌性。结论待检MDCK细胞具有生产流感疫苗的潜在可能性。

关键词： MDCK 细胞鉴别内外源病毒致瘤性和致癌性

液质联用分析重组人尿激酶原的糖基修饰异质性

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药学学报 2020年第11期55卷 2713-2718页

作者：陶磊于雷丁有学毕华饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

应用超高效液相色谱-质谱联用技术,对重组人尿激酶原的糖基修饰异质性进行了分析鉴定。首先通过测定切除N-糖基前、后完整蛋白的相对分子质量,确定异质性的来源;然后在肽段水平鉴定糖基化位点并确定不同O-糖肽的比例;最后通过绘制N-糖图... 详细信息

应用超高效液相色谱-质谱联用技术,对重组人尿激酶原的糖基修饰异质性进行了分析鉴定。首先通过测定切除N-糖基前、后完整蛋白的相对分子质量,确定异质性的来源;然后在肽段水平鉴定糖基化位点并确定不同O-糖肽的比例;最后通过绘制N-糖图谱,对N-糖基进行定性定量分析。结果显示,该蛋白的异质性主要由糖基化修饰造成。T18全部发生岩藻糖化;6.4%的S138/139发生O-糖基化,糖型主要有2种,比例分别为6.0%和0.4%;N302全部发生N-糖基化,糖型有十多种,以A2F和A3F最多,二者约占总比例的80%。本文对该制品糖基修饰异质性的分析可为其质量标准的提高提供数据参考。

关键词：液质联用重组蛋白尿激酶原糖基化异质性

第2代WHO百日咳毒素国际标准品的协作标定

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中国新药杂志 2018年第16期27卷 1855-1860页

作者：卫辰晁哲吴燕王丽婵骆鹏马霄中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的:建立第2代WHO百日咳毒素国际标准品。方法:以第1代WHO百日咳毒素国际标准品为协作标定的标准品,对英国国家生物制品检定所提供的待标品和中国食品药品检定研究院内部参考品进行国际单位值测定和稳定性测定。测定方法为组胺致敏试验... 详细信息

目的:建立第2代WHO百日咳毒素国际标准品。方法:以第1代WHO百日咳毒素国际标准品为协作标定的标准品,对英国国家生物制品检定所提供的待标品和中国食品药品检定研究院内部参考品进行国际单位值测定和稳定性测定。测定方法为组胺致敏试验、CHO细胞簇集试验以及3项生化试验方法。结果:中国食品药品检定研究院完成了组胺致敏、CHO细胞簇集2项试验以及1项生化试验。结论:NIBSC经过对来自12个国家的14个实验室的结果进行统计学处理后,赋值第2代WHO百日咳毒素国际标准品组胺致敏活性为每支1 813 IU、CHO细胞簇集活性为每支680 IU,储存和运输稳定性符合要求。

关键词：国际标准品百日咳毒素组胺致敏 CHO细胞簇集

液质联用进行干扰素理化对照品的一级结构鉴定及比对研究

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药学学报 2015年第1期50卷 75-80页

作者：陶磊裴德宁韩春梅陈伟饶春明王军志中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

应用UPLC与质谱联用技术对5个厂家生产的重组人干扰素理化对照品进行一级结构鉴定及比对研究。通过测定质谱分子量及胰蛋白酶酶解肽图,对其氨基酸序列进行验证,并对二硫键连接方式等翻译后修饰进行分析鉴定。结果 5份对照品的实测分子... 详细信息

应用UPLC与质谱联用技术对5个厂家生产的重组人干扰素理化对照品进行一级结构鉴定及比对研究。通过测定质谱分子量及胰蛋白酶酶解肽图,对其氨基酸序列进行验证,并对二硫键连接方式等翻译后修饰进行分析鉴定。结果 5份对照品的实测分子量均与理论一致;液质肽图结果显示各样品的氨基酸序列均与理论一致;4批样品的二硫键连接方式为Cys1-Cys98、Cys29-Cys138,1批为Cys29-Cys139、Cys86-Cys99;部分样品存在N-末端"+Met"、乙酰化及蛋氨酸氧化等翻译后修饰。液质联用技术可用于干扰素理化对照品的一级结构鉴定及不同厂家产品的比对研究。

关键词：液质联用干扰素一级结构鉴定比对研究

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假病毒检测平台的建立以及应用

中华微生物学和免疫学杂志 2013年第1期33卷 40-46页

作者：王佑春聂建辉吴雪伶刘强中国食品药品检定研究院/卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

传统的病毒学方法对病毒特性的分析以及相关检测发挥了重要的作用，但由于病毒某些特性的限制，使其应用也得到了相应的限制，如传统的HIV培养方法可以检测病毒所诱导的中和抗体以及分析病毒耐药表型等，但其传统的培养需要在Ⅲ级生物... 详细信息

传统的病毒学方法对病毒特性的分析以及相关检测发挥了重要的作用，但由于病毒某些特性的限制，使其应用也得到了相应的限制，如传统的HIV培养方法可以检测病毒所诱导的中和抗体以及分析病毒耐药表型等，但其传统的培养需要在Ⅲ级生物安全实验室进行，而且耗时且操作繁琐；人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus，HPV）很难在体外进行培养，不能用细胞培养的方法检测中和抗体，而其他的检测方法所检测的抗体主要是结合抗体；其他一些病毒如痘病毒、腺病毒、腺相关病毒等虽然可以用传统的培养方法检测中和抗体，但比较繁琐，而且不能高通量进行检测。

关键词：检测平台假病毒应用生物安全实验室中和抗体细胞培养人乳头瘤病毒腺相关病毒

建立我国HIV阳转血浆盘并评价HIV酶免血筛试剂窗口期

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第7期36卷 528-533页

作者：黄维金宋爱京许四宏王佑春中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的：建立我国HIV系列阳转血清盘并用其评价HIV酶免血筛诊断试剂的窗口期。方法收集HIV感染者的系列血清,利用Western blot确认试剂、HIV抗原定量检测试剂、核酸定量检测试剂等检测系列样品,RT-PCR的方法扩增HIV env序列并测序和分型,... 详细信息

目的：建立我国HIV系列阳转血清盘并用其评价HIV酶免血筛诊断试剂的窗口期。方法收集HIV感染者的系列血清,利用Western blot确认试剂、HIV抗原定量检测试剂、核酸定量检测试剂等检测系列样品,RT-PCR的方法扩增HIV env序列并测序和分型,以确认HIV感染。对国内外5种第四代和14种第三代酶免HIV血液筛查诊断试剂的检测窗口期进行评价。结果共收集确认8套HIV感染者的阳转系列血浆,AE亚型6套,B亚型1套,未分型1套,共含有36份样品。用HIV系列阳转血清盘评价发现四代抗原抗体联合检测试剂较三代抗体检测试剂具有更早的窗口期检测能力,前者评分9.4分,后者3.6分,差异具有统计学意义（t=8.547,P〈0.01）；部分国产四代试剂质量已经达到进口试剂的水平；核酸试剂的窗口期检测能力高于酶免试剂,在3套血清盘中至少提高2周以上；确认试剂的灵敏度低于血筛试剂的灵敏度；4/5四代试剂在检测感染早期样品时会出现检测信号值/界值（ S/CO）下降的情况,存在第二窗口期漏检风险。结论本研究建立了8套我国的HIV系列阳转血清盘,评价发现我国HIV血液筛查酶免诊断试剂窗口期检测能力存在差异。

关键词：人类免疫缺陷病毒诊断窗口期血液筛查

无细胞百日咳疫苗小鼠中和抗体法的建立及效力评价验证

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中华微生物学和免疫学杂志 2018年第7期38卷 535-541页

作者：卫辰晁哲吴燕王丽婵骆鹏马霄中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的建立一种元细胞百日咳疫苗的功能性抗体检测方法，为无细胞百日咳疫苗原液及成品的生产一致性评价和效力评价提供一种便捷有效的解决方案。方法优化并使用CHO细胞簇集试验方法检测鼠免疫血清的百日咳毒素中和抗体滴度。结果确定疫... 详细信息

目的建立一种元细胞百日咳疫苗的功能性抗体检测方法，为无细胞百日咳疫苗原液及成品的生产一致性评价和效力评价提供一种便捷有效的解决方案。方法优化并使用CHO细胞簇集试验方法检测鼠免疫血清的百日咳毒素中和抗体滴度。结果确定疫苗样品以1／5人用剂量腹腔免疫20～24g、5周龄的雌性NIH小鼠10只，4周后采血分离血清，倍比稀释血清用0．1IU／ml的百日咳毒素国家参考品中和2h，加入到预先培养的CHO细胞孔中孵育48h后判定簇集结果，最终不簇集孔的血清稀释倍数的几何均值即为样品中和抗体滴度。不同工艺无细胞百日咳疫苗的中和抗体滴度有显著性差异；不同工艺无细胞百日咳疫苗改良脑腔攻击试验结果通过与不通过的产品中和抗体有明显区分度。结论百日咳毒素中和抗体法大幅减少动物使用量，CHO细胞簇集试验具备一定的重复性和精密性，可以满足不同工艺无细胞百日咳疫苗成品及原液的生产一致性和效力的监测和初步评价。

关键词：百日咳毒素无细胞百日咳疫苗中和抗体 CHO细胞效力试验