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A型塞内卡病毒2C蛋白通过STING调控IFNβ、TNF-α和IL-6的表达

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微生物学通报 2023年第5期50卷 2087-2098页

作者：王梦瑶张瑞谭小雨游青马潇雨周泷柏玲张志雄李彦敏张志东西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

【背景】A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是新发猪塞内卡病毒病的病原,属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)塞内卡病毒属(Senecavirus)的单股正链RNA病毒。可引起新生仔猪死亡和成年猪口、蹄部出现水泡。先天免疫是宿主抵御病毒入... 详细信息

【背景】A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是新发猪塞内卡病毒病的病原,属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)塞内卡病毒属(Senecavirus)的单股正链RNA病毒。可引起新生仔猪死亡和成年猪口、蹄部出现水泡。先天免疫是宿主抵御病毒入侵的第一道防线,但SVA与宿主抗病毒先天免疫的相互作用机制尚不清楚。【目的】探究SVA非结构蛋白2C在先天免疫应答中的作用机制。【方法】利用SVA感染和通过在猪PK-15细胞中过表达SVA 2C蛋白,利用RT-qPCR和Western blotting分析2C蛋白对细胞因子表达及其关键信号通路的影响。【结果】RT-qPCR检测发现,SVA感染PK-15细胞导致IFNβ、TNF-α和IL-6表达的显著升高;同时,SVA感染导致TBK1和NF-κB的磷酸化。进一步的研究发现,SVA的2C蛋白能够激活TBK1和NF-κB磷酸化,并诱导IFNβ、TNF-α和IL-6的表达;2C蛋白能够激活抗DNA病毒感染关键蛋白干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING)磷酸化,敲除STING抑制TBK1、NF-κB的磷酸化和IFNβ、TNF-α、IL-6的表达。【结论】本研究初步揭示了SVA 2C蛋白通过激活STING诱导天然免疫应答的作用机制,揭示了STING参与调控RNA病毒SVA介导的免疫应答的功能,为抗病毒药物和疫苗的研发提供了理论基础。

关键词： A型塞内卡病毒天然免疫应答 2C蛋白细胞因子干扰素基因刺激因子

2020年~2021年我国副猪嗜血杆菌和链球菌的血清型、耐药基因型流行情况分析

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中国预防兽医学报 2022年第10期44卷 1045-1051,1065页

作者：董婉玉王馨雨张聚民王晴雨肖敏任华卢昌周莹珊杜静于浩然仲伟宋厚辉王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 杭州市临安区畜牧农机发展中心浙江杭州311300 江西正邦农业科学院江西南昌330096

为了解我国副猪嗜血杆菌(HPS)和猪链球菌(SS)血清型的流行趋势,本研究利用PCR对2020年~2021年国内分离的52株HPS和69株SS分别检测二者的血清型;通过查阅2014年~2020年国内外文献报道的402株HPS和189株SS的血清型,并与上述分离的HPS、SS... 详细信息

为了解我国副猪嗜血杆菌(HPS)和猪链球菌(SS)血清型的流行趋势,本研究利用PCR对2020年~2021年国内分离的52株HPS和69株SS分别检测二者的血清型;通过查阅2014年~2020年国内外文献报道的402株HPS和189株SS的血清型,并与上述分离的HPS、SS的血清型作比较,分析二者血清型的流行趋势。结果显示,2020年~2021年HPS主要优势血清型占比由高到低依次为12>4=5>13型,SS主要优势血清型占比由高到低依次为2或1/2>5>不确定型(US)>8=18>27>15型;文献检索结果显示:2014年~2020年HPS主要优势血清型占比从高到低依次为4>5>US>13>14>7型,SS主要优势血清型为2或1/2>7>9>US。表明血清4、5、13型仍是HPS的优势血清型,且12型升高了28%;血清2或1/2仍然是我国SS的优势血清型,且5、15、18、27型明显增加,7和9型减少,US型仍然较高。采用K-B法检测HPS与SS分离株的耐药性,采用PCR检测二者的耐药基因(7大类共27种耐药基因),并分析二者的耐药基因与耐药表型的相关性。药敏试验结果显示,两类分离菌中对β-内酰胺类、大环内酯类和磺胺类药物耐药的菌株高达88.31%(68/77),对氨基糖苷类和四环素类药物耐药的菌株分别约为80.52%(62/77)和76.62%(59/77),对酰胺醇类和喹诺酮类药物耐药的菌株较少。且二者均存在严重的多重耐药性,其中双重耐药的菌株占比最高为28.57%(22/77),4重、5重、6重及8重耐药的菌株均为14.29%(11/77)。耐药基因检测结果显示,两类细菌均检出了β-内酰胺类、氨基糖苷类、磺胺类和Ⅰ类整合子4大类耐药基因,特别是β-内酰胺类的bla-TEM、磺胺类的sulI耐药基因检出率均为100%。其中100%HPS分离株检出氨基糖苷类的Aph(3’)-Ia、Ⅰ类整合子的3’CS和Int1耐药基因;100%SS分离株检出Ⅰ类整合子的VR耐药基因。两株菌耐药基因与耐药表型相关性分析结果显示,β-内酰胺类和磺胺类耐药表型与耐药基因之间的符合率达88%;氨基糖苷类耐药表型与耐药基因之间的符合率为72%;四环素类和喹诺酮类耐药基因和耐药表型之间不符合。上述结果表明,HPS和SS分离株的耐药性均较强,且其部分耐药表型与其携带的耐药基因相关性较强。本研究为规模化养殖场HPS和SS感染的临床用药及疫苗研发提供了数据支持,并为后续相关疾病的防控奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌链球菌血清型耐药基因流行趋势

板蓝根多糖IIP-A-1和IIP-2作为疫苗佐剂的免疫原性

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中国药理学与毒理学杂志 2019年第1期33卷 22-29页

作者：李海霞刘坤璐贾培媛于卫立武军华胡涛王勃王玉霞单俊杰军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850 广西医科大学药学院广西南宁530021 中国科学院过程工程研究所北京100190

目的研究板蓝根中均一多糖IIP-A-1和IIP-2作为疫苗佐剂的免疫原性。方法 (1)分别用钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,与IIP-A-1和IIP-2分别偶联,制备免疫抗原KLH-IIP-A-1和KLH-IIP-2及检测抗原BSA-IIP-A-1和BSA-IIP-2。K... 详细信息

目的研究板蓝根中均一多糖IIP-A-1和IIP-2作为疫苗佐剂的免疫原性。方法 (1)分别用钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,与IIP-A-1和IIP-2分别偶联,制备免疫抗原KLH-IIP-A-1和KLH-IIP-2及检测抗原BSA-IIP-A-1和BSA-IIP-2。KLH-IIP-A-1和KLH-IIP-2(每只家兔300μg)分别与弗氏佐剂(每只0.65 mL)联用,皮内注射免疫家兔2次,间隔28 d;第2次免疫后14 d,分别用KLH,BSA和BSA-IIP-A-1或BSA-IIP-2 5 mg·L^(-1)包被酶联反应板,ELISA检测家兔血清中抗IIP-A-1和IIP-2抗体。(2)IIP-A-1和IIP-2(每只500μg)分别im免疫小鼠3次,每次间隔28 d;每次免疫后14 d,用BSA-IIP-A-1或BSA-IIP-2 5 mg·L^(-1)包被酶联反应板,ELISA检测小鼠血清中抗IIP-A-1或IIP-2抗体。(3)IIP-A-1和IIP-2为佐剂(每只200μg),分别配伍口蹄疫病毒灭活疫苗(Aftosa,每只2μg)im免疫小鼠2次;IIP-2(每只200μg)配伍H1N1病毒裂解疫苗(每只3μg)im免疫3次,配伍乙肝病毒重组亚单位蛋白乙肝病毒表面抗原(HBsAg,每只2μg)im免疫小鼠2次;每次间隔28 d。末次免疫后14 d,用KLH-IIP-A-1或KLH-IIP-2 2 mg·L^(-1)包被酶联反应板,ELISA检测小鼠血清中抗IIP-A-1或IIP-2抗体。结果 (1)KLH-IIP-A-1和KLH-IIP-2分别与弗氏佐剂联用免疫家兔2次,可产生抗KLH,IIP-A-1或IIP-2抗体,抗KLH滴度≥1∶50 000,抗IIP-A-1抗体滴度≥1∶20 000,抗IIP-2抗体滴度≥1∶100 000。(2)IIP-A-1和IIP-2分别单独肌注免疫小鼠3次,仅检测出抗IIP-2 IgG_1抗体,滴度为1∶1000。(3)IIP-A-1作为佐剂配伍Aftosa疫苗免疫小鼠后,未检测出抗IIP-A-1 IgG_1抗体。IIP-2作为佐剂分别配伍H1N1和Aftosa疫苗免疫小鼠后,均可检测出抗IIP-2 IgG_1抗体,滴度均为1∶400;配伍HBsAg抗原免疫小鼠后,检测出低水平的抗IIP-2 IgG_1抗体,滴度为1∶100。结论作为半抗原,板蓝根多糖IIP-A-1和IIP-2连接KLH后,可刺激家兔产生高滴度的抗IIP-A-1和IIP-2抗体。作为佐剂,IIP-A-1无免疫原性;IIP-2具有一定的免疫原性,分别与Aftosa疫苗、H1N1病毒裂解疫苗和HbsAg配伍免疫小鼠,均产生抗IIP-2 IgG_1型抗体。

关键词：板蓝根多糖佐剂抗体

基于集成深度学习框架的新型冠状病毒感染治疗药物活性预测

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中国药业 2024年第14期33卷 47-53页

作者：许强罗杰斯杨明张永林川北医学院附属医院四川南充637000 西南医科大学四川泸州646000

目的建立预测新型冠状病毒感染治疗药物活性的集成深度学习框架。方法采用卷积神经网络(CNN)和递归神经网络(RNN)从简化分子线性输入规范(SMILES)字符串序列信息中筛选出代表性的特征标识,以深度神经网络(DNN)从离散特征信息中提取更... 详细信息

目的建立预测新型冠状病毒感染治疗药物活性的集成深度学习框架。方法采用卷积神经网络(CNN)和递归神经网络(RNN)从简化分子线性输入规范(SMILES)字符串序列信息中筛选出代表性的特征标识,以深度神经网络(DNN)从离散特征信息中提取更高级别的抽象特征,均以网格筛选法生成1个主框架模型和7个离散特征模型的最优结构,构成8种架构的127种可能组合。通过准确率(ACC)、F、召回率(Recall)、精确度(PRE)和马修斯相关系数(MCC)5个标准指标评估模型的预测性能。建立和维护最终框架。结果最终建立了1个以BiLSTM为集成深度学习框架的核心架构和4个不同的离散特征模型组成的集成深度学习模型,训练集ACC为72.84%,F为69.70,Recall为72.21%,PRE为68.03,MCC为0.456 9;测试集中成功预测了23种可能对新型冠状病毒感染有治疗作用的药物。结论集成深度学习框架相较于单个模型具有更强的预测能力,该研究为新型冠状病毒感染治疗药物的筛选提供了新的选择。

关键词：集成深度学习框架新型冠状病毒感染药物活性神经网络自动生物序列

猴痘病毒E2L蛋白的表达、纯化及免疫原性评价

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南方农业学报 2023年第10期54卷 3056-3063页

作者：贾梦乐熊嘉琦杨领弟王毅豪孙静婷王婷黎美凤孔令保彭棋江西农业大学生物科学与工程学院/南昌市动物病毒与基因工程重点实验室/江西农业大学病原微生物研究所江西南昌330045

【目的】构建猴痘病毒E2L蛋白原核表达载体,经诱导表达及纯化鉴定后免疫接种昆明小鼠评价其免疫原性,为猴痘病毒诊断试剂、疫苗和特异性治疗药物的研发打下基础。【方法】根据GenBank已公布的猴痘病毒基因组序列优化密码子后合成E2L基因... 详细信息

【目的】构建猴痘病毒E2L蛋白原核表达载体,经诱导表达及纯化鉴定后免疫接种昆明小鼠评价其免疫原性,为猴痘病毒诊断试剂、疫苗和特异性治疗药物的研发打下基础。【方法】根据GenBank已公布的猴痘病毒基因组序列优化密码子后合成E2L基因,将其克隆至表达载体pET-28a(+)上构建原核表达载体pET-28a-E2L,然后转化大肠杆菌BL21(DE3)受态细胞,采用控制变量的方法对融合蛋白最佳诱导表达条件进行优化,通过SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。融合蛋白经His-Bind柱亲和层析纯化后,经腹腔注射免疫昆明小鼠,从免疫当天(第0 d)开始每隔7 d通过断尾法采集昆明小鼠血清1次,采用ELISA检测血清抗体效价。【结果】以构建的原核表达载体pET-28a-E2L转化BL21(DE3)受态细胞后,经IPTG诱导,能成功表达获得融合蛋白E2L,且主要以包涵体的形式进行表达。融合蛋白E2L的最佳诱导表达条件为40℃下以1.0 mmol/L IPTG诱导16 h,通过His-Bind柱亲和层析纯化时的最佳咪唑洗脱浓度为100 mmol/L。昆明小鼠免疫试验结果表明,纯化后的融合蛋白E2L能诱导昆明小鼠产生较高水平的体液免疫,至免疫第42 d昆明小鼠血清仍然维持较高抗体水平,抗体效价高达1∶70400,说明融合蛋白E2L具有良好的免疫原性。【结论】猴痘病毒E2L蛋白在原核表达系统能实现高效表达,且以纯化后的融合蛋白E2L免疫昆明小鼠能产生较强的体液免疫,表明具有良好的免疫原性,可用于新型猴痘病毒检测方法及预防疫苗的研发。

关键词：猴痘病毒 E2L蛋白原核表达免疫原性

一种新的分化心肌细胞筛选策略:稳定表达αMHC-Bla^r-2A-EGFP-Rex-mCherry-2A-neo融合基因的人胚胎干细胞系的建立及其向心肌细胞定向分化的鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2012年第3期28卷 276-282页

作者：魏晋牟晓宁马跃蒋曹德西南大学生命科学学院重庆400715 中国科学院生物物理研究所北京100101 中国科学院研究生院北京100080 西南大学动物科技学院重庆400715

心肌梗死是威胁人类健康的重要疾病之一,胚胎干细胞来源的心肌细胞移植是目前治疗心肌梗死的研究热点.但是由于受到分化的心肌细胞纯度的影响,限制了心肌分化的机理研究以及临床应用.本实验构建含有心肌特异性启动子α-MHC启动的灭瘟素(... 详细信息

心肌梗死是威胁人类健康的重要疾病之一,胚胎干细胞来源的心肌细胞移植是目前治疗心肌梗死的研究热点.但是由于受到分化的心肌细胞纯度的影响,限制了心肌分化的机理研究以及临床应用.本实验构建含有心肌特异性启动子α-MHC启动的灭瘟素(Blasticidin,简称Blar)抗性基因及增强绿色荧光蛋白(EGFP)的慢病毒表达载体αMHC-Blar-2A-EGFP-Rex-mCherry-2A-neo.应用慢病毒转染技术将慢病毒转染到人胚胎干细胞(hESCs),胚胎干细胞特异性启动子Rex启动mCherry和neo抗性蛋白的表达.经过G418药物筛选,建立G418和mCherry阳性的细胞系.通过PCR及流式细胞术,进一步鉴定稳定转染的hESCs细胞系;核型分析表明,该细胞系在建立过程中仍保持细胞核型的稳定.在诱导稳定转染的hESCs向心肌细胞分化的实验中,分化的心肌细胞表达心肌细胞特异的肌钙蛋白(cTnT),同时具有EGFP和Blasticidin药物筛选的双标记.本实验建立的这一细胞系可用于心肌细胞的纯化,为深入研究心肌发生发育的关键调控机制及临床应用奠定基础.

关键词：心肌特异性 α肌球蛋白重链启动子慢病毒人胚胎干细胞心肌细胞

3C样蛋白酶:重要抗PEDV药物的筛选靶标

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中国预防兽医学报 2023年第1期45卷 105-111页

作者：刘怡炜包淋斌徐像文孙静杨杨杨永春苏明俊宋厚辉浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 广昌县农业农村局浙江广昌344900

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种有囊膜的单股正链RNA病毒,属于套式病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)成员。由于冠状病毒的RNA酶缺乏校正功能,PEDV等冠状病毒... 详细信息

关键词：猪流行性腹泻病毒冠状病毒科 PEDV 冠状病毒属校正功能

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奶水牛同期发情效果的影响因素研究

中国畜牧杂志 2023年第5期59卷 174-177页

作者：黄荣春谭正准黄健李辉陈明棠于农淇曾令湖梁淦冯超覃广胜中国农业科学院广西水牛研究所广西水牛遗传繁育重点试验室广西南宁530001

本实验旨在探讨不同药物处理、季节和生产阶段对奶水牛同期发情效果的影响,为进一步优化并提高同期发情效果提供依据。选择2~8岁、体重350~700 kg的本地奶水牛90头(后备牛40头、经产牛50头)。试验一:选取33头后备牛,随机分为2组,采用GnR... 详细信息

本实验旨在探讨不同药物处理、季节和生产阶段对奶水牛同期发情效果的影响,为进一步优化并提高同期发情效果提供依据。选择2~8岁、体重350~700 kg的本地奶水牛90头(后备牛40头、经产牛50头)。试验一:选取33头后备牛,随机分为2组,采用GnRH+PGF_(2α)+GnRH法(GnRH组)和CIDR+PGF_(2α)法(CIDR组)处理,在秋季观察其同期发情效果;试验二:选取40头后备牛,采用GnRH+PGF_(2α)+GnRH法处理,观察春季、秋季和冬季奶水牛同期发情效果;试验三:选用17头后备牛和50头经产牛,采用GnRH+PGF_(2α)+GnRH法处理,观察不同生产阶段奶水牛同期发情效果。结果表明:GnRH组和CIDR组的发情率、排卵率分别为94.12%、81.25%和81.25%、76.92%;冬季、秋季发情率(100.00%、94.12%)均高于春季(58.33%)(P0.05);后备牛和经产牛的发情率分别为94.12%和96.00%(P>0.05),排卵率分别为81.25%和97.92%(P<0.05)。可见,GnRH组和CIDR组的同期发情效果无显著差异;季节会影响奶水牛的同期发情效果,秋、冬季进行同期发情较为适宜;经产牛的同期发情效果比后备牛好,可能是后备牛生殖系统还未发育成熟,一定程度上影响其排卵。

关键词：奶水牛同期发情药物处理季节生产阶段

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分子蒸馏技术制备米糠油植物甾醇的工艺研究

中国食品添加剂 2010年第5期21卷 216-219页

作者：黄妙玲卢生奇王小会朱龙平杨伟军冀红斌杨得坡中山大学药学院生药学与天然药物化学实验室广州510006 南宁市轻工食品研究所南宁530031 国家健康科技产业基地中山市尤利卡天然药物有限公司中山528437

植物甾醇是一类具有独特生理活性的天然物质,广泛存在于生物体内,主要来源于植物油脂中。常规的甾醇制备工艺存在产品收率低、溶剂消耗量大、回收困难的缺点。分子蒸馏技术是一种新型高效的液-液分离技术,具有操作温度低、分离效率高、... 详细信息

植物甾醇是一类具有独特生理活性的天然物质,广泛存在于生物体内,主要来源于植物油脂中。常规的甾醇制备工艺存在产品收率低、溶剂消耗量大、回收困难的缺点。分子蒸馏技术是一种新型高效的液-液分离技术,具有操作温度低、分离效率高、溶剂消耗少等特点。本文采用分子蒸馏技术,通过二次蒸馏对米糠油中植物甾醇的纯化工艺进行研究,通过考察蒸馏温度、进料速率和刮膜转速三个工艺参数对重相中植物甾醇含量的影响,确定了最佳工艺条件:在预热温度60℃和冷凝面温度为10℃,进料速率为2mL/min以及刮膜转速为250r/min的条件下,一、二级蒸馏的最佳蒸馏温度和压力分别为80℃、50Pa和160℃、1Pa。在此工艺条件下,采用分光光度法对植物甾醇含量进行测定,结果显示,甾醇含量由原料油中的3.15%提高到了61.37%。

关键词：分子蒸馏米糠油植物甾醇分光光度法