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CHO细胞表达系统研究新进展

生物工程进展 2000年第4期20卷 23-25,22页

作者：申烨华耿信笃西北大学现代分离科学研究所陕西省现代分离科学重点实验室西安710069

中国仓鼠卵巢细胞 (ChineseHamsterOvaryCell)是目前重组糖基蛋白生产的首选体系。本文综述近几年来该系统在生产基因工程药物方面的研究进展、存在问题和发展方向。

关键词：中国仓鼠卵巢细胞基因工程药物表达系统

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蛋白质磁性分子印迹聚合物的制备与应用

蛋白质磁性分子印迹聚合物的制备与应用

中国化学会第22届全国色谱学术报告会及仪器展览会

作者：陈朗星何锡文张玉奎南开大学化学学院天津市生物传感与分子识别重点实验室中国科学院大连化学物理研究所

＜正＞自然界中蛋白质的种类数以万计。以人类细胞为例,蛋白质的种类高达上万种,有高、低丰度两类蛋白质,二者在浓度范围内可以相差6个或更多数量级。虽然低丰度蛋白质在生物体的生命活动中承担着重要的生命活动,但样品中低丰度蛋白质... 详细信息

＜正＞自然界中蛋白质的种类数以万计。以人类细胞为例,蛋白质的种类高达上万种,有高、低丰度两类蛋白质,二者在浓度范围内可以相差6个或更多数量级。虽然低丰度蛋白质在生物体的生命活动中承担着重要的生命活动,但样品中低丰度蛋白质的含量极低,且往往被高丰度蛋白质掩盖或夹带,造成难以实现对低丰度蛋白质的有效检测。因此,如何实现蛋白质高效、快速地分离分析低丰度蛋白质,是蛋白组学研究中遇到的一个亟待解决的问题。

关键词：蛋白质分子印迹聚合物磁性分离

缺血再灌注预处理对血浆MDA、SOD及脊髓AQP4mRNA的表达影响

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中华胸心血管外科杂志 2013年第7期29卷 422-425页

作者：杨国柱郭惠明庄建陈寄梅张晓慎范瑞新范小平刘怀普黄晶晶朱平广东省心血管病研究所广东省人民医院心外科广东省医学科学院广东药学院生命科学与生物制药学院广东省生物技术候选药物研究重点实验室广州510100

目的探讨腹主动脉缺血预处理对再灌注不同时间血浆丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及脊髓组织中水通道蛋白4（AQP4）mRNA表达的影响。方法将54只体质量189—207g雌雄不拘的sD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I／R... 详细信息

目的探讨腹主动脉缺血预处理对再灌注不同时间血浆丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及脊髓组织中水通道蛋白4（AQP4）mRNA表达的影响。方法将54只体质量189—207g雌雄不拘的sD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I／R组）和缺血预处理组（IPC组）3组。采用肾下腹主动脉阻断法，建立脊髓缺血再灌注模型；Sham组6只，手术开始步骤同其他两组，但不作肾下腹主动脉阻断即缝合伤口；I／R组24只，直视下采用动脉夹夹闭腹主动脉段左肾动脉分支起始处下方5mm处（即肾动脉后型），仅阻断腹主动脉60min后开放灌注；而IPC组24只，先阻断腹主动脉5min，开放5min，再阻断60min后开放灌注。再灌注后12h、1、2、5、10天分别进行神经功能评分，同时观察大鼠血浆MDA、SOD指标的水平，以及预处理对脊髓AQP4mRNA表达的影响。结果54只大鼠术后全部存活，I／R组行为学评分降低（P〈0．01），IPC组的神经功能评分在再灌注5天内均高于I／R组（P〈0．01），随着再灌注时间的延长行为学评分逐渐增加。I／R组血浆SOD水平仅在再灌注1天时较Sham组显著下降，随时间延长SOD水平逐渐升高与Sham组无差异，血浆各时间点MDA水平比Sham组低（P〈0．05）；IPC组SOD、MDA水平与Sham组比较没有差异。I／R组再灌注2天时AQP4mRNA表达显著增高（P〈0．01），之后降低至与Sham组无差异；IPC组在再灌注1天时即出现AQP4mRNA表达明显升高（P〈0．05），之后表达逐渐降低，第5天时与Sham组无差异。IPCAQP4mRNA峰值明显低于I／R组（P〈0．01）。结论大鼠腹主动脉缺血再灌注的预处理IPC可能通过减轻由缺血再灌注造成的全身氧化应激反应和下调AQP4mRNA的表达，进而保护脊髓组织。

关键词：缺血预处理缺血再灌注丙二醛超氧化物歧化酶水通道蛋白4

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系统性红斑狼疮中A20表达特点的研究

中国病理生理杂志 2015年第3期31卷 518-523页

作者：张帆朱丽花王旭陈少华杨力建吴秀丽李萡周毅李扬秋广东药学院生命科学与生物制药学院广东省生物技术候选药物研究重点实验室广东广州510006 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学第一附属医院风湿免疫科广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的:了解系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3,也称A20)、核因子κB(NF-κB)、黏膜相关淋巴瘤易位基因1(MALT1)及其转录本1(MALT1V1)的mRNA表达特点。方法:采用real-time PCR法检测21例SLE患者(其中合并... 详细信息

目的:了解系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3,也称A20)、核因子κB(NF-κB)、黏膜相关淋巴瘤易位基因1(MALT1)及其转录本1(MALT1V1)的mRNA表达特点。方法:采用real-time PCR法检测21例SLE患者(其中合并硬皮症2例,合并类风湿关节炎1例,合并淋巴瘤1例)及31例健康人外周血单个核细胞(PBMC)中MALT1、A20、NF-κB和MALT1V1 mRNA的表达情况。结果:SLE样本中,A20 mRNA表达水平较健康人明显降低(P研究还显示,健康人中A20和MALT1V1存在正相关关系(P0.05)。结论:本研究首先提供了MALT1-A20-NF-κB通路在SLE中的表达特点。SLE患者异常低表达A20,这可能与患者低免疫耐受相关,其与NF-κB表达的正相关性情况可能与其它因素的调控有关,有待进一步证实。

关键词：系统性红斑狼疮 A20 MALT1 NF-κB

强力霉素诱导型Cas9基因编辑小鼠胚胎干细胞系的构建

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发育医学电子杂志 2018年第3期6卷 160-165页

作者：姚玉琛朱少华曹佳妮张琳杨月伟赵同标曲阜师范大学生命科学学院山东曲阜273165 中国科学院动物研究所干细胞与生殖生物学国家重点实验室北京100101

目的建立强力霉素(doxmycin,Dox)诱导型Cas9基因编辑小鼠胚胎干细胞系,以满足不同条件下基因编辑的实验需求。方法根据四环素(tetracycline,Tet)-on诱导表达调控系统的原理,分别构建含有调控元件反义Tet转录激活因子(reverse tetracy-cl... 详细信息

目的建立强力霉素(doxmycin,Dox)诱导型Cas9基因编辑小鼠胚胎干细胞系,以满足不同条件下基因编辑的实验需求。方法根据四环素(tetracycline,Tet)-on诱导表达调控系统的原理,分别构建含有调控元件反义Tet转录激活因子(reverse tetracy-cline transcriptional activator,rt TA)的表达质粒p CDH-CAG-rt TA-IRES-m Cherry和含有Tet应答元件(Tet-responsive element,TRE)及Cas9的表达质粒p Tight-Cas9-IRES-GFP-Tight-Puro,其中红色荧光蛋白m Cherry通过内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)与rt TA表达,绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)通过IRES与Cas9相连,分别指示rt TA与Cas9的表达,Puro抗性基因作为药物筛选标记。将上述两种质粒包装为慢病毒,分步转入小鼠胚胎干细胞中,建立Dox诱导Cas9表达的小鼠胚胎干细胞系。结果首先通过瞬时转染方法在293T细胞中验证其可诱导性,然后结合报告荧光与药物筛选获得同时整合有调控元件rt TA与应答元件TRE及Cas9的小鼠胚胎干细胞系,该细胞系加入Dox后出现有GFP报告荧光表达,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,rt-q PCR)结果同时表明Cas9可以被成功诱导表达。结论本研究成功构建了Dox诱导Cas9表达的小鼠胚胎干细胞系,该细胞系在基因编辑方法上更加灵活可控,具有很高的潜在应用价值。

关键词： CRISPR/Cas9 四环素诱导条件性敲除小鼠ES细胞系

黄酮类化合物的神经氨酸酶抑制活性及构效关系研究进展

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中国新药杂志 2012年第19期21卷 2272-2278页

作者：靳玉瑞李爱秀邓联柏中国人民武装警察部队后勤学院基础医学部药物设计实验室天津300162 中国人民武装警察部队后勤学院职业与环境危害生物标志物天津市重点实验室天津300162

神经氨酸酶(neuraminidase,NA)为A型和B型流感病毒表面的一种糖蛋白,是抗流感病毒药物的靶点之一。近年来,国内外研究者发现一些黄酮类化合物具有很好的NA抑制活性,其结构骨架不同于已上市NA抑制剂奥司他韦和扎那米韦,有望解决流感病毒... 详细信息

神经氨酸酶(neuraminidase,NA)为A型和B型流感病毒表面的一种糖蛋白,是抗流感病毒药物的靶点之一。近年来,国内外研究者发现一些黄酮类化合物具有很好的NA抑制活性,其结构骨架不同于已上市NA抑制剂奥司他韦和扎那米韦,有望解决流感病毒耐药性和当前药物NA亚型依赖性等问题。有些黄酮类化合物与奥司他韦联用能显著增强后者对不同亚型NA的抑制活性,因此该类药物的研发上市将为临床治疗方案提供新的选择。现综述不同结构类型黄酮类化合物的NA抑制活性及构效关系研究进展,为新型黄酮类NA抑制剂先导化合物的发现和结构改造提供参考。

关键词：抗流感药物黄酮类化合物神经氨酸酶抑制活性构效关系

7-木糖紫杉烷糖基水解酶LXYL-P1-2最新研究进展

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7-木糖紫杉烷糖基水解酶LXYL-P1-2最新研究进展

2012年中国菌物学会学术年会

作者：朱平王芬于文博天然药物活性物质与功能国家重点实验室、卫生部天然药物生物合成重点实验室中国医学科学院北京协和医学院药物研究所

7-木糖紫杉烷糖基水解酶LXYL-P1-1和LXYL-P-1-2是本实验室克隆自真菌香菇的双功能β-木糖苷酶/β-葡萄糖苷酶,能特异性水解7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇（XDT）等在红豆杉中含量丰富的7-木糖紫杉烷,生成的7-羟基紫杉烷可用于化学半合成紫... 详细信息

7-木糖紫杉烷糖基水解酶LXYL-P1-1和LXYL-P-1-2是本实验室克隆自真菌香菇的双功能β-木糖苷酶/β-葡萄糖苷酶,能特异性水解7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇（XDT）等在红豆杉中含量丰富的7-木糖紫杉烷,生成的7-羟基紫杉烷可用于化学半合成紫杉醇等抗肿瘤药物。两种酶蛋白具有97%的序列一致性,但后者的酶活性是前者的2倍以上。以LXYL-P-1-2为主要研究对象,目前已实现该酶基因在毕赤酵母中的高效表达,并分别从基础和应用两个方面进行了研究与探索。本文重点报告过去一年的研究进展。在基础研究方面,开展了该酶结构与功能关系的研究,包括由LXYL-P1-1向LXYL-P1-2的单一和多点组合突变研究,以及对预测的LXYL-P1-1和LXYL-P1-2活性中心进行的定点突变和功能分析;与外单位合作开展了LXYL-P1-2蛋白的结晶试验。在应用研究方面,开展了该重组菌高密度发酵试验和生物催化（转化）的逐级放大研究。在高密度发酵试验中,探讨了培养基类型、甲醇诱导时的初始细胞密度、溶氧（DO）等对细胞酶活性的影响,完成了10升罐规模的发酵试验。在生物催化（转化）试验中,完成了5升反应体积的试验,并进行了产物分离纯化工艺研究。

关键词： 7-木糖紫杉烷糖基水解酶紫杉醇结构与功能高密度发酵生物催化

酚类及苷类氮氧自由基衍生物的合成及抗辐射性能研究

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酚类及苷类氮氧自由基衍生物的合成及抗辐射性能研究

中国化学会第十二届全国天然有机化学学术会议

作者：罗国英赵亮董树清李辉中国科学院兰州化学物理研究所西北特色植物资源化学重点实验室

电离辐射是引起细胞损伤到整个机体功能异常甚至死亡的重要因素之一,但现有用于临床的辐射防护药物较少,仅有硫胺化合物、激素、细胞因子少数的几类,但是都由于毒副作用强使其在临床上的使用受到了限制。从现阶段国内外的相关研究工作中... 详细信息

电离辐射是引起细胞损伤到整个机体功能异常甚至死亡的重要因素之一,但现有用于临床的辐射防护药物较少,仅有硫胺化合物、激素、细胞因子少数的几类,但是都由于毒副作用强使其在临床上的使用受到了限制。从现阶段国内外的相关研究工作中,天然药物活性成分因其具有来源广易获得毒性小生物相容性好等优势,是开发辐射防护药物研究的热点。本课题组围绕苷类及酚类天然产物的氮氧自由基衍生物的设计合成-辐射防护性能-抗辐射先导药物这一主线开展本项研究工作。首先将氮氧自由基分子修饰到天然分子骨架上,合成了白藜芦醇、生育酚、红景天苷、熊果苷紫檀菧等天然产物的氮氧自由基衍生物;其次在细胞和动物层次上综合考察了这些苷类及酚类氮氧自由基衍生物的毒性及其辐射防护性能,发现酚类氮氧自由基衍生物可明显地降低胞内活性氧延缓辐照细胞的凋亡。后期会通过开展细胞辐射损伤标志物检测,研究细胞辐射损伤的应激机制,阐明天然产物氮氧自由基衍生物的防护机理。期望开发一种低毒高效的辐射防护先导药物。在放射治疗肿瘤太空宇航员以及从事辐射工作人员等的辐射防护方面具有实际应用。

关键词：化学合成药效学结构优化改造靶向药物作用机制

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丙酮酸氧化酶在压力下的解离

生物物理学报 1992年第1期8卷 135-142页

作者：阮康成张庭芳中国科学院上海生物化学研究所 200031 北京大学生物系生化教研室

本文通过测定丙酮酸氧化酶内源荧光谱和荧光偏振的变化研究了该酶在1—2200bar压力下的解离。研究结果表明,在压力作用下酶的辅基FAD不可逆地从酶分子上解离下来,并因此引起酶的失活;酶亚基在压力下的解离是可逆的,在5℃,pH7.6条件下,... 详细信息

本文通过测定丙酮酸氧化酶内源荧光谱和荧光偏振的变化研究了该酶在1—2200bar压力下的解离。研究结果表明,在压力作用下酶的辅基FAD不可逆地从酶分子上解离下来,并因此引起酶的失活;酶亚基在压力下的解离是可逆的,在5℃,pH7.6条件下,该酶的解离自由能⊿G°为29.89k cal/mol,解离标准体积变化⊿V°为-220ml/mol。脱辅基丙酮酸氧化酶的解离自由能为24.93k cal/mol,证明FAD对酶有稳定作用;⊿V°则为-153ml/mol,减少了近30％,表明FAD对亚基间的空间大小有很大贡献。经胰凝乳蛋白酶部分酶解所活化的酶的解离⊿G°和⊿V°均有所增加,底物丙酮酸亦有相同的影响。研究还表明,碱性pH条件能促进丙酮酸氧化酶的解离。在此研究中,我们也观察到了Weber和Ruan在乳酸脱氢酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶等研究中报道的"conformational drift"现象。

关键词：丙酮酸氧化酶解离