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PS3000-b-PAA5000球形胶束温度效应的原位小角X射线散射技术研究

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物理学报 2018年第4期67卷 235-242页

作者：金鑫杨春明滑文强李怡雯王劼中国科学院上海应用物理研究所上海光源上海201204 中国科学院大学北京100049 中国科学院上海生命科学研究院国家蛋白质中心上海200031

应用小角X射线散射技术(SAXS)对两亲嵌段共聚物聚苯乙烯聚丙烯酸(PS-b-PAA)胶束形貌的温度影响进行了原位表征.SAXS结果表明:随着水含量的增加,粒子尺寸相应增加;对于水含量10%的PS_(3000)-b-PAA_(5000)胶束溶液,发现了明显的SAXS双峰现... 详细信息

应用小角X射线散射技术(SAXS)对两亲嵌段共聚物聚苯乙烯聚丙烯酸(PS-b-PAA)胶束形貌的温度影响进行了原位表征.SAXS结果表明:随着水含量的增加,粒子尺寸相应增加;对于水含量10%的PS_(3000)-b-PAA_(5000)胶束溶液,发现了明显的SAXS双峰现象;双峰的位置不随着温度的变化而改变,但是peak 1和peak 2的相对强度随着温度发生了减弱和增强的交错变化;相邻的SAXS双峰说明在PS_(3000)-b-PAA_(5000)胶束溶液中最初形成的粒子尺寸并不是均匀的,主要分为尺寸极其相近的两种球形粒子;随着温度的升高,粒径大小不同的两种粒子存在着一种消融和生长的过程,并且保持着一个相同的归一化动态平衡速率.

关键词：嵌段共聚物聚小角X射线散射温度效应同步辐射

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丝瓜籽中一种具有翻译抑制活性和胰蛋白酶抑制剂活性的多肽——Luffin P1的纯化和性质

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第9期35卷 847-852页

作者：李丰夏恒传杨欣秀胡维国李臻张祖传中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学重点实验室上海200031 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学重点实验室

通过硫酸铵分级沉淀、CM 5 2阳离子交换层析、蓝胶亲和层析和FPLCMonoS阳离子交换层析 ,从丝瓜籽抽提液中分离到一种多肽luffinP1。经MALDI TOFMS测得其分子量为 5 2 2 6 .5。氨基酸序列测定及同源性分析发现 ,luffinP1的N端 11个氨基... 详细信息

通过硫酸铵分级沉淀、CM 5 2阳离子交换层析、蓝胶亲和层析和FPLCMonoS阳离子交换层析 ,从丝瓜籽抽提液中分离到一种多肽luffinP1。经MALDI TOFMS测得其分子量为 5 2 2 6 .5。氨基酸序列测定及同源性分析发现 ,luffinP1的N端 11个氨基酸序列与丝瓜籽中的一种 6 .5K富含Arg Glu的多肽AGRP的部分序列相同 ,并与南瓜籽中一种胰蛋白酶抑制剂C2肽具有很高的同源性。体外分析表明 ,luffinP1同时具有两种生物活性 :(1)对兔网织红细胞裂解液系统蛋白质生物合成有较强的抑制作用 ,IC50 为 0 .6nmol L ;(2 )具有明显的胰蛋白酶抑制活性 ,IC50 为 2 2 μmol L。

关键词：丝瓜籽 Luffin P1 翻译抑制活性胰蛋白酶抑制活性

慈菇蛋白酶抑制剂A和B的活性中心探讨(英文)

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生物化学与生物物理学报 2002年第5期34卷 662-666页

作者：李炯阮康成戚正武中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学实验室中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学实验室上海200031

慈菇蛋白酶抑制剂A和B(APIA和APIB)是一种双头多功能抑制剂 ,它们的一级结构和cDNA序列已经被阐明。为了找到它们的活性中心 ,利用定点诱变的方法将APIB中根据与其他抑制剂家族的序列比较所推断的可能的活性中心残基 :Lys44、Arg76和Ar... 详细信息

慈菇蛋白酶抑制剂A和B(APIA和APIB)是一种双头多功能抑制剂 ,它们的一级结构和cDNA序列已经被阐明。为了找到它们的活性中心 ,利用定点诱变的方法将APIB中根据与其他抑制剂家族的序列比较所推断的可能的活性中心残基 :Lys44、Arg76和Arg87分别用Pro替代 ,所得到的突变基因分别在酵母分泌体系中得到了表达。与天然的APIB相比 ,K44P APIB对胰蛋白酶的抑制活力没有改变 ;而R76P APIB和R87P APIB对胰蛋白酶的抑制活力都分别下降了一半 ,由原来的抑制两分子变成了一分子。表明Arg76和Arg87分别是APIB的两个活性中心残基 ,而Lys44则不是。为了证实以上结论 ,进一步制备了另外 3种突变体 (K44P R76P APIB、K44P R87P APIB、R76P R87P APIB) ,在每个突变体中 ,3个可能的活性位点中只保留 1个。有关的抑制活力测定表明 ,K44P R76P APIB(只保留Arg87)和K44P R87P APIB(只保留Arg76)分别只抑制一分子胰蛋白酶 ,而R76P R87P APIB(只保留Lys44)对胰蛋白酶基本不抑制 ,从而肯定了以上结论。经过测定 ,两个突变体K44P R87P APIB和K44P R76P APIB对胰蛋白酶的抑制常数Ki 分别是 0 .39nmol/L和 0 .4 7nmol/L。突变体R87L APIB(APIA中 87位是Leu)丧失了接近一半的胰蛋白酶抑制活力 ,但同时对胰凝乳蛋白酶的抑制活性由原来?

关键词：慈菇蛋白酶抑制剂定点诱变抑制活性活性中心

栝楼籽中一种新的具有蛋白质生物合成抑制活性的多肽——TrichokirinS1的分离、纯化和性质

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第9期35卷 841-846页

作者：李丰杨欣秀胡维国夏恒传李臻张祖传中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学重点实验室中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学重点实验室上海200031

改进了常规的核糖体失活蛋白的分离纯化方案 ,首先采用抽提蛋白体的方法 ,提高了分离效果 ,然后再经硫酸铵分级沉淀、FPLCMonoS阳离子交换层析和Superose12凝胶过滤层析等步骤 ,从栝楼种子中分离到一种新的多肽———trichokirin S1。经... 详细信息

改进了常规的核糖体失活蛋白的分离纯化方案 ,首先采用抽提蛋白体的方法 ,提高了分离效果 ,然后再经硫酸铵分级沉淀、FPLCMonoS阳离子交换层析和Superose12凝胶过滤层析等步骤 ,从栝楼种子中分离到一种新的多肽———trichokirin S1。经MALDI TOFMS质谱分析测得其分子量为 114 2 6。该肽的N端氨基酸序列为PRRKEG GSFDECCSE ,与一种存在于南瓜籽中的小分子核糖体失活蛋白 β moschin具有很高的同源性。trichokirin S1对核糖体失活的机制与天花粉蛋白 (TCS)一致 ,是rRNAN 糖苷酶催化型的 ,对兔网织红细胞裂解液系统蛋白质生物合成有较强的抑制作用 ,IC50 为 0 .71nmol L ,因而有可能开发成免疫毒素的高效“弹头”。

关键词： trichokirin-S1 翻译抑制活性 rRNA N-糖苷酶

一种提高固定pH梯度(IPG)凝胶双向电泳的重复性、分辨率和通量的方法(英文)

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生物化学与生物物理学报 2003年第7期35卷 611-618页

作者：袁泉安杰刘定干赵辅昆中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学重点实验室中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学重点实验室上海200031

在蛋白质组学研究中 ,双向聚丙烯酰胺凝胶电泳是现行蛋白质分离的最重要的方法之一。实验发展了一种提高固定pH梯度 (IPG)凝胶双向电泳的重复性、分辨率和通量的方法 :在一块SDS 聚丙烯酰胺凝胶上同时进行多块固定pH梯度(IPG)凝胶 (Mult... 详细信息

在蛋白质组学研究中 ,双向聚丙烯酰胺凝胶电泳是现行蛋白质分离的最重要的方法之一。实验发展了一种提高固定pH梯度 (IPG)凝胶双向电泳的重复性、分辨率和通量的方法 :在一块SDS 聚丙烯酰胺凝胶上同时进行多块固定pH梯度(IPG)凝胶 (Multi stripsononeSDSgel,MSOG)电泳。用此方法比较了人肝癌细胞、不同生长状态的人肝癌细胞、3T3细胞的蛋白质以及同一个样品在不同大小的第二向凝胶系统 (大型和中型凝胶 )的双向电泳图谱。结果表明 ,同一样品在 13cmIPGStrip双向电泳可分离 2 0 0 0以上蛋白质点且图谱蛋白质点的匹配率可超过 95 %以上。同时又可以最大程度地降低凝胶背景对蛋白质点比较分析的干扰 ,从而提高了双向电泳分离蛋白质的分辨率和通量。这些优点都有助于差异蛋白质组学特别是细胞器差异蛋白质组学研究的自动化。

关键词：双向电泳同时进行多块固定pH梯度(IPG)凝胶的方法重复性高通量蛋白质组学

福寿螺 (Ampullaria crossean)内源性多功能纤维素酶基因的克隆(英文)

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生物化学与生物物理学报 2003年第10期35卷 941-946页

作者：王骥丁明李燕红陈清西许根俊赵辅昆中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学重点实验室中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学重点实验室上海200031

迄今为止已克隆的动物纤维素酶基因都是编码内切 β 1,4 葡聚糖酶或β 葡萄糖苷酶的 ,还没有有关动物外切 β 1,4 葡聚糖酶基因的报道。并且 ,动物是否对植物细胞壁的另一主要成分木聚糖具有水解能力也依然是个疑问。已经由草食性软体... 详细信息

迄今为止已克隆的动物纤维素酶基因都是编码内切 β 1,4 葡聚糖酶或β 葡萄糖苷酶的 ,还没有有关动物外切 β 1,4 葡聚糖酶基因的报道。并且 ,动物是否对植物细胞壁的另一主要成分木聚糖具有水解能力也依然是个疑问。已经由草食性软体动物福寿螺的胃液中纯化得到一种纤维素酶 ,该酶同时具有外切 β 1,4 葡聚糖酶、内切 β 1,4 葡聚糖酶和内切 β 1,4 木聚糖酶等三种活性 ,是一种多功能纤维素酶 (命名为EGX)。在此基础上 ,从福寿螺胃组织中克隆得到的EGXcDNA开放阅读框全长为 1185bp ,共编码 395个氨基酸。由氨基酸顺序同源和活性部位的保守顺序的比较分析 ,EGX可归属于糖苷水解酶第10家族。该多功能纤维素酶cDNA在毕赤酵母 (Pichiapastoris)中表达的产物具有水解外切 β 1,4 葡聚糖酶底物 (pNPC) ,羧甲基纤维素 (内切 β 1,4 葡聚糖酶的底物 )和木聚糖 (木聚糖酶的底物 )的活力。另外也从福寿螺卵巢组织中获得编码福寿螺多功能纤维素酶EGX基因 ,长度为 4 892bp ,含有 9个外显子和 8个内含子。8个内含子分别位于开放阅读框的 74bp、12 2bp、2 80bp、336bp、4 73bp、6 4 6bp、75 3bp和 972bp处。以上结果证明了多功能纤维素酶EGX是福寿螺自身产生的 ,同时也证明了福寿螺具有与微生物相似的纤维素?

关键词：多功能纤维素酶 EGX 基因克隆福寿螺(Ampullaria crossean)

新方法随机筛选血管内皮生长因子受体1激酶的抑制剂

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Acta Pharmacologica Sinica 2002年第2期23卷 25-31页

作者：庄书斐,周彩红,钱静,钱蓁,SHIBUYA Masabumi,叶其壮国家新药筛选中心中国科学院上海生命科学院药物研究所国家新药筛选中心中国科学院上海生命科学院药物研究所国家新药筛选中心中国科学院上海生命科学院药物研究所国家新药筛选中心中国科学院上海生命科学院药物研究所东京大学药物研究所基因研究系上海中国 201203 上海中国 201203 上海中国 201203 上海中国 201203 东京日本

目的:利用重组血管内皮细胞生长因子(VEGF)受体1激酶蛋白质建立大规模随机筛选分子模型.方法:重组人源VEGF受体1激酶蛋白质的催化活性通过酶联免疫法检测96孔板上的底物磷酸化程度得到.用大规模随机筛选寻找抑制剂,并在稳定表达VEGF受体... 详细信息

目的:利用重组血管内皮细胞生长因子(VEGF)受体1激酶蛋白质建立大规模随机筛选分子模型.方法:重组人源VEGF受体1激酶蛋白质的催化活性通过酶联免疫法检测96孔板上的底物磷酸化程度得到.用大规模随机筛选寻找抑制剂,并在稳定表达VEGF受体1的细胞系上研究它们的性质.结果:在研究VEGF受体1激酶蛋白质大肠杆菌表达体系的基础上,建立了大规模筛选模型.通过对2800个有机化合物的筛选,找到了两个二取代呋喃类的VEGF受体1激酶抑制剂(A1和A5).其中化合物A1能抑制底物磷酸化,而化合物A5则对激酶的自磷酸化和底物磷酸化都能抑制.同时A1和A5都能影响转染细胞上的受体磷酸化作用.结论:利用重组受体激酶建立的分子模型为寻找抗肿瘤血管生成抑制剂提供了一个简单而有效的方法.

关键词：蛋白质酪氨酸激酶药物筛选生长因子受体类血管内皮

基于质谱的磷酸化蛋白质组学:富集、检测、鉴定和定量

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生物化学与生物物理进展 2018年第12期45卷 1250-1258页

作者：石文昊童梦莎李恺王钰珅丁琛国家蛋白质科学中心(北京) 北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室北京102206 清华大学生命科学学院北京100084 复旦大学生命科学学院上海200438

磷酸化是一种调控生命活动的重要翻译后修饰,调控生物的生长发育、信号转导、以及疾病的发生发展.从上世纪80年代开始,质谱应用于蛋白质磷酸化的检测中,极大地推动了磷酸化蛋白质组学的发展.质谱检测拥有高灵敏度、高通量的特点,更重要... 详细信息

磷酸化是一种调控生命活动的重要翻译后修饰,调控生物的生长发育、信号转导、以及疾病的发生发展.从上世纪80年代开始,质谱应用于蛋白质磷酸化的检测中,极大地推动了磷酸化蛋白质组学的发展.质谱检测拥有高灵敏度、高通量的特点,更重要的是具有位点分辨率,因此基于质谱的磷酸化蛋白质组检测方法得到不断的发展和推广.常见的磷酸化蛋白质组研究,首先对磷酸化肽段进行富集,然后进行串联质谱分析,最后通过搜索引擎对修饰位点进行鉴定和定量.本文从这个三个基本方面,对磷酸化蛋白质组研究进行综述,并对未来研究发展方向进行讨论.

关键词：磷酸化蛋白质组学方法串联质谱修饰位点解析

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锤头状核酶在鸡胚成纤维细胞中的对鹅副粘病毒SF02繁殖的抑制作用(英文)

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生物化学与生物物理学报 2003年第9期35卷 801-805页

作者：邹键龚祖埙中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学重点实验室中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学重点实验室上海200031

针对鹅副粘病毒SF0 2的F基因 ,设计了锤头状核酶RzF5 98,并插入真核细胞表达载体pcDNA3获得该核酶的转基因质粒pcDNA RzF5 98。以无核酶功能的突变体dRzF5 98和pcDNA3空质粒为对照 ,分析核酶对病毒繁殖的抑制作用。结果表明 ,RzF5 98不... 详细信息

针对鹅副粘病毒SF0 2的F基因 ,设计了锤头状核酶RzF5 98,并插入真核细胞表达载体pcDNA3获得该核酶的转基因质粒pcDNA RzF5 98。以无核酶功能的突变体dRzF5 98和pcDNA3空质粒为对照 ,分析核酶对病毒繁殖的抑制作用。结果表明 ,RzF5 98不仅能在体外成功切割靶基因的mRNA ,还能有效抑制SF0 2在鸡胚成纤维细胞中的繁殖。转染pcDNA RzF5 98的鸡胚成纤维细胞经SF0 2感染后存活率可达 80 %左右 ,而未转染任何质粒的细胞和转染pcDNA3空质粒的细胞经SF0 2感染后存活率只有约 5 %。转染dRzF5 98的细胞对病毒也具有一定抗性 ,这可能是由于反义RNA的作用。

关键词：锤头状核酶鹅副粘病毒新城疫病毒鸡胚成纤维细胞