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江浙蝮蛇毒L-氨基酸氧化酶的分离纯化及其性质鉴定

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生物化学与生物物理学报 2002年第3期34卷 305-310页

作者：刘杰武柴敏强杜晓燕宋建国周元聪中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化?

从江浙蝮蛇粗毒中经SephadexG 15 0凝胶过滤、DEAE SepharoseCL 6B以及FPLCSuperose 12分离出一种蛋白质。该蛋白质经SDS PAGE测定在非还原和还原条件下分子量均为 5 7kD左右 ,等电聚焦测得其等电点约为 4.9。生物活性测定表明该蛋白质... 详细信息

从江浙蝮蛇粗毒中经SephadexG 15 0凝胶过滤、DEAE SepharoseCL 6B以及FPLCSuperose 12分离出一种蛋白质。该蛋白质经SDS PAGE测定在非还原和还原条件下分子量均为 5 7kD左右 ,等电聚焦测得其等电点约为 4.9。生物活性测定表明该蛋白质具有L 氨基酸氧化酶活性 ,能够抑制由ADP和胶原所引起的血小板聚集 ,具有抑制革兰氏阴性菌的作用 ;并且具有细胞毒性 ,能够诱导细胞凋亡

关键词： L-氨基酸氧化酶(LAO) 江浙蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas) 血小板聚集抑菌作用细胞凋亡

人心肌肌球蛋白轻链1与重链和肌动蛋白的结合

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第1期33卷 41-45页

作者：黄人健彭宝珍周国瑛沈菊英龚祖埙中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所!上海200031

在测得中国人心肌肌球蛋白轻链 1cDNA的核苷酸序列 ,并获得一株单克隆抗体 (HCMLC1 8)的基础上 ,用PCR方法 ,以中国人心肌肌球蛋白轻链 1的cDNA为模板 ,分别获得中国人心肌肌球蛋白轻链 1的各为 98个氨基酸的N端和C端片段cDNA的克隆并... 详细信息

在测得中国人心肌肌球蛋白轻链 1cDNA的核苷酸序列 ,并获得一株单克隆抗体 (HCMLC1 8)的基础上 ,用PCR方法 ,以中国人心肌肌球蛋白轻链 1的cDNA为模板 ,分别获得中国人心肌肌球蛋白轻链 1的各为 98个氨基酸的N端和C端片段cDNA的克隆并进行了表达。同时进行了其表达产物和大鼠心肌肌球蛋白重链和人心肌肌动蛋白以及单克隆抗体结合的研究 ,发现三者均和轻链 1的N端相结合 ,结合位点各不相同。这些结合位点可能均位于轻链 1的分子表面 ,而且如果轻链 1在实验状态下先与肌动蛋白结合 ,则有可能影响轻链与重链间的彼此结合。肌动蛋白在体外能以不同位点结合肌球蛋白重链和轻链 ,可能在肌肉收缩过程中具有重要的生理意义

关键词：结合心肌肌球蛋白轻链1 肌球蛋白重链肌动蛋白单克隆抗体

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构建噬菌体展示的β转角多肽文库

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第3期33卷 335-339页

作者：李家大唐为钢王克夷中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所!上海200031

可以形成I型 β转角构象的多肽CX2 GPX4 C融合表达于丝状噬菌体fd的次要衣壳蛋白 g3p的N端 ,从而展示在噬菌体的表面。构建的多肽文库容量达到 1.0 4× 10 8个。随机挑取了 19个克隆 ,序列分析表明 ,核苷酸和氨基酸的分布与预期的基本... 详细信息

可以形成I型 β转角构象的多肽CX2 GPX4 C融合表达于丝状噬菌体fd的次要衣壳蛋白 g3p的N端 ,从而展示在噬菌体的表面。构建的多肽文库容量达到 1.0 4× 10 8个。随机挑取了 19个克隆 ,序列分析表明 ,核苷酸和氨基酸的分布与预期的基本一致。19个多肽的疏水性和等电点的综合指标分布广泛。以单克隆抗体 12CA5为靶分子 ,经过 3轮筛选 ,出现明显富集。噬菌体酶联免疫吸附法 (ELISA)以及竞争性ELISA的结果表明 ,从第 3轮洗脱液中随机挑选的 15个噬菌体克隆都能结合于抗体的抗原结合位点。破坏多肽的构象 ,这种结合将丧失

关键词：噬菌体展示肽库 β转角

用酵母单杂交系统筛选与人ε-珠蛋白基因表达相关的基因

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生物化学与生物物理学报 2001年第2期33卷 246-250页

作者：黄建侯春晖钱若兰中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所!上海200031

人体胚胎型ε 珠蛋白基因 5′旁侧一个沉默子 (- 392～ - 177bp)对关闭该基因在胎儿期的表达起重要作用。DNaseI足迹法分析已表明在沉默子区内存在着一个明显的蛋白质因子结合位点 (- 2 78～ - 2 35bp)。为了筛选与沉默子DNA特异结合的... 详细信息

人体胚胎型ε 珠蛋白基因 5′旁侧一个沉默子 (- 392～ - 177bp)对关闭该基因在胎儿期的表达起重要作用。DNaseI足迹法分析已表明在沉默子区内存在着一个明显的蛋白质因子结合位点 (- 2 78～ - 2 35bp)。为了筛选与沉默子DNA特异结合的蛋白质因子 ,将该保护区域的DNA序列作为靶序列 ,采用酵母单杂交系统对人胎儿肝cDNA表达文库进行筛选 ,并对获得的克隆进行序列分析。初步的结果表明 ,已分离到了人核糖体大亚基蛋白3(ribosomalproteinL3 ,RPL3)的全长cDNA克隆。体外凝胶电泳阻抑分析及竞争实验亦证明该蛋白质与沉默子DNA存在相互作用。提示RPL3可能通过与沉默子DNA的结合参与调节ε 珠蛋白基因的关闭

关键词：人ε-珠蛋白基因酵母单杂交系统沉默子人核糖体大亚基蛋白3

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抑制血管生成治疗肿瘤的策略和展望(英文)

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第10期35卷 873-880页

作者：张紫莱王晋慧刘新垣中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

新生血管生成是绝大多数肿瘤得以生长和转移的必要前提。所以 ,通过抑制肿瘤血管生成来抑制肿瘤是非常有前途的一种方法 ,有望发展成为一种新型的癌症疗法。主要可以分为两大类 :一是通过抑制促血管生成信号或扩大抑制血管生成因子的作... 详细信息

新生血管生成是绝大多数肿瘤得以生长和转移的必要前提。所以 ,通过抑制肿瘤血管生成来抑制肿瘤是非常有前途的一种方法 ,有望发展成为一种新型的癌症疗法。主要可以分为两大类 :一是通过抑制促血管生成信号或扩大抑制血管生成因子的作用来干扰肿瘤新生血管的形成过程 ,这领域的广泛研究已经发现了一系列促血管生成因子及其抑制剂和血管生成抑制因子 ;二是利用肿瘤血管与正常血管的差别来携带杀伤性药物直接特异性破坏已形成的肿瘤血管 ;另外 ,内皮细胞及其前体细胞制成疫苗也可起到直接杀伤作用。到目前为止 ,虽然很多抑制肿瘤血管的药物已经被用于临床试验 ,但结果往往不尽如人意 ,从长远来看 ,需要更有效的治疗方法。包括抗血管基因治疗策略 ,靶向药物导入系统的研究 ,以及抗血管生成药物和免疫疗法、化疗和放射治疗的联合应用都在探讨中。随着肿瘤模型评估系统的发展 ,抗血管治疗肿瘤的方法在不久的将来一定会广泛进入临床应用。

关键词：血管生成肿瘤血管肿瘤血管抑制治疗

丝瓜籽核糖体失活蛋白luffin-b的基因克隆及表达

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生物化学与生物物理学报 2001年第2期33卷 205-209页

作者：严明杨欣秀李臻平蓓芳张祖传中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所!上海200031

丝瓜籽毒蛋白luffin b(LUFb)是毒性极强的植物核糖体失活蛋白 ,它的cDNA序列已由Kataoka等作了报道 ,但luffin b的基因表达至今未见报道。用RT PCR方法从未成熟的丝瓜籽中克隆了luffin b的基因 (lufB) ,并构建了表达载体 pET 2 4a(+ ) l... 详细信息

丝瓜籽毒蛋白luffin b(LUFb)是毒性极强的植物核糖体失活蛋白 ,它的cDNA序列已由Kataoka等作了报道 ,但luffin b的基因表达至今未见报道。用RT PCR方法从未成熟的丝瓜籽中克隆了luffin b的基因 (lufB) ,并构建了表达载体 pET 2 4a(+ ) lufB ,pET 2 4a(+ ) lufB转化的大肠杆菌BL2 1(DE3)用IPTG诱导表达 ,SDS PAGE和Western印迹的结果表明重组luffin b主要存在于包含体中。用逐步透析法对包含体进行了复性 ,复性产物表现出很强的N 糖苷酶活性 ,并对兔网织红细胞裂解液的体外蛋白质合成具有较强的抑制活性 ,其IC50 约为1.2 5× 10 -10 mol/L。

关键词：丝瓜籽核糖体失活蛋白luffin-b 基因克隆表达免疫印迹包含体复性

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肿瘤基因治疗的靶向策略(英文)

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第4期35卷 311-316页

作者：王晋慧刘新垣中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所

对肿瘤组织的靶向性可以提高基因治疗的效果 ,避免对正常组织的损伤 ,并且能降低作为载体的微生物对机体的危害。对于瘤内注射的给药方法 ,靶向性似乎显得不是特别重要 ,但是如果要系统给药 ,靶向性是很关键的一个问题。靶向基因治疗肿... 详细信息

对肿瘤组织的靶向性可以提高基因治疗的效果 ,避免对正常组织的损伤 ,并且能降低作为载体的微生物对机体的危害。对于瘤内注射的给药方法 ,靶向性似乎显得不是特别重要 ,但是如果要系统给药 ,靶向性是很关键的一个问题。靶向基因治疗肿瘤可以通过靶向基因导入和靶向基因表达来实现。近年来 ,在靶向基因导入方面的研究有很多进展 ,例如 ,用双亲性的桥连分子协助腺病毒和逆转录病毒靶向转导 ;在各种病毒载体的衣壳蛋白中插入靶向性的小肽或较大的多肽靶向结构域 ;增殖病毒作为一种很有前途的抗肿瘤制剂可有效地靶向杀伤肿瘤细胞。受体介导的DNA或DNA 脂质体复合物的靶向系统和其他一些靶向性的有疗效的载体 ,如细菌 ,也处于研究中。其中的一些载体已经进入临床实验。为了实现基因的靶向可调控表达 ,组织或肿瘤特异性的启动子和人工合成的可调控表达系统被用来调控治疗基因的表达。反义核酸、核酶以及脱氧核酶 (DNAzyme)被用来靶向抑制与肿瘤发生密切相关基因的表达。

关键词：靶向基因治疗肿瘤

普萘洛尔通过磷脂酶D的活化诱导磷脂酸水平的增高(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第9期22卷 11-18页

作者：柴敏强陈军松赵晟宋建国中国 200031 分子生物学国家重点实验室中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所生物化学与细胞生物学研究所上海

目的:考察普萘洛尔诱导细胞内磷脂酶D的活化,分析该酶的活化与普萘洛尔刺激引起胞内磷脂酸水平升高的关系,研究蛋白激酶C在此过程中的作用。方法:[~3H]-豆蔻脂酸放射性标记细胞,通过转磷脂酰反应,抽提细胞脂类分子用薄层层析法分析磷脂... 详细信息

目的:考察普萘洛尔诱导细胞内磷脂酶D的活化,分析该酶的活化与普萘洛尔刺激引起胞内磷脂酸水平升高的关系,研究蛋白激酶C在此过程中的作用。方法:[~3H]-豆蔻脂酸放射性标记细胞,通过转磷脂酰反应,抽提细胞脂类分子用薄层层析法分析磷脂酶D的产物。用蛋白激酶C的抑制剂来抑制蛋白激酶C的活性或通过佛波酯长时间处理细胞来下调蛋白激酶C的水平。以免疫印记法分析蛋白激酶C的含量。结果:在正丁醇的存在下,普萘洛尔处理A-549细胞引起磷脂酶D的活性快速增高,普萘洛尔诱导磷脂酰丁醇的生成导致磷脂酸生成水平的下降。用蛋白激酶C的抑制剂星形孢菌素(staurosporine),Ro-31-8220及粗糠柴毒素(rottlerin)预处理细胞或通过佛波酯长时间处理下调胞内蛋白激酶C的水平对普萘洛尔诱导的磷脂酶D的活性没有抑制作用,而有增强效应。结论:普萘洛尔引起细胞内磷脂酸水平的提高是由于普萘洛尔对磷脂酶D活性的强烈诱导作用而导致的,蛋白激酶C对该过程可起到负调节作用。

关键词：磷脂酶D 磷脂酸类蛋白激酶C 普萘洛尔星形孢菌素 A-549细胞免疫印迹法

Tn细胞凋亡抑制蛋白(TnIAP)在粉纹夜蛾细胞中的表达和活性研究

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生物化学与生物物理进展 2002年第5期29卷 741-744页

作者：廖文韬杨扬吴祥甫中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

在粉纹夜蛾 (Trichoplusiani)细胞Tn 5B1 4中 ,高效表达了来自粉纹夜蛾细胞Tn 5B1 4能够抑制细胞凋亡的TnIAP蛋白 .聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析表明 ,表达的重组TnIAP只有少部分是可溶性蛋白 ,大部分以不溶的形式存在 .这一结果... 详细信息

在粉纹夜蛾 (Trichoplusiani)细胞Tn 5B1 4中 ,高效表达了来自粉纹夜蛾细胞Tn 5B1 4能够抑制细胞凋亡的TnIAP蛋白 .聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析表明 ,表达的重组TnIAP只有少部分是可溶性蛋白 ,大部分以不溶的形式存在 .这一结果与以往在昆虫细胞中往往表达出可溶性蛋白不同 .活性实验表明 ,可溶的重组TnIAP能够直接抑制caspase 9酶解Ac LEHD AFC的活性 ,也能抑制caspase 9激活HEK2 93细胞抽提物酶解Ac DEVD AFC的活性 .结果进一步证明。

关键词： Tn细胞凋亡抑制蛋白 TnIAP 粉纹夜蛾细胞凋亡表达活性

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