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核酶在大肠杆菌内对烟草花叶病毒靶RNA的切割作用

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实验生物学报 1998年第4期31卷 333-339页

作者：张庆琪宋任涛许政(日岂) 中国科学院上海植物生理研究所植物分子遗传国家重点实验室上海200032

把一段取自TMV RNA的靶cDNA序列连接在一个体内表达转录载体内的报道基因CAT起译密码子ATG的下游组成了读码框不改变的CAT融合基因,通过测定载体在大肠杆菌内表达的CAT活力变化,观察了与CAT同时表达的核酶在体内对靶序列的作用。当专一... 详细信息

把一段取自TMV RNA的靶cDNA序列连接在一个体内表达转录载体内的报道基因CAT起译密码子ATG的下游组成了读码框不改变的CAT融合基因,通过测定载体在大肠杆菌内表达的CAT活力变化,观察了与CAT同时表达的核酶在体内对靶序列的作用。当专一核酶RZ1、RZ1A或RZ1表达时,CAT的酶活力下降了30%,但非专一核酶RZ3的表达并不改变CAT活力。凝胶电泳和引物延伸结果表明CAT活力的下降是由于这些核酶对融合CAT mRNA在5’靶序列区发生了专一切割从而影响了蛋白的合成所致。

关键词：烟草花叶病毒核酶大肠杆菌切割作用靶RNA

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通过PEG法转化甘蓝获得转基因植株

Acta Botanica Sinica 1997年第1期39卷 28-33页

作者：薛红卫卫志明许智宏中国科学院上海植物生理研究所植物分子遗传国家重点实验室上海200032

通过PEG法将外源基因导入甘蓝(Brassica oleracea L.)下胚轴原生质体。以潮霉素和卡那霉素进行筛选,均成功地得到了抗性愈伤组织。对于潮霉素抗性愈伤组织,其绝对和相对转化频率分别为4.1×10^(-4)和1％～3％,在分化培养基上,抗性愈伤... 详细信息

通过PEG法将外源基因导入甘蓝(Brassica oleracea L.)下胚轴原生质体。以潮霉素和卡那霉素进行筛选,均成功地得到了抗性愈伤组织。对于潮霉素抗性愈伤组织,其绝对和相对转化频率分别为4.1×10^(-4)和1％～3％,在分化培养基上,抗性愈伤组织能够分化出芽。诱导生根后进行移栽,生长状况良好。Southem blotting分析表明外源基因已插入到植物细胞基因组中。对影响转化的一些因素进行了探讨。

关键词：甘蓝原生质体 PEG转化转基因植株基因工程

Rch10启动子引导iaaL基因在转基因烟草中的表达导致花器官发育的变异

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Acta Botanica Sinica 1996年第7期38卷 541-547页

作者：杨洪全卫志明许智宏中国科学院上海植物生理研究所植物分子遗传国家重点实验室上海200032

来源于丁香假单孢杆菌 ( Pseudomonas syringae ***)的吲哚乙酰胺赖氨酸酯合成酶基因 ( iaa L )与来自水稻 ( Oryza sativa)的在花器官中具有高水平表达的启动子 ( Rch1 0 )融合后导入烟草( N icotiana tabacum)。在转基因烟草中研究了... 详细信息

来源于丁香假单孢杆菌 ( Pseudomonas syringae ***)的吲哚乙酰胺赖氨酸酯合成酶基因 ( iaa L )与来自水稻 ( Oryza sativa)的在花器官中具有高水平表达的启动子 ( Rch1 0 )融合后导入烟草( N icotiana tabacum)。在转基因烟草中研究了这种嵌合基因的表达特性 ,并测定了各个器官内源生长素的水平。结果表明 :Rch1 0启动子能引导 iaa L基因在转基因植株的幼嫩花序、花器官及幼嫩果实中表达 ,并导致了各器官内源生长素水平不同程度的降低。转基因植株当代的花序或花器官的发育出现了明显的表型变异 :开花后顶端优势减弱、花序正常发育受阻、果实发育不良等。这些 Rch1 0 - iaa L的转基因植株可为进一步研究

关键词：烟草花器官特异表达启动子转基因烟草 iaaL

GL-7-ACA酰化酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达

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生物工程学报 1991年第2期7卷 99-107页

作者：杨蕴刘恽定芳关颖谦彭惠林陈剑民何云生焦瑞身中国科学院上海植物生理研究所

本文报道了利用BamHI酶解的载体pBR322 DNA与Sau3A部分酶解的假单胞菌Ps.130染色体DNA片段构建重组质粒,并用^(32)P标记的寡核苷酸探针从3205个含有外源片段的重组质粒中检测得到7株阳性克隆株。进一步经^(125)I一标记的抗体/抗原放射... 详细信息

本文报道了利用BamHI酶解的载体pBR322 DNA与Sau3A部分酶解的假单胞菌Ps.130染色体DNA片段构建重组质粒,并用^(32)P标记的寡核苷酸探针从3205个含有外源片段的重组质粒中检测得到7株阳性克隆株。进一步经^(125)I一标记的抗体/抗原放射免疫反应、GL-7-ACA酰化酶活力测定以及酶反应产物的纸谱色层分析,由上述7株阳性株中鉴定出3株能在大肠杆菌中表达酰化酶活力的基因克隆株。对该3株菌的重组质粒——pMR 5、pMR 6和pMR7 DNA的初步凝胶电泳分析表明,pMR 5和pMR 7质粒中插入片段的分子量为6.8kb,质粒pMR 6则带有5.7kb的外源片段。实验还比较了重级质粒pMR5在8株不同的大肠杆菌宿主菌中,GL-7-ACA酰化酶的表达水平。

关键词： 7-ACA酰化酶基因克隆基因表达

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鱼腥藻类囊体膜及其性质的研究

Acta Botanica Sinica 1997年第3期39卷 259-265页

作者：钟健彭建新史晓虹王国强中国科学院上海植物生理研究所上海200032

研究了鱼腥藻(Anabaena azollae Strasb.)的光合膜及其性质,结果如下:(1)以培养液为反应介质,测出鱼腥藻细胞的光合放氧,这种放氧受电子传递抑制剂DCMU的抑制。1mmol/L的NH_4Cl既延迟光合放氧的诱导期又抑制光合放氧速率。(2)在700～30... 详细信息

研究了鱼腥藻(Anabaena azollae Strasb.)的光合膜及其性质,结果如下:(1)以培养液为反应介质,测出鱼腥藻细胞的光合放氧,这种放氧受电子传递抑制剂DCMU的抑制。1mmol/L的NH_4Cl既延迟光合放氧的诱导期又抑制光合放氧速率。(2)在700～300nm波长范围,鱼腥藻出现4个吸收高峰,分别位于680、625、480和440nm处。其中625nm的吸收峰应属蓝绿藻的特有吸收峰。(3)通过高压氮气破碎法,并结合超声波处理,可以破碎鱼腥藻细胞壁,并从中分离出鱼腥藻类囊体膜制剂。测定表明,这种膜制剂具有进行光合磷酸化的能力,同时亦有膜上ATP酶水解ATP的能力。(4)利用此膜制剂,分离并部分纯化出ATP酶,在SDS-PAGE图谱上,此酶的两种小亚基(δ和ε亚基)的分子量分别低于菠菜叶绿体ATP酶的δ和ε亚基,但两种酶的α和β两种大亚基的分子量相近。以上结果提示,鱼腥藻具有进行光合作用的内在机构,这种机构在组分及其性质上与其它种类光合膜的异同是值得深入研究的课题。

关键词：藻类鱼腥藻类囊体膜性质

核酶的体外合成及其对烟草叶病毒RNA靶的作用

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中国科学（B辑） 1992年第1期B卷 47-53页

作者：许政(日岂) 李洁张庆琪中国科学院上海植物生理研究所

通过微机对烟草花叶病毒(TMV)RNA二级结构的分析并参照烟草环斑卫星病毒(sTobRV)的锤头型(hammer head)催化性RNA(即ribozyme或核酶)序列,我们在体外分别合成了以TMV移动蛋白(MP)基因区域正链和负链及正链3’末端序列为靶的锤头型核酶RZ... 详细信息

通过微机对烟草花叶病毒(TMV)RNA二级结构的分析并参照烟草环斑卫星病毒(sTobRV)的锤头型(hammer head)催化性RNA(即ribozyme或核酶)序列,我们在体外分别合成了以TMV移动蛋白(MP)基因区域正链和负链及正链3’末端序列为靶的锤头型核酶RZ1,RZ3和RZ2。体外结果表明,RZ1在50,37和30℃都能切割含有其靶序列的体外转录TMV RNA BT1(+)和BT2(+);与之相比,RZ3在50,37和30℃都只能部分切割靶RNA BT2(-)。至于RZ2,它对TMV正链3’末端内的靶序列的任何切割作用则未能观察到。我们在核酶RZ1的催化序列的茎环内或其3’末端引入了一个起稳定作用的序列CUUCGG以观察该序列对核酶的影响,实验表明这种修饰并不改变核酶的作用效率。

关键词： TMV 核酶体外转录核酶催化反应

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植物再生的研究进展

科学通报 2016年第36期61卷 3887-3902页

作者：孙贝贝刘杰葛亚超盛李宏陈吕琴胡小梅杨仲南黄海徐麟中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所中国科学院分子植物科学卓越创新中心植物分子遗传国家重点实验室上海200032 上海师范大学生命与环境科学学院上海200234 中国科学院大学北京100049

再生不仅赋予植物修复受损组织的能力,更能使植物产生新器官,实现营养繁殖.再生能力是植物在严酷环境下能够生存的重要手段,也被广泛应用于生产实践中.组织培养、扦插和嫁接等都是基于植物再生能力而开发的农业技术.再生现象的本质是细... 详细信息

再生不仅赋予植物修复受损组织的能力,更能使植物产生新器官,实现营养繁殖.再生能力是植物在严酷环境下能够生存的重要手段,也被广泛应用于生产实践中.组织培养、扦插和嫁接等都是基于植物再生能力而开发的农业技术.再生现象的本质是细胞在受伤或胁迫的环境下命运发生转变的过程.近年来,植物再生领域的研究取得了一系列突破性进展,不仅对植物再生过程中细胞命运转变的谱系有了初步认识,而且探讨了植物细胞高度可塑性的分子机制.伤口或胁迫信号、激素、转录因子和表观遗传途径因子形成有序协作的调控通路,控制着再生过程.本文将总结种子植物中器官从头发生和体细胞胚发生这两种再生方式的研究进展,以期为从事植物再生研究的工作者提供参考.

关键词：植物再生器官从头发生体细胞胚发生组织培养愈伤组织细胞可塑性细胞全能性细胞多能性

紫云英根瘤菌胞外多糖缺陷型变种的分离及遗传分析

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生物工程学报 1991年第2期7卷 124-131页

作者：陈汉才龙北国宋鸿遇中国科学院上海植物生理研究所

经转座子Tn5诱变,获得20株紫云英根瘤菌菌株109胞外多糖(Exopolysaccharide,EPS)缺陷型(EPS-deficient,Exo^-)变种。这些变种仍都是原养型,在含不同的碳底物或不同浓度碳底物的固体培养基上,菌落型态均无改变。与亲本菌相比,变种的EPS... 详细信息

经转座子Tn5诱变,获得20株紫云英根瘤菌菌株109胞外多糖(Exopolysaccharide,EPS)缺陷型(EPS-deficient,Exo^-)变种。这些变种仍都是原养型,在含不同的碳底物或不同浓度碳底物的固体培养基上,菌落型态均无改变。与亲本菌相比,变种的EPS产量明显降低。所有变种未能在其宿主植物紫云英上结瘤。利用载体质粒pMN2,经Exo^-变种与大肠杆菌受体菌交配,通过选择Tn5卡那霉素抗性标记的转移,构建成带有Tn5及菌株109多糖基因DNA片段的R-prime质粒。R-prime质粒能稳定地存在于菌株109中。大部分变种的Exo^-表型能被R-prime质粒互补,但R-prime质粒未能使这些Exo^-变种恢复有效结瘤的共生能力。根据互补结果,20株Exo^-变种分为6种不同的互补群,其中5种互补群的多糖位点在遗传上是连锁的。

关键词：根瘤菌胞外多糖合成遗传分析

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分子氢和氧对受高温胁迫蓝藻固氮活性的影响

水生生物学报 1995年第3期19卷 234-239页

作者：陈因方大惟中国科学院上海植物生理研究所

蓝藻Ａｎａｂａｅｎａ７１２０经高温处理后，固氮活性下降，对氧的敏感度增大，增大程度随氧浓度增高而递增。高温胁迫下，分子氢与对正常条件下生长的蓝藻一样可以削弱或消除氧对固氮的伤害，氢的此种行为在光照下和黑暗中表现相似，... 详细信息

蓝藻Ａｎａｂａｅｎａ７１２０经高温处理后，固氮活性下降，对氧的敏感度增大，增大程度随氧浓度增高而递增。高温胁迫下，分子氢与对正常条件下生长的蓝藻一样可以削弱或消除氧对固氮的伤害，氢的此种行为在光照下和黑暗中表现相似，其良好作用比正常生长蓝藻显著，添加光合抑制剂。ＣＯ＿２或Ｎ＿２时亦如此。有外源蔗糖时，氢的良好作用不表现。经ＣＯ或Ｃ＿２Ｈ＿２处理的蓝藻，氢在其固氮活性受氧伤害时的良好作用消失。

关键词：蓝藻高温胁迫固氮活性分子氢氧