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高温胁迫下橡胶树白粉菌实时荧光定量PCR内参基因的筛选

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分子植物育种 2024年第1期22卷 68-76页

作者：何永祥李芳肖莹韩乔慧曹学仁海南大学植物保护学院热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室海口570228 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业农村部热带作物有害生物综合治理重点实验室海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室海口571101

为了筛选出合适的内参基因,构建高温胁迫下不同生长发育时期橡胶树白粉菌基因表达的RT-qPCR体系。利用实时荧光定量PCR技术对EF1、GAPDH、CH、H3、PBS2、TUB、CU 7个候选内参基因进行表达水平测定,并结合△Ct法、GeNorm、NormFinder和Re... 详细信息

为了筛选出合适的内参基因,构建高温胁迫下不同生长发育时期橡胶树白粉菌基因表达的RT-qPCR体系。利用实时荧光定量PCR技术对EF1、GAPDH、CH、H3、PBS2、TUB、CU 7个候选内参基因进行表达水平测定,并结合△Ct法、GeNorm、NormFinder和Refindre对其进行表达稳定性分析。分生孢子时期基因表达稳定性为EF1>H3>PBS2>TUB>GAPDH>CH>CU,萌发期为GAPDH>EF1>PBS2>CH>TUB>H3>CU,侵染期为EF1>GAPDH>PBS2>H3>TUB>CU>CH,在菌丝生长期和产孢期,基因的表达稳定顺序分别为EF1>GAPDH>CH>H3>CU>TUB>PBS2和EF1>GAPDH>H3>PBS2>CU>TUB>CH。综上所述,EF1基因可以作为高温胁迫对橡胶树白粉菌基因表达的理想内参基因。本研究结果为高温胁迫下橡胶树白粉菌相关基因的表达研究提供了合适的内参基因。

关键词：橡胶树白粉菌实时荧光定量PCR 内参基因温度

不同初加工方法对咖啡豆风味化合物和感官特性的影响

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食品工业科技 2024年

作者：肖克翟慧楠胡荣锁于鑫欣董文江宁夏大学食品科学与工程学院宁夏食品微生物应用技术与安全控制重点实验室中国热带农业科学院香料饮料研究所海南省特色热带作物适宜性加工与品质控制重点实验室国家重要热带作物工程技术研究中心

本研究旨在探究不同初加工处理方法对阿拉比卡咖啡理化特性、风味和感官特性的影响。通过电子鼻和感官分析评价不同初加工咖啡样品的感官风味，主成分分析（PCA）对不同初加工方式进行区分，并利用皮尔逊相关系数分析初加工方法与产生... 详细信息

本研究旨在探究不同初加工处理方法对阿拉比卡咖啡理化特性、风味和感官特性的影响。通过电子鼻和感官分析评价不同初加工咖啡样品的感官风味，主成分分析（PCA）对不同初加工方式进行区分，并利用皮尔逊相关系数分析初加工方法与产生的风味化合物之间的关系。结果表明，在理化指标方面，不同初加工方法对咖啡样品的总可滴定酸度（TA）、总可溶性固形物（TSS）和pH具有显著影响（P 生物碱、绿原酸和有机酸等风味化合物含量影响较大，干法处理Ⅰ（GA）的咖啡因含量最高（12.32 mg/g DW），蜜处理Ⅰ（MA）拥有最高的葫芦巴碱含量（3.71 mg/g DW），湿法加工（CS）导致咖啡样品具有较低的绿原酸含量和最高的有机酸含量。此外，电子鼻结果显示，不同初加工方法制备的咖啡香气化合物含量差异显著，相较于人工评测，电子感官分析可以更有效的对不同初加工方法进行区分。该研究结果明晰了不同初加工方法对咖啡的化学组成及感官风味的影响，对咖啡风味品质提升及对优质产品的筛选和鉴别具有重要意义。

关键词：阿拉比卡咖啡初加工处理理化特性风味化合物电子感官

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文昌鸡胚胎期胸肌发育特征的研究

中国畜牧杂志 2024年第7期60卷 164-168页

作者：陈岸鸿徐铁山顾丽红蒋启程陆阳清郑心力广西大学动物科学技术学院亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室广西南宁5300041 海南省农业科学院畜牧兽医研究所海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海南海口571100 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所海南海口571101

为研究文昌鸡胚胎期胸肌发育规律及肌肉调控基因(MyoG、MRF4)对肌纤维发育的影响,本研究挑选了100枚蛋重(40±2) g的文昌鸡种蛋进行同条件孵化,测定8~20日胚龄(E8~E20)的胚胎重和胸肌重,计算其胸肌率,并取胸肌进行冰冻组织切片,观察胚... 详细信息

为研究文昌鸡胚胎期胸肌发育规律及肌肉调控基因(MyoG、MRF4)对肌纤维发育的影响,本研究挑选了100枚蛋重(40±2) g的文昌鸡种蛋进行同条件孵化,测定8~20日胚龄(E8~E20)的胚胎重和胸肌重,计算其胸肌率,并取胸肌进行冰冻组织切片,观察胚胎期胸肌纤维变化情况。随后采用实时荧光定量(qRT-PCR)方法分析其胸肌中MRF4、MyoG、β-actin的表达量。结果显示:文昌鸡胚胎重在E19前随着胚龄增加而增加,在E19后略微下降;胸肌重在E16前随着胚龄增加而增加,并在E16后波浪式下降;胸肌率在E8~E14呈波浪式上升,E14后显著下降。E8~E14阶段成肌细胞大量增殖;E14阶段成肌细胞开始出现少量融合分化形成的多核肌管;E16阶段细胞核开始完全移动至肌纤维周围,肌纤维雏形形成;到E20阶段胸肌肌纤维已经具备成年动物肌纤维相同的形状。MYOG和MRF4在胸肌中分别在E14和E16达到表达高峰。综上,E14至E16阶段是文昌鸡胚胎胸肌发育最快的时期,是胸肌发育的关键转折期,其中,E14是胸肌从增殖到融合的关键过渡点,而E16是胸肌肌纤维成熟的关键点。本文通过探究文昌鸡胸肌发育与其关键调控基因之间的潜在联系,为制定高效养殖策略并提升文昌鸡胸肌产量提供了理论依据。

关键词：文昌鸡胚胎胸肌 MyoG MRF4

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基于广泛靶向代谢组学的不同花色秋石斛类黄酮差异分析

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分子植物育种 2024年

作者：林芳玉陆顺教廖易殷涵泰凌鹏李崇晖中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所海南省热带观赏植物种质创新利用工程技术研究中心海南省热带作物资源遗传改良与创新重点实验室农业部华南作物基因资源与种质创制重点实验室海南大学热带农林学院

为解析紫红色系不同秋石斛(Den-Phals)品种中花色素组成和含量差异，本研究利用超高效液相色谱-串联质谱对‘水蜜桃’(浅桃红)、‘迷你’(紫红)和‘黑猫’(深红)花被片中的类黄酮进行定性和定量分析，筛选差异代谢物，并对其进行KEGG富... 详细信息

为解析紫红色系不同秋石斛(Den-Phals)品种中花色素组成和含量差异，本研究利用超高效液相色谱-串联质谱对‘水蜜桃’(浅桃红)、‘迷你’(紫红)和‘黑猫’(深红)花被片中的类黄酮进行定性和定量分析，筛选差异代谢物，并对其进行KEGG富集分析。结果表明，3个品种花被片中总黄酮含量以‘黑猫’为最高，‘水蜜桃’为最低。基于代谢组学技术共鉴定出8类242种类黄酮代谢物，其中黄酮醇类88种(占33.06%)、黄酮类91种(占35.14%)、花青素类38种(占15.70%)，以上3大类物质的合成途径为优势代谢通路，其余为查耳酮、异黄酮、黄烷酮、黄烷醇等。‘黑猫’花被片中黄酮醇和黄酮类化合物的含量占总量的69.86%，为3个品种最高。‘水蜜桃’vs‘迷你’、‘水蜜桃’vs‘黑猫’、‘黑猫’vs‘迷你’3组中共同差异代谢物111种，显著富集在黄酮和黄酮醇以及花青素生物合成途径上。代谢物差异分析表明，随着天竺葵素及其衍生物含量增加，花色逐渐偏向于桃红色。矢车菊素糖苷、飞燕草素糖苷、以及黄酮和黄酮醇类代谢物对‘黑猫’的花色贡献很大，其中槲皮素糖苷和异鼠李素糖苷是影响花色的重要物质。本研究为阐明秋石斛类黄酮生物合成途径提供基础，也为秋石斛花色改良提供参考。

关键词：秋石斛(Den-Phals) 代谢组类黄酮差异代谢物

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基于流式细胞术测定9种兰属植物基因组大小

分子植物育种 2024年

作者：董旭黄明忠陈金花冷青云杨光穗中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所农业部华南作物基因资源与种质创制重点实验室海南省热带观赏植物种质创新利用工程技术研究中心海南省热带作物资源遗传改良与创新重点实验室海南大学热带农林学院

本研究首先采用WPB、Galbraith’s和mGb 3种解离液进行墨兰细胞核解离，构建流式细胞术基因组大小检测技术体系，结果显示WPB的解离效果最好。以此为基础，利用WPB解离液检测了9种兰属植物的基因组大小，结果如下：纹瓣兰为6.28±0.06 G... 详细信息

本研究首先采用WPB、Galbraith’s和mGb 3种解离液进行墨兰细胞核解离，构建流式细胞术基因组大小检测技术体系，结果显示WPB的解离效果最好。以此为基础，利用WPB解离液检测了9种兰属植物的基因组大小，结果如下：纹瓣兰为6.28±0.06 Gb，椰香兰为3.35±0.03 Gb，莎叶兰为4.06±0.04 Gb，冬凤兰为3.39±0.07 Gb，独占春为4.31±0.07 Gb，美花兰为3.44±0.05 Gb，兔耳兰为3.33±0.04 Gb，湿地兰为3.57±0.02 Gb，果香兰为2.36±0.02 Gb。本研究丰富了兰科植物的基因库，为兰属植物基因组学和进化生物学等研究奠定基础。

关键词：流式细胞术兰属基因组大小

不同氮源处理对4个木薯品种幼苗生长发育的影响

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热带生物学报 2024年第1期15卷 19-26页

作者：赵金铃潘晋龙吴宇垚韩昊祥张怀方陈新曾长英海南大学热带作物学院海口570228 中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口571101

为了探究不同形态的氮源对不同品种木薯(Manihot esculenta)幼苗生长发育的影响及其差异性,以‘CH16’、‘SC16’、‘SC205’和‘17Q’等4个木薯品种作为试验材料,设置了-N、NO_(3)^(-)、NH4+三种不同氮源,围绕4个木薯品种的生长状况、... 详细信息

为了探究不同形态的氮源对不同品种木薯(Manihot esculenta)幼苗生长发育的影响及其差异性,以‘CH16’、‘SC16’、‘SC205’和‘17Q’等4个木薯品种作为试验材料,设置了-N、NO_(3)^(-)、NH4+三种不同氮源,围绕4个木薯品种的生长状况、氮含量、根系形态、氮积累量、氮素利用效率等特征展开研究。结果表明:在NaNO3(3 mmol·L^(-1)),NH4Cl(3 mmol·L^(-1))处理下,‘SC205’、‘17Q’对铵态氮的氮素利用效率相对较高,属于喜铵品种,‘SC16’和‘CH16’对硝态氮和铵态氮的利用效率和喜好性无差异;在无氮条件下,‘17Q’和‘SC16’耐低氮胁迫能力相对较强,是氮高效品种,而‘SC205’和‘CH16’耐低氮胁迫能力相对较弱,是氮低效品种,其中,‘CH16’的耐低氮能力最弱。

关键词：木薯无氮硝态氮铵态氮氮素利用效率生长发育

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海南粗榧中MATE基因的鉴定与表达分析

分子植物育种 2024年

作者：孙静怡吴崇玉唐欣孙化鹏江雪飞乔飞中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所农业农村部中药材生物学与栽培重点实验室海南大学热带农林学院海南大学三亚南繁研究院

植物多药及毒性复合物排出蛋白MATE(multidrug and toxic compound extrusion)在植物中具有转运功能。为探索海南粗榧中MATE的相关功能，本研究从海南粗榧转录组数据中筛选到两个海南粗榧MATE基因命名为ChMATE1和ChMATE2。研究利用生物... 详细信息

植物多药及毒性复合物排出蛋白MATE(multidrug and toxic compound extrusion)在植物中具有转运功能。为探索海南粗榧中MATE的相关功能，本研究从海南粗榧转录组数据中筛选到两个海南粗榧MATE基因命名为ChMATE1和ChMATE2。研究利用生物信息学对两个基因编码的蛋白进行分析，使用PCR技术对这两个基因序列ORF区进行克隆，并通过实时荧光定量PCR检测ChMATE1与ChMATE2在海南粗榧不同植物组织中的表达情况。将ChMATE1和ChMATE2和GFP基因在烟草细胞中融合表达，然后在显微镜下观察其亚细胞定位。结果表明，ChMATE1和ChMATE2的基因全长分别为1467 bp与1521 bp，编码488个与506个氨基酸，预测蛋白分子量为53.25 kDa与54.09 kDa。生物信息学表明，ChMATE1与转运次生代谢物的MATE蛋白聚在一类，ChMATE2和参与异生化合物解毒的DTX蛋白聚在一类。实时荧光定量PCR结果表明ChMATE1和ChMATE2在叶片中的表达量均高于茎，并且ChMATE2在叶片中的表达水平高于ChMATE1。亚细胞定位的结果显示ChMTE1与ChMATE2均定位在液泡膜上。本研究为MATE蛋白家族在海南粗榧生物碱转运方面的研究提供一定的参考，为继续验证ChMATE1和ChMATE2的转运功能提供理论基础。

关键词：海南粗榧 MATE家族实时荧光定量PCR 亚细胞定位

海南粗榧ChHCT基因的克隆和茉莉酸甲酯诱导表达分析

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分子植物育种 2024年

作者：吴崇玉江雪飞姚润冬孙静怡唐欣孙化鹏丛汉卿乔飞海南大学热带农林学院海南大学三亚南繁研究院中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所农业农村部中药材生物学与栽培重点实验室

羟基肉桂酰基转移酶是植物苯丙烷代谢通路中重要的酰基转移酶，参与植物次生代谢物质的合成。为研究茉莉酸甲酯处理下海南粗榧羟基肉桂酰基转移酶的表达特性，本研究从海南粗榧转录组结果中筛选出1个编码羟基肉桂酰基转移酶的基因，利用... 详细信息

羟基肉桂酰基转移酶是植物苯丙烷代谢通路中重要的酰基转移酶，参与植物次生代谢物质的合成。为研究茉莉酸甲酯处理下海南粗榧羟基肉桂酰基转移酶的表达特性，本研究从海南粗榧转录组结果中筛选出1个编码羟基肉桂酰基转移酶的基因，利用PCR技术克隆得到该基因的CDS序列，命名为ChHCT。通过生物信息学对其进行蛋白理化性质进行分析。结果表明：该基因长度为1 302 bp，编码434个氨基酸，该蛋白为亲水蛋白，不稳定系数为38.43，属于稳定蛋白。亚细胞定位结果显示该蛋白定位于细胞质中，与其他物种中的HCT蛋白进行氨基酸序列进行比对分析，ChHCT含有BAHD酰基转移酶家族特有的HXXXD和DFGWG两个保守结构域，系统发育树分析结果发现，ChHCT与其他物种中的HCT聚类在同一分支中，ChHCT与辐射松的HCT表现出较高的同源性。外源茉莉酸甲酯处理海南粗榧叶片和悬浮培养细胞时发现，随着胁迫时间的增加ChHCT表达量逐渐上升，表明茉莉酸可以通过促进ChHCT的表达调节苯丙烷生物合成的代谢流，从而在海南粗榧抗逆性中扮演关键角色。研究结果可为海南粗榧中羟基肉桂酰基转移酶后续功能研究提供参考。

关键词：海南粗榧(Cephalotaxus hainanensis) 羟基肉桂酰转移酶生物信息学分析茉莉酸甲酯

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基于白木香转录组的SSR序列特征分析

分子植物育种 2024年第9期22卷 2971-2978页

作者：向琳曾军王昊李薇董文化戴好富梅文莉华中农业大学植物科学技术学院武汉430070 中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南省沉香工程技术研究中心海口市热带天然产物研究与利用重点实验室海口571101 海南热带农业资源研究院海南省热带农业生物资源保护与利用重点实验室海口571101

为探究白木香的简单重复序列特征,开发SSR分子标记用于白木香种质资源的遗传分化和分子鉴定,本研究鉴定了白木香转录组unigene序列的SSR位点,对其SSR的分布及序列特征进行统计分析,进而设计SSR引物,并验证其SSR引物的多态性。结果表明,... 详细信息

为探究白木香的简单重复序列特征,开发SSR分子标记用于白木香种质资源的遗传分化和分子鉴定,本研究鉴定了白木香转录组unigene序列的SSR位点,对其SSR的分布及序列特征进行统计分析,进而设计SSR引物,并验证其SSR引物的多态性。结果表明,在128712条unigene中共鉴定到9362个SSR位点,分布频率为7.27%。SSR序列中双碱基重复序列最多,占总SSR的54.90%;白木香双碱基重复序列以AG/CT、AC/GT为主,占34.22%。SSR位点重复次数主要集中在5~11次,占总SSR位点数的96.56%,其中三碱基重复5次的SSR位点数最多,共有1925个。设计并合成50对引物,其中35对引物可扩增出预期大小条带,扩增效率达到70%。以24个不同白木香个体对35对引物进行扩增,采用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SSR引物多态性,表明SSR引物具有多态性。研究表明,白木香转录组SSR重复基元类型丰富,分布密度高,多态性高,可用于白木香资源的遗传多样性评价、遗传分化、种质鉴定和分子育种等后续研究。

关键词：白木香转录组简单重复序列序列特征种质资源