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肛门直肠畸形直肠末端c-kit和干细胞因子受体表达的研究

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中华小儿外科杂志 2006年第12期27卷 631-634页

作者：张海兰高红袁正伟王维林中国医科大学附属第二医院小儿外科沈阳110004 中国医科大学附属第二医院小儿先天畸形实验室

目的研究肛门直肠畸形(ARM)患儿直肠末端c-kit和SCF的表达水平,以探讨ARM患儿术后便秘的分子机制。方法通过RT-PCR方法研究10例高位、10例中位、8例低位ARM畸形和2例后天性肛瘘直肠末端c-kit mRNA和SCF mRNA的表达水平,并与正常对照组... 详细信息

目的研究肛门直肠畸形(ARM)患儿直肠末端c-kit和SCF的表达水平,以探讨ARM患儿术后便秘的分子机制。方法通过RT-PCR方法研究10例高位、10例中位、8例低位ARM畸形和2例后天性肛瘘直肠末端c-kit mRNA和SCF mRNA的表达水平,并与正常对照组进行比较。结果与正常对照组相比较,c-kit mRNA、SCF mRNA的表达在高位ARM组、中位ARM组差异有显著意义(P＜0．05),后天性肛瘘组、低位ARM组差异无显著意义(P＞0．05)。结论低位ARM和后天性肛瘘直肠末端c-kit mRNA和SCF mRNA表达未见明显异常提示这两种疾病可能不影响患儿直肠末端Cajal间质细胞的发育和功能。高、中位ARM患儿直肠末端c-kit mRNA和SCF mRNA表达的减少可能是先天性的,将影响Cajal间质细胞的发育和功能,可能是患儿术后便秘产生的分子生物学证据之一。

关键词：直肠,畸形原癌基因干细胞因子受体

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肝母细胞瘤基因组不平衡性与染色体变异

中华肿瘤杂志 2006年第12期28卷 915-919页

作者：高红张志波欧阳玲张可仞王维林中国医科大学附属第二医院卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004 中国医科大学附属第二医院妇产科沈阳110004

目的建立稳定的比较基因组杂交(CGH)技术,探讨肝母细胞瘤(HB)染色体1p36杂合性缺失(LOH)的特点。方法应用CGH检测30例HB DNA的丢失或扩增;应用聚合酶链反应-简单重复序列多态性(SSLP)方法,对30例HB中染色体1p36上6个微卫星的杂合子丢失... 详细信息

目的建立稳定的比较基因组杂交(CGH)技术,探讨肝母细胞瘤(HB)染色体1p36杂合性缺失(LOH)的特点。方法应用CGH检测30例HB DNA的丢失或扩增;应用聚合酶链反应-简单重复序列多态性(SSLP)方法,对30例HB中染色体1p36上6个微卫星的杂合子丢失进行检测。结果每例HB细胞染色体均有不同程度的变异,HB常见增益的染色体区域是1q、2 q、2p、8 q、8 p、12q和22q,常见丢失的染色体区域为1p、4q、4p、16q、17p和18q。30例HB中,1号染色体上6个基因座发生LOH的总频率为63．3％(19／30),其中D1S199为最高(66．7％),其次为D1S450(46．7％)。结论HB存在多条染色体DNA拷贝数扩增或丢失的区域;HB在染色体1p36上存在广泛的LOH;染色体变异引起相应瘤基因扩增和抑癌基因的丢失可能参与了HB的发生、发展。

关键词：肝母细胞瘤比较基因组杂交杂合性丢失

宫内窘迫后胎鼠肾脏表皮生长因子及其受体表达变化的研究

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中国医科大学学报 2004年第5期33卷 400-401,404页

作者：吴捷高红王伟魏克伦中国医科大学附属第二医院儿科辽宁沈阳110004 中国医科大学附属第二医院小儿先天畸形研究室辽宁沈阳110004

目的 :探讨宫内窘迫后胎鼠肾脏表皮生长因子 (EGF)和转化生长因子α(TGF α)及其受体 (EGFR)的变化。方法 :利用胎鼠宫内窘迫模型 ,采用Western杂交技术检测胎肾TGF α和EGF蛋白表达 ;免疫组织化学染色观察胎肾EGFR表达。结果 :Western... 详细信息

目的 :探讨宫内窘迫后胎鼠肾脏表皮生长因子 (EGF)和转化生长因子α(TGF α)及其受体 (EGFR)的变化。方法 :利用胎鼠宫内窘迫模型 ,采用Western杂交技术检测胎肾TGF α和EGF蛋白表达 ;免疫组织化学染色观察胎肾EGFR表达。结果 :Western杂交仅检测到胎肾TGF α阳性信号 ,而未见EGF表达。TGF α蛋白在假手术组已有表达 ,再灌注后呈增加趋势。胎肾EGFR表达部位主要在肾皮质近曲小管 ,假手术组几乎无表达 ,再灌注后表达渐增强 ,15h达高峰 (P <0 .0 1)。结论 :胎儿后期 ,肾组织TGF α是与EGFR结合的主要生长因子配体 ;宫内窘迫后应用外源性生长因子可能对防治肾损伤有重要作用。

关键词：宫内窘迫肾脏表皮生长因子转化生长因子α 表皮生长因子受体

分析人雄激素受体基因判断子宫颈癌及子宫颈上皮内瘤变组织的克隆状态

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中华妇产科杂志 2004年第11期39卷 763-766页

作者：陆春雪张淑兰林蓓高红中国医科大学附属第二医院妇产科沈阳110004 卫生部小儿先天畸形重点实验室

目的　通过分析人雄激素受体 (humanandrogenreceptor,HUMARA)基因 ,检测宫颈癌及宫颈上皮内瘤变 (CIN)组织的X染色体失活方式 ,从而判断其克隆状态。方法　对 2 6例宫颈浸润性癌 (宫颈癌组 )、31例CIN(CIN组 )及 33例正常宫颈 (正常宫... 详细信息

目的　通过分析人雄激素受体 (humanandrogenreceptor,HUMARA)基因 ,检测宫颈癌及宫颈上皮内瘤变 (CIN)组织的X染色体失活方式 ,从而判断其克隆状态。方法　对 2 6例宫颈浸润性癌 (宫颈癌组 )、31例CIN(CIN组 )及 33例正常宫颈 (正常宫颈组 )组织标本 ,提取其DNA ,经甲基化敏感性限制性核酸内切酶HhaⅠ消化后 ,对HUMARA基因片段行PCR扩增并电泳 ,通过观察电泳条带判断其克隆状态。结果　HUMARA基因的杂合率为 89%。宫颈癌组、CIN组及正常宫颈组组织的单克隆率分别为 92 %、38%和 10 % ,宫颈癌组分别与CIN组及正常宫颈组比较 ,差异均有极显著性 (P 0 0 5 )。CIN组中 ,CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ组织的单克隆率分别为 2 0 % (2 / 10 )、38% (3/ 8)及 6 3% (5 / 8) ,呈逐级增高趋势 ,但各级CIN间比较 ,差异均无显著性 (P >0 0 5 )。结论　宫颈癌是癌细胞克隆性增殖的结果。对单克隆状态的CIN应给予积极干预或严密随访。HUMARA基因分析可能成为研究宫颈癌发生机制的一种分子生物学检测手段。

关键词： CIN 子宫颈癌正常单克隆雄激素受体基因子宫颈上皮内瘤变状态 X染色体失活电泳限制性核酸内切酶

NOX4调控神经细胞增殖在神经管缺损发生中的作用

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中华小儿外科杂志 2023年第3期44卷 252-258页

作者：付佳琳黄琬淇黄天楚顾卉袁正伟中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

目的探究烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4)通过调控细胞增殖对小鼠神经管缺损(neural tube defects,NTDs)形成的作用。方法选用体重18~20 g的健康C57BL/6J小鼠,雌鼠30只,雄鼠15只,雌雄小鼠按2∶1比例于晚上合笼、过夜,次日清晨观察小鼠阴道栓,有明显阴道栓确认已交配,当日记为孕0.5 d(E0.5)。选取明确受孕的18只小鼠,按随机数字表法随机分为小鼠NTDs组(9只)和对照组(9只)。孕8.5 d(E8.5)时,将小鼠NTDs组利用全反式维甲酸(all trans retinoid acid,ATRA)按70 mg/kg的浓度灌胃处理,对照组采用橄榄油灌胃处理。在孕9.5 d(E9.5)收集胎鼠。体式显微镜下观察胚胎神经管发育情况并拍照记录形态。通过免疫荧光染色法观察神经管形态,蛋白质印迹法(Western blot)检测NOX4和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在神经管的表达情况。构建NOX4过表达质粒(oe-NOX4)和对照(NC)以及NOX4沉默质粒(sh-NOX42^(#)、sh-NOX43^(#))和对照(sh-NC),分别转染至C17.2细胞系中,通过Western blot检测NOX4及增殖相关蛋白PCNA的表达情况;通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)检测转染质粒24 h、48 h、72 h、96 h后细胞生长情况,进一步明确NOX4对细胞增殖的调控作用。结果体式显微镜下观察E9.5胎鼠神经管发育情况,NTDs组存在明显神经管畸形。免疫荧光染色结果也显示NTDs组存在明显的神经管闭合不全,对照组神经管发育正常,且NTDs组神经管中NOX4表达略高于对照组,而PCNA的表达低于对照组。Western blot结果显示,NTDs组胚胎中NOX4表达(6.24±2.70)高于对照组(1.00±0.51),PCNA的表达(0.75±0.09)低于对照组(1.00±0.12),两组间的差异有统计学意义(P<0.05)。在C17.2神经干细胞中转染NOX4过表达质粒(oe-NOX4)和沉默质粒(sh-NOX42^(#)、sh-NOX43^(#)),利用Western blot检测NOX4表达水平的变化,结果显示,转染oe-NOX4质粒后,NOX4的表达(1.26±0.13)显著高于转染NC组(1.00±0.02),而转染oe-NOX4质粒后增殖相关蛋白PCNA的表达(0.71±0.10)较NC组(1.00±0.12)显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);相反,转染sh-NOX42^(#)、sh-NOX43^(#)质粒后,NOX4的表达为(0.85±0.06)、(0.71±0.06),显著低于转染sh-NC质粒组(1.00±0.04),PCNA的表达(1.61±0.17)、(1.43±0.17)较sh-NC组(1.00±0.17)明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。利用CCK8实验探究NOX4对细胞增殖能力的影响,结果提示,过表达NOX4,24 h后与NC组相比,吸光度为(0.48±0.01)比(0.48±0.02),48 h为(0.82±0.04)比(1.12±0.03),72 h为(1.07±0.10)比(2.10±0.10),96 h为(2.53±0.20)比(3.01±0.43),细胞增殖能力呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05);而与sh-NC相比,当转染sh-NOX42^(#)、sh-NOX43^(#),24 h吸光度分别为(0.32±0.02)、(0.31±0.02)、(0.30±0.01),48 h为(0.77±0.02)、(0.64±0.04)、(0.37±0.04),72 h为(1.94±0.05)、(1.69±0.03)、(1.24±0.08),96 h为(2.33±0.11)、(2.11±0.05)、(2.01±0.01),细胞增殖能力有显著提高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论NTDs中异常高表达的NOX4能够通过降低增殖相关蛋白PCNA的表达,抑制细胞增殖,导致小鼠神经管闭合异常。

关键词：神经管缺损烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4 细胞增殖

凋亡抑制基因survivin在卵巢上皮性癌组织中的表达及其与bcl-2、bax蛋白表达的关系

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中华妇产科杂志 2003年第4期38卷 203-206,i001页

作者：张淑兰赵长清林蓓李妍高红中国医科大学附属第二医院妇产科沈阳110004 卫生部小儿先天畸形重点实验室

目的　探讨凋亡抑制基因survivin在卵巢上皮性癌中的表达 ,及其与bcl 2、bax蛋白表达的相关性。方法　应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测 35例卵巢上皮性癌组织中survivin基因的表达 ;应用免疫组织化学链霉亲和素生物素过... 详细信息

目的　探讨凋亡抑制基因survivin在卵巢上皮性癌中的表达 ,及其与bcl 2、bax蛋白表达的相关性。方法　应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测 35例卵巢上皮性癌组织中survivin基因的表达 ;应用免疫组织化学链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物 (SABC)方法 ,检测bcl 2及bax蛋白的表达 ,并与卵巢上皮性交界性肿瘤、良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织各 10例进行对照。结果　卵巢上皮性癌、交界性肿瘤组织中 ,survivin基因的表达率分别为 83%及 80 % ,显著高于良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织的表达率 2 0 %及 0 % (P均 0 .0 5 )。survivin基因表达与bcl 2蛋白表达呈正相关 (P <0 0 1) ,而与bax蛋白表达呈负相关 (P <0 .0 5 )。结论　survivin基因可通过抑制癌细胞凋亡 ,对卵巢上皮性癌的发生和发展起作用 ;survivin基因可能与凋亡相关基因bcl 2、bax ,在卵巢上皮性癌的发展中分别起协同和拮抗作用。

关键词：抑制基因细胞凋亡卵巢肿瘤原癌基因蛋白c-bcl-2 原癌基因蛋白质类

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卵巢癌发生与转化生长因子β受体关系研究

中国医科大学学报 1999年第1期28卷 34-35,54页

作者：任舒月杨滨任常山中国医科大学第二临床学院小儿先天畸形实验室

目的：研究卵巢癌病人基因组不稳定和转化生长因子β受体Ⅱ基因（ＴβＲ—Ⅱ）突变与其发生关系。方法：应用聚合酶链反应技术和单链构象多态性分析方法，分析Ｄ２Ｓ１２３、Ｍｓｅ５和ＴβＲ—Ⅱ三个位点微卫星变化，并检测ＴβＲ—Ⅱ... 详细信息

目的：研究卵巢癌病人基因组不稳定和转化生长因子β受体Ⅱ基因（ＴβＲ—Ⅱ）突变与其发生关系。方法：应用聚合酶链反应技术和单链构象多态性分析方法，分析Ｄ２Ｓ１２３、Ｍｓｅ５和ＴβＲ—Ⅱ三个位点微卫星变化，并检测ＴβＲ—Ⅱ突变。结果：１５例卵巢癌中有３例表现微卫星不稳定，有２例检出ＴβＲ—Ⅱ突变。结论：部分卵巢癌病人基因组存在微卫星不稳定，与其发生有关。ＴβＲ—Ⅱ基因突变，使细胞失去对转化生长因子β的反应而发生肿瘤。

关键词：卵巢癌转化生长因子β 受体聚合酶链反应

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针对性生物反馈训练的长期疗效随访

中华医学杂志 2004年第6期84卷 478-481页

作者：袁正伟王维林白玉作王伟中国医科大学第二附属医院小儿外科卫生部先天畸形重点实验室沈阳110004

目的　探讨针对便失禁病因的生物反馈训练方法 ,并对近期和远期疗效进行随访观察。方法　利用多种先进的客观检测手段通过不同侧面对 31例无肛患儿肛门直肠功能进行综合评定 ,根据患儿不同的控制机制异常进行加强肛周肌肉力量、改善直... 详细信息

目的　探讨针对便失禁病因的生物反馈训练方法 ,并对近期和远期疗效进行随访观察。方法　利用多种先进的客观检测手段通过不同侧面对 31例无肛患儿肛门直肠功能进行综合评定 ,根据患儿不同的控制机制异常进行加强肛周肌肉力量、改善直肠感觉阈值、缩短括约肌反应时间、建立肛门括约肌收缩反射和改善排便动力的生物反馈训练 ,并对疗效进行 5～ 7年的长期随访。结果接受生物反馈训练患儿的临床评分与生活质量评分在训练前、训练后、近期随访和远期随访分别是3.2± 1.1与 8.7± 1.1、5 .2± 0 .6与 11.0± 0 .8、5 .0± 0 .6与 10 .8± 0 .9和 4 .6± 0 .7与 10 .0± 0 .7。经过训练之后 ,代表肛周肌肉力量、直肠功能和直肠肛管综合控制能力的指标均有明显改善 ,并出现统计学差异。结论　针对性的生物反馈训练方法对于治疗无肛术后便失禁效果非常明显 ,并且疗效能够长期保持 ,对提高患儿生活质量具有重要意义。

关键词：生物反馈训练大便失禁肛门闭锁随访研究肛门括约肌小儿

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大肠癌和卵巢癌病人微卫星序列变化研究

中国医科大学学报 1999年第2期28卷 88-89页

作者：任舒月杨滨陈春生隋承光陈红任常山中国医科大学第二临床学院小儿先天畸形实验室肿瘤研究所第二研究室

目的：研究大肠癌和卵巢癌病人基因组微卫星ＤＮＡ序列变化。方法：应用ＰＣＲ、聚丙烯酰胺凝胶电泳和同位素技术检测３５例大肠癌和１５例卵巢癌病人基因组３个微卫星位点变化。结果：１０例大肠癌（２８．５７％）和３例卵巢癌（２０... 详细信息

目的：研究大肠癌和卵巢癌病人基因组微卫星ＤＮＡ序列变化。方法：应用ＰＣＲ、聚丙烯酰胺凝胶电泳和同位素技术检测３５例大肠癌和１５例卵巢癌病人基因组３个微卫星位点变化。结果：１０例大肠癌（２８．５７％）和３例卵巢癌（２０％）存在至少一个微卫星位点的变化。结论：部分大肠癌和卵巢癌病人表现微卫星ＤＮＡ不稳定，与其发生机理有关。

关键词：大肠癌卵巢癌微卫星DNA 序列变化