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小附红细胞体mpg1基因的克隆及序列分析

中国兽医科学 2014年第1期44卷 7-13页

作者：曹薇周鹏米荣升黄燕秦培兰杨晓娇王向佩王晓娟石凯陈兆国中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心上海200241

根据猪附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因（msgl）序列设计引物，对上海地区分离的小附红细胞体阳性猪全血DNA进行PCR扩增，获得小附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因（mpgl）并进行测序和分析，研究其遗传变异特点。结果... 详细信息

根据猪附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因（msgl）序列设计引物，对上海地区分离的小附红细胞体阳性猪全血DNA进行PCR扩增，获得小附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因（mpgl）并进行测序和分析，研究其遗传变异特点。结果显示，共获得了11条小附红细胞体mpgl基因序列，序列长度均为1011bp。同源性分析显示，所获得的1l条小附红细胞体mpgl基因序列之间的相似性为96．8％～99．9％，预测氨基酸序列的相似性在97．9％～100％之间；与GenBank中公布的猪附红细胞体msgl基因核苷酸序列相似性在96．6％～98．2％之间，氨基酸序列的相似性为98．2％～99．1％。系统进化分析表明，msgl基因与mpgl基因共同构成每个聚簇。

关键词：小附红细胞体 mpg1基因克隆序列分析

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宠物蜱传疾病流行概况和防控技术研究进展

中国媒介生物学及控制杂志 2021年第3期32卷 257-264页

作者：韦娜娜张厚双周金林中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241

蜱是专性吸血的体外寄生虫,也是人和动物的致病性病毒、细菌、真菌和原虫的传播媒介,因此,相关研究具有重要的公共卫生意义。近年来,宠物数量急剧增加,导致宠物蜱传人兽共患病发病率不断增高。该文从宠物常见寄生蜱类及特征、宠物常见... 详细信息

蜱是专性吸血的体外寄生虫,也是人和动物的致病性病毒、细菌、真菌和原虫的传播媒介,因此,相关研究具有重要的公共卫生意义。近年来,宠物数量急剧增加,导致宠物蜱传人兽共患病发病率不断增高。该文从宠物常见寄生蜱类及特征、宠物常见蜱传病原体及常见蜱传疾病流行情况和防控技术研究进展等方面作一综述,以期为宠物蜱传人兽共患病的综合防控提供参考。

关键词：蜱宠物蜱传疾病防控

3-甲基喹噁啉-2-羧酸的制备及其细胞毒性

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中国兽医学报 2014年第7期34卷 1118-1123页

作者：张可煜郑海红班曼曼郑文丽李涛费陈忠薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241 河南省动物卫生监督所河南郑州450008

通过贝鲁特反应和还原、脱羧反应在体外合成制备3-甲基喹噁啉-2-羧酸,并进行理化鉴定和抗菌活性测试;通过MTT方法研究3-甲基喹噁啉-2-羧酸对多种细胞的生长抑制作用,利用单细胞电泳研究其对细胞DNA的损伤作用,利用流式细胞术研究其对细... 详细信息

通过贝鲁特反应和还原、脱羧反应在体外合成制备3-甲基喹噁啉-2-羧酸,并进行理化鉴定和抗菌活性测试;通过MTT方法研究3-甲基喹噁啉-2-羧酸对多种细胞的生长抑制作用,利用单细胞电泳研究其对细胞DNA的损伤作用,利用流式细胞术研究其对细胞周期的改变。结果显示,体外成功合成制备出3-甲基喹噁啉-2-羧酸,而3-甲基喹噁啉-2-羧酸几乎没有抗菌效果,对多种细胞的生长抑制作用较弱,在剂量检测范围内细胞抑制率不到30%,但在一定剂量下能导致细胞DNA损伤,主要表现为尾长和尾部DNA含量显著升高;并且3-甲基喹噁啉-2-羧酸也能改变Chang细胞的细胞周期,表现为S期阻滞。结果表明,3-甲基喹噁啉-2-羧酸具有一定的细胞毒性。

关键词： 3-甲基喹噁啉-2-羧酸合成 DNA损伤细胞周期

单股正链RNA病毒3'非编码区的结构与功能研究进展

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畜牧与兽医 2011年第10期43卷 98-102页

作者：刘萍刘长龙陆嘉琦高飞尹杨姚火春袁世山南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心猪传染病研究室/农业部动物寄生虫病重点实验室上海200241

单股正链RNA病毒基因组中的3'非编码区(3'UTR)可以形成二级或者高级结构,这些结构对维持病毒RNA的稳定性以及病毒的复制调控具有至关重要的作用。它不仅可以单独发挥作用,也可以与RNA或者蛋白相互作用调控病毒的复制、转录、翻译和包装... 详细信息

单股正链RNA病毒基因组中的3'非编码区(3'UTR)可以形成二级或者高级结构,这些结构对维持病毒RNA的稳定性以及病毒的复制调控具有至关重要的作用。它不仅可以单独发挥作用,也可以与RNA或者蛋白相互作用调控病毒的复制、转录、翻译和包装等各个过程。本文对RNA结构和功能研究的一般方法,以及一些单股正链RNA病毒代表种属的3'UTR的结构和功能进行了综述,并且就研究前景和一些存在的问题进行了探讨。

关键词：单股正链RNA病毒 3′UTR 结构与功能病毒复制

微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及抗血清的制备

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动物医学进展 2012年第7期33卷 54-59页

作者：秦培兰米荣升黄燕周鹏张国恩苏庆美呼高伟曹薇陈兆国中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心上海200241

以微小隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR(SOE PCR)将该3段基因片段串联在一起,各基因片段之间引入柔性氨基酸接头(GGGGS)编码基因。将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)... 详细信息

以微小隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR(SOE PCR)将该3段基因片段串联在一起,各基因片段之间引入柔性氨基酸接头(GGGGS)编码基因。将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达载体,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果表明,获得了CP15-P23-CP15/60融合基因,并在大肠埃希菌中高效表达,Western blot显示重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清识别,制备的多克隆抗体能被重组蛋白特异性识别,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性。

关键词：微小隐孢子虫 CP15-P23-CP15/60融合基因原核表达重叠延伸PCR

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无色孔雀石绿免疫原的合成与鉴定

中国兽医科学 2007年第6期37卷 534-538页

作者：王权李健郭德华龚鹏飞中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生研究室农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232 上海出入境检验检疫局上海200135

用化学方法合成了硝基无色孔雀石绿(NO2-LMG),还原为氨基无色孔雀石绿(NH2-LMG),经红外光谱扫描鉴定NH2-LMG为所需化合物。氨基无色孔雀石绿经重氮法处理后与兔血清白蛋白(RSA)载体蛋白相连,通过紫外分光光谱鉴定,偶联产物与其前体物相... 详细信息

用化学方法合成了硝基无色孔雀石绿(NO2-LMG),还原为氨基无色孔雀石绿(NH2-LMG),经红外光谱扫描鉴定NH2-LMG为所需化合物。氨基无色孔雀石绿经重氮法处理后与兔血清白蛋白(RSA)载体蛋白相连,通过紫外分光光谱鉴定,偶联产物与其前体物相比吸收峰发生了飘移,说明偶联成功。通过动物免疫试验和ELISA抗体特异性试验对该人工合成抗原免疫原性和与无色孔雀石绿反应原性的鉴定,表明成功合成了无色孔雀石绿免疫原。

关键词：无色孔雀石绿免疫原合成

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呋喃它酮代谢物人工抗原及多克隆抗体的制备

畜牧与兽医 2013年第2期45卷 69-73页

作者：刘迎春蒋蔚陈永军高艺林石金磊王权中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生实验室农业部动物寄生虫学重点实验室上海200232

本文利用对醛基苯甲酸(CPA)与呋喃它酮代谢物(AMOZ)进行衍生化,得到衍生物CPAMOZ,并通过质谱法对其结构进行确证。然后采用混合酸酐法将CPAMOZ与载体蛋白偶联,采用紫外扫描(UV)法对偶联物进行验证。用偶联成功的人工全抗原(CPAMOZ-BSA)... 详细信息

本文利用对醛基苯甲酸(CPA)与呋喃它酮代谢物(AMOZ)进行衍生化,得到衍生物CPAMOZ,并通过质谱法对其结构进行确证。然后采用混合酸酐法将CPAMOZ与载体蛋白偶联,采用紫外扫描(UV)法对偶联物进行验证。用偶联成功的人工全抗原(CPAMOZ-BSA)免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定小鼠血清抗体效价为1∶8×104,对NPAMOZ的半数抑制量为26.55μg/L,间接竞争ELISA鉴定小鼠血清多克隆抗体,与NPAMOZ、CPAMOZ的交叉反应率分别为100%、44.8%,与AMOZ、对醛基苯甲酸、对硝基苯甲醛以及同类其他三种药物呋喃妥因、呋喃西林、呋喃唑酮等原药及其代谢物以及代谢物衍生物的交叉反应均小于0.01%。结果表明,制备的AMOZ多克隆抗体效价高、特异性强,灵敏度高,为进一步制备AMOZ单克隆抗体和研制快速筛选检测试剂盒奠定了基础。

关键词：呋喃它酮代谢物人工抗原化学合成鉴定

弓形虫表面抗原SAG1截短型片段在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化

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生物技术通报 2009年第10期25卷 136-141页

作者：安立刚蒋蔚王权陈永军龚国华周锦萍邢小勇孙泉云丁铲中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室上海200241 上海市动物疫病防控中心上海201103

在大肠杆菌中高效表达及纯化获得可溶性、有反应活性的弓形虫表面抗原SAG1截短型片段(tSAG1),为研制新型的弓形虫病检测试剂奠定基础。构建重组质粒pET-32a-tSAG1并将其转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG... 详细信息

在大肠杆菌中高效表达及纯化获得可溶性、有反应活性的弓形虫表面抗原SAG1截短型片段(tSAG1),为研制新型的弓形虫病检测试剂奠定基础。构建重组质粒pET-32a-tSAG1并将其转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达蛋白。SDS-PAGE分析表达产物的表达形式,通过降低培养温度、降低摇床转数和升高LB液体培养基pH,诱导目的蛋白在上清中表达,利用*** Kit试剂盒对目的蛋白进行纯化,Western blot和ELISA检测纯化蛋白的反应原性。在IPTG为1mmol/L、温度37℃条件下,tSAG1以融合蛋白(His-tSAG1)的形式在大肠埃希菌中高效表达,表达产物以包涵体形式存在。在22℃和LB培养基pH为7.7条件下,融合蛋白主要在上清中表达。Western blot和ELISA分析纯化蛋白能被弓形虫的阳性血清所识别。tSAG1在大肠埃希菌中得到了可溶性蛋白表达,经纯化后能被弓形虫的阳性血清所识别,可用于制备检测弓形虫病的诊断试剂。

关键词：弓形虫 tSAG1 蛋白表达蛋白纯化免疫印迹 ELISA

虫卵孵化试验对山羊捻转血矛线虫左旋咪唑抗药性检测

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畜牧与兽医 2010年第6期42卷 87-89页

作者：夏永高王权上海市动物卫生监督所上海200335 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

在多次使用左旋咪唑后不能有效控制羊线虫病的羊场是否有线虫抗药性产生,我们用改良的虫卵孵化试验进行抗药性检测,在控制温度的条件下进行样品中的虫卵浓集和孵化,当虫卵发育到即将孵化时加入不同剂量的左旋咪唑让其暴露于不同药物浓... 详细信息

在多次使用左旋咪唑后不能有效控制羊线虫病的羊场是否有线虫抗药性产生,我们用改良的虫卵孵化试验进行抗药性检测,在控制温度的条件下进行样品中的虫卵浓集和孵化,当虫卵发育到即将孵化时加入不同剂量的左旋咪唑让其暴露于不同药物浓度中继续孵化,适时终止孵化,并计算虫卵孵化抑制率。结果表明加入药物继续孵化6和9 h,药物浓度自然对数值与虫卵死亡机率值呈直线回归关系,ED50分别为0.295ug/mL和0.406 ug/mL,与文献报道左旋咪唑捻转血矛线虫敏感株的ED50接近,经虫卵减少试验证实该羊场未产生左旋咪唑抗药性。

关键词：虫卵孵化试验羊捻转血矛线虫左旋咪唑抗药性检测药物浓度有效控制羊线虫病回归关系不同剂量 ED50 抑制率敏感株卵发育机率值自然直线样品验证文献温度