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功能胰腺β细胞获取与应用的研究进展

生物工程学报 2022年第9期38卷 3316-3328页

作者：向桂齐阳刘清桂胡以平王敏君陈费中国人民解放军海军军医大学基础医学院细胞生物学教研室上海200433 中国人民解放军海军军医大学基础医学院学员六大队上海200433

胰腺β细胞生成和分泌的胰岛素对维持人体正常血糖起到关键作用,胰岛素分泌不足或利用缺陷将会导致糖尿病(diabetes mellitus,DM)的发生。经典的DM治疗方法包括药物治疗和胰岛移植,新兴的胰腺β细胞替代疗法可以使患者摆脱对药物的依赖... 详细信息

胰腺β细胞生成和分泌的胰岛素对维持人体正常血糖起到关键作用,胰岛素分泌不足或利用缺陷将会导致糖尿病(diabetes mellitus,DM)的发生。经典的DM治疗方法包括药物治疗和胰岛移植,新兴的胰腺β细胞替代疗法可以使患者摆脱对药物的依赖并且可以缓解胰岛移植供体缺乏的难题。通过重编程技术或者定向诱导干细胞分化等方法可以获得胰腺β样细胞,相关功能已经在体外细胞和动物体内水平得以验证。有些医院已开展了β细胞替代疗法的临床试验。体外获取具有功能的胰腺β样细胞有望成为临床DM细胞治疗的可靠来源。文中总结了胰腺β细胞主要获取方式,讨论了现有方法存在的问题,为将来获取和应用功能胰腺β细胞提供了思路。

关键词：糖尿病干细胞类器官胰腺β细胞分化

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丹参柯巴基焦磷酸合酶的生物信息学分析

中草药 2015年第6期46卷 887-894页

作者：李卿邸鹏陆文铨张磊陈万生中国人民解放军第二军医大学附属长征医院药学部上海200003 中国人民解放军第二军医大学药学院药用植物学教研室上海200433

目的分析丹参柯巴基焦磷酸合酶(CPS)的氨基酸序列特征,并与其他植物进行比较,为丹参CPS蛋白的后续研究提供有利参考。方法利用生物信息学方法,以丹参为主,对13科16种植物的18条CPS蛋白序列进行了序列组成、生化特性、导肽、信号肽、跨... 详细信息

目的分析丹参柯巴基焦磷酸合酶(CPS)的氨基酸序列特征,并与其他植物进行比较,为丹参CPS蛋白的后续研究提供有利参考。方法利用生物信息学方法,以丹参为主,对13科16种植物的18条CPS蛋白序列进行了序列组成、生化特性、导肽、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、蛋白质二级、三级结构及功能域等预测分析,并进行了丹参CPS蛋白序列与其他植物的同源比对以及系统进化树构建。结果 CPS蛋白氨基酸残基数集中在730以上;相对分子质量91 610左右;平均理论等电点5.87,提示CPS为酸性蛋白。序列结构预测结果显示,CPS蛋白具有明显的疏水区和亲水区,不存在信号肽,不具有跨膜结构域,可能有叶绿体转运肽。蛋白质二级结构中最主要的结构元件是α-螺旋和无规则卷曲。蛋白同源性比对结果显示,丹参CPS与同科植物迷迭香和玄参科植物野甘草的同源性最高。结论对丹参等植物的CPS蛋白进行了详细的生物信息学分析,可为今后深入研究该酶的结构特征和功能提供参考。

关键词：丹参柯巴基焦磷酸合酶(CPS) 生物信息学一级结构二级结构三级结构

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高金线兰镇痛活性物质基础及其作用机制研究

高金线兰镇痛活性物质基础及其作用机制研究

作者：施艺中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

疼痛是人体受到各种伤害性刺激时所产生的感觉,是许多疾病和创伤的常见症状。军队人员在执行作战任务或者训练演习时,极易受到武器伤、训练伤等多种伤害,从而产生不同程度的疼痛感。各种急慢性疼痛造成官兵作业能力下降和生活质量降低,... 详细信息

疼痛是人体受到各种伤害性刺激时所产生的感觉,是许多疾病和创伤的常见症状。军队人员在执行作战任务或者训练演习时,极易受到武器伤、训练伤等多种伤害,从而产生不同程度的疼痛感。各种急慢性疼痛造成官兵作业能力下降和生活质量降低,严重影响部队正常训练和作战能力。所以研制效果好、副作用小的镇痛药物,对于缓解官兵痛苦、促进伤员康复和提升部队平战时期作业能力具有重要意义。金线莲是闽台特色名贵中草药,来源于兰科(Orchidaceae)金线兰属Anoectochilus Blume植物,全草入药,药食两用,具有清热凉血、祛风利湿、解毒等功效。由于过渡采挖,金线莲野生资源急剧减少,从同属植物中寻找替代药源具有现实意义。2018年,本课题组在云南进行资源考察过程中发现一种特殊的金线兰属植物,鉴定为高金线兰Anoectochilus elatus L.,为国内新记录种,现已在实验室成功实现组织培养。通过查阅文献挖掘其传统药用价值,发现高金线兰在印度等国民间常用于胸腹痛等多种疼痛治疗,但至今尚未有文献对其药理活性及其潜在活性成分进行相关报道。因此,本课题拟采用现代药理学和化学技术方法,系统考察高金线兰的镇痛药理活性及化学成分,以期解析其镇痛活性物质基础及作用机制,为高金线兰的传统应用与资源合理开发利用提供科学依据。本文以高金线兰组培苗的种植样品为研究对象,采用小鼠醋酸扭体、热甩尾、福尔马林舔足等不同疼痛动物模型,考察高金线兰粗提物(醇提物EE和水提物AE)的镇痛活性;进一步结合活性导向分离,采用水提醇沉、凝胶色谱、高效制备液相等方法对提取物进行分离纯化,运用核磁共振波谱NMR、甲基化分析、单糖组成分析等方法对主要成分进行结构表征;对制备所得单体、均一多糖采用上述多种疼痛动物模型,评价镇痛药效,并通过在动物模型中使用不同类型的拮抗剂初步探究主要活性成分的可能镇痛机制;最后利用western blot、膜片钳和肠道菌群组学等技术方法探讨活性成分的镇痛作用机制。主要研究结果如下:(1)高金线兰组培苗的种植样品干燥后经95%乙醇提取得到醇提取物EE,药渣烘干后加水热提,得到水提取物AE。采用小鼠醋酸扭体、热甩尾、福尔马林舔足实验评价不同提取物的镇痛活性。结果表明EE和AE均能显著抑制醋酸所致小鼠扭体次数,延长小鼠热刺激甩尾耐受时间,并减少福尔马林所致小鼠晚期舔足时间,具有良好的镇痛活性。(2)采用高效液相色谱分析EE化学成分,发现其液相色谱峰中存在一个主峰,采用制备液相分离纯化得到单体化合物,经过核磁和质谱分析,对照已知化合物波谱和质谱数据,确认为斑叶兰苷(goodyeroside A,GA),GA在醇提物EE中含量约60%。AE进一步经过醇沉,分为上清和沉淀多糖部分。AE醇沉后的沉淀多糖部分可显著抑制醋酸所致小鼠扭体次数,上清则无镇痛活性,提示水提物的镇痛活性主要来源于醇沉的粗多糖。AE醇沉的粗多糖部分进一步经DEAE-52阴离子交换柱、Sephacryl S-100凝胶柱色谱分离纯化,结合活性导向分离,得到一种分子量为10.28k Da的均一多糖GJXL-1。单糖组成分析结果显示GJXL-1仅含葡萄糖,表明GJXL-1为葡聚糖;进一步经甲基化以及1D和2D NMR结果分析,提示GJXL-1含有末端Glcp-(1→,→4)-Glcp-(1→,→3,4)-Glcp-(1→和→4,6)-Glcp-(1→四种残基,摩尔比分别为0.095:0.800:0.026:0.079,以→4)-Glcp-(1→为主链,在主链葡萄糖的3位和6位存在少量支链,其中1,3,4-α-D-glcp残基在α-D-(1→4)-葡聚糖中非常少见。(3)进一步对从EE中分离得到的单体化合物GA与从AE中分离得到的均一多糖GJXL-1进行体内药效评价,并采用小鼠旷场实验和延长戊巴比妥钠小鼠睡眠时间实验考察GA和GJXL-1对动物自主活动和神经系统的影响。结果表明,二者镇痛药效良好,均可显著抑制醋酸所致小鼠扭体次数,延长小鼠热刺激甩尾耐受时间,并减少福尔马林所致小鼠早期、晚期舔足时间,且均未延长由戊巴比妥钠引发的睡眠时间和影响小鼠的自主活动,表明具有较好的安全性。拮抗实验中,发现GA和GJXL-1的镇痛作用都能被L-NAME部分拮抗,提示镇痛活性与机体内NO调节系统相关。此外,GA还能有效抑制SD大鼠CCI模型模拟的慢性神经痛,显著提高大鼠后肢机械痛阈值。(4)机制研究表明,GA在Bv-2细胞可显著抑制MAPK信号通路中p38和JNK的磷酸化表达,而对ERK的磷酸化没有影响;进一步研究发现,GA抑制了上游IRAK1、IRAK4和TAK1磷酸化蛋白的表达;GA在体外对钠离子通道Nav1.1-1.8的电流均无明显影响,且初步药代实验表明GA灌胃给药半小时以后血浆中即检测不到原型,提示GA可能不是原型起效发挥镇痛作用,其作用机制有待进一步探究。GJXL-1可显著抑制LPS刺激的RAW264.7细胞

关键词：高金线兰斑叶兰苷均一多糖镇痛活性作用机制

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西红花中类胡萝卜素生物合成途径研究进展

中草药 2018年第19期49卷 4702-4709页

作者：陈祥慧谭何新张磊第二军医大学药学院药用植物学教研室上海200433

以西红花苷为代表的脱辅基类胡萝卜素类化合物是传统中药西红花Crocus sativus的主要药效成分,具有广泛的抗氧化、抗炎、抗粥样动脉硬化、抗癌、抗抑郁等药理活性。西红花中类胡萝卜素的生物合成途径包括以甲羟戊酸起始合成牻牛儿基牻... 详细信息

以西红花苷为代表的脱辅基类胡萝卜素类化合物是传统中药西红花Crocus sativus的主要药效成分,具有广泛的抗氧化、抗炎、抗粥样动脉硬化、抗癌、抗抑郁等药理活性。西红花中类胡萝卜素的生物合成途径包括以甲羟戊酸起始合成牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸至玉米黄质的传统上游路径,以及裂解玉米黄质特异性合成西红花酸及西红花苷的下游途径。对近年来西红花中类胡萝卜素代谢途径相关关键酶基因的研究现状进行综述,为进一步解析合成西红花苷等类胡萝卜素衍生物的下游途径指明方向,更为后续采用代谢工程的手段提高西红花苷等药效物质产量提供理论依据。

关键词：西红花类胡萝卜素生物合成酶西红花酸西红花苷

肝外胆管组织中干性细胞的研究现状和应用潜能

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中国细胞生物学学报 2023年第3期45卷 550-556页

作者：王紫君刘清桂王敏君胡以平陈费中国人民解放军海军军医大学基础医学院细胞生物学教研室上海200433

肝外胆管是肝脏胆管系统的组成部分,包括胆囊、胆总管等组织。近年来研究发现肝外胆管组织中存在一群具有干性特征的细胞。这群细胞在体外可以扩增培养,形成类器官结构,改变培养条件可以使胆管上皮干性细胞分化为具有一定功能的肝细胞... 详细信息

肝外胆管是肝脏胆管系统的组成部分,包括胆囊、胆总管等组织。近年来研究发现肝外胆管组织中存在一群具有干性特征的细胞。这群细胞在体外可以扩增培养,形成类器官结构,改变培养条件可以使胆管上皮干性细胞分化为具有一定功能的肝细胞、胆管细胞以及胰腺β样细胞等。将分化后的功能细胞分别植入肝脏受损、胆管缺陷、胰腺受损的模型小鼠中,功能细胞可以修复模型小鼠受损的肝脏或胆管,分化后的功能细胞甚至可以在胰腺受损的模型小鼠中分泌胰岛素。该文描述了肝外胆管组织的发育过程,阐明了干细胞的定位分布与具体特征,介绍了肝外胆管组织干细胞治疗疾病的相关应用,为后续研究启发思路并提供参考。

关键词：肝外胆管组织胆管发育肝脏损伤细胞治疗

基于丹参基因组的迷迭香酸合成酶的生物信息学分析

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基因组学与应用生物学 2017年第4期36卷 1611-1622页

作者：杨瑾冬马金洋李卿朱婷婷季倩张磊中国人民解放军第二军医大学药学院药用植物学教研室上海200433 中国人民解放军第二军医大学附属上海长征医院药学部上海200003 沈阳药科大学中药学院东北道地药材研发重点实验室沈阳100016

丹参是我国常用大宗中药材,丹酚酸B是其水溶性药效成分的代表,迷迭香酸是丹酚酸B等复杂活性物质的核心结构单元,迷迭香酸合成酶承担着催化迷迭香酸生物合成的重要作用。因此,解析丹参迷迭香酸合成酶的生物学功能,对研究迷迭香酸和丹酚酸... 详细信息

丹参是我国常用大宗中药材,丹酚酸B是其水溶性药效成分的代表,迷迭香酸是丹酚酸B等复杂活性物质的核心结构单元,迷迭香酸合成酶承担着催化迷迭香酸生物合成的重要作用。因此,解析丹参迷迭香酸合成酶的生物学功能,对研究迷迭香酸和丹酚酸B生物合成,促进丹参品质改善具有重要作用。本研究利用生物信息学方法,从丹参基因组库中寻找到11条迷迭香酸合成酶编码基因,并对其进行了生物信息学分析。丹参迷迭香酸合成酶属于BAHD酰基转移酶家族,分子量在36 kD至59 kD之间,多为酸性稳定蛋白,不含信号肽和导肽,无规则卷曲和α-螺旋是其二级结构的主要特征。本研究对丹参迷迭香酸合成酶进行了详细的生物信息学分析,可为今后深入研究该酶的结构特征和功能提供参考。

关键词：丹参基因组迷迭香酸合成酶生物信息学

基于环介导等温扩增微流控芯片技术快速检测蚊媒携带登革病毒方法的建立

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第2期42卷 234-241页

作者：姜宁白洁李平单文琪周秋明董昊炜袁浩陶峰李翔宇马雅军彭恒上海理工大学健康科学与工程学院上海200093 中国人民解放军海军军医大学基础医学院病原生物学教研室上海200433 海口市疾病预防控制中心海南海口571100 中国人民解放军海军军医大学海医系上海200433

目的建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片技术的快速检测蚊媒携带登革病毒的方法。方法根据登革病毒衣壳蛋白(C)、前膜蛋白(prM)和非结构蛋白2A(NS2A)基因片段构建pUC-GWAmp-CprM和pUC-GW-Amp-NS2A质粒,设计多组环介导等温扩增... 详细信息

目的建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片技术的快速检测蚊媒携带登革病毒的方法。方法根据登革病毒衣壳蛋白(C)、前膜蛋白(prM)和非结构蛋白2A(NS2A)基因片段构建pUC-GWAmp-CprM和pUC-GW-Amp-NS2A质粒,设计多组环介导等温扩增特异性引物组。制备LAMP微流控芯片,以靶基因质粒、登革病毒核酸为模板进行检测,根据起峰时间、相对荧光单位、假阳性、重复实验稳定性、检测灵敏度等指标筛选最优引物组。用最优引物组分别检测埃及伊蚊、白纹伊蚊等主要登革热传播媒介和常见的致倦库蚊、中华按蚊、摇蚊的cDNA,并与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒等常见蚊媒传播病原体进行交叉检测,评价LAMP法的特异性。评价LAMP法检测CprM和NS2A靶基因质粒的灵敏度,分别与PCR、实时荧光定量PCR(qPCR)检测结果进行比较。用登革病毒RNA与传播媒介埃及伊蚊、白纹伊蚊RNA分别以1∶10、1∶100和1∶1000混合,模拟媒介携带登革病毒的样品进行LAMP微流控芯片检测。对采集自宁德市三都岛、西安市、上海朱家角、长兴岛和五角场等5地的白纹伊蚊的cDNA进行检测。结果引物组筛选结果显示,CprMG2和NS2AG1引物组起峰时间早,相对荧光单位高,灵敏度最高,为最优引物组。CprMG2引物组可检测浓度低至10-6 ng/μl的pUC-GW-Amp-CprM质粒,最低检测限为1.3×10^(3)拷贝;NS2AG1引物组可检测浓度低至10-9 ng/μl的pUC-GW-Amp-NS2A质粒,最低检测限为1拷贝。最优引物组CprMG2、NS2AG1对埃及伊蚊、白纹伊蚊、中华按蚊、致倦库蚊、摇蚊等蚊虫cDNA无非特异性扩增,与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒核酸无交叉反应。LAMP微流控芯片检测CprM靶基因的最低检测限为1.3×10^(3)拷贝,较PCR检测的最低检测限(1.3×10^(4)拷贝)高1个数量级;LAMP微流控芯片检测CprM和NS2A靶基因的最低检测限分别为1.3×10^(3)拷贝、1拷贝,与qPCR检测的最低检测限(1.3×10^(3)拷贝、1拷贝)相当。LAMP微流控芯片检测模拟现场样品的结果显示,CprMG2可检出与埃及伊蚊、白纹伊蚊RNA 1∶10、1∶100和1∶1000混合的登革病毒RNA,NS2AG1最低可检出1∶100混合的登革病毒,特异性均为100%。LAMP微流控芯片检测5地现场采集白纹伊蚊的结果均为阴性。结论建立了基于LAMP微流控芯片检测登革病毒的方法,该法敏感性和特异性高,检测时间短,可用于现场蚊媒携带登革病毒的检测。

关键词：登革病毒蚊虫环介导等温扩增微流控芯片现场检测技术

高效液相色谱法同时测定马蓝根、茎、叶中4种成分的含量及其3种不同干燥方法的评价

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中国医院药学杂志 2018年第2期38卷 120-125页

作者：杨阳浦如月冯格张磊陆文铨高守红徐州医科大学附属淮海医院/中国人民解放军第九七医院药剂科江苏徐州221004 中国人民解放军第二军医大学附属长征医院药学部上海200003 中国人民解放军第二军医大学药学院药用植物学教研室上海200433

目的:建立高效液相色谱法测定马蓝根、茎、叶中靛蓝、靛玉红、色胺酮、异鼠李素4种成分的含量,并对其烘干、阴干、冻干3种不同干燥方法进行评价。方法:采用Agilent 1200高效液相色谱仪,色谱柱为迪马Diamonsil C_(18)柱,流动相为0.2%甲... 详细信息

目的:建立高效液相色谱法测定马蓝根、茎、叶中靛蓝、靛玉红、色胺酮、异鼠李素4种成分的含量,并对其烘干、阴干、冻干3种不同干燥方法进行评价。方法:采用Agilent 1200高效液相色谱仪,色谱柱为迪马Diamonsil C_(18)柱,流动相为0.2%甲酸甲醇溶液-0.2%甲酸水溶液的梯度溶液,流速为1.0mL·min^(-1),检测波长为289 nm,柱温为25℃,进样量为10μL。结果:测定了36份分别采用烘干、阴干、冻干进行干燥处理的4个批次的马蓝根茎叶样品。马蓝根中仅能够检测出色胺酮。马蓝茎中能够同时检测出靛蓝、靛玉红、色胺酮。马蓝叶中能够同时检测出靛蓝、靛玉红、色胺酮、异鼠李素。3种不同干燥方法中,冻干法分别处理的马蓝茎、叶中靛蓝含量相对最高。3种不同干燥方法分别处理的马蓝茎、叶中靛玉红含量基本一致。阴干法分别处理的马蓝根、茎、叶中色胺酮含量相对最高。烘干法、冻干法分别处理的马蓝叶中异鼠李素含量基本一致,但阴干法处理的未检测到异鼠李素。结论:本方法操作简便快捷、精密准确、灵敏度高,重现性好,适用于马蓝不同部位药材的质量控制。马蓝根、茎、叶的干燥方法应根据其药用部位以及活性成分进行适当选择。

关键词：马蓝高效液相色谱法含量测定干燥方法

纳米载体心肌靶向诱导合成硫化氢抑制再灌注性线粒体自噬的机制研究

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纳米载体心肌靶向诱导合成硫化氢抑制再灌注性线粒体自噬的机制研...

作者：张鹏中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

一、研究背景心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)是指因冠状动脉发生部分或完全阻塞后导致心肌缺血,在一定时间内缺血心肌再次恢复正常血流灌注时,心肌损伤反而较前加重的病理过程。其表现形式主要包括... 详细信息

一、研究背景心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)是指因冠状动脉发生部分或完全阻塞后导致心肌缺血,在一定时间内缺血心肌再次恢复正常血流灌注时,心肌损伤反而较前加重的病理过程。其表现形式主要包括心肌舒缩功能障碍以及心肌组织不可逆性损伤等。近年来,随着医学水平的不断提高,体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)技术已经广泛应用于心脏外科领域,采用CPB心脏停搏手术来进行心血管疾病的外科治疗已经成为常态。但因CPB技术所导致的MIRI成为了困扰临床医生的新问题。如何能够降低心肌缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)导致的心肌细胞损伤,从而有效地保护心肌,改善患者预后一直是研究的重要问题。硫化氢(hydrogen sulfide,HS)是一种具有生物活性的内源性气体信号分子,与一氧化氮(nitric oxide,NO)和一氧化碳(carbon monoxide,CO)相似,具有持续产生、弥散迅速、作用广泛等特点,参与机体的众多病理、生理进程。内源性HS在体内的分布具有器官特异性,在心肌组织中HS主要由高表达的胱硫醚γ裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)调控合成并发挥病理、生理作用。既往研究已经证实,内源性HS具有抗氧化、抗凋亡、抗炎等多种生物活性,因而在心血管系统中发挥着十分重要的病理、生理作用。在MIRI的过程中HS主要通过S-巯基化修饰、调控mi RNA的表达、抗细胞凋亡、抗氧化应激、调节离子通道的活性等机制发挥心肌保护作用。虽然HS在IR中的积极作用已经得到证实,但具有剧毒、水溶性质不稳定、与空气混合易爆炸等理化性质阻碍了其作为药物应用于临床的进程。目前对HS供体药物的研究主要围绕外源性与内源性HS两方面展开,前者以2008年首次合成的新型水溶性HS缓释剂GYY4137为代表,尽管外源性HS供体易于制备,但缺少靶向效应、稳定性不佳等缺点制约了其进一步临床应用;后者则主要围绕靶向给药技术展开研究。在众多靶向给药技术中,与传统运载系统(如腺病毒、脂质微球等)相比,纳米载体具有低毒、易制备等优点,既能作为水溶性药物载体又能作为脂溶性药物载体。此外,纳米载体具有多种给药途径可供选择,提高药物稳定性之外,有助于实现药物的靶向效应。纳米载药微粒的研制是纳米技术与医药学交叉渗透的新领域,本研究采用纳米载体加载特异性抗体等技术修饰,构建CSE的缺血心肌组织靶向给药系统,使其特异性过表达缺血心肌组织CSE、上调内源性HS表达,有望获得疗效确切、安全性佳的新型HS供体药物。二、研究目的1、构建CSE心肌靶向纳米载体,明确该纳米载体能否特异性作用于缺血心肌组织,提高IR时心肌局部内源性HS水平;2、通过成功构建CSE心肌靶向纳米载体,明确内源性HS能否通过对再灌注性心肌细胞线粒体自噬的调控,减轻心肌IR损伤。三、研究方法1、CSE心肌靶向纳米载体的构建:本研究采用带负电荷的靶向肽偶联的量子点(Peptide-PEG-QDs,Pep-QD)和CSE基因质粒载体,与带正电荷的聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)静电组装的方式,使靶向量子点和CSE基因质粒载体组装成纳米团簇,其中带正电荷的PEI具有细胞转染的作用,量子点表面的靶向肽具有靶向定位心肌缺血组织的作用。2、CSE心肌靶向纳米载体靶向定位的验证:取CSE纳米载体注射后大鼠的IR心肌(结扎冠状动脉左前降支(LAD)30min,松解120min后,取左室前壁心肌组织)、非IR心肌、肺、脾、胰腺及主动脉组织,利用Western-blot方法,比较各组织中CSE蛋白表达水平。3、实验对象及分组:选取健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(n=40)并分为以下4组:(1)正常对照组(n=10):SD大鼠,开胸后缝线穿过LAD下方,不阻断LAD,30min后抽出缝线并关胸,120min后静脉注射生理盐水;(2)IR组(n=10):SD大鼠,开胸后缝线穿过LAD下方,阻断LAD 30min后松解,恢复血流灌注120min后静脉注射生理盐水;(3)CSE上调组(n=10):IR后即刻给予静脉注射CSE过表达纳米靶向质粒,使缺血心肌CSE表达上调;(4)CSE下调组(n=10):构建si RNA,脂质体为载体,局部心肌注射,使缺血心肌CSE表达下调。4、心肌损伤的变化:于术后24h检测大鼠左室功能改变(±dp/dt max)情况,之后处死大鼠进行标本采集。(1)采用TTC染色的方法,苍白区为梗死区(INF)、红染区与苍白区统称为危险区(AAR)、蓝染区为非梗死区,苍白区、红染区与蓝染区之和为左心室面积(LV)。以AAR/LV的比值评价危险面积(%)大小,INF/AAR的比值评价心梗面积(%)大小;(2)利用全自动生化分析仪,检测各组心肌组织中血

关键词：硫化氢缺血再灌注纳米载体线粒体自噬心肌保护