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中南大学学报（医学版） 2010年第2期35卷 100-106页

作者：李云超管茶香周漾孙国瑛施萌邬晶李文杰中南大学湘雅医学院临床医学系长沙410078 中南大学湘雅医学院生理学系长沙410078

目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞表达髓样细胞触发受体-1(TREM-1)的影响及其信号转导途径。方法:采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)观察巨噬细胞TREM-1mRNA表达量的变化,应用流式细胞术检测巨噬细胞... 详细信息

目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞表达髓样细胞触发受体-1(TREM-1)的影响及其信号转导途径。方法:采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)观察巨噬细胞TREM-1mRNA表达量的变化,应用流式细胞术检测巨噬细胞膜表面TREM-1蛋白的表达。结果:CGRP对未受刺激的巨噬细胞表达TREM-1无明显影响,LPS可诱导巨噬细胞表达TREM-1;CGRP预处理呈剂量和时间依赖性上调LPS所致的巨噬细胞TREM-1mRNA的表达;同时,CGRP上调LPS所致的巨噬细胞膜表面TREM-1蛋白的表达;上述作用均可被PKC阻断剂H-7和PKA阻断剂H-89部分逆转(P<0.05)。结论:CGRP上调LPS诱导的巨噬细胞表达TREM-1,其胞内信号转导途径与PKA和PKC有关。

关键词：降钙素基因相关肽髓样细胞触发受体-1 脂多糖巨噬细胞

日本血吸虫新抗原基因Sj-Ts4的克隆、表达及免疫保护性(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第2期34卷 143-148页

作者：周东明,易新元,曾宪芳,王敏,蔡春,王庆林,张顺科,MCREYNOLDS Larry 中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室 Molecular Parasitology G

为探讨旋毛虫感染小鼠后抗血吸虫感染的分子机制 ,并为血吸虫病疫苗的研究提供新的抗原分子 ,用旋毛虫感染鼠血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库。经过 3轮筛选 ,获得 9个阳性克隆 ,其中新基因Sj Ts4有一完整的编码框 ,编码2 10个氨基酸。... 详细信息

为探讨旋毛虫感染小鼠后抗血吸虫感染的分子机制 ,并为血吸虫病疫苗的研究提供新的抗原分子 ,用旋毛虫感染鼠血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库。经过 3轮筛选 ,获得 9个阳性克隆 ,其中新基因Sj Ts4有一完整的编码框 ,编码2 10个氨基酸。该蛋白质的理论分子量为 2 3kD ,等电点为 7.72。将Sj Ts4亚克隆于原核表达载体 pGEX 5X 3,以GST融合蛋白的形式在E .coliDH5α中表达。Western印迹分析显示 ,重组Sj Ts4蛋白 (rSj Ts4)能被慢性感染鼠血清识别。rSj Ts4或与弗氏完全佐剂混合后免疫小鼠 ,均可以诱导产生特异性的IgG抗体 ,抗体效价可高达 1∶2 5 6 0 0。两免疫组的减虫率分别为31.36 %和 36 .80 % ,与对照组相比都具有统计学意义

关键词：日本血吸虫旋毛虫 Sj-Ts4 分子克隆免疫

BRD7结构功能域Bromodomain的研究以及一个新的BRD7交互作用蛋白的鉴定

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生物化学与生物物理进展 2006年第10期33卷 948-956页

作者：彭聪李小玲李夏雨刘华英周鸣张黎明罗小敏沈守荣李桂源中南大学肿瘤研究所长沙410078 中南大学湘雅医学院长沙410078 中南大学湘雅三医院长沙410008

溴区包含蛋白7(BRD7)是采用cDNA代表性差异分析方法克隆的一个新基因.研究证实了BRD7能够与乙酰化的组蛋白3结合,其识别位点在组蛋白3的14位氨基酸;并且证实了溴区结构域(Bromodomain)缺失型的BRD7突变体失去了与乙酰化组蛋白3的结合能... 详细信息

溴区包含蛋白7(BRD7)是采用cDNA代表性差异分析方法克隆的一个新基因.研究证实了BRD7能够与乙酰化的组蛋白3结合,其识别位点在组蛋白3的14位氨基酸;并且证实了溴区结构域(Bromodomain)缺失型的BRD7突变体失去了与乙酰化组蛋白3的结合能力.Bromodomain是在进化上高度保守的功能结构域,该结构域在空间构象上具有鲜明的特征:包括4个左手、呈反向平行排列的“螺旋(αz,αA,αB,αC)”以及2个“连结环”(ZAloop,BCloop).通过生物信息学等综合分析,预测BRD7可能具有上述特征.依据上述分析结果,构建了BRD7的Bromodomain相关缺失突变体,通过肽段结合实验分析上述突变体与乙酰化组蛋白3结合的能力.结果表明,ZAloop与BCloop的完整性对于BRD7结合乙酰化的组蛋白3有着重要的意义.同时通过免疫荧光分析,证实了ZAloop与BCloop的完整性能够影响BRD7的亚细胞定位.最后,证实了BRD7与CBP可能存在交互作用.CBP不仅具有乙酰化转移酶活性(HATs),能够对组蛋白末端进行乙酰化修饰,并且作为一种重要的细胞转录因子广泛参与细胞的各种生物学活动.

关键词：溴区包含蛋白7(BRD7) 溴区结构域(Bmmodomain) 乙酰化组蛋白3 CBP(CREB-binding protein)

血管紧张素Ⅱ对大鼠骨髓间充质干细胞棕色脂肪变的抑制作用

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中国组织工程研究 2025年第23期29卷 4859-4867页

作者：刘晨洋王瑾张文婷王丽清尹晓晓赵俊楠焦向英山西医科大学基础医学院生理学系山西省太原市030001

背景:骨髓间充质干细胞是脂肪细胞的来源之一,且表达所有肾素血管紧张素系统成分,但血清血管紧张素Ⅱ对骨髓间充质干细胞向棕色脂肪组织分化的影响尚不清楚。目的:观察血管紧张素Ⅱ对骨髓间充质干细胞向棕色脂肪细胞分化的影响,并探究... 详细信息

背景:骨髓间充质干细胞是脂肪细胞的来源之一,且表达所有肾素血管紧张素系统成分,但血清血管紧张素Ⅱ对骨髓间充质干细胞向棕色脂肪组织分化的影响尚不清楚。目的:观察血管紧张素Ⅱ对骨髓间充质干细胞向棕色脂肪细胞分化的影响,并探究血管紧张素1a型受体敲除对血管紧张素Ⅱ影响骨髓间充质干细胞向棕色脂肪细胞分化的作用及可能机制。方法:分离培养野生型SD大鼠及血管紧张素1a型受体敲除SD大鼠的骨髓间充质干细胞,将其培养至第3代,随机分为4组:野生组,基因敲除组,野生+血管紧张素Ⅱ组,基因敲除+血管紧张素Ⅱ组,在棕色脂肪诱导分化培养基中诱导分化14 d,后2组在每次更换分化培养基的同时加入100 nmol/L血管紧张素Ⅱ进行干预。采用Western blot、qRT-PCR、免疫荧光等方法检测棕色脂肪诱导分化、脂肪分解、β氧化和线粒体生物发生等相关标记物的表达。结果与结论:血管紧张素Ⅱ可抑制骨髓间充质干细胞向棕色脂肪细胞分化,敲除血管紧张素1a型受体基因能够通过促进脂肪分解、增强脂肪酸β氧化、促进线粒体生物发生、增强线粒体功能来改善血管紧张素Ⅱ对骨髓间充质干细胞向棕色脂肪细胞分化的抑制作用。这些发现为肥胖治疗提供了新的研究方向和潜在治疗靶点,揭示了肾素血管紧张素系统在脂肪代谢中的重要作用及其作为治疗目标的潜力。

关键词：血管紧张素Ⅱ 骨髓间充质干细胞棕色脂肪变线粒体 β氧化血管紧张素Ⅱ1a受体

口腔鳞癌患者PBMC表面活化性受体NKG2D的表达及临床意义

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上海口腔医学 2012年第4期21卷 427-431页

作者：李超石芳琼杨丹王洁翦新春蒋灿华中南大学湘雅医院口腔颌面外科湖南长沙410008 中南大学湘雅医学院免疫学系湖南长沙410008

目的:探讨口腔鳞癌患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)表面活化性受体自然杀伤细胞2族成员D(natural killer group 2,member D,NKG2D)的表达及临床意义。方法:应用流式细胞术检测54例口腔鳞癌患者和20例健康... 详细信息

目的:探讨口腔鳞癌患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)表面活化性受体自然杀伤细胞2族成员D(natural killer group 2,member D,NKG2D)的表达及临床意义。方法:应用流式细胞术检测54例口腔鳞癌患者和20例健康成年人(正常对照组)PBMC表面活化性受体NKG2D的表达情况,采用SPSS16.0软件包中的方差分析及两独立样本t检验对数据进行统计学分析。结果:54例口腔鳞癌患者PBMC表面NKG2D表达的阳性率为(12.49±5.26)%,显著低于健康成人的(22.93±8.14)%(P0.05)。结论:口腔鳞癌患者PBMC表面NKG2D表达低于正常,且与肿瘤大小及临床分期相关。

关键词：口腔鳞状细胞癌 NKG2D 免疫逃逸

Kruppel样因子4对内毒素所致IL-6基因表达的调控及机制研究

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生物化学与生物物理进展 2009年第10期36卷 1313-1318页

作者：冯衍生刘梅冬刘瑛刘俊文陈广文张华莉肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学系长沙410078

探讨Kruppel样因子4(KLF4)对内毒素所致白介素(IL-6)的基因表达以及释放的影响,并对其调控机制做了初步研究.使用RT-PCR和Westernblot检测KLF4mRNA和蛋白质的表达.采用KLF4过表达的RAW264.7巨噬细胞株或反义寡核苷酸技术抑制内源性KLF4... 详细信息

探讨Kruppel样因子4(KLF4)对内毒素所致白介素(IL-6)的基因表达以及释放的影响,并对其调控机制做了初步研究.使用RT-PCR和Westernblot检测KLF4mRNA和蛋白质的表达.采用KLF4过表达的RAW264.7巨噬细胞株或反义寡核苷酸技术抑制内源性KLF4的表达,用RT-PCR和ELISA检测内毒素(LPS)刺激后IL-6mRNA和蛋白质的表达.采用荧光素酶报告基因检测RAW264.7细胞中KLF4过表达对IL-6基因启动子报告基因转录活性的影响.使用EMSA法检测细胞中KLF4与IL-6基因启动子区KLF4元件的结合.结果表明:LPS可以诱导RAW264.7巨噬细胞KLF4的表达以及IL-6蛋白表达.KLF4过表达明显抑制IL-6的mRNA和蛋白质的表达,而KLF4缺失使这种作用消失.荧光素酶报告基因的结果显示,KLF4可以抑制LPS所致的IL-6基因启动子的转录活性.EMSA显示KLF4不能与IL-6启动子区的KLF4结合元件直接结合.结果表明,LPS可以促进RAW264.7小鼠巨噬细胞KLF4的表达和IL-6的释放.KLF4能抑制LPS诱导的IL-6表达和释放,其机制是抑制IL-6启动子的转录活性,但KLF4的抑制作用不是通过直接与IL-6基因的启动子区相结合而实现的.

关键词： Kruppel样因子4(KLF4) 内毒素(LPS) 白介素6(IL-6) 炎症

HSF1基因剔除对HSR抗内毒素血症的影响

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生物化学与生物物理进展 2008年第4期35卷 424-430页

作者：陈广文王慷慨刘瑛唐道林肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学系长沙410078

利用内毒素(LPS)血症小鼠模型,观察HSF1基因剔除对热休克反应(HSR)保护作用的影响.采用腹腔注射LPS建立内毒素血症小鼠模型,HSR采用肛温42℃维持15min,室温恢复24h,利用RT-PCR、苏木素-伊红(HE)染色、丙二醛测定以及死亡率,计算和分析... 详细信息

利用内毒素(LPS)血症小鼠模型,观察HSF1基因剔除对热休克反应(HSR)保护作用的影响.采用腹腔注射LPS建立内毒素血症小鼠模型,HSR采用肛温42℃维持15min,室温恢复24h,利用RT-PCR、苏木素-伊红(HE)染色、丙二醛测定以及死亡率,计算和分析重要脏器组织中炎症介质基因的表达、脏器损伤程度及小鼠存活率.注射LPS15mg/kg72h后HSR+LPS(HSF1+/+)组存活率(7/15)显著高于LPS(HSF1+/+)组(0/15)、LPS(HSF1-/-)组(0/14)和HSR+LPS(HSF1-/-)组(0/14),而注射LPS14mg/kg72h后,LPS(HSF1+/+)组存活率(5/15)显著高于LPS(HSF1-/-)组(0/13)和HSR+LPS(HSF1-/-)组(0/13).在注射LPS12h后LPS(HSF1+/+)组、LPS(HSF1-/-)组和HSR+LPS(HSF1-/-)组的心、肺组织丙二醛含量显著升高,但HSR+LPS(HSF1+/+)组不升高.肺组织炎症介质基因IL-1β、IL-6、TNF-α、CCL-2、SOCS3、MCSF、GCSF、IL-15在LPS(HSF1-/-)组和LPS(HSF1+/+)组表达上调,HSR+LPS(HSF1-/-)组除IL-15较低外其他上调更甚,HSR+LPS(HSF1+/+)组除IL-1β和TNF-α较高外其他显著下调.注射LPS后LPS(HSF1+/+)组和LPS(HSF1-/-)组的肺、肝、肾病理形态改变明显,HSR+LPS(HSF1+/+)组改变较轻,HSR+LPS(HSF1-/-)组改变更加严重.HSF1基因剔除能显著消减HSR对内毒素血症小鼠的保护作用.

关键词：热休克反应内毒素血症基因剔除热休克因子1 炎症介质

重组白细胞介素-4增强日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫苗诱导小鼠的保护力

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第2期23卷 65-68页

作者：陈欲晓王林纤唐连飞张顺科章洁曾宪芳易新元中南大学湘雅医学院免疫学教研室长沙410078 中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室长沙410078

目的探讨重组白细胞介素-4(IL-4)真核表达质粒增强日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗对小鼠的免疫保护效果。方法将小鼠IL-4基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1以构建小鼠重组IL-4表达质粒,并联合日本血吸虫组织蛋白酶B的表达质粒DNA(VR1012-Sj... 详细信息

目的探讨重组白细胞介素-4(IL-4)真核表达质粒增强日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗对小鼠的免疫保护效果。方法将小鼠IL-4基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1以构建小鼠重组IL-4表达质粒,并联合日本血吸虫组织蛋白酶B的表达质粒DNA(VR1012-Sj31)肌注免疫小鼠,设重组IL-4表达质粒、组织蛋白酶B表达质粒和2种空载体质粒对照组。免疫组化检测IL-4和组织蛋白酶B在小鼠肌细胞内的表达,末次免疫3周后攻击感染,用减虫率及减卵率表示保护力。结果重组IL-4和组织蛋白酶BDNA均在小鼠肌细胞表达,重组IL-4和组织蛋白酶BDNA联合免疫小鼠,产生43.2%的减虫率和76.6%的减卵率,与组织蛋白酶BDNA单独免疫相比差异有显著性(P免疫效应。

关键词：组织蛋白酶B 日本血吸虫保护力重组真核表达载体pcDNA3.1 白细胞介素-4(IL-4) 疫苗诱导免疫保护效果 BDNA疫苗真核表达质粒免疫组化检测免疫小鼠基因克隆载体质粒肌细胞内攻击感染细胞表达单独免疫免疫效应

人STAT4基因真核表达载体构建和在HEK293细胞中表达

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中国现代医学杂志 2013年第19期23卷 6-10页

作者：李轩岸黄玉梅姚芳玲范洁琳雷光华黎明中南大学湘雅医院骨科中南大学湘雅医学院免疫学教研室中南大学湘雅医学院

目的构建STAT4基因的真核表达载体,在人胚肾细胞系HEK293中表达。方法设计引物、采用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中获得STAT4的cDNA全长序列,在PCR产物两端加上SalI和BamHI限制性内切酶识别序列,将pEGFP-C1载体和PCR产物用SalI和Ba... 详细信息

目的构建STAT4基因的真核表达载体,在人胚肾细胞系HEK293中表达。方法设计引物、采用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中获得STAT4的cDNA全长序列,在PCR产物两端加上SalI和BamHI限制性内切酶识别序列,将pEGFP-C1载体和PCR产物用SalI和BamHI进行双酶切,将STAT4 cD-NA定向克隆到pEGFP-C1中,从而构建了重组质粒pEGFP-STAT4;经酶切和测序鉴定正确后,将pEGFP-STAT4体外转染HEK293细胞,瞬时表达带有GFP标签的STAT4融合蛋白;采用荧光显微镜技术和免疫印迹技术检测融合蛋白的表达。结果 RT-PCR扩增了2 247 bp的STAT4 cDNA全长,经测序分析与GenBank中已知序列一致;重组质粒pEGFP-STAT4转染HEK293细胞中,可检测到瞬时表达的GFP-STAT4融合蛋白。结论成功构建重组质粒pEGFP-STAT4,在真核细胞HEK293中能被表达。

关键词： STAT4 基因克隆真核表达