人STAT4基因真核表达载体构建和在HEK293细胞中表达

作     者：李轩岸 黄玉梅 姚芳玲 范洁琳 雷光华 黎明 LI Xuan-an;HUANG Yu-mei;YAO Fang-ling;FAN Jie-lin;LEI Guang-hua;LI Ming

作者机构：中南大学湘雅医院骨科 中南大学湘雅医学院免疫学教研室 中南大学湘雅医学院 

出 版 物：《中国现代医学杂志》 (China Journal of Modern Medicine)

年 卷 期：2013年第23卷第19期

页      面：6-10页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：2012年湖南省自然科学基金重点项目(No:12JJ2016) 2011年国家大学生创新训练立项项目(No:AE11528) 

主　　题：STAT4 基因克隆 真核表达 

摘      要：目的构建STAT4基因的真核表达载体,在人胚肾细胞系HEK293中表达。方法设计引物、采用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中获得STAT4的cDNA全长序列,在PCR产物两端加上SalI和BamHI限制性内切酶识别序列,将pEGFP-C1载体和PCR产物用SalI和BamHI进行双酶切,将STAT4 cD-NA定向克隆到pEGFP-C1中,从而构建了重组质粒pEGFP-STAT4;经酶切和测序鉴定正确后,将pEGFP-STAT4体外转染HEK293细胞,瞬时表达带有GFP标签的STAT4融合蛋白;采用荧光显微镜技术和免疫印迹技术检测融合蛋白的表达。结果 RT-PCR扩增了2 247 bp的STAT4 cDNA全长,经测序分析与GenBank中已知序列一致;重组质粒pEGFP-STAT4转染HEK293细胞中,可检测到瞬时表达的GFP-STAT4融合蛋白。结论成功构建重组质粒pEGFP-STAT4,在真核细胞HEK293中能被表达。