检索结果-南通市图书馆

作者：许微微东北农业大学

学位级别：硕士

奶牛子宫内膜炎是奶牛产后主要由于细菌感染而引起的常见产科疾病，可导致繁殖障碍，给奶牛养殖业造成很大的经济损失。本试验选取了产后正常奶牛和患子宫内膜炎奶牛为试验研究对象，通过对牛舍的疾病调查，分析产后子宫内膜炎发病原因... 详细信息

奶牛子宫内膜炎是奶牛产后主要由于细菌感染而引起的常见产科疾病，可导致繁殖障碍，给奶牛养殖业造成很大的经济损失。本试验选取了产后正常奶牛和患子宫内膜炎奶牛为试验研究对象，通过对牛舍的疾病调查，分析产后子宫内膜炎发病原因感染情况，共采集54头来自黑龙江省各奶牛场正常(12头)和患牛(42头)子宫分泌物，采用需氧厌氧两种不同的环境进行培养，再选择不同固体培养基分离鉴定，确定引起奶牛子宫内膜炎的主要致病菌。从产后0d～14d正常奶牛子宫中分离到细菌8种，产后5d～9d检出的细菌数最多，从患病奶牛子宫内容物中得到14种细菌，其中主要致病菌五种分别为：大肠杆菌、葡萄球菌、化脓棒状杆菌、拟杆菌和梭菌。试验中分离的大量的厌氧菌，对今后进一步研究奶牛子宫内细菌菌群提供一个参考。本试验为了研究中西药对奶牛子宫内膜炎致病菌的敏感程度，测定了16种西约、11种单味中药及2个复方中药对患子宫内膜炎奶牛子宫内分离鉴定的主要致病菌的体外抑菌作用。结果表明，西药万古霉素、新霉素、氟苯尼考和环丙沙星对分离出的主要致病菌株均有较强的抑制作用，尤其以环丙沙星效果更为突出：中药以苦参、黄芩、鱼腥草、公英和复方Ⅰ、Ⅱ的抑菌效果较好。本试验系统地进行体外中西药敏感性筛选，为临床上治疗奶牛子宫内膜炎提供重要依据，指导临床合理用药。本试验还针对需氧菌和厌氧菌进行了单味中药的体外抑菌试验，筛选出效果好的单味中药，进行正交试验并选出效果好的药物进行组方。本试验共拟定2个中药复合方剂，采用试管二倍稀释法，测定该组方对奶牛子宫内膜炎的主要致病菌(大肠杆菌、葡萄球菌、化脓棒状杆菌、拟杆菌、梭菌)的抑菌效果。试验结果表明，公英、连翘、双花等8味中草药所组成的复方制剂对奶牛子宫内膜炎致病菌具有显著的抑菌作用。通过体外抑菌试验选取效果好的组方临床应用，中医角度来治疗奶牛子宫内膜炎，为临床用药提供一个良好的参考。

关键词：奶牛子宫内膜炎细菌分离鉴定组方筛选药敏试验

圆台型聚风罩对垂直轴风力机起动性与输出功率影响研究

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圆台型聚风罩对垂直轴风力机起动性与输出功率影响研究

作者：唐静东北农业大学

学位级别：硕士

为了改善直线翼垂直轴风力机的低风速起动性问题和提高风力机输出功率,设计了一种可安装于风力机风轮上下两端的圆台型聚风罩,利用上下聚风罩形成的变截面通道对来流进行导流,提高风轮入口流速,减少叶片尖端流动损失,整流风轮内部流场,... 详细信息

为了改善直线翼垂直轴风力机的低风速起动性问题和提高风力机输出功率,设计了一种可安装于风力机风轮上下两端的圆台型聚风罩,利用上下聚风罩形成的变截面通道对来流进行导流,提高风轮入口流速,减少叶片尖端流动损失,整流风轮内部流场,从而提高风力机的静态起动特性和动态功率输出性能。研究采用了理论分析、数值模拟和风洞试验相结合的方法,主要进行了两部分研究内容:(1)聚风罩对风力机静态起动性能影响研究,主要采用理论分析与数值模拟相结合的方法。首先利用流体力学基本原理对聚风罩聚风原理进行理论分析,初步设定聚风罩结构形式;然后对聚风罩多个结构参数进行系统分析,通过二次正交旋转组合设计方法与三维数值计算相结合手段,对聚风罩主要结构参数进行优化设计,计算在不同结构参数组合下聚风罩对风力机静态起动力矩影响,找出较优聚风罩结构参数;最后通过分析有无聚风罩风轮的周围流场不同,揭示聚风罩的作用机理。(2)聚风罩对风力机动态输出功率性能影响研究,主要采用风洞试验的方法,将在计算中得到的较优聚风罩结构进行设计,制作了1台直径600mm、高500mm的风轮模型和圆台型聚风罩,进行了风洞试验,测试了在不同风速下,具有不同叶片个数的有无聚风罩风力机的转速特性和输出功率特性,验证聚风罩的有效性。在本研究条件下得到的主要结论如下:(1)针对本研究设定风力机模型,通过数值模拟获得了一组可有效提高风力机静态起动性的聚风罩结构参数:聚风罩倾角为46°,高度为299mm,距风轮距离36mm。风洞试验结果表明带有聚风罩风力机在各旋转角下的起动力矩均有不同程度提高,在15°旋转角时静力矩最高提升了30%。同时,带有聚风罩风力机起动时间缩短,转速增长快,可达稳定转速高。验证了该圆台型聚风罩对风力机起动性能改善的有效性。(2)通过对有无聚风罩风力机的动态性能风洞试验表明,带有聚风罩的风力机在不同风速下的最大输出功率系数均有不同程度提高,且随风速的增大而增大,最高提升35%。试验结果还表明聚风罩对2叶片和4叶片的风力机性能提升都有一定效果,说明了聚风罩对具有不同叶片个数的直线翼垂直轴风力机性能提高均有一定的适用性。(3)通过数值计算获得了三维流线图和不同平面上的速度分布情况,聚风罩对风轮入口处增速效果明显,风速最高提升了36.7%;聚风罩对流经叶片尖端和风轮内部的涡旋均有不同程度改善,一定程度上减少了能量损失,从而改善了风轮周围流场特性。本研究通过计算和试验验证了提出的圆台型聚风罩对直线翼垂直轴风力机起动性能改善和输出功率提高的有效性,为开发结构更紧凑,效果更好的聚风装置提供了研究基础,为开发出高性能的直线翼垂直轴风力机提供了有益的探索。本研究所采用的数值模拟与正交旋转设计方法,为研究具有类似多结构参数垂直轴风力机设计提供了参考。

关键词：垂直轴风力机聚风罩起动性输出功率数值计算风洞试验

金黄色葡萄球菌噬菌体的分离鉴定及对治疗乳腺炎的初步应用

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金黄色葡萄球菌噬菌体的分离鉴定及对治疗乳腺炎的初步应用

作者：汤婷婷东北农业大学

学位级别：硕士

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)为葡萄球菌属的革兰阳性球菌,可引起食物中毒、心内膜炎、葡萄球菌烫伤皮肤综合征和中毒性休克综合征,是一种常见的人兽共患病病原。目前治疗金黄色葡萄球菌主要是使用抗生素,而抗生素的滥用导致... 详细信息

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)为葡萄球菌属的革兰阳性球菌,可引起食物中毒、心内膜炎、葡萄球菌烫伤皮肤综合征和中毒性休克综合征,是一种常见的人兽共患病病原。目前治疗金黄色葡萄球菌主要是使用抗生素,而抗生素的滥用导致金黄色葡萄球菌耐药菌株愈来愈多,给临床治疗带来困难。本研究通过噬菌体富集法从猪粪中分离出5株金黄色葡萄球菌烈性噬菌体,分别命名为4086-1、4086-2、4086-3、4086-4和4086-6。通过电镜观察,5株噬菌体均具有典型的二十面体头部和不能收缩的短尾部,属于尾噬菌体目、短尾噬菌体科。通过对噬菌体基因组进行限制性内切酶(Eco R Ⅰ、Hpa Ⅰ、Rsr Ⅱ、Sac Ⅰ、Sph Ⅰ、Bgl Ⅱ、SMa Ⅱ、Sac Ⅱ、Sna B Ⅰ、Avr Ⅱ、Pst Ⅰ)分析,结果表明噬菌体4086-1、4086-2、4086-3、4086-4和4086-6是5株不同的噬菌体。宿主范围测定结果显示,4086-1、4086-2、4086-3可感染金黄色葡萄球菌*** CVCC546、*** 4086、*** Ben和*** ATCC 43300,4086-4和4086-6均可感染金黄色葡萄球菌*** CVCC 546和*** 4086。一步生长曲线测定结果显示,噬菌体4086-1、4086-2、4086-3、4086-4和4086-6的潜伏期分别为10 min、10 min、20 min、20 min和10min;裂解周期分别为90 min、100 min、80 min、80 min和90 min;裂解量分别为365.7PFU/infected cell、400 PFU/infected cell、19.4 PFU/cell、149.4 PFU/infected cell和52.4PFU/infected cell。研究不同理化因素对噬菌体的影响结果显示,噬菌体4086-1、4086-2、4086-3、4086-4和4086-6在-20～42℃范围内,均能稳定存活,62℃以上作用40 min全部失活。噬菌体4086-1、4086-2、4086-3、4086-4和4086-6在p H 4～10的环境中较为稳定,表明噬菌体有较强的酸碱耐受性。噬菌体4086-1、4086-2、4086-3、4086-4和4086-6在75%乙醇中作用30 min后完全灭活;在80%丙酮中作用30 min后,效价分别降低1、1、1、1.5和2个数量级;但对DMSO和氯仿不敏感,能够稳定存活。通过检测不同去污剂对噬菌体的作用,结果显示,5株噬菌体经0.1%SDS处理30 min后,均完全失活;噬菌体4086-1、4086-2、4086-3、4086-4和4086-6在0.1%月桂酰肌氨酸钠(Sarkosyl)、0.1%CTAB和0.1%苯扎溴铵中作用30min后,效价均无明显变化。检测渗透压对噬菌体的活性影响,结果表明随着溶液中氯化钠浓度的升高(0～4.5M),噬菌体4086-1、4086-2、4086-3、4086-4和4086-6效价均无明显变化,表明5株噬菌体对渗透压有一定的耐受能力。分析二价阳离子(钙、镁离子)对噬菌体的影响,结果表明4086-1和4086-3在添加钙离子的LB培养基中,效价最高;噬菌体4086-2和4086-6在添加钙离子和镁离子的LB培养基中,效价最高;噬菌体4086-4在添加镁离子的LB培养基中滴度最高。通过研究噬菌体感染后金黄色葡萄球菌的动态变化来观察噬菌体裂解细菌的能力,结果表明,噬菌体4086-1、4086-2、4086-3、4086-4和4086-6以不同MOI(MOI为0.01、0.1、1.0、10)感染细菌后,均能显著降低金黄色葡萄球菌数量,8小时后,细菌数量开始上升,表明产生部分噬菌体抗性菌。通过分析噬菌体对金黄色葡萄球菌ATCC 43300生物膜形成的影响,结果显示,噬菌体4086-1清除生物膜的能力最强。利用金黄色葡萄球菌ATCC 43300(耐甲氧西林金葡菌)建立小鼠乳腺炎模型,应用噬菌体治疗后,结果表明噬菌体能够有效地降低乳腺组织中的细菌数,病理结果表明噬菌体治疗后,乳腺组织腺泡内炎性浸润减少。通过ELISA检测乳腺组织中的细胞因子水平,结果显示,同对照组相比,噬菌体治疗组和抗生素治疗组的促炎性因子TNF-α和IL-6均显著降低,且噬菌体治疗组的促炎性因子水平低于抗生素治疗组,表明经噬菌体治疗后可有效缓解炎症反应。综上,本研究分离了5株金黄色葡萄球菌噬菌体,鉴定了它们的生物学特性,为其应用提供了重要的实验数据。通过分析噬菌体在体外对金黄色葡萄球菌生物膜的破坏作用,并应用其对小鼠乳腺炎模型进行治疗,为金黄色葡萄球

关键词：金黄色葡萄球菌噬菌体生物学特性生物膜乳腺炎

餐饮业厨房中单增李斯特菌污染情况及控制方法

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餐饮业厨房中单增李斯特菌污染情况及控制方法

作者：潘琳东北农业大学

学位级别：硕士

餐饮是百姓日常生活重要组成部分,餐饮食品安全是食品生产加工环节从“农田到餐桌”的最后一关,一旦出了问题,将直接危及消费者的生命和健康。影响餐饮食品安全的因素很多,其中生物性因素中的单增李斯特菌,因其可生长温度范围广,耐冷、... 详细信息

餐饮是百姓日常生活重要组成部分,餐饮食品安全是食品生产加工环节从“农田到餐桌”的最后一关,一旦出了问题,将直接危及消费者的生命和健康。影响餐饮食品安全的因素很多,其中生物性因素中的单增李斯特菌,因其可生长温度范围广,耐冷、对热也有较强抵抗力,在食品加工的环境中广泛存在,病死率高达20～70%,被WHO称为四大食源性致病菌之一。最近几年,我国不少研究者对食品中单增李斯特菌污染情况进行了研究,但对餐饮业中该菌污染研究少有报道。本课题就是基于此目的上,随机选取哈尔滨周边餐饮单位采集厨房中环境、食品样品,进行单增李斯特菌检测、血清学分型和PFGE分型。本试验中,餐饮业厨房中单增李斯特菌总检出率为15.3%,环境样品检出率12.2%,食品样品检出率8.3%。餐饮业厨房中存在一定程度单增李斯特菌的污染,急需控制。单增李斯特菌血清学分型,共检出1/2a、1/2b、1/2c、3b、4b 5种血清型,其中1/2a血清型检出率最高,且分布较广。同时检出具有高致病力的4b血清型菌株。应加大以上几种检出的血清型监测力度,着重注意高致病力4b菌株的污染点。PFGE分型将菌株分为10种型别,同源性在49.8%～100%。不同样品来源的菌株同源性为100%,说明在餐饮食品在加工过程中极可能存在交叉污染。通过PFGE分型,得到分型种类较多,表明菌株之间的相关性不大;且同一来源的样品分离的菌株有不同的PFGE型别,各个型别差异较大,说明污染是来自不同的克隆株,餐饮厨房中单增李斯特菌的污染可能是来自多方面的。根据以上结果,从环境、器具、人员、清洁方面提出餐饮业厨房中单增李斯特菌的控制方法。经过三个月实施餐饮业厨房中单增李斯特菌的控制方法,各个监控点检出率明显降低。说明餐饮业厨房中单增李斯特菌的控制方法可以有效控制单增李斯特菌的污染,保障消费者饮食安全。

关键词：餐饮业厨房单增李斯特菌污染控制方法

矮化大豆GmEXPA41基因的克隆及功能分析

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矮化大豆GmEXPA41基因的克隆及功能分析

作者：任明玄东北农业大学

学位级别：硕士

大豆是世界五大作物之一,是非常重要的植物蛋白质和食用油资源,也是重要的优质工业原料,大豆的综合利用和开发受到了世界各国重视。然而,近年来我国大豆生产却增长缓慢,已经不能满足国内大豆需求。为解决这一矛盾,必须提高大豆产量、优... 详细信息

大豆是世界五大作物之一,是非常重要的植物蛋白质和食用油资源,也是重要的优质工业原料,大豆的综合利用和开发受到了世界各国重视。然而,近年来我国大豆生产却增长缓慢,已经不能满足国内大豆需求。为解决这一矛盾,必须提高大豆产量、优化大豆种植,而矮化大豆的研究有利于优势大豆的种植、提高大豆的产量,满足中国大豆日益增长的需求量。而许多文献表明,膨胀素(expansin)基因可能与植株的高矮相关,所以对矮化大豆expansin的研究有利于我们在分子水平上研究大豆表型的成因,为大豆的分子育种奠定基础。本文克隆了矮化大豆的膨胀素GmEXPA41基因的全长序列,对其进行信息学分析,最后将矮化大豆的expansin基因构建到了大肠杆菌的表达载体pET32a中,转化到了大肠杆菌BL21(DE3)中,进行了原核表达,经过SDS-PAGE分析,筛选了高产菌株,并借助发酵罐对其进行发酵培养,为后期矮化大豆膨胀素的分离纯化、结构解析和功能验证奠定了基础。具体研究结果如下：1.通过序列比对设计了矮化大豆膨胀素基因的保守区引物,利用PCR技术克隆得到了765bp的膨胀素基因的CDS。再通过5'RACE和3'RACE进行PCR扩增分别得到804bp和828bp的基因,最后将三段基因进行拼接获得了矮化大豆GmEXPA41mRNA的全长序列。通过NCBI中的blast比较,发现该序列为新序列,将其提交genebank,得到登陆号为JF694991。2.膨胀素GmEXPA41基因进行分析表明,基因的CDS大小为765bp,共编码254个氨基酸。与正常大豆氨基酸序列的同源性为96.47%。进行二级结构预测和比较,结果发现矮化大豆的膨胀素蛋白比正常大豆的膨胀素蛋白多了一个α螺旋。通过计算机同源模型获得了矮化大豆以及正常大豆膨胀素蛋白的三维结构,发现矮化大豆的膨胀素蛋白比正常大豆的膨胀素蛋白的β折叠要略少一些。另外,以正常大豆expansin蛋白为受体进行了分子对接模拟,找到与正常大豆的膨胀素蛋白结合较好的10个化合物,并模拟了它们的结合方式,初步研究了一些化合物与膨胀素蛋白的相互作用。3.构建了大肠杆菌重组菌[pET32a-expansin BL21(DE3)],并且得到了高效表达菌株2号。4.利用高效表达2号菌株为出发菌株,进行试管和三角瓶培养,然后以10%的接种量转接到3L的发酵罐中,温度为37度,初始转速为100rpm,通气量为150L.h-1。经过3h培养后,将转速与溶氧量进行关联,当A600为15时,加入终浓度为1mM的IPTG进行诱导,继续培养4h后,离心收集菌体,最终发酵得到菌体湿重94.66g。

关键词：矮化大豆膨胀素基因克隆原核表达结构预测

水貂ADV、CDV和MEV TaqMan多重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

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水貂ADV、CDV和MEV TaqMan多重实时荧光定量PCR检测方法的建立与...

作者：崔巍东北农业大学

学位级别：硕士

水貂阿留申病、水貂犬瘟热病和水貂细小肠炎病是水貂常见的传染性疾病,分别由阿留申病毒(Alertian Disease virus,ADV)、犬瘟热病毒(Canine Distemper virus,CDV)和细小病毒(Mink Enteritis parvovirus,MEV)感染水貂引起。这三种水貂传... 详细信息

水貂阿留申病、水貂犬瘟热病和水貂细小肠炎病是水貂常见的传染性疾病,分别由阿留申病毒(Alertian Disease virus,ADV)、犬瘟热病毒(Canine Distemper virus,CDV)和细小病毒(Mink Enteritis parvovirus,MEV)感染水貂引起。这三种水貂传染病易出现混合感染的情况,临床鉴别诊断困难。因此,建立一种能够准确、快速,并且适用于临床大批量检测方法,对水貂传染病的早期诊断、预防、控制与净化十分重要。基于此,本研究针对NCBI数据库中记录的ADV-VP2、CDV-N和MEV-VP2基因设计特异性引物与TaqMan特异性探针,建立可以同时检测上述三种病原的多重TaqMan实时荧光定量PCR(TaqMan qRT-PCR)检测方法。并将其初步应用于对临床样本的检测中,同时与国家标准信息公共服务平台官方网站(http://***/)中公布的山东省地方标准检测方法(DB 37/T 3319-2018)进行了对比,研究结果如下:(1)成功建立了水貂ADV、CDV和MEV单重的TaqMan qRT-PCR检测方法。我们首先使用各个基因保守序列设计特异性扩增引物,使用p UC19空载体与扩增的目的片段构建重组质粒标准品;使用不同稀释浓度的重组质粒作为模板进行单重的TaqMan qRT-PCR扩增。成功建立了ADV、CDV和MEV的单重TaqMan qRT-PCR检测方法,最低检出下限为0.961×10copies/μL、1.222×10copies/μL和2.979×10copies/μL,重复性试验结果显示三种病毒的单重检测方法变异系数均低于3%。(2)在成功建立水貂ADV、CDV和MEV单重TaqMan qRT-PCR检测方法的基础上成功建立了水貂ADV、CDV和MEV多重TaqMan qRT-PCR检测方法。使用单重TaqMan qRT-PCR的特异性引物和探针,以构建的三种阳性重组质粒作为混合模板,以对整个反应体系和反应条件上进行优化与调整,成功建立了水貂ADV、CDV和MEV多重TaqMan qRT-PCR检测方法。同时使用水貂出血性肺炎(MPB)、水貂脑炎病(CAV-2RZ)和水貂C型肉毒梭菌(CBTc)病原的DNA核酸模板作为阴性对照以及DEPC水作为空白对照,对建立的该检测方法进行特异性检测敏感性检测,确定特异性良好,ADV、CDV和MEV最低检出下限分别为0.999×10copies/μL、1.442×10copies/μL和3.155×10copies/μL,重复性试验结果显示三种病毒的多重检测方法变异系数均低于3%。(3)将建立的多重TaqMan qRT-PCR检测方法初步应用于水貂养殖的临床检测中,并检测来自黑龙江地区的100份临床样本。使用本研究中建立的多重TaqMan qRT-PCR检测方法对样本进行检测,并使用全国标准信息公共服务平台官方网站(http://***/)中所记录的山东省地方标准检测方法(DB 37/T 3319-2018)进行对比。结果显示:两种检测结果完全符合,对比两种检测方法的检测步骤与检测时间,发现本研究成功建立的多重TaqMan qRT-PCR检测方法更适用于临床感染病例的检测。综上所述,本课题建立的ADV、CDV和MEV多重TaqMan qRT-PCR检测方法,能够快速、准确地对水貂这三种传染病病原单独及混合感染进行检测,将显著降低了临床检测难度,具有较高的临床应用价值。

关键词：阿留申病毒犬瘟热病毒细小性肠炎病毒 TaqMan多重实时荧光定量PCR检测水貂

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板栗壳和锯末干馏热解特性研究

板栗壳和锯末干馏热解特性研究

作者：王明峰东北农业大学

学位级别：硕士

世界每年生物质产量约1460亿吨，是继石油、煤炭、天然气等化石能源之后，当今全球第四大能源，我国生物质资源丰富，每年生产的农作物秸秆、谷物壳皮等生物质扣除各种已利用部分，尚有相当于2-2.5亿吨标准煤的生物质待开发利用，林业... 详细信息

世界每年生物质产量约1460亿吨，是继石油、煤炭、天然气等化石能源之后，当今全球第四大能源，我国生物质资源丰富，每年生产的农作物秸秆、谷物壳皮等生物质扣除各种已利用部分，尚有相当于2-2.5亿吨标准煤的生物质待开发利用，林业废弃生物质资源每年约有3700万立方米，相当于2000万吨标准煤。另外，我国每年还有相当于2亿吨标准煤的城镇有机垃圾生物质资源有待处理和开发利用。生物质能利用方式较多，其中在生物质热化学转换技术中，由于热解可直接获得炭、液态和气态产物而越来越受到人们的关注。我国板栗栽培面积广，产量为世界之最，约占世界总产量的3／4。板栗在采集和加工过程中，产生大量的板栗壳，板栗壳上带刺，利用起来很不方便，一般都被遗弃，本研究以板栗壳为主要对象，对其热解进行了较系统的研究，并将其与锯末的热解进行对比。主要研究内容与结论如下： 1)利用热重分析仪在5、10、20和40K／min的升温速率，1073K的反应终温下对板栗壳热解的过程和动力学特性进行了研究，板栗壳热解共分四个阶段，随着升温速率的增加，热解特征温度滞后，求解了反应动力学参数—活化能和频率因子，主反应区间二个热解事件的活化能分别为176MJ／mol和255MJ／mol，板栗壳热解机理符合Jander方程中的二维扩散，n=1／2的反应机理函数。 2)研究了板栗壳和锯末在小型管式反应器上不同温度下热解时三态产物的分布情况，在实验温度范围内板栗壳与锯末热解产物的分布趋势相同，即：炭的产率随着温度的升高而降低，液体产率先增加后减少，气体产率随着温度的升高不断增加;炭的热值随温度的增加先升高再减少;在350℃以后板栗壳热解炭和气体产率明显高于锯末，液体产率低于锯末;板栗壳热解气体产物以CO、CO、CH和H为主，另外还有少量的C、C的有机气体成分，在541—622℃的温度范围内CH含量达到24％，H含量达到27.5％;板栗壳热解气体的热值随收集温度的上升而不断增加，高温区域气体的低位热值稳定在14.4MJ／m，明显高于气化气体热值。 3)在干馏釜反应器上研究了升温速率和反应温度对板栗壳热解产物及产物特性的影响，发现升温速率对各态产率影响不大，反应温度对板栗壳热解产物分布趋势的影响与小型管式反应器相似，但在放大的干馏釜反应器上炭和液体产率减少，而气体产率增加。

关键词：生物质动力学管式反应器干馏釜干馏热解

猪传染性胃肠炎病毒M蛋白诱导IFN-β表达分子机制及功能域研究

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猪传染性胃肠炎病毒M蛋白诱导IFN-β表达分子机制及功能域研究

作者：王洪微东北农业大学

学位级别：硕士

猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)是一种有囊膜的单股正链RNA病毒,可引起猪急性、高度接触性、传染性肠道疾病——猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis,TGE)。自2010年以来,TGE在我国多个省市... 详细信息

猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)是一种有囊膜的单股正链RNA病毒,可引起猪急性、高度接触性、传染性肠道疾病——猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis,TGE)。自2010年以来,TGE在我国多个省市的暴发,给养猪业造成了巨大的经济损失,制约了我国规模化猪场的健康高速发展。TGEV致病机制的研究有助于对TGE的防控。有研究报道TGEV感染可以诱导I型干扰素(IFN)的产生。IFN及其下游的干扰素刺激因子(ISGs)能够有效的抑制病毒感染和病毒在体内的增殖,是宿主抗病毒感染的重要环节。多数病毒感染是拮抗IFN产生的,而TGEV感染细胞后可以诱导I型IFN的产生,目前对其具体分子机制的相关研究报道较少。本研究使用TGEV HE-1株在IPEC-J2细胞上传代适应,盲传至第八代时,细胞开始出现典型的细胞病变(cytopathic effect,CPE),经RT-PCR验证TGEV HE-1株可以在IPEC-J2细胞上适应,荧光显微镜下可观察到随着感染病毒滴度的增加,绿色荧光信号逐渐增强。TGEV HE-1株感染IPEC-J2模型可以用来研究TGEV诱导细胞IFN-β产生的分子机制。实时荧光定量RT-PCR和双荧光素酶分析系统检测结果表明TGEV感染IPEC-J2细胞呈时间和剂量依赖性上调IFN-β表达。同时,TGEV感染可激活IRF-3和NF-κB启动子活性,且IRF-3启动子的表达量变化明显高于NF-κB,Western blot和激光共聚焦结果表明TGEV感染可诱导IRF-3磷酸化和核转移,说明TGEV感染上调IFN-β的表达可能主要依赖于IRF-3转录因子调控。通过RT-PCR扩增了TGEV的S、E、M、N基因,并与pCMV-HA-N真核表达载体连接构建重组质粒,通过Western blot验证各结构蛋白在IPEC-J2细胞内均成功表达。双荧光素酶分析系统检测显示S、N、E蛋白虽也能诱导IFN-β少量表达,但M蛋白作为关键蛋白激活作用最显著。TGEV M基因siRNA转染细胞后,IFN-β表达量显著下调,进一步证明TGEV M蛋白可以诱导IFN-β产生。Western blot和激光共聚焦检测表明,M蛋白通过诱导IRF-3的磷酸化和核转移激活IFN-β。通过截短表达TGEV M基因,构建5个重组质粒,双荧光素酶分析确定M蛋白激活IFN-β的关键功能域位于第1-88位氨基酸。综上,本研究证明了TGEV分离株HE-1株可以在IPEC-J2细胞上生长繁殖;TGEV感染IPEC-J2细胞诱导IFN-β产生依赖于IRF-3转录因子调控,且呈时间和剂量依赖性;TGEV M蛋白是诱导IFN-β产生的关键结构蛋白,通过诱导IRF-3的磷酸化和核转移激活IFN-β信号通路,TGEV M蛋白激活IFN-β信号通路的关键功能域位于第1～88位氨基酸。本研究为阐明TGEV的致病机理奠定基础,为靶向药物的研究及对TGE的有效防控提供理论依据。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 M蛋白 IFN-β IRF-3 功能域

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虹鳟源蜂房哈夫尼菌的鉴定及其致病性研究

虹鳟源蜂房哈夫尼菌的鉴定及其致病性研究

作者：宋健东北农业大学

学位级别：硕士

蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei)是一种革兰氏阴性、兼性厌氧菌,属于肠杆菌科的条件性致病菌,广泛存在于哺乳动物肠道中,因其具有腐败性特性在自然环境以及冷冻食品中也可检测到该菌。蜂房哈夫尼菌感染虹鳟(Oncorhynchus mykiss)可引起虹鳟... 详细信息

蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei)是一种革兰氏阴性、兼性厌氧菌,属于肠杆菌科的条件性致病菌,广泛存在于哺乳动物肠道中,因其具有腐败性特性在自然环境以及冷冻食品中也可检测到该菌。蜂房哈夫尼菌感染虹鳟(Oncorhynchus mykiss)可引起虹鳟体表出血及炎症反应,并造成急性死亡,对虹鳟养殖业造成极大影响。因此,分离获得虹鳟源蜂房哈夫尼菌分离株,并对其生物学特性及致病性进行系统研究,为进一步研究蜂房哈夫尼菌的致病机制及其防控具有重要意义。本研究从辽宁某患病虹鳟养殖场中,游动缓慢、体表发黑出血的患病虹鳟病灶组织中分离获得优势菌1株,命名为HA01株,结合16S r RNA序列分析、生理生化鉴定、药敏纸片法以及RT-PCR等方法对其生物学特性、耐药性、致病性进行研究。研究结果如下:1.生物学特性结果显示,HA01株在TSA平板上呈灰白色,圆形,边缘较为整齐,可利用葡萄糖、水乳糖、七叶苷,V-P试验、ONPG试验、OF试验、过氧化氢酶试验均呈阳性,能还原硝酸盐,不能产生硫化氢,不能水解明胶、淀粉等。16S r RNA比对结果表明,HA01株与蜂房哈夫尼菌参考株ATCC 29926的同源性为99.65%。综合菌株的理化特性和分子特性,确定HA01菌株为蜂房哈夫尼菌。2.耐药性结果表明,HA01株对恩诺沙星、庆大霉素、链霉素、氯霉素、甲氧胺嘧啶敏感,对阿莫西林、青霉素、红霉素、利福平、氨苄西林不敏感。3.致病性结果表明,HA01株对虹鳟幼鱼的半致死浓度(LD)为4.80×10CFU/m L,从人工感染的试验鱼体内可重新分离到蜂房哈夫尼菌,符合科赫法则。组织病理变化表明,虹鳟感染HA01株后脾脏淋巴细胞减少,红细胞大量增多,呈明显的血细胞浸润现象;肝细胞肿胀,轻度水样变性,部分肝细胞核溶解消失,胞质疏松淡染;肠细胞空泡化,炎性细胞浸润,肠绒毛断裂。通过平板计数法检测蜂房哈夫尼菌感染后试验鱼各组织中的病原载量,结果显示,感染后6 h,在肝脏、脾脏、肾脏、肠道中均可检出蜂房哈夫尼菌,肝脏中病原菌载量最高,为6.7×10CFU/g;感染24 h时,各组织病原菌载量达到最大值,肝脏病原菌载量最高,为8.3×10CFU/g,其它组织病原菌载量略低于肝脏。从24 h到48 h,各组织病原菌载量显著降低,48 h后逐渐降低。4.虹鳟免疫应答结果表明,感染后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h和120 h试验鱼血液中的红细胞和血红蛋白含量呈先降低后升高的趋势,72 h含量显著低于其它时间点(P<0.05),白细胞含量呈先升高后降低的趋势,48h含量显著高于其它时间点(P<0.05);肝脏溶菌酶(LZM)、谷丙转氨酶(GPT)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)以及总抗氧化能力(T-AOC)均呈现先升高后降低的趋势,且在48 h时达到顶峰,显著高于其它时间点(P<0.05);肝脏和脾脏内指示免疫水平和炎症反应的相关基因Ig M、IL10,生长因子FGF和促炎因子SAA的表达量均呈现出先升高后降低的趋势,各个时间点之间的变化显著(P<0.05),48 h时各检测基因表达量达到峰值。综上所述,患病虹鳟病灶组织中分离获得HA01株经鉴定为蜂房哈夫尼菌,其感染虹鳟后,能引起患病鱼的肝、脾和肠组织组织产生病理变化,鱼体通过提高抗氧化能力及免疫功能抑制病原菌在体内的含量。并且该病原菌对恩诺沙星、庆大霉素等药物敏感,这为养殖生产中蜂房哈夫尼菌感染引起的疾病预防和治疗用药提供了理论依据。

关键词：蜂房哈夫尼菌虹鳟致病性耐药性免疫应答

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黑龙江省农村小额信贷发展问题及对策研究

黑龙江省农村小额信贷发展问题及对策研究

作者：韩序东北农业大学

学位级别：硕士

黑龙江省是我国著名的农业大省,也是我国最大的商品粮基地。作为黑龙江省解决“三农”问题的重要一步,农村金融改革直接影响经济包容性增长和社会和谐稳定发展。连续几年出台的中央一号文件都对这一问题进行过专门部署,旨在推动农村金... 详细信息

黑龙江省是我国著名的农业大省,也是我国最大的商品粮基地。作为黑龙江省解决“三农”问题的重要一步,农村金融改革直接影响经济包容性增长和社会和谐稳定发展。连续几年出台的中央一号文件都对这一问题进行过专门部署,旨在推动农村金融改革的长久发展。从黑龙江省实际情况来看,由于人多地广,对资金的需求量大且分散,各地开始积极探索组建农业信用担保机构,为农村提供金融服务。伴随农民观念的不断转变以及农村小额信贷制度的不断完善,农村小额信贷需求强劲,为农户扩大生产规模、发展生产,提供了资金支持。本文重点分析了黑龙江省农村小额信贷发展的现状和存在的主要问题,分析了当前黑龙江省农村小额信贷的主要影响因素。再进一步借鉴国内其他地区农村小额信贷发展经验,提出了有针对性的、切实有效地能够促进黑龙江省农村小额信贷健康发展的对策建议。文章首先明确了选题的背景、目的和意义,比较系统地总结了农村小额信贷的国内外研究状况,并指出了研究思路和方法。其次,从农村小额信贷的相关理论入手,对相关概念进行了界定。同时,从农村小额信贷需求主体,农村小额信贷服务主体,农村小额信贷融资途径,农村小额信贷利率水平等方面,归纳出存在的主要问题。最后,针对黑龙江省农村小额信贷存在的主要问题,根据黑龙江省农村小额信贷的主要影响因素分析,以及借鉴国内其他地区农村小额信贷发展经验,多角度、多层次地提出了促进黑龙江省农村小额信贷健康发展的对策建议。

关键词：农村金融小额信贷现状问题对策研究