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以“学”为中心的基因工程实验混合式教学设计与实施

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生物工程学报 2021年第8期37卷 2956-2966页

作者：娄慧玲杨熙尚凌月周逸人吴燕华复旦大学生物科学国家级实验教学示范中心上海200433 复旦大学生命科学学院上海200433

生物学实验教学是生命科学类人才培养的重要环节。面向生物学学科的快速发展和研究型人才培养需求的增加,生物学实验教学应设立更加多元化的学习目标,即在实验技能训练的基础上,努力培养学生的实验设计与操作能力,提升学生的科学思维和... 详细信息

生物学实验教学是生命科学类人才培养的重要环节。面向生物学学科的快速发展和研究型人才培养需求的增加,生物学实验教学应设立更加多元化的学习目标,即在实验技能训练的基础上,努力培养学生的实验设计与操作能力,提升学生的科学思维和创新意识。文中结合基因工程实验课程的混合式教学改革的过程,介绍基因工程实验在线资源建设方法、混合式教学理念设计和课堂实施细节,并对教学效果进行了初步分析。实践证明,基因工程实验的混合式教学模式能够有效促进学生的主动学习,形成以"学"为中心的教学模式,帮助学生提高实验技术的学习效果,并在此基础上培养严谨的科学态度、专业的研究素质及创新的学术能力。

关键词：基因工程实验混合式教学改革实验教学创新能力

贵州瑶族3支系Y-DNA及线粒体DNA序列多态性分析

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遗传 2006年第2期28卷 153-158页

作者：褚迅单可人文波齐晓岚李毅吴昌学刘 赵艳任锡麟金力贵阳医学院分子生物学重点实验室贵阳550004 复旦大学生命科学院现代人类学研究中心上海200433

采用PCRRFLP技术,通过观察由12个单核苷酸多态位点(SNPs)组成的Y染色体单倍型及由9个多态位点组成的线粒体DNA单倍型在贵州瑶族中的分布,分析贵州瑶族父系及母系遗传结构,探讨其起源及迁徙。结果显示,97份男性样本分别属于H7、H8、H9、H... 详细信息

采用PCRRFLP技术,通过观察由12个单核苷酸多态位点(SNPs)组成的Y染色体单倍型及由9个多态位点组成的线粒体DNA单倍型在贵州瑶族中的分布,分析贵州瑶族父系及母系遗传结构,探讨其起源及迁徙。结果显示,97份男性样本分别属于H7、H8、H9、H114种YDNA单倍型,苗瑶语系特异YDNA单倍型H7的平均频率为92.4%;通过对线粒体DNA基因分型,得到8种单倍型,可归入B4、B5、D4、D5和N单倍型类群中,CoⅡ/tRNALys区域间的9bp缺失平均频率为58.2%。结果提示贵州瑶族父系遗传结构单一,具有典型的苗瑶族群特征,又存在与其他族群的融合。母系遗传结构相对复杂,9bp缺失是贵州瑶族的母系遗传结构特征。

关键词：贵州瑶族 Y-DNA单倍型 mtDNA单倍型类群

HB-EGF可挽救ADAM17缺失导致的大脑皮层神经前体细胞分化迁移异常

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复旦学报（自然科学版） 2017年第5期56卷 602-609页

作者：景迎春李擎瑜刘彬郑煜芳复旦大学生命科学学院上海200438 复旦大学发育生物学研究院上海200433 复旦大学附属妇产科医院生殖发育研究院上海200090

ADAM17金属蛋白酶对多种生长因子的成熟和功能有重要作用.实验室前期研究发现ADAM17对于大脑皮层神经前体细胞的迁移分化有重要作用,本研究进一步探究ADAM17影响大脑皮层神经前体细胞的迁移分化的分子机制.在小鼠胚胎E14.5天,采用IUE技... 详细信息

ADAM17金属蛋白酶对多种生长因子的成熟和功能有重要作用.实验室前期研究发现ADAM17对于大脑皮层神经前体细胞的迁移分化有重要作用,本研究进一步探究ADAM17影响大脑皮层神经前体细胞的迁移分化的分子机制.在小鼠胚胎E14.5天,采用IUE技术用针对性shRNA降低在大脑皮层中高表达的ADAM17底物(HB-EGF,L1-CAM,NRG1)的表达,或者在敲低ADAM17的同时共表达底物质粒,在E18.5天取样切片染色观测大脑皮层神经前体干细胞的迁移分化.结果显示敲低HB-EGF表达的大脑皮层神经前体细胞迁移分化异常表型与敲低ADAM17的表型相似;过表达HB-EGF胞外段成熟蛋白可以拯救敲低ADAM17的大脑皮层神经前体细胞迁移受阻的现象.因此推论,HB-EGF是ADAM17调控大脑皮层神经前体细胞的迁移分化过程中的一个主要底物.

关键词： ADAM17 HB-EGF L1-CAM NRG1 皮层神经前体细胞辐射状迁移

基于分子模拟的河鲀毒素核酸适配体的连续优化

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中国生物工程杂志 2022年第8期42卷 1-12页

作者：颜志超宋梦华刘建平黄强复旦大学生命科学学院上海200438

河鲀毒素(tetrodotoxin, TTX)是一种生物碱类神经毒素,其中毒事件在世界范围内广泛发生,严重危害到人类健康,但尚无特效解毒剂,因此TTX的检测对食品安全领域有重大意义。为了得到更高效的TTX识别元件,在分子模拟指导下对SELEX筛选所得... 详细信息

河鲀毒素(tetrodotoxin, TTX)是一种生物碱类神经毒素,其中毒事件在世界范围内广泛发生,严重危害到人类健康,但尚无特效解毒剂,因此TTX的检测对食品安全领域有重大意义。为了得到更高效的TTX识别元件,在分子模拟指导下对SELEX筛选所得的核酸适配体TTX-27进行了连续优化。首先,使用Mini-hairpin结构替换阻碍TTX结合的茎环结构,使TTX更易与截短型适配体结合,然后将T39、C40碱基突变为C39、T40碱基,并对C39进行了2′-OH修饰,以增强结合区域碱基与TTX的氢键作用和范德瓦耳斯相互作用。微量热泳动(microscale thermophoresis, MST)实验证实,经截短、碱基突变和化学修饰的各适配体变体的亲和力均有提高,其中化学修饰变体TTX-D2-X-R结合TTX的解离平衡常数K为1.08 nmol/L,相较于TTX-27的亲和力提高了75.5倍。表明基于分子模拟的截短-突变-化学修饰是核酸适配体post-SELEX优化的有效途径,所得的适配体变体TTX-D2-X-R在TTX检测领域有着潜在的应用价值。

关键词：河鲀毒素核酸适配体分子模拟碱基截短碱基突变化学修饰

表达抗原 Rv3478的重组卡介苗的实验研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2015年第5期35卷 359-366页

作者：孔聪朱琳粟海波黄琪李光华宋娜徐颖王洪海复旦大学生命科学学院上海200438

目的：本研究选取结核杆菌优秀抗原Rv3478，构建重组疫苗rBCG：Rv3478并对其进行免疫原性评价。方法 PCR扩增基因Rv3478，构建重组质粒Rv3478-pMV261之后电转进入BCG感受态细胞中，另外将扩增的基因片段导入pET-28a中，构建表达载体Rv34... 详细信息

目的：本研究选取结核杆菌优秀抗原Rv3478，构建重组疫苗rBCG：Rv3478并对其进行免疫原性评价。方法 PCR扩增基因Rv3478，构建重组质粒Rv3478-pMV261之后电转进入BCG感受态细胞中，另外将扩增的基因片段导入pET-28a中，构建表达载体Rv3478-pET-28a（ BL21）表达蛋白Rv3478，蛋白免疫小鼠获取多克隆抗体，蛋白印迹方法筛选得到表达Rv3478的重组卡介苗；用构建好的重组卡介苗刺激巨噬细胞，收集细胞培养上清 ELISA 检测细胞因子的分泌；重组疫苗rBCG：Rv3478（R3）免疫小鼠，PBS、BCG、BCG：pMV261（R0）作对照组。分别在免疫4周和12周后处死小鼠，用ELISPOT、ELISA、流式细胞术等方法检测疫苗细胞免疫和体液免疫水平。结果成功表达蛋白Rv3478，免疫小鼠后获得多克隆抗体；成功构建重组疫苗R3；免疫小鼠后，能够引发强烈的细胞免疫应答（强烈的IFN-γ反应，高水平的TNF-α的分泌），促进外周血CD4＋／CD8＋T细胞比例增加， CD44＋CD62L＋T细胞百分比增加。结论构建的重组疫苗R3能够引发强烈的免疫应答，显示出良好的免疫原性，具有良好的抗结核潜力，值得进一步研究。

关键词：结核病重组卡介苗 Rv3478 疫苗

CREB4基因的表达谱分析和功能初步研究(英文)

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Acta Genetica Sinica 2005年第9期32卷 898-902页

作者：高永娟曹根涛殷刚王鑫季朝能顾少华倪晓华华东师范大学生命科学院生物化学及分子生物学实验室上海200062 上海新智生物技术有限公司上海200031 复旦大学生命科学院遗传所遗传工程国家重点实验室上海200433

cAMP 反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding proteins,CREB)是一个哺乳动物转录因子家族,通过cAMP 反应元件(cAMP response element,CRE)介导cAMP和钙离子依赖性基因表达.CREB4是CREB转录家族的新成员.人肿瘤MTC panel结果显示,CREB4在人肺癌LX-1、结肠腺癌CX-1、前列腺癌PC-3、结肠癌G1-112和胰腺癌G1-103中有表达.构建表达CREB4-LexA和CREB215～395aa-LexA的pLexA融合质粒分别转化含p8opLacZ报告质粒的酵母EGY48菌株,诱导表达后发现CREB4蛋白为转录激活因子,N端决定其转录激活活性.亚细胞定位结果显示,全长CREB4蛋白定位于细胞质,而缺失C端假定转膜结构域的CREB41～275aa蛋白突变体则转移至细胞核内.表达谱结果显示CREB4蛋白可能在人多种肿瘤组织的基因表达调控中起作用,其C端假定的转膜结构域与其转录激活功能密切相关.

关键词： CREB4 人肿瘤MTC panel 转录激活因子亚细胞定位基因表达调控表达谱分析 response element 结合蛋白

细菌视紫红质/聚乙烯醇复合膜的制备及相关功能研究

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化学学报 2002年第12期60卷 2209-2213页

作者：刘嘉明明刘坚黄力李庆国丁建东复旦大学高分子科学系聚合物分子工程教育部重点实验室上海200433 复旦大学生命科学院生理学与生物物理学系上海200433

细菌视紫红质(bR)是一种独特的光敏蛋白,具有光致变色和光驱质子泵功能.将bR蛋白包埋于聚乙烯醇(PVA)基质中,制备了bR/PVA复合膜.利用紫外 -可见分光光度计和自制的毫秒级动力学光谱仪,检测了样品的吸收光谱和光循环M中间体在脉冲光激... 详细信息

细菌视紫红质(bR)是一种独特的光敏蛋白,具有光致变色和光驱质子泵功能.将bR蛋白包埋于聚乙烯醇(PVA)基质中,制备了bR/PVA复合膜.利用紫外 -可见分光光度计和自制的毫秒级动力学光谱仪,检测了样品的吸收光谱和光循环M中间体在脉冲光激发下随时间的变化;同时,利用凝胶扫描成像仪及相关分析软件考察了样品成膜后的均匀程度.实验表明:bR/PVA复合膜具有良好的均匀性、透明性和力学性能,而且bR蛋白保持了原有的生物活性和光学性质,bR与M中间体之间能达到一种光可控制的双稳态,M中间体的寿命也得到了显著的延长。

关键词：聚乙烯醇制备细菌视紫红质光循环光驱质子泵聚合物复合膜信息材料信息存储

ALS相关突变型σ1R的激活促进大鼠施旺细胞RSC96的凋亡

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复旦学报（自然科学版） 2017年第6期56卷 662-670页

作者：周梅李增民郑煜芳复旦大学生命科学学院上海200438 复旦大学发育生物学研究院上海200433 复旦大学附属妇产科医院生殖发育研究院 200090

肌萎缩性侧索硬化症(ALS)是一种渐进的致命的神经退行性疾病,症状为运动神经元损失所导致的肌肉萎缩和痉挛,大部分病人最后死于呼吸衰竭.对其致病机理的研究主要集中于对神经元的影响,而对施旺细胞在其中的作用至今仍未有报道.之前研究... 详细信息

肌萎缩性侧索硬化症(ALS)是一种渐进的致命的神经退行性疾病,症状为运动神经元损失所导致的肌肉萎缩和痉挛,大部分病人最后死于呼吸衰竭.对其致病机理的研究主要集中于对神经元的影响,而对施旺细胞在其中的作用至今仍未有报道.之前研究发现在一个青少年发病的ALS家族中,SIGMAR1基因编码区的一个碱基存在错位突变,该突变使Sigma-1型受体(σ1R)的102位氨基酸由谷氨酸(E)突变为谷氨酰胺(Q).本文通过在大鼠施旺细胞系(RSC96细胞)中过表达野生型及突变型σ1R来研究该突变对RSC96细胞凋亡的影响.实验结果表明在毒胡萝卜素(Thapsigargin)诱导的内质网压力和σ1R激动剂PRE084的刺激下,突变型σ1R使施旺细胞更倾向于凋亡,失去了对胞质Ca^(2+)调节的能力,并且对ADAM10具有更强的抑制作用.本研究提示σ1R突变也可能通过施旺细胞对ALS的病理过程起到作用.

关键词：肌萎缩性侧索硬化症 Sigma-1型受体 RSC96 细胞凋亡胞质Ca2+ 去整合素金属蛋白酶10

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Neuritin的研究进展

生理学报 2013年第5期65卷 483-488页

作者：姚金晶梅岩艾复旦大学生命科学学院上海200433

Neuritin是神经营养因子家族中的一个新成员,其基因cpg15(candidate plasticity-related gene 15)可由神经活动或神经营养素(neurotrophins,NTs)激活。实验表明neuritin能够促进神经元突起的生长和分支,在神经元可塑性及神经元再生中发... 详细信息

Neuritin是神经营养因子家族中的一个新成员,其基因cpg15(candidate plasticity-related gene 15)可由神经活动或神经营养素(neurotrophins,NTs)激活。实验表明neuritin能够促进神经元突起的生长和分支,在神经元可塑性及神经元再生中发挥着重要的作用。近年来的研究证实,neuritin不仅参与神经系统中多项生理功能的调节,还在血管生成以及相关肿瘤的发生中扮演着重要角色。本文将综述neuritin蛋白的翻译表达和调控机理、生物学效用,并围绕neuritin如何发挥其生物活性及目前研究中存在的热点和难点进行讨论。

关键词：神经突起因子神经可塑性血管生成肿瘤