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原子力显微镜观察体外纯化蛋白分子的表面结构

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中国药理学通报 2025年第1期41卷 193-199页

作者：陈昭颖方骁枫刘丹彦陈梦琴凌夕赵洁旻魏伟吴育晶安徽医科大学临床药理研究所抗炎免疫药物教育部重点实验室安徽合肥230032 安徽医科大学第二临床医学院安徽合肥230022

目的以课题组纯化获得的蛋白样本为观察对象,对比原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)及扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)的观察结果,并总结AFM观察生物大分子的主要问题和解决方法。方法将蛋白样本使用PBS稀释... 详细信息

目的以课题组纯化获得的蛋白样本为观察对象,对比原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)及扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)的观察结果,并总结AFM观察生物大分子的主要问题和解决方法。方法将蛋白样本使用PBS稀释至15 nmol·L^(-1),分别固定于载玻片、硅片和云母片上烘干,制成固相观察样本,SEM样本在观察前镀铂,使用AFM及SEM观察蛋白质表面结构,计算样本高度,对比结果差异。结果带正电的蛋白样本在观察时由于AFM探针的斥力会向右偏移;云母片能很好地消除蛋白正电荷从而避免样本移动;PBS能为蛋白样本提供良好的稳定环境,但PBS盐结晶会干扰探针运行和成像清晰度;SEM样本需要镀铂后观察,无法达到AFM的精度。结论使用AFM和SEM均可在体外环境直接观察蛋白质结构,AFM能提供更高精度的观察结果;在蛋白样本稳定性允许的情况下首选超纯水为溶剂载体,乙醇等挥发性液体也可作为溶剂载体,AFM的应用可为药理学生物大分子互作研究提供一新途径。

关键词：原子力显微镜扫描电子显微镜受体结构蛋白质体外结构超微结构云母载体

大麻二酚对转化生长因子β1诱导肝星状细胞活化和肝纤维化的作用

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中国组织工程研究 2025年第23期29卷 4965-4974页

作者：王联谢娜赵珮伶陈浩李芏酉王豫萍贵州医科大学附属医院临床检验中心贵州省贵阳市550003 贵州医科大学医学检验学院临床微生物学及免疫学教研室贵州省贵阳市550004

背景:大麻二酚具有抗炎、抗氧化等药理学作用,并且不具有精神活性,在肝脏疾病中的研究日渐增加,但其对肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号转导通路的作用尚未明确。目的:探讨大麻二酚对肝星状细胞中转化生长因子β1/Smad信号转导通路... 详细信息

背景:大麻二酚具有抗炎、抗氧化等药理学作用,并且不具有精神活性,在肝脏疾病中的研究日渐增加,但其对肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号转导通路的作用尚未明确。目的:探讨大麻二酚对肝星状细胞中转化生长因子β1/Smad信号转导通路的影响,研究其抗肝纤维化的可能机制。方法:(1)体外实验:选取大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),分6组培养:对照组常规培养24 h,单纯药物组加入大麻二酚培养24 h,造模组加入转化生长因子β1培养24 h,造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组均加入转化生长因子β1培养24 h后分别加入1,5μmol/L大麻二酚或水飞蓟素培养24 h。培养结束后,检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路蛋白表达。(2)动物体内实验:将C57BL/6J小鼠随机分为5组,每组8只:假手术组不造模,造模组、造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组通过胆管结扎法建立肝纤维化模型,造模3周后分别腹腔注射4,8 mg/kg大麻二酚或水飞蓟素,1次/d,连续给药7 d。给药结束后,检测各组小鼠肝功能、肝脏病理形态及α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路相关蛋白表达。结果与结论:(1)体外实验:与对照组比较,造模组HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平以及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1、p-Smad2/3蛋白表达均升高(P<0.05),Smad7蛋白表达降低(P<0.05);两种剂量大麻二酚处理可改善转化生长因子β1诱导的HSC-T6细胞上述指标的变化,并且以造模+高剂量药物组改善作用更明显;(2)体内实验:与假手术组比较,模型组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活性升高(P<0.05),肝组织中炎性细胞浸润及胶原含量增加(P<0.05),转化生长因子β1/Smad信号转导通路被激活,α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白表达升高(P<0.05);两种剂量大麻二酚干预可减轻造模小鼠上述指标的变化,并且以造模+高剂量药物组效果更明显;(3)结果表明,大麻二酚通过抑制肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号传导通路的激活抑制肝纤维化。

关键词：大麻二酚肝星状细胞肝纤维化信号转导通路转化生长因子β1/Smad HSC-T6细胞

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五味子甲素改善氧化应激引起的内皮功能障碍

中国药理学通报 2025年第1期41卷 122-130页

作者：侯惠民张文文赵卫萍赵鑫朴贤美寒地心血管疾病国家重点实验室哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室—省部共建国家重点实验室培育基地心血管药物研究教育部重点实验室黑龙江哈尔滨150086

目的探究五味子甲素(schizandrin A,SchA)对氧化应激引起内皮功能障碍的拮抗作用及其作用机制。方法选用人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)作为研究对象,采用MTT实验检测SchA对HUVECs活力的影响;通过流... 详细信息

目的探究五味子甲素(schizandrin A,SchA)对氧化应激引起内皮功能障碍的拮抗作用及其作用机制。方法选用人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)作为研究对象,采用MTT实验检测SchA对HUVECs活力的影响;通过流式细胞技术检测细胞中ROS的含量;试剂盒检测HUVECs中MDA、CAT的含量以及细胞上清液中NO、ET-1的含量;Western blot实验检测细胞中SOD1、p-eNOS/eNOS蛋白以及Nrf2/Keap1/HO-1通路蛋白的表达情况;免疫荧光实验检测细胞Nrf2的入核情况。结果SchA通过激活Nrf2/Keap1/HO-1信号通路逆转LPS或缺氧诱导的HUVECs内ROS和MDA含量的升高及SOD1和CAT含量的下降;SchA逆转LPS诱导的HUVECs中p-eNOS和eNOS蛋白表达的降低及逆转细胞培养液中NO含量的下降和ET-1含量的升高;Nrf2抑制剂ML385逆转SchA对氧化应激及内皮功能障碍的拮抗作用。结论SchA拮抗LPS及缺氧诱导的氧化应激,SchA通过上调Nrf2/Keap1/HO-1信号通路改善氧化应激引起的内皮功能障碍。

关键词： SchA 氧化应激内皮功能障碍 Nrf2/Keap1/HO-1信号通路 HUVECs LPS

淫羊藿苷预处理增强人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞的影响

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中国组织工程研究 2025年第7期29卷 1328-1335页

作者：喻婷吕冬梅邓浩孙涛程钎西南医科大学口颌面修复重建和再生泸州市重点实验室四川省泸州市646000 西南医科大学口腔医学研究所四川省泸州市646000 西南医科大学附属口腔医院正畸科四川省泸州市646000 西南医科大学口腔医学院四川省泸州市646000

背景:人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞促炎功能有一定抑制作用,具有抗炎等药理活性的淫羊藿苷是否能增强人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞的抑制作用尚不明确。目的:探究淫羊藿苷预处理人牙周膜干细胞后对M1型巨噬细胞的影响。方法:分离培养... 详细信息

背景:人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞促炎功能有一定抑制作用,具有抗炎等药理活性的淫羊藿苷是否能增强人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞的抑制作用尚不明确。目的:探究淫羊藿苷预处理人牙周膜干细胞后对M1型巨噬细胞的影响。方法:分离培养原代人牙周膜干细胞,并进行鉴定。对THP-1细胞进行诱导,采用免疫荧光染色及PCR进行M1型巨噬细胞鉴定。用含浓度10^(-7),10^(-6),10^(-5),10^(-4)mol/L淫羊藿苷的α-MEM完全培养基培养人牙周膜干细胞1,3,5,7 d,采用CCK-8法筛选合适的淫羊藿苷浓度进行实验。将α-MEM完全培养基、未处理的人牙周膜干细胞α-MEM条件培养基及淫羊藿苷预处理24 h的人牙周膜干细胞α-MEM条件培养基与RPMI-1640完全培养基以1∶1的比例对M1型巨噬细胞进行条件培养,分别为对照组、未处理组及预处理组,24 h后RT-PCR法检测M1型巨噬细胞炎症因子的mRNA表达情况;ELISA法检测M1型巨噬细胞炎症因子的蛋白表达情况;Western blot检测M1/M2型巨噬细胞表面标记物及核转录因子κB通路相关蛋白的表达。结果与结论:(1)CCK-8检测结果显示,10^(-7),10^(-6),10^(-5),10^(-4)mol/L淫羊藿苷对人牙周膜干细胞均无细胞毒性,且从第5天起,各浓度都提高了细胞活力,促进细胞增殖,选择10^(-4)mol/L淫羊藿苷进行后续实验。(2)RT-PCR法及ELISA检测结果显示,与对照组相比,未处理组及预处理组均降低了M1型巨噬细胞白细胞介素1β、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α的表达与分泌(P<0.05),且预处理组低于未处理组(P<0.05)。(3)Western blot检测结果显示,与未处理组相比,预处理组CD86的表达明显降低(P<0.05);与对照组相比,未处理组和预处理组M2型巨噬细胞表面标志物CD206的表达均升高(P<0.01),且预处理组明显高于未处理组(P<0.01);M1型巨噬细胞经24 h条件培养后,与对照组相比,核转录因子κB/P65的表达在未处理组和预处理组均有降低(P<0.01),p-IκBα的表达仅在预处理组降低(P<0.01);与未处理组相比,预处理组核转录因子κB/P65和p-IκBα的表达均显著降低(P<0.05),而IκBα在3组中的表达差异无显著性意义。(4)上述结果证实,淫羊藿苷增强了人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞的抑制作用,此作用可能与抑制了巨噬细胞的核转录因子κB信号通路相关。

关键词：人牙周膜干细胞淫羊藿苷巨噬细胞条件培养基共培养表面标志物炎症因子抗炎核转录因子κB信号通路

间尼索地平对血管钙超负荷大鼠主动脉钙积累的作用(英文)

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中国药理学报 1996年第4期17卷 323-328页

作者：孙安阳杨藻宸钟慈声江明华俞彰王永铭上海医科大学药理学教研室上海医科大学生物物理学教研室

目的:在组织和细胞水平探讨间尼索地平(m-Nis)对血管钙超负荷(VCO)大鼠主动脉钙积累的作用。方法:建立大鼠VCO模型,用原子吸收分光光度法和电子探针微分析法分别测定主动脉总钙和动脉平滑肌亚细胞钙。结果:m-Nis(1—15mg·kg^(-1))对VC... 详细信息

目的:在组织和细胞水平探讨间尼索地平(m-Nis)对血管钙超负荷(VCO)大鼠主动脉钙积累的作用。方法:建立大鼠VCO模型,用原子吸收分光光度法和电子探针微分析法分别测定主动脉总钙和动脉平滑肌亚细胞钙。结果:m-Nis(1—15mg·kg^(-1))对VCO大鼠主动脉总钙升高作用弱,且量效关系呈钟罩形。m-Nis 2.5mg·kg^(-1)对总钙升高抑制为24％。维拉帕米12.5mg·kg^(-1)疗效略优于m-Nis。m-Nis2.5mg·kg^(-1)对主动脉中膜平滑肌细胞的胞浆和线粒体钙升高有明显抑制,抑制率分别为72％和76％,对胞核钙升高抑制稍小。结论:m-Nis对VCO大鼠主动脉主要抑制血管平滑肌细胞内尤其是胞浆和线粒体钙超负荷,而对组织间质钙沉积作用较弱。

关键词：间尼索地平钙积累主动脉探针血管

氟他胺对大鼠及小鼠前列腺肥大的抑制作用(英文)

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中国药理学报 1999年第6期20卷 537-540页

作者：章蕴毅李佩芬陈滨凌李端上海医科大学药学院药理教研室

观察氟他胺（Ｆｌｕ）抗前列腺肥大的作用方法：以两种动物模型：阉割大鼠每只每日ｓｃ睾酮０．５ｍｇ引起前列腺肥大和小鼠前列腺中植入同系１６ｄ龄胎鼠的尿生殖窦组织，ｉｇＦｌｕ　１０，２５，和５０ｍｇ·ｋｇ－１３０ｄ... 详细信息

观察氟他胺（Ｆｌｕ）抗前列腺肥大的作用方法：以两种动物模型：阉割大鼠每只每日ｓｃ睾酮０．５ｍｇ引起前列腺肥大和小鼠前列腺中植入同系１６ｄ龄胎鼠的尿生殖窦组织，ｉｇＦｌｕ　１０，２５，和５０ｍｇ·ｋｇ－１３０ｄ或ｓｃ雌二醇（Ｅｓｔ），两模型分别持续３０ｄ和１４ｄ．结果：１）Ｆｌｕ能显著抑制大鼠各叶前列腺体积和重量，使其降至对照组的１０％至５０％，并呈良好的剂量效应关系．腺体上皮萎缩，腺腔直径缩小，其效应比Ｅｓｔ强．２）Ｆｌｕ治疗组前列腺体积和重量均减小，但只有体积项呈剂量效应关系此模型中，Ｅｓｔ的作用较Ｆｌｕ强．结论：Ｆｌｕ具有抑制前列腺肥大的作用。

关键词：氟他胺前列腺增生睾丸切除术雌二醇药理

酶联免疫吸附试验测定儿童体内抗青霉素类IgG抗体

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中国药理学报 1996年第3期17卷 274-277页

作者：张蕾王永铭沈刚陈斌艳上海医科大学药学院药理教研室

目的：建立一个测定青霉素类反应性ＩｇＧ的酶联免疫吸附方法（ＥＬＩＳＡ）并用该方法观察儿童血清中的特异性抗体．方法：采用免疫印迹、ＥＬＩＳＡ、半抗原抑制试验．结果：青霉素类和牛血清白蛋白结合成复合物，该复合物能作为ＥＬ... 详细信息

目的：建立一个测定青霉素类反应性ＩｇＧ的酶联免疫吸附方法（ＥＬＩＳＡ）并用该方法观察儿童血清中的特异性抗体．方法：采用免疫印迹、ＥＬＩＳＡ、半抗原抑制试验．结果：青霉素类和牛血清白蛋白结合成复合物，该复合物能作为ＥＬＩＳＡ中的包被抗原（１００ｍｇ·Ｌ－１）．样品稀释倍数和吸光度间有良好的相关性，相关系数０９９１８．运用ＥＬＩＳＡ在１３例临床可疑青霉素过敏的患儿中检测出４例青霉素抗体，１例青霉素和氨苄西林抗体，３例青霉素、氨苄西林、哌拉西林抗体．结论：成功的建立了一个ＥＬＩＳＡ方法，针对青霉素的ＩｇＧ应答在儿童具有异质性．ＩｇＧ抗体不但能识别青霉素分子本身，还能识别降解产物以及来自复合物的新抗原决定族．青霉素、氨苄西林、哌拉西林间有免疫交叉反应．

关键词：免疫球蛋白G 青霉素类交叉反应抗体 ELISA

戈米辛J对肝线粒体膜和培养心肌细胞的抗脂质过氧化作用

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中国药理学报 1996年第6期17卷 538-541页

作者：彭红丽陈道峰蓝洪祥张雪梅顾峥江明华上海医科大学药学院药理教研室生药教研室

戈米辛Ｊ对肝线粒体膜和培养心肌细胞的抗脂质过氧化作用１彭红丽，陈道峰２，蓝洪祥，张雪梅，顾峥，江明华（上海医科大学药学院药理教研室；２生药教研室，上海２０００３２，中国）关键词脂质过氧化；戈米辛Ｊ；木脂素；培养的细胞... 详细信息

戈米辛Ｊ对肝线粒体膜和培养心肌细胞的抗脂质过氧化作用１彭红丽，陈道峰２，蓝洪祥，张雪梅，顾峥，江明华（上海医科大学药学院药理教研室；２生药教研室，上海２０００３２，中国）关键词脂质过氧化；戈米辛Ｊ；木脂素；培养的细胞；肝线粒体；心肌目的：研究来自内南...

关键词：过氧化脂质戈米辛J 木脂素肝线粒体心肌

肌球蛋白轻链激酶活性片段对肌球蛋白轻链的非钙依赖性磷酸化作用特征(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第9期35卷 793-800页

作者：杨静娴王晓明唐泽耀陈华徐红林原大连医科大学药理教研室大连医科大学药理教研室大连116027

肌球蛋白轻链激酶 (MLCK)的活性片段 (MLCKF)能比完整的MLCK更有效地、以非钙依赖性的方式磷酸化肌球蛋白轻链 (MLC2 0 )。该片段是用胰蛋白酶水解MLCK ,再经DEAE 5 2柱层析分离而获得的 ,分子量约为 6 1kD。Western印迹已证实该MLCKF... 详细信息

肌球蛋白轻链激酶 (MLCK)的活性片段 (MLCKF)能比完整的MLCK更有效地、以非钙依赖性的方式磷酸化肌球蛋白轻链 (MLC2 0 )。该片段是用胰蛋白酶水解MLCK ,再经DEAE 5 2柱层析分离而获得的 ,分子量约为 6 1kD。Western印迹已证实该MLCKF与完整的MLCK同源。MLCKF对肌球蛋白轻链的磷酸化作用及其作用特征通过甘油电泳及ScoinImage扫描软件检测 ,肌球蛋白ATP酶活性通过分光光度法检测。实验结果证实 ,MLCKF催化的MLC2 0 非钙依赖性磷酸化 (CIPM)比MLCK催化的CIPM效力高、耗能多 ,但比MLCK催化的MLC2 0 钙依赖性磷酸化 (CDPM)效力低、耗能少 ;MLCKF催化的CIPM与MLCK催化的CIPM均较MLCK催化的CDPM稳定 ,不易受温育温度、温育时间及离子浓度等变化的影响 ,且对MLCK抑制剂ML 9敏感性低。

关键词：蛋白酶解肌球蛋白轻链激酶活性片段磷酸化 ATP酶活性