淫羊藿苷预处理增强人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞的影响

作     者：喻婷 吕冬梅 邓浩 孙涛 程钎 Yu Ting;Lyu Dongmei;Deng Hao;Sun Tao;Cheng Qian

作者机构：西南医科大学口颌面修复重建和再生泸州市重点实验室四川省泸州市646000 西南医科大学口腔医学研究所四川省泸州市646000 西南医科大学附属口腔医院正畸科四川省泸州市646000 西南医科大学口腔医学院四川省泸州市646000 

出 版 物：《中国组织工程研究》 (Chinese Journal of Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2025年第29卷第7期

页      面：1328-1335页

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 100104[医学-病理学与病理生理学] 100215[医学-康复医学与理疗学] 10[医学] 

基　　金：泸州市科技计划项目(2023JYJ055),项目负责人:程钎 四川省医学青年创新科研课题计划(Q21053),项目负责人:程钎 西南医科大学附属口腔医学院导师组能力提升资助项目(2022DS14),项目负责人:程钎 西南医科大学大学生创新创业训练项目(S202210632302),项目负责人:邓浩 

主　　题：人牙周膜干细胞 淫羊藿苷 巨噬细胞 条件培养基共培养 表面标志物 炎症因子 抗炎 核转录因子κB信号通路 

摘      要：背景:人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞促炎功能有一定抑制作用,具有抗炎等药理活性的淫羊藿苷是否能增强人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞的抑制作用尚不明确。目的:探究淫羊藿苷预处理人牙周膜干细胞后对M1型巨噬细胞的影响。方法:分离培养原代人牙周膜干细胞,并进行鉴定。对THP-1细胞进行诱导,采用免疫荧光染色及PCR进行M1型巨噬细胞鉴定。用含浓度10^(-7),10^(-6),10^(-5),10^(-4)mol/L淫羊藿苷的α-MEM完全培养基培养人牙周膜干细胞1,3,5,7 d,采用CCK-8法筛选合适的淫羊藿苷浓度进行实验。将α-MEM完全培养基、未处理的人牙周膜干细胞α-MEM条件培养基及淫羊藿苷预处理24 h的人牙周膜干细胞α-MEM条件培养基与RPMI-1640完全培养基以1∶1的比例对M1型巨噬细胞进行条件培养,分别为对照组、未处理组及预处理组,24 h后RT-PCR法检测M1型巨噬细胞炎症因子的mRNA表达情况;ELISA法检测M1型巨噬细胞炎症因子的蛋白表达情况;Western blot检测M1/M2型巨噬细胞表面标记物及核转录因子κB通路相关蛋白的表达。结果与结论:(1)CCK-8检测结果显示,10^(-7),10^(-6),10^(-5),10^(-4)mol/L淫羊藿苷对人牙周膜干细胞均无细胞毒性,且从第5天起,各浓度都提高了细胞活力,促进细胞增殖,选择10^(-4)mol/L淫羊藿苷进行后续实验。(2)RT-PCR法及ELISA检测结果显示,与对照组相比,未处理组及预处理组均降低了M1型巨噬细胞白细胞介素1β、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α的表达与分泌(P0.05),且预处理组低于未处理组(P0.05)。(3)Western blot检测结果显示,与未处理组相比,预处理组CD86的表达明显降低(P0.05);与对照组相比,未处理组和预处理组M2型巨噬细胞表面标志物CD206的表达均升高(P0.01),且预处理组明显高于未处理组(P0.01);M1型巨噬细胞经24 h条件培养后,与对照组相比,核转录因子κB/P65的表达在未处理组和预处理组均有降低(P0.01),p-IκBα的表达仅在预处理组降低(P0.01);与未处理组相比,预处理组核转录因子κB/P65和p-IκBα的表达均显著降低(P0.05),而IκBα在3组中的表达差异无显著性意义。(4)上述结果证实,淫羊藿苷增强了人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞的抑制作用,此作用可能与抑制了巨噬细胞的核转录因子κB信号通路相关。