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柚皮素对人自然杀伤细胞杀伤肝癌细胞的影响及其机制

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临床肝胆病杂志 2022年第8期38卷 1819-1824页

作者：马利节于畅王芳唐亦非邬海龙孙学华高月求上海中医药大学上海201203 上海中医药大学附属曙光医院肝病科上海201203 上海中医药大学附属曙光医院中心实验室上海201203 上海健康医学院上海201203

目的将人外周血单个核细胞体外扩增为自然杀伤(NK)细胞,与肝癌细胞1∶1共培养。观察柚皮素对NK细胞杀伤率的影响并初步研究相关机制。方法淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞,在体外经重组人白细胞介素2诱导培养NK细胞;0、3.125、6.2... 详细信息

目的将人外周血单个核细胞体外扩增为自然杀伤(NK)细胞,与肝癌细胞1∶1共培养。观察柚皮素对NK细胞杀伤率的影响并初步研究相关机制。方法淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞,在体外经重组人白细胞介素2诱导培养NK细胞;0、3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L浓度柚皮素作用于人肝癌细胞0、24、48 h后CCK8检测肝癌细胞增殖情况;不同浓度柚皮素作用于人NK细胞24 h后,CCK8检测NK细胞增殖情况;柚皮素作用于NK-肝癌细胞1∶1共培养体系24 h后,CellTiter-LumiTM检测NK细胞杀伤率;实时荧光定量PCR法检测NK细胞中激活型受体NKG2D的基因表达,以及肝癌细胞中NKG2D配体的基因表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果经重组人白细胞介素2诱导培养后,NK细胞可扩增至人外周血单个核细胞的82.33%±0.70%;柚皮素作用24 h后,所有质量浓度组CLC5肝癌细胞的增殖率无明显差异(P值均>0.05),25及50μmol/L质量浓度组柚皮素对NK细胞的增殖有较明显的促进作用(P值均0.05),对肝癌细胞中ULBP1、ULBP3等NKG2D配体的表达有明显上调作用(P值均<0.001)。结论柚皮素可能通过上调肝癌细胞中NKG2D配体表达,从而增加NK细胞的杀伤活性。

关键词：癌,肝细胞柚皮素自然杀伤T细胞免疫疗法

育肾活血方联合促性腺激素释放激素类似物治疗肾虚型子宫内膜异位症不孕症腹腔镜术后临床疗效观察

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中华中医药杂志 2023年第4期38卷 1892-1896页

作者：黄家宓胡国华张亚楠王佳云谷灿灿孔珏莹万怡婷陈静上海中医药大学上海201203 上海中医药大学附属市中医医院上海200071

目的:观察育肾活血方联合促性腺激素释放激素类似物(GnRH-a)对肾虚型子宫内膜异位症(EMs)不孕症腹腔镜术后患者的临床疗效。方法:收集2019年12月至2020年12月于上海中医药大学附属市中医医院就诊的肾虚型EMs不孕症腹腔镜术后患者64例,... 详细信息

目的:观察育肾活血方联合促性腺激素释放激素类似物(GnRH-a)对肾虚型子宫内膜异位症(EMs)不孕症腹腔镜术后患者的临床疗效。方法:收集2019年12月至2020年12月于上海中医药大学附属市中医医院就诊的肾虚型EMs不孕症腹腔镜术后患者64例,按照随机数表法分为两组:试验组(32例)予中药育肾活血方联合GnRH-a,对照组(32例)予GnRH-a,均治疗3个月。比较两组患者妊娠率、临床疗效、肾虚型中医证候评分、抗缪勒管激素(AMH)含量。结果:在1年随访中,对照组总妊娠率为53.13%(17/32),试验组总妊娠率为78.13%(25/32),试验组显著高于对照组(P实验室检查均改善,对照组总有效率为71.88%(23/32),试验组总有效率为96.88%(31/32),试验组显著高于对照组(P中医证候评分较治疗前显著降低(P中医证候评分。其作用机制可能与提高患者的卵巢功能有关。

关键词：育肾活血方促性腺激素释放激素类似物子宫内膜异位症不孕症腹腔镜术后临床疗效机制

桃红四物汤对CCl_(4)诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其机制

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临床肝胆病杂志 2021年第11期37卷 2563-2568页

作者：刘旭凌杨广越张玮孙田甜马文婷吴柳薛冬英刘成陶乐上海中医药大学附属普陀医院肝病实验室上海200062 上海中医药大学附属普陀医院感染科上海200062 上海中医药大学附属普陀医院中心实验室上海200062

目的探讨桃红四物汤对CCl_(4)诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其作用机制。方法24只雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组、模型组和桃红四物汤组,每组8只。模型组和桃红四物汤组小鼠腹腔注射10%CCl_(4),第3周开始给予桃红四物汤灌胃给药4周... 详细信息

目的探讨桃红四物汤对CCl_(4)诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其作用机制。方法24只雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组、模型组和桃红四物汤组,每组8只。模型组和桃红四物汤组小鼠腹腔注射10%CCl_(4),第3周开始给予桃红四物汤灌胃给药4周,检测肝功能(ALT、AST),观测肝组织病理形态学。实时荧光定量PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、透明质酸合成酶-2(HAS-2)、Ⅰ型胶原(Col1)mRNA的表达,蛋白免疫印迹法检测α-SMA、Col1及HAS-2蛋白的表达。分离小鼠原代肝星状细胞(HSC),应用siRNA沉默HAS-2,检测其对HSC激活的影响。计量资料两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组内进一步两两比较采用SNK或LSD-t检验。结果与正常组相比,模型组血清肝功能指标ALT、AST水平显著升高,桃红四物汤组小鼠血清ALT、AST水平均显著下降(P值均<0.01)。病理学染色显示:模型组炎症细胞浸润明显,增生的胶原纤维形成纤维间隔;桃红四物汤组胶原纤维间隔较疏松及炎症细胞浸润减轻。与模型组相比,桃红四物汤组α-SMA、Col1 mRNA和蛋白的表达水平均显著降低(P值均<0.001)。与正常组比较,模型组肝组织中HAS-2 mRNA表达水平显著升高(t=6.14,P<0.05),桃红四物汤组HAS-2蛋白表达水平(0.29±0.10)较模型组(1.00±0.12)明显减少(t=70.73,P<0.001)。siRNA沉默HAS-2,TGFβ处理后(Si HAS-2+TGFβ组)α-SMA、Col1 mRNA表达水平较NC+TGFβ组显著降低(P<0.01)。结论桃红四物汤通过抑制HAS-2对CCl 4致小鼠纤维化有显著治疗作用。

关键词：肝硬化桃红四物汤透明质酸合成酶2 小鼠,近交C57BL

肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β在结膜松弛症发病中的炎性机制及意义

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中华实验眼科杂志 2017年第4期35卷 325-331页

作者：柯梅青张兴儒周桂贞马艳春李青松项敏泓上海中医药大学附属普陀医院眼科 200062 上海中医药大学附属普陀医院中心实验室 200062

背景结膜松弛症（CCh）是年龄相关性眼表疾病，研究发现CCh患者结膜组织及泪液中炎性细胞因子表达升高，推测炎性细胞因子可能参与CCh的发病，但其作用机制尚未完全阐明。研究还发现CCh患者结膜组织中基质金属蛋白酶（MMPs）的表达上调... 详细信息

背景结膜松弛症（CCh）是年龄相关性眼表疾病，研究发现CCh患者结膜组织及泪液中炎性细胞因子表达升高，推测炎性细胞因子可能参与CCh的发病，但其作用机制尚未完全阐明。研究还发现CCh患者结膜组织中基质金属蛋白酶（MMPs）的表达上调，而炎性因子与MMPs在CCh发病中是否有关联尚不清楚。目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）对CCh患者结膜成纤维细胞中MMP-1、MMP-3及TNF-α刺激产生的肿瘤坏死因子刺激基因6（TSG-6）和穿透素3（PTX3）表达的影响。方法采用组织块培养法分别对CCh和白内障患者手术中采集的结膜组织进行培养，将培养的2种结膜成纤维组织各分为3个组，分别用含20ng／ml的PBS、TNF-α或IL-1B的细胞全培养基培养细胞4h，分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测细胞中MMP-1、MMP-3、TSG-6和PTX3 mRNA及其蛋白的表达。结果倒置显微镜下可见第2代细胞的形态和大小一致，为长梭形，呈放射状排列，细胞核呈卵圆形，细胞突起相互交联。CCh组和白内障组间用PBS、TNF-α和IL-1β干预后细胞中MMP-1、MMP-3、TSG-6和PTX3mRNA相对表达量的总体比较差异均有统计学意义（MMP-1 mRNA：F分组=2．611，P=0．116；F干预=161．564，P=0．000；MMP-3 mRNA：F分组=5．201，P=0．029；F干预=211．021，P=0．000；TSG-6 mRNA：F分组=47．209，P=0．000；F干预=119．340，P=0．000；PTX3 mRNA：F分组=40．512，P=0．000；F干预=93．935，P=0．000）。与白内障组PBS干预后比较，CCh组PBS干预后MMP-1、MMP-3、TSG-6和PTX3 mRNA的相对表达量均明显升高，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；与CCh组PBS干预后比较，CCh组TNF-α和IL-1β干预后细胞中MMP-1、MMP-3、TSG-6和PTX3 mRNA的相对表达量明显升高，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；与白内障组PBS干预后比较，白内障组TNF-α和IL-1β干预后细胞中MMP-1、MMP-3、TSG-6和PTX3 mRNA相对表达量明显增高，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。CCh组和白内障组间用PBS、TNF-α和IL-1β干预后细胞中MMP-1、MMP-3、TSG-6和PTX3蛋白相对表达量的总体比较差异均有统计学意义（MMP-1：F分组=84．702，P=0．000；F干预=48．900，P=0．000；MMP-3：F分组=112．818，P=0．000；F干预=194．980，P=0．000；TSG-6：F分组=56．867，P=0．000；F干预=70．356，P：0．000；PTX3：F分组=1．488，P=0．231；F干预=89．872，P=0．000）。各组细胞用PBS、TNF-α和IL-1β干预后MMP-1、MMP-3、TSG-6和PTX3蛋白相对表达量的组间比较与其基因表达趋势一致。结论CCh患者结膜成纤维细胞中MMP-1、MMP-3、TSG-6和PTX3的表达量增加；TNF-α和IL-1β均可上调CCh结膜成纤维细胞中MMP-1、MMP-3、TSG-6和PTX3的表达。

关键词：结膜松弛症炎症炎性细胞因子基质金属蛋白酶肿瘤坏死因子刺激基因6 穿透素3 细胞培养人

骨形态生成蛋白激活素膜结合抑制因子在信号转导中的研究现状

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中国临床药理学杂志 2021年第17期37卷 2369-2372页

作者：沈东晓刘成上海中医药大学附属普陀医院中心实验室上海200062

BMP激活素膜结合抑制因子(BAMBI)是转化生长因子(TGF-β)的假受体,其胞外区域与TGF-βⅠ型受体具有相似的结构,但胞内区域不具备生物学活性,能够竞争性地与TGF-βⅡ型受体结合,导致TGF-β信号不能往下游传导,从而阻断TGF-β信号传导。... 详细信息

BMP激活素膜结合抑制因子(BAMBI)是转化生长因子(TGF-β)的假受体,其胞外区域与TGF-βⅠ型受体具有相似的结构,但胞内区域不具备生物学活性,能够竞争性地与TGF-βⅡ型受体结合,导致TGF-β信号不能往下游传导,从而阻断TGF-β信号传导。本文对BAMBI在信号转导中的研究作一综述。

关键词： BMP激活素膜结合抑制因子假受体转化生长因子信号

下瘀血汤下调NLRP3改善高脂饮食诱导小鼠非酒精性脂肪性肝炎

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中国中西医结合杂志 2020年第10期40卷 1202-1208页

作者：吴柳杨广越张洁陈蓓马文婷张玮陶乐薛冬英刘成上海中医药大学附属普陀医院肝病实验室上海200062 上海中医药大学附属普陀医院感染科上海200062 上海中医药大学附属普陀医院中心实验室上海200062

目的探讨下瘀血汤对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的干预作用及机制。方法24只雄性C57/BL6小鼠随机分为低脂饮食(LFD)组(8只)、高脂饮食(HFD)组(16只),喂养6周。第7周始,HFD组随机分为HFD-water组(简称HFD组,8只)和下瘀血汤... 详细信息

目的探讨下瘀血汤对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的干预作用及机制。方法24只雄性C57/BL6小鼠随机分为低脂饮食(LFD)组(8只)、高脂饮食(HFD)组(16只),喂养6周。第7周始,HFD组随机分为HFD-water组(简称HFD组,8只)和下瘀血汤干预组(高脂饮食+下瘀血汤治疗组,简称XYX组,8只),灌胃共计16周。22周结束后,检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量;采用HE染色、油红O染色,观察小鼠肝脏组织形态、脂滴沉积;实时定量PCR检测肝组织中脂肪代谢途径相关因子固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)、脂肪酸合成酶(FASN)、乙酰辅酶羧化酶α(ACCα),炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、簇分化抗原68(CD68)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及核苷酸结合寡聚化结构域蛋白样受体3(NLRP3)炎性小体相关基因等;Western Blot、免疫组化检测NLRP3表达;天狼猩红染色、免疫组化检测a-SMA观察肝脏纤维化。结果与LFD组比较,HFD组血清ALT活性、TC、TG含量显著升高(P<0.05,P<0.01)。肝脏脂肪变明显,NAS评分显著升高(P<0.05);SREBP-1、FANS、ACCα等脂肪代谢合成相关因子显著上调,CD68、MCP-1等炎症相关因子mRNA表达显著升高(P<0.05);NLRP3炎性小体相关基因的表达显著上调(P<0.01,P<0.05);与HFD组比较,XYX组的肝脏脂肪变改善,NAS评分下调,脂肪代谢合成相关因子、炎症因子的mRNA表达下调,NLRP3炎性小体相关基因下调和NLRP3蛋白表达下调(均P<0.05)。天狼猩红染色及α-SMA染色显示HFD组的染色面积较LFD组增加(P<0.05),XYX组则较HFD组减少(P<0.05)。结论下瘀血汤对HFD诱导小鼠NASH有显著改善作用;抑制NLRP3是下瘀血汤改善NASH的作用机制之一。

关键词：下瘀血汤非酒精性脂肪性肝炎高脂饮食核苷酸结合寡聚化结构域蛋白样受体3

基于指纹图谱和成分定量的丹参化瘀颗粒质量评价研究

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中国医院药学杂志 2022年第10期42卷 986-992页

作者：朱静静闫勇翟亮李京旻吴曙辉苟小军高珊珊左琦上海中医药大学附属曙光医院宝山分院耳鼻喉科上海201999 上海中医药大学附属曙光医院宝山分院中心实验室上海201999

目的:建立丹参化瘀颗粒的HPLC指纹图谱及多成分定量分析方法,为其质量评价提供依据。方法:采用Agilent 5TC-C_(18)(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5.0μm),以0.05%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0 mL·min^(-1),柱... 详细信息

目的:建立丹参化瘀颗粒的HPLC指纹图谱及多成分定量分析方法,为其质量评价提供依据。方法:采用Agilent 5TC-C_(18)(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5.0μm),以0.05%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0 mL·min^(-1),柱温30℃,进样量20μL,检测波长403 nm、230 nm及302 nm,测定12批次丹参化瘀颗粒指纹图谱,标定共有峰并进行归属分析及相似度评价,对采用对照品比对确认的成分进行含量测定。结果:12批丹参化瘀颗粒指纹图谱标定共有峰29个,其中8个来源于丹参、1个来源于天麻、2个来源于当归川芎药对、1个来源于红花、1个来源于芍药。通过对照品比对确认其中7个成分,分别为天麻素、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮ⅡA。各批样品相似度均在0.99以上。结论:所建立的方法灵敏度高,专属性强,HPLC指纹图谱结合多成分定量测定能全面反映丹参化瘀颗粒内在质量,可用于其质量控制。

关键词：丹参化瘀颗粒高效液相色谱法指纹图谱相似度分析

芝类提取物改善Walker-256腹水大鼠免疫功能

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第二军医大学学报 2017年第8期38卷 1016-1022页

作者：赵若琳殷佩浩倪振华孙健徐可何裕民上海中医药大学中医基础理论教研室上海201203 上海中医药大学附属普陀医院中心实验室上海200062

目的探讨芝类提取物(GLE)对Walker-256腹水大鼠免疫功能的影响及其机制。方法根据不同处理方法将60只Wistar大鼠随机分为6组:对照组、模型组、低剂量GLE组、中剂量GLE组、高剂量GLE组和顺铂组,每组10只。采用Walker-256大鼠腹水癌细胞... 详细信息

目的探讨芝类提取物(GLE)对Walker-256腹水大鼠免疫功能的影响及其机制。方法根据不同处理方法将60只Wistar大鼠随机分为6组:对照组、模型组、低剂量GLE组、中剂量GLE组、高剂量GLE组和顺铂组,每组10只。采用Walker-256大鼠腹水癌细胞接种法造模后,高、中、低剂量GLE组大鼠分别给予GLE 0.84、1.68、3.36g/(kg·d)灌胃,每天2次,每次2mL,连续14d;顺铂组大鼠给予0.004g/(kg·d)顺铂(溶于生理盐水)腹腔注射,每周1次。对照组(未造模大鼠)和模型组均给予生理盐水灌胃,每天2次,每次2mL,连续14d。观察各组大鼠的一般情况,测定腹水质量,称量计算大鼠脾、胸腺和肾脏器指数,检测肾功能;流式细胞术检测各组大鼠胸腺和骨髓的细胞周期、外周血T淋巴细胞亚群分布和自然杀伤(NK)细胞数;血清免疫因子蛋白芯片检测对照组、模型组和中剂量GLE组大鼠血清免疫细胞因子的水平。结果 GLE可有效减少大鼠腹水质量(P<0.05)。与对照组相比,模型组和顺铂组均出现胸腺、脾和肾损伤,给予中、高剂量GLE干预后大鼠胸腺指数、肾指数提高,血肌酐和尿素氮值降低(P<0.05);模型组和顺铂组大鼠胸腺和骨髓细胞发生G0/G1期阻滞,给予GLE干预后G0/G1期阻滞减少、G2/M和S期细胞比例升高(P<0.05)。与模型组相比,给予GLE干预使大鼠外周血中CD4+细胞比例、CD4+/CD8+细胞比值和NK细胞比例均增加,CD8+细胞比例降低(P<0.05)。中剂量GLE组大鼠血清中干扰素γ(IFN-γ)、白介素(IL)-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-10和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达与模型组相比均升高(P<0.05)。结论GLE可有效减少Walker-256腹水大鼠腹水生成,改善大鼠免疫功能,且与顺铂相比无肾脏损害。

关键词：灵芝腹水免疫细胞因子类 T淋巴细胞天然杀伤细胞

金丝桃苷调节非酒精性脂肪性肝病大鼠脂质代谢的作用机制研究

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上海中医药杂志 2023年第8期57卷 38-43页

作者：郅音马星张苗叶颖夏伟宋雅楠上海中医药大学附属第七人民医院中心实验室上海200137

目的探讨金丝桃苷对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠脂质代谢的影响及其作用机制。方法Wistar大鼠高脂饮食喂养6周,造模成功后随机分为模型对照组(n=10)、金丝桃苷低剂量组(50 mg·kg^(-1),n=10)和金丝桃苷高剂量组(10... 详细信息

目的探讨金丝桃苷对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠脂质代谢的影响及其作用机制。方法Wistar大鼠高脂饮食喂养6周,造模成功后随机分为模型对照组(n=10)、金丝桃苷低剂量组(50 mg·kg^(-1),n=10)和金丝桃苷高剂量组(100 mg·kg^(-1),n=10);另设空白对照组予正常饲料喂养(n=10)。各组均灌胃给药,每日1次。每周测量大鼠的体质量;干预6周后,检测大鼠肝功能和脂质代谢指标,苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠肝组织的病理形态改变,Western blot法检测大鼠肝组织脂质代谢相关蛋白的表达水平。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠肝脏有明显的脂肪变性。与模型对照组比较,金丝桃苷高剂量组大鼠肝内脂滴空泡、肝组织脂肪变性有明显改善,肝组织中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)水平显著降低(P<0.05),脂肪合成相关蛋白胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合酶(FASN)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)表达量显著下调(P<0.05),脂肪分解相关蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A)表达量明显增加(P<0.05),且磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α(p-AMPKα)蛋白表达量升高(P<0.05),差异均有统计学意义。结论金丝桃苷可能通过调节腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路抑制肝脏脂质合成,促进脂质分解,说明金丝桃苷可能是治疗NAFLD的潜在药物。

关键词：非酒精性脂肪性肝病金丝桃苷腺苷酸活化蛋白激酶通路脂质代谢大鼠模型中药研究