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降解霉菌毒素乳酸菌的筛选及鉴定

动物营养学报 2024年第4期36卷 2674-2689页

作者：姚有莉张朋王永奔卢博雨吴国芳张剑搏王磊青海省畜牧兽医科学院(青海大学) 西宁810016 青海大学青海省高原放牧家畜动物营养与饲料科学重点实验室西宁810016 青海省高原家畜遗传资源保护与创新利用重点实验室西宁810016 农业农村部青藏高原畜禽遗传育种重点实验室西宁810016

本试验旨在获得可高效降解霉菌毒素和具有益生特性的乳酸菌,为后期其作为饲料添加剂在饲料中应用奠定基础。试验通过对分离自青海牦牛和藏羊瘤胃中的169株乳酸菌进行霉菌毒素降解能力比较,以及形态学、生理生化特性、分子生物学、益生... 详细信息

本试验旨在获得可高效降解霉菌毒素和具有益生特性的乳酸菌,为后期其作为饲料添加剂在饲料中应用奠定基础。试验通过对分离自青海牦牛和藏羊瘤胃中的169株乳酸菌进行霉菌毒素降解能力比较,以及形态学、生理生化特性、分子生物学、益生性和安全性的综合评定,最终获得4株可以同时降解饲料原料中4种真菌毒素的菌株(菌株C2、E28、C16和A16)。在本研究中,初筛获得的15株乳酸菌对黄曲霉毒B 1(AFB 1)、呕吐毒素(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEA)和硫代葡萄糖苷(GLUS)的降解率最高分别为70.95%、60.11%、64.00%和59.18%;复筛获得的4株乳酸菌对AFB 1、DON、ZEA和GLUS的降解率分别为33.53%、60.18%、51.45%和43.41%。16S rRNA测序结果表明:菌株C2和E28为乳酸片球菌,菌株A16为戊糖片球菌,菌株C16为乳肠球菌;这4株乳酸菌起酵时间短,产酸能力强(pH<4.5),能在pH 3.5和胆盐浓度为0.1%的环境中正常生长,且有良好的自凝集力和疏水性。通过安全性试验得知,4株乳酸菌均不溶血,其中乳肠球菌C16和戊糖片球菌A16对红霉素和青霉素敏感,乳酸片球菌C2和E28对红霉素和青霉素敏感或中度敏感,且乳酸片球菌C2和E28对金黄色葡萄球菌有强抑菌性,抑菌圈直径≥20 mm,是优良的候选菌株。

关键词：霉菌毒素乳酸菌益生性安全性

LncRNA调控反刍家畜脂质代谢的研究进展

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中国畜牧杂志 2024年第6期60卷 7-14页

作者：吴刚倪萌萌李世军贵州大学动物科学学院高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州贵阳550025

脂质代谢对机体的生长发育、繁殖等均有重要作用,反刍家畜的背膘厚、肌内脂肪含量和乳脂率等经济性状与脂质代谢密切相关。长链非编码RNA(lncRNA)是长度大于200核苷酸的非编码RNA,近年来研究发现lncRNA可以通过干扰基因的表达、调控酶... 详细信息

脂质代谢对机体的生长发育、繁殖等均有重要作用,反刍家畜的背膘厚、肌内脂肪含量和乳脂率等经济性状与脂质代谢密切相关。长链非编码RNA(lncRNA)是长度大于200核苷酸的非编码RNA,近年来研究发现lncRNA可以通过干扰基因的表达、调控酶活性、竞争靶位点等方式参与许多重要的机体代谢。在畜牧经济性状研究中,lncRNA可通过调控脂质代谢影响肌内脂肪的沉积及乳脂率,从而影响反刍家畜的肉质、乳质性状。本文对lncRNA调控反刍动物肉质性状与产乳性状的脂质代谢途径及相关研究进行综述,以期对反刍家畜经济性状的改善提供理论依据。

关键词： lncRNA 反刍家畜脂质代谢 IMF 乳脂

柯乐猪CRISP 3基因SNP鉴定及其对繁殖性状的影响

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浙江农业学报 2024年第6期36卷 1270-1278页

作者：向进王春源吴燕谭元成杨酸张依裕贵州大学动物科学学院高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室香猪研究所贵州贵阳550025

为分析富半胱氨酸的分泌蛋白3(cysteine rich secretory protein 3,CRISP3)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点对柯乐猪繁殖性状的影响,采用Sanger测序法检测250头健康经产柯乐猪母猪CRISP 3基因的SNP突变位点,利用SPSS 22.0软件分析SNP位点与柯乐猪产活仔猪数、初生窝重、初生均重、断奶窝重、断奶仔猪数和断奶均重6个指标的关联性。结果显示,在柯乐猪CRISP 3基因第4内含子共发现3个SNP突变位点,即g.43796318T>C、g.43796424T>A和g.43796425G>T,均存在3种基因型。g.43796318T>C和g.43796424T>A位点的优势基因型为TT,优势等位基因为T;g.43796425G>T位点的优势基因型为GG,优势等位基因为G。χ^(2)检验显示,g.43796318T>C位点基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05);g.43796424T>A和g.43796425G>T位点基因型分布均极显著(PA与g.43796425G>T之间存在强连锁不平衡。关联分析显示,g.43796318T>C位点TT和CC基因型个体的初生窝重和初生均重均显著(PA位点TA基因型个体的产活仔猪数、初生窝重和断奶仔猪数均显著(PT位点GT基因型个体的产活仔猪数、初生窝重和断奶仔猪数均显著(P<0.05)高于GG和TT基因型。双倍型关联分析显示,双倍型H2H4(CCTAGT)个体的产活仔猪数、初生窝重、断奶仔猪数和断奶窝重显著(P<0.05)高于H1H2(TCTAGT)个体和H2H2(CCAATT)个体;双倍型H2H2(CCAATT)个体的初生均重显著(P<0.05)高于除H4H4(CCTTGG)个体外的其他个体,且其断奶均重显著(P<0.05)高于其他双倍型个体。CRISP 3基因第4内含子上的3个突变位点与柯乐猪的6个繁殖性状均存在显著关联,可作为柯乐猪繁殖性状选择的候选分子标记。

关键词：柯乐猪 CRISP 3基因单核苷酸多态性繁殖性状

清远麻鸡miR-142-3p分析及其关键靶基因的筛选

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中国农业大学学报 2024年第7期29卷 12-22页

作者：朱师良余春林邱莫寒张增荣熊霞胡陈明杨礼彭涵陈家磊宋小燕夏波杨朝武四川省畜牧科学研究院动物遗传育种重点实验室成都610066

为分析清远麻鸡不同组织中miR-142-3p的表达情况,并筛选其在脾脏中的关键靶基因,本研究利用在线数据库预测鸡miR-142-3p靶基因,并对靶基因进行GO和KEGG富集分析以及构建蛋白-蛋白互作网络。利用在线公共数据库,分析脾脏相对于其他组织的... 详细信息

为分析清远麻鸡不同组织中miR-142-3p的表达情况,并筛选其在脾脏中的关键靶基因,本研究利用在线数据库预测鸡miR-142-3p靶基因,并对靶基因进行GO和KEGG富集分析以及构建蛋白-蛋白互作网络。利用在线公共数据库,分析脾脏相对于其他组织的miR-142-3p表达量;再根据miRNA表达量与其靶基因表达量负相关机制,对miR-142-3p靶基因与脾脏中相对其他组织显著下调基因取交集,筛选潜在靶基因。结果表明:1)预测获得85个靶基因,GO富集分析显示,靶基因参与多种高分子化合物的合成与转运过程。2)KEGG结果显示富集到MAPK、Notch、Wnt等多条与抗肿瘤免疫相关的信号通路。3)PPI网络共筛选到4个Hub基因。4)miR-142-3p在脾脏中的表达量极显著高于肝脏、肺脏、胸肌、心脏和肾脏(P<0.01)。5)共筛选到TWF1、MYH10、NFIB、FNBP1L和FERMT25个靶基因。综上,鸡miR-142-3p在脾脏中很可能通过TWF1、MYH10、NFIB、FNBP1L和FERMT2发挥生物学功能。本研究为解析鸡miR-142-3p的功能及其分子机制提供了参考和依据。

关键词：清远麻鸡 miR-142-3p 生物信息学组织表达脾脏

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抗菌肽在猪精液常温保存中的应用研究进展

畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1401-1411页

作者：黄杰阮子豪蔡瑞西北农林科技大学动物科技学院陕西省动物遗传育种与繁殖重点实验室杨凌712100

人工授精(AI)是畜牧业加速发展的核心技术之一,精液保存为其中的一个关键环节。猪精液在保存过程中容易受到细菌污染而导致精子质量下降,随着全面禁抗时代的到来,迫切需要开发具有不同活性的抗菌替代品,以提高精液保存效果。抗菌肽(AMPs... 详细信息

人工授精(AI)是畜牧业加速发展的核心技术之一,精液保存为其中的一个关键环节。猪精液在保存过程中容易受到细菌污染而导致精子质量下降,随着全面禁抗时代的到来,迫切需要开发具有不同活性的抗菌替代品,以提高精液保存效果。抗菌肽(AMPs)因具有广谱抗菌活性和较低耐药性,通过细胞膜损伤和非膜损伤机制在猪精液保存过程中发挥抗菌作用,目前已成为抗生素的重要替代品。本文综述了AMPs的抑菌机制及其在猪精液保存技术中应用的研究进展,旨在为猪精液常温保存抗菌肽产品的开发提供科学依据。

关键词：猪精液保存抗菌肽细菌污染抑菌机制

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中草药防治鸭病毒病的研究进展

中国动物传染病学报 2024年第4期32卷 225-231页

作者：王晗晗嵇辛勤阮涌罗晓宇龙丹丹段志强贵州大学动物科学学院贵阳550025 贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵阳550025 贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025

鸭病毒性疾病是我国养鸭业传播最广泛、造成重大经济损失的传染病之一。由于抗病毒药物的稀缺,且使用化学药物具有明显的副作用和耐药性,中草药防治鸭病毒病有了重要的研究价值。中草药含有丰富的活性成分,运用不同制剂形式防治鸭病毒... 详细信息

鸭病毒性疾病是我国养鸭业传播最广泛、造成重大经济损失的传染病之一。由于抗病毒药物的稀缺,且使用化学药物具有明显的副作用和耐药性,中草药防治鸭病毒病有了重要的研究价值。中草药含有丰富的活性成分,运用不同制剂形式防治鸭病毒病能达到调节机体免疫力、改善临床症状等效果。文章主要阐述中草药抗鸭病毒的作用机制,以及在鸭病毒性肝炎、鸭瘟、鸭呼肠孤病毒病、鸭坦布苏病毒病、鸭禽流感5种常见病毒病中的应用研究,旨在为中草药在鸭病毒病防治中的研究提供一定的参考。

关键词：中草药鸭病毒病防治

4个基因在副猪嗜血杆菌感染仔猪脑组织中DNA甲基化与mRNA表达联合验证

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中国畜牧兽医 2024年第4期51卷 1651-1659页

作者：杨雅琼程鸿星梁明霞刘玉兰付书林张晶陈洪波任红艳郭玲晁哲武汉轻工大学动物科学与营养工程学院动物遗传繁育与精准养殖实验室武汉430023 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口570312 武汉轻工大学动物营养与饲料科学湖北省重点实验室武汉430023 动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室武汉430070

【目的】验证候选基因在副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis,GPS)感染仔猪脑组织中DNA甲基化与mRNA表达之间的联合调控关系,为揭示副猪嗜血杆菌引起仔猪脑膜炎的表观致病机理提供理论依据。【方法】选取6头28日龄断奶仔猪,随机均分为... 详细信息

【目的】验证候选基因在副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis,GPS)感染仔猪脑组织中DNA甲基化与mRNA表达之间的联合调控关系,为揭示副猪嗜血杆菌引起仔猪脑膜炎的表观致病机理提供理论依据。【方法】选取6头28日龄断奶仔猪,随机均分为对照组和GPS组,GPS组仔猪腹腔注射1 mL 2×109 CFU/mL副猪嗜血杆菌SH0165菌液,对照组仔猪腹腔注射等量生理盐水,7 d后采集仔猪脑组织提取DNA和RNA。采用实时荧光定量PCR检测4个候选基因(LYPD1、PITPNM1、SYP、ACVR1B)的mRNA表达量,并利用重亚硫酸盐测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)、甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测副猪嗜血杆菌感染前后4个基因在仔猪脑组织中的DNA甲基化变化。【结果】本研究成功将MSP方法应用于基因的DNA甲基化测序研究,使其不局限于定点检测甲基化位点。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,GPS组仔猪LYPD 1、PITPNM 1、SYP、ACVR 1 B基因mRNA表达均显著或极显著下调(P模式。

关键词：副猪嗜血杆菌 LYPD 1基因 PITPNM 1基因 SYP基因 ACVR 1 B基因 DNA甲基化

SOCS2对山羊鼻甲骨细胞增殖、周期及凋亡的影响

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畜牧兽医学报 2024年第5期55卷 2226-2240页

作者：李秋云田芯源廖文圣张焕容任玉鹏杨发龙朱江江向华西南民族大学动物医学四川省高等学校重点实验室成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室成都610041

细胞因子信号转导抑制因子2 (suppressor of cytokine signaling 2,SOCS2)在动物体内参与调节多种生理和病理过程,如细胞凋亡、细胞增殖、细胞周期、肿瘤和炎症反应等。本研究在首次克隆山羊SOCS2基因的基础上,研究过表达和干扰SOCS2表... 详细信息

细胞因子信号转导抑制因子2 (suppressor of cytokine signaling 2,SOCS2)在动物体内参与调节多种生理和病理过程,如细胞凋亡、细胞增殖、细胞周期、肿瘤和炎症反应等。本研究在首次克隆山羊SOCS2基因的基础上,研究过表达和干扰SOCS2表达对山羊鼻甲骨细胞增殖、周期及凋亡的影响。以1周岁的健康简州大耳羊(6只)的心、肝、脾、肺、肾、瘤胃、大肠、小肠和山羊鼻甲骨细胞共9个样本为模板,采用反转录PCR技术克隆山羊SOCS2基因CDS区序列,并进行序列分析。利用RT-qPCR技术检测SOCS2基因在不同组织中的表达。将克隆得到的SOCS2基因CDS区连接载体构建真核表达载体pcDNA3.1-SOCS2。根据山羊SOCS2基因序列设计合成并筛选有效siRNA。利用Lipofectamine^(TM) 3000试剂将pcDNA3.1-SOCS2和siRNA片段分别转染至鼻甲骨细胞,采用蛋白免疫印迹技术检测SOCS2蛋白表达,MTT法检测SOCS2对细胞增殖的影响,流式细胞术检测SOCS2对细胞周期和凋亡的影响,并利用RT-qPCR技术检测细胞周期相关基因p21、CDK2和凋亡相关基因Caspase3、Caspase7、PARP1、p53、Bax、BCL2L11和Bcl-2的转录水平。结果显示,成功扩增山羊SOCS2基因序列,总长为1 065 bp, CDS区长为597 bp,编码198个氨基酸残基。SOCS2基因在肝中表达水平最高;SOCS2可以抑制细胞增殖。成功构建真核表达载体pcDNA3.1-SOCS2,且该基因在鼻甲骨细胞内成功表达。SOCS2过表达可导致G2/M+S期细胞数量显著增加,且下调CDK2和p21基因的mRNA表达;促进细胞凋亡,且上调Caspase3、Caspase7、Bax、p53、BCL2L11、Bcl-2基因的mRNA表达,PARP1表达水平无显著变化。而干扰SOCS2表达后,G0/G1期细胞数量显著升高,且CDK2和p21基因的mRNA表达上调;细胞凋亡被抑制,且Caspase3、Bax、p53、PARP1基因的mRNA表达下调,Caspase7、BCL2L11、Bcl-2基因表达水平无显著变化。综上所述,SOCS2可将细胞周期阻滞在G2/M+S期,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖。研究结果为全面揭示山羊SOCS2功能提供试验数据。

关键词：山羊 SOCS2 细胞增殖细胞周期细胞凋亡

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PLZF的克隆及其对犏牛未分化精原细胞的增殖作用

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中国农业科学 2024年第2期57卷 390-402页

作者：张鹏王明秀敬科民李雨谦田园钟金城蔡欣教育部重点实验室西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省

【目的】犏牛作为牦牛与黄牛的种间杂交产物，具有优良的生产性能，但其杂种优势的进一步应用却受限于犏牛雄性不育。通过克隆犏牛PLZF，明确其在犏牛和牦牛睾丸组织和未分化精原细胞中的差异表达，并进一步揭示过表达该基因对犏牛未分... 详细信息

【目的】犏牛作为牦牛与黄牛的种间杂交产物，具有优良的生产性能，但其杂种优势的进一步应用却受限于犏牛雄性不育。通过克隆犏牛PLZF，明确其在犏牛和牦牛睾丸组织和未分化精原细胞中的差异表达，并进一步揭示过表达该基因对犏牛未分化精原细胞活性的影响。为阐明犏牛生精停滞的作用机制提供理论基础。【方法】以24月龄公麦洼牦牛和F1代公犏牛为实验动物，通过RT-PCR法克隆得到了犏牛PLZF的CDS序列，并进行了生物信息学分析；通过RT-qPCR法分析PLZF在犏牛和牦牛睾丸组织中的差异表达；采用同源重组的方法构建了PLZF的表达载体，并利用RT-qPCR检测了PLZF过表达效率及其下游靶基因的表达；通过PDT、CCK-8、EdU和免疫荧光检测了过表达PLZF对犏牛未分化精原细胞增殖活性的影响。【结果】克隆获得了犏牛PLZF的CDS区，并通过生物信息学分析发现该基因编码的蛋白序列不包含跨膜结构域和信号肽序列，其三级结构以α螺旋和无规卷曲为主。系统进化树分析表明犏牛PLZF与黄牛PLZF的亲缘关系更近。三级结构预测发现，虽然犏牛、牦牛和黄牛的PLZF蛋白三级结构高度相似，但牦牛PLZF蛋白在531—540位氨基酸处与犏牛和黄牛有较大差异。RT-qPCR发现，PLZF在犏牛睾丸组织和未分化精原细胞中的表达均显著低于牦牛（P<0.05），而在犏牛未分化精原细胞中过表达PLZF后，该基因的表达上调了13.8倍（P<0.01），且能显著增加犏牛未分化精原细胞的增殖活性（P<0.05），表明PLZF表达下调影响了犏牛未分化精原细胞增殖活性。此外，过表达PLZF后，犏牛未分化精原细胞中与增殖相关的基因（Etv5、Bcl6b、Pcna和c-fos）全部显著上调（P<0.05），与分化相关的基因（Stra8、Kit、Dmrt1和Sohlh2）全部显著下调（P<0.05），表明PLZF通过上调增殖相关基因、下调分化相关基因的表达促进犏牛未分化精原细胞增殖。【结论】PLZF在犏牛未分化精原细胞中表达异常降低了犏牛未分化精原细胞增殖活性，导致其数量减少，影响了犏牛的精子发生。本试验为进一步阐明犏牛生精停滞的作用机制提供了理论基础，并为解决犏牛雄性不育问题提供了新的思路。

关键词：犏牛 PLZF 未分化精原细胞增殖