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羊痘病毒与羊口疮病毒双重RPA-LFD检测方法的建立与应用

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生物技术通报 2024年第5期40卷 103-111页

作者：王玲玲马爱红宋前进王小龙曹晓真刘治凤陈亚飞李继东宁夏大学动物科技学院银川750021 银川市畜牧技术推广服务中心银川750006

【目的】旨在建立一种基于重组聚合酶(recombinase polymerase amplification,RPA)检测技术结合测流层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD)快速鉴别检测羊痘病毒(capripox virus,CaPV)与羊口疮病毒(orf virus,ORFV)的双重RPA-LFD检测方法。【方法】选取CaPV P32基因及ORFV 011基因的保守片段,进行目的片段扩增并构建重组质粒;设计CaPV及ORFV RPA引物各3对,CaPV-HP、ORFV-HP探针各1条;进行单重基础RPA引物筛选试验;对双重RPA-LFD的反应时间及反应温度进行优化;探索双重RPA-LFD最佳引物配比体系及最佳探针配比体系;进行双重RPA-LFD灵敏度、特异性及重复性试验;用所建立的方法对采集的55份临床样品进行检测。【结果】引物筛选试验结果显示,引物对CaPV-RPA-F3/R3、ORFV-RPA-F1/R1的特异性最强、扩增效率最高;该方法在反应温度为39℃、反应时间为11 min的反应条件下扩增效率最佳;CaPV-RPA-F3/R3、ORFV-RPA-F1/R1的最佳引物配比为0.8 μL∶1.6 μL,CaPV-HP、ORFV-HP的最佳探针配比为0.1 μL∶0.9 μL;双重RPA-LFD灵敏性试验最低检出限为CaPV/ORFV 4.65/3.94×10~0 copies/μL;特异性试验结果显示与PPRV、IBRV、Sau、SPN均无交叉反应;临床样品检测结果显示RPA-LFD检测阳性率与PCR检测阳性率相符合。【结论】成功建立了CaPV与ORFV双重RPA-LFD快速检测方法,可用于临床中CaPV与ORFV混合感染的快速鉴别诊断。

关键词：羊痘病毒羊口疮病毒 RPA-LFD 鉴别诊断混合感染

基于牛流行热病毒G蛋白的免疫胶体金检测方法的建立

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中国畜牧兽医 2024年 4429-4439页

作者：王雪妍靳双媛杜家伟温宏武李永琴许立华宁夏大学动物科技学院宁夏吴忠市盐池县农业农村局畜牧技术推广服务中心

[目的]建立牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus,BEFV)的免疫胶体金检测方法,为牛流行热(BEF)诊断提供研究基础。[方法]构建原核表达载体pET32a-BEFV-G,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行表达,对诱导成功后的表达产物进... 详细信息

[目的]建立牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus,BEFV)的免疫胶体金检测方法,为牛流行热(BEF)诊断提供研究基础。[方法]构建原核表达载体pET32a-BEFV-G,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行表达,对诱导成功后的表达产物进行纯化和SDS-PAGE、Western blotting鉴定。以纯化后的蛋白作为特异性抗原包被检测线,以链球菌G蛋白作为金标抗原,与金纳米颗粒结合后标记在金标垫上,用羊抗鼠IgG作为质控线,通过优化不同的反应条件,建立检测BEFV的免疫胶体金检测方法,并对试纸条进行敏感性、特异性和重复性检测。[结果]SDS-PAGE结果显示,在IPTG终浓度为0.75 mmol/L时,37℃诱导8 h的条件下重组BEFV G蛋白表达量最大,且以包涵体形式表达,分子质量约为46 ku。Western blotting结果显示,浓缩纯化后的重组BEFV G蛋白具有较好的反应原性,可作为包被抗原用于免疫胶体金试纸条的建立。在质控线包被的抗体羊抗鼠IgG浓度为2 mg/mL,BEFV G蛋白包被浓度为0.6 mg/mL,喷金量为2.5μL/cm的条件下,3～5 min就可完成检测。制备的试纸条有较高的敏感性和特异性,血清稀释倍数为40倍的时候显色接近消线,且试纸条仅与BEFV阳性血清发生显色反应,与牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)等其他病毒阳性血清均无交叉反应,阳性血清样本重复性试验证明试纸条的重复性较高,成功建立了免疫胶体金检测方法。[结论]本研究以原核表达的G蛋白为抗原成功制备了检测BEFV的新型免疫胶体金试纸条,该检测试纸条特异性强、稳定性好,适合用于临床快速检测BEF。

关键词：牛流行热病毒(BEFV) G蛋白原核表达蛋白纯化免疫胶体金

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山西省生猪产业智能化现状、问题与思考

猪业观察 2024年第1期 47-49页

作者：贠红梅李鹏山西省畜牧技术推广服务中心

目前,智能化猪只养殖模式逐渐成为山西省生猪产业发展的趋势和方向。本文简要介绍了在山西生猪智能化程度较高的长荣农业科技股份有限公司等7家典型企业案例,明确了山西省生猪产业智能化下一步的工作重点与推进方向,为养猪智能技术发展... 详细信息

目前,智能化猪只养殖模式逐渐成为山西省生猪产业发展的趋势和方向。本文简要介绍了在山西生猪智能化程度较高的长荣农业科技股份有限公司等7家典型企业案例,明确了山西省生猪产业智能化下一步的工作重点与推进方向,为养猪智能技术发展提供思路与借鉴。

关键词：生猪产业发展企业案例智能技术养殖模式推进方向问题与思考山西省智能化

不同父系和性别对育肥尕力巴牛生产性能、屠宰性能、肉品质和经济效益的影响

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草业科学 2024年第6期41卷 1407-1417页

作者：李岩牛小莹朱旭鑫何克磊党智周建伟甘肃省畜牧技术推广总站甘肃兰州730000 甘南藏族自治州畜牧技术服务中心甘肃合作747000 合作市畜牧工作站甘肃合作747000 兰州大学草地农业科技学院甘肃兰州730000

本研究旨在通过舍饲育肥试验,探究不同父系和性别对尕力巴牛生产性能、屠宰性能、肉品质及经济效益的影响,以期为甘南州提高该畜种的资源利用率和实现科学养殖提供理论依据。试验采用2×2双因子设计,选取3周岁、体况相近、体重[(151±9.... 详细信息

本研究旨在通过舍饲育肥试验,探究不同父系和性别对尕力巴牛生产性能、屠宰性能、肉品质及经济效益的影响,以期为甘南州提高该畜种的资源利用率和实现科学养殖提供理论依据。试验采用2×2双因子设计,选取3周岁、体况相近、体重[(151±9.2)kg]的健康尕力巴牛24头,其中黄尕力巴和牦尕力巴牛各12头(公母各半)。试验饲粮由精料和粗料两部分构成,其中精料饲喂量为每头牛2.50 kg·d^(-1),粗料自由采食。结果表明:1)黄尕力巴牛终末体重和日增重均显著高于牦尕力巴牛(P0.10);5)黄尕力巴牛的增重价值和育肥收入均显著高于牦尕力巴牛(P黄尕力巴母牛>牦尕力巴公牛>牦尕力巴母牛。

关键词：尕力巴牛父系生产性能肉品质经济效益舍饲育肥体尺指标

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原州区畜禽粪污资源化利用现状及做法

畜牧兽医科技信息 2024年第08期 72-75页

作者：周世平固原市原州区畜牧技术推广服务中心

畜牧业是关系国计民生的支柱产业，在原州区农业农村经济发展中占有重要的地位。随着畜禽养殖的发展，畜禽粪资源化利用率偏低，畜禽养殖污染已成为农村面源污染的重要因素，也是当前农业生态资源环境面临的突出问题。本文就原州区畜禽... 详细信息

畜牧业是关系国计民生的支柱产业，在原州区农业农村经济发展中占有重要的地位。随着畜禽养殖的发展，畜禽粪资源化利用率偏低，畜禽养殖污染已成为农村面源污染的重要因素，也是当前农业生态资源环境面临的突出问题。本文就原州区畜禽粪污资源化利用现状、存在问题、畜禽粪污治理技术措施及技术模式进行了相关分析，积累了良好的经验和做法，形成了“两坚持三结合”典型原州模式，走出了一条种养结合、生态循环的现代畜牧业高质量发展之路。

关键词：畜禽粪污资源化利用养殖污染主要做法

来源：博看期刊

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马铃薯黑膜覆盖垄上覆土栽培技术分析

中文科技期刊数据库（全文版）农业科学 2024年第8期 0179-0182页

作者：雍纬基宁夏回族自治区隆德县农业技术推广服务中心宁夏隆德756300

在当今农业生产中,马铃薯作为一种重要的粮食作物,其产量和品质的提升一直是农业科研和生产中的重点,随着科技的进步和农业技术的创新,马铃薯的栽培技术也在不断进步,黑膜覆盖垄上覆土栽培技术作为一种新型的栽培方式,因其在提高土壤温... 详细信息

在当今农业生产中,马铃薯作为一种重要的粮食作物,其产量和品质的提升一直是农业科研和生产中的重点,随着科技的进步和农业技术的创新,马铃薯的栽培技术也在不断进步,黑膜覆盖垄上覆土栽培技术作为一种新型的栽培方式,因其在提高土壤温度、减少水分蒸发、抑制杂草生长、改善土壤结构等方面的显著效果,受到了广泛的关注和应用。为此,本文对马铃薯黑膜覆盖栽培技术,展开分析。

关键词：马铃薯黑膜覆盖垄上覆土栽培技术

添加干物料混合时间对苜蓿贮前均匀度和含水量的影响

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中国饲料 2024年第9期 34-38,44页

作者：侯东来杨子森贾镇宁刘柱张婷赵祥山西省畜牧技术推广服务中心山西太原030001 山西农业大学草业学院山西太谷030801

为明确混合时间与紫花苜蓿(Medicago sativa)混合青贮均匀度和含水量之间的关系,提供科学合理的苜蓿混合青贮工艺。本试验以80%、75%、70%、65%含水量苜蓿(M)为材料,选择玉米粉和麸皮(Y)作为添加剂,根据适宜含水量(60%)共设计7个添加处... 详细信息

为明确混合时间与紫花苜蓿(Medicago sativa)混合青贮均匀度和含水量之间的关系,提供科学合理的苜蓿混合青贮工艺。本试验以80%、75%、70%、65%含水量苜蓿(M)为材料,选择玉米粉和麸皮(Y)作为添加剂,根据适宜含水量(60%)共设计7个添加处理(80%M+10%Y、80%M+15%Y、75%M+10%Y、75%M+15%Y、70%M+10%Y、70%M+15%Y、65%M+5%Y),5个混合时间处理(3、5、7、9、11 min),采用筛分法测定混合均匀度,烘箱烘干法测定苜蓿混合青贮发酵前含水量。结果表明:混合时间为5 min时,各处理的混合均匀度均可达到90%以上,其中70%M+10%Y混合均匀度最佳,为93.47%;混合时间为7 min时,80%M+15%Y混合均匀度最佳,为95.44%;混合青贮发酵前,65%M+5%Y的含水量随着混合时间的延长逐渐接近60%;75%M+15%Y的含水量在混合7 min时最接近60%,为59.41%。因此,合适的混合时间有利于调节苜蓿混合青贮均匀度和含水量,进而改善其发酵品质。

关键词：苜蓿混合青贮均匀度含水量

静原鸡miR-2954的靶基因预测及生物信息学分析

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黑龙江畜牧兽医 2024年第9期 48-52,118页

作者：杨嘉翊何亮宏禹保军王浩睿魏榕付希胡佳欢毛向媛张娟宁夏大学农学院银川750021 彭阳县畜牧技术推广中心宁夏固原756599

为了预测静原鸡miR-2954的靶基因,并分析miR-2954在静原鸡不同组织的表达差异,探索其在静原鸡肌肉组织生长发育中的调控机制,试验采用生物信息学方法对比miR-2954成熟序列,并分析其保守性,使用TargetScan、miRDB、miRmap在线工具预测其... 详细信息

为了预测静原鸡miR-2954的靶基因,并分析miR-2954在静原鸡不同组织的表达差异,探索其在静原鸡肌肉组织生长发育中的调控机制,试验采用生物信息学方法对比miR-2954成熟序列,并分析其保守性,使用TargetScan、miRDB、miRmap在线工具预测其靶基因,对靶基因集合进行GO功能注释和KEGG信号通路富集分析,并采用实时荧光定量PCR方法对miR-2954的组织表达水平进行研究。结果表明:miR-2954序列在鸟类间高度保守,靶基因GO功能条目主要集中在RNA聚合酶Ⅱ对转录的正向调节、信号转导、RNA聚合酶Ⅱ对转录的负向调节、氧化-还原过程、免疫反应和G-蛋白偶联受体信号转导途径等,存在于细胞核、胞浆、外泌体等多个组分中,在ATP结合、锌离子结合、金属离子结合、蛋白质结合等分子功能中也发挥作用。靶基因主要富集于细胞因子-细胞因子受体的相互作用、肌动蛋白细胞骨架的调节、细胞黏附分子、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用、胰岛素信号传递途径与脂肪细胞因子信号传递途径等信号通路。miR-2954在静原鸡公鸡肺脏、肝脏中的相对表达量极显著高于其他组织(P<0.01),在静原鸡母鸡肺脏、肾脏、胸肌、腿肌中的相对表达量极显著高于其他器官(P<0.01)。说明miR-2954可通过调节其靶向基因影响静原鸡的生长发育。

关键词：静原鸡 miR-2954 miRNA 靶基因生物信息学

不同蛋白质水平开口料对岗巴羊羔羊生长性能及健康状况的影响

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饲料工业 2024年

作者：张永翠何孟莲白玛央珍程光民殷正艳王金君赵满达山东畜牧兽医职业学院山东省饲料安全与高效利用工程技术研发中心日喀则市畜牧技术推广服务中心

试验旨在探究不同蛋白质水平开口料对岗巴羊公羔采食量、体重、健康状况的影响，选用15日龄左右、平均体重（3.90±0.50）kg的哺乳期健康岗巴羊公羔75只，随机分为5个组，分别为试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组、试验Ⅳ组、试验Ⅴ组，每... 详细信息

试验旨在探究不同蛋白质水平开口料对岗巴羊公羔采食量、体重、健康状况的影响，选用15日龄左右、平均体重（3.90±0.50）kg的哺乳期健康岗巴羊公羔75只，随机分为5个组，分别为试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组、试验Ⅳ组、试验Ⅴ组，每组15只羔羊。试验Ⅰ组为对照组，羔羊每天跟随母羊维持传统放牧，试验Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组分别饲喂粗蛋白含量为15%、17%、19%、21%的羔羊开口饲料，自由采食，试验期45 d。结果表明：各试验组第1周平均日采食量差异均不显著（P>0.05），试验第2～6周，试验Ⅳ组、Ⅴ组的平均日采食量显著高于试验Ⅱ组、Ⅲ组（P<0.05），且试验Ⅳ组（蛋白质含量为19%）平均采食量最高。试验Ⅳ组、Ⅴ组断奶体重显著高于试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组（P<0.05），试验Ⅳ组断奶体重最高，为9.46 kg，其次为试验Ⅴ组；试验Ⅳ组平均日增重最高，为132.14 g，显著高于其他各组（P<0.05）。试验Ⅴ组腹泻率和死淘率显著高于其他各试验组（P<0.05）。综上，羔羊开口料中蛋白质含量为19%时，岗巴羊公羔的平均日采食量、断奶体重及平均日增重最高；蛋白质水平为21%时会引起羔羊腹泻率增加；本试验条件下，羔羊开口料中蛋白质含量为19%时能够有效提高岗巴羊的生长性能。

关键词：岗巴羊开口料蛋白质水平生长性能健康状况