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体外培养的人胸腺组织移植到裸鼠不同部位后的免疫重建效果分析

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免疫学杂志 2024年第2期40卷 113-121页

作者：关万青罗贵华撖菁萱糜建红冯泽清吴玉章南方医科大学基础医学院免疫学教研室广州510000 重庆国际免疫研究院 401338 陆军军医大学基础医学院免疫学教研室重庆400038 重庆理工大学药学与生物工程学院 400054

目的通过分析人胸腺组织切片移植到裸鼠肾包膜,皮下和股四头肌后的免疫重建效果,探究胸腺组织异位移植的最佳位置。方法收集先天性心脏病患者手术废弃的胸腺组织,制作成0.5~1 mm厚的组织切片,体外培养以清除免疫细胞。利用H&E染色、免... 详细信息

目的通过分析人胸腺组织切片移植到裸鼠肾包膜,皮下和股四头肌后的免疫重建效果,探究胸腺组织异位移植的最佳位置。方法收集先天性心脏病患者手术废弃的胸腺组织,制作成0.5~1 mm厚的组织切片,体外培养以清除免疫细胞。利用H&E染色、免疫组织化学染色和定量PCR等方法评估组织切片中残余的组织结构、细胞类型和功能。最后将胸腺组织切片分别移植入裸鼠的肾包膜、皮下和股四头肌3个部位,并通过流式细胞术和组织学检测等手段比较3个部位移植后的免疫重建效果。结果体外培养14 d的胸腺组织切片中T淋巴细胞的清除率达90%以上,上皮细胞网状结构保存完整,残存大量的巨噬细胞、树突状细胞、内皮细胞。定量PCR结果显示,体外培养能有效维持胸腺组织切片中上皮细胞标志物及其分泌细胞因子的基因表达量。流式细胞术显示移植后16周,不同移植组小鼠外周血中T细胞的比例均显著增加,其中股四头肌移植组小鼠的T细胞比例最高。原位组织学检测显示,移植物在3个部位均能检出胸腺组织再生。但是肾包膜组移植物检出率为40%,皮下组移植物检出率为60%,股四头肌组移植物检出率为100%。结论体外培养14 d的胸腺组织切片保留了完整的胸腺基质微环境,移植人的胸腺组织切片后可有效重建裸鼠的T细胞比例,且股四头肌部位移植的效果优于肾包膜和皮下部位。

关键词：人胸腺组织切片胸腺移植免疫重建

弹性蛋白酶调节中性粒细胞炎性募集的功能研究

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中国免疫学杂志 2024年第3期40卷 449-455页

作者：刘洋孟玲范思佳任春光张欢重庆医科大学基础医学院细胞与遗传教研室发育生物学研究室重庆400016

目的:探索中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对中性粒细胞炎性募集的影响。方法:采用外源性弹性蛋白酶抑制剂西维来司钠盐预处理小鼠骨髓来源的中性粒细胞,通过腹膜炎过继性迁移、细胞体外趋化、流动室黏附、免疫荧光染色、细胞伸展等实验,检测N... 详细信息

目的:探索中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对中性粒细胞炎性募集的影响。方法:采用外源性弹性蛋白酶抑制剂西维来司钠盐预处理小鼠骨髓来源的中性粒细胞,通过腹膜炎过继性迁移、细胞体外趋化、流动室黏附、免疫荧光染色、细胞伸展等实验,检测NE的抑制对中性粒细胞体内炎性募集、体外趋化、牢固黏附、细胞极化与伸展能力的影响;利用流式细胞术及鲁米诺化学发光系统检测NE的抑制对中性粒细胞吞噬及活性氧(ROS)释放能力的影响。结果:西维来司钠盐预处理显著减弱了中性粒细胞体内炎性募集(P<0.001);减弱了中性粒细胞在体外趋化过程中对催化剂方向性的感知(P<0.05),减慢了趋化速率(P<0.05),降低了趋化距离(P<0.05);减少了中性粒细胞在炎性内皮细胞表面形成牢固黏附的能力(P<0.000 1),抑制了中性粒细胞对细菌的吞噬能力(P<0.01);但对中性粒细胞的伸展、极化及ROS的释放均无显著影响。结论:NE的抑制显著损害了中性粒细胞在体内外的炎性募集级联反应及吞噬作用,但对中性粒细胞的伸展、极化、ROS释放等功能无显著影响。

关键词：中性粒细胞弹性蛋白酶西维来司钠盐炎性募集

硫代乙酰胺诱导的小鼠肝内胆管癌模型特点研究

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中国药理学通报 2024年第5期40卷 992-998页

作者：张玉梅琼沈玉先安徽医科大学基础医学院药理学教研室生物药物研究所安徽合肥230032

目的建立硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)诱导的小鼠肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)模型并探讨该模型的特点及形成机制,为ICC的病理机制和治疗药物的研究提供实验基础。方法C57BL/6J小鼠分为正常对照组和TAA组,正常对... 详细信息

目的建立硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)诱导的小鼠肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)模型并探讨该模型的特点及形成机制,为ICC的病理机制和治疗药物的研究提供实验基础。方法C57BL/6J小鼠分为正常对照组和TAA组,正常对照组小鼠饮用灭菌水,模型组小鼠饮用600 mg·L^(-1)的TAA溶液,连续饮用32周。眼球取血,检测血清中ALT、AST、DBIL和TBIL的水平;观察两组小鼠肝脏形态;HE、天狼猩红、Masson和普鲁士蓝染色观察肝脏组织病理改变;免疫组化检测CK7、CK19、Ki67、CD68、TNF-α和α-SMA的表达水平;RT-qPCR和Western blot检测ICC相关标志物mRNA和蛋白的水平;免疫荧光双标记检测肝脏组织中HNF4α+CK19+双阳性细胞。结果与正常对照组比较,TAA组小鼠肝脏表面呈细颗粒状、质硬,肝内呈肿块性病变;病理检查结果显示,肝组织有炎症细胞浸润,肿瘤细胞排列成管状,肝组织有明显的纤维化;血清中ALT、AST、DBIL和TBIL水平升高;肝脏组织中ICC标志物CK7、CK19及细胞增殖标志物Ki67表达上调;免疫细胞标志分子CD68和TNF-α表达增多,肝星状细胞活化标志物α-SMA的阳性染色增多;肝组织中出现HNF4α+CK19+双表型细胞。结论TAA可用于诱导小鼠ICC模型,该模型具有炎症免疫细胞浸润、纤维化及ICC分子标志物增高等特点,这与人类的ICC非常相似,可用于评价内源性分子和外源性药物对ICC作用的研究。

关键词：硫代乙酰胺肝内胆管癌小鼠模型肝纤维化炎症

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FSHR基因多态性、BMI及性激素与多囊卵巢综合征发病风险的相关性分析

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解放军医学杂志 2024年第1期49卷 50-56页

作者：昝志芳土增荣王淇蓉段毓刘建兵李莉山西医科大学基础医学院医学细胞生物与遗传学教研室山西太原030001 山西医科大学第一医院生殖医学科山西太原030001

目的探讨体重指数(BMI)、性激素及卵泡刺激素受体(FSHR)基因rs2268361和rs2349415位点的单核苷酸多态性(SNP)与多囊卵巢综合征(PCOS)发病风险的相关性。方法收集2021年3-8月山西医科大学第一医院生殖医学科门诊就诊的213例PCOS患者(PCOS... 详细信息

目的探讨体重指数(BMI)、性激素及卵泡刺激素受体(FSHR)基因rs2268361和rs2349415位点的单核苷酸多态性(SNP)与多囊卵巢综合征(PCOS)发病风险的相关性。方法收集2021年3-8月山西医科大学第一医院生殖医学科门诊就诊的213例PCOS患者(PCOS组)与207名健康对照者(对照组)的外周血,随机收集PCOS组与对照组各32例卵泡液。计算PCOS组与对照组的BMI;采用免疫化学发光法检测两组外周血卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、睾酮(T)、孕酮(P)和泌乳素(PRL)水平;采用聚合酶链式反应(PCR)和高分辨熔解曲线(HRM)分析两组FSHR基因rs2268361和rs2349415位点多态性;采用实时定量PCR检测两组外周血及卵巢颗粒细胞FSHR mRNA表达水平。结果LH与LH/FSH呈明显正相关(r=0.88,P学意义(P<0.05);PCOS组卵巢颗粒细胞中FSHR mRNA表达水平明显高于对照组(P=0.004),其中rs2349415 TT基因型FSHR mRNA表达水平高于CC(P=0.002)和CT基因型(P=0.035)。结论高水平的BMI、LH、E2及rs2349415位点T等位基因可增加PCOS的发病风险。

关键词：多囊卵巢综合征卵泡刺激素受体单核苷酸多态性性激素

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黏膜免疫佐剂研究进展

中国免疫学杂志 2024年

作者：张芹丁步坚张标广东医科大学基础医学院

黏膜是抗原侵入和机体抵抗外来病原体的重要场所，诱发有效黏膜免疫应答的疫苗在预防外来病原体感染方面具有十分重要的价值。然而，由于黏膜（消化道、呼吸道和泌尿生殖道等）环境十分复杂，使得疫苗抗原经黏膜途径免疫时难以诱发有效... 详细信息

黏膜是抗原侵入和机体抵抗外来病原体的重要场所，诱发有效黏膜免疫应答的疫苗在预防外来病原体感染方面具有十分重要的价值。然而，由于黏膜（消化道、呼吸道和泌尿生殖道等）环境十分复杂，使得疫苗抗原经黏膜途径免疫时难以诱发有效的黏膜免疫应答，阻碍了黏膜疫苗的开发。黏膜免疫佐剂因可以调节或加强疫苗的黏膜免疫应答效应，为黏膜疫苗的研发提供了新的机会。本文主要从细菌毒素、Toll样受体激动剂、细胞因子或趋化因子以及其他新型黏膜佐剂等方面对黏膜免疫佐剂的研究进展进行综述。

关键词：佐剂黏膜免疫 Toll受体激动剂抗原递送复合佐剂

重组蛋白EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162的原核表达、纯化及鉴定

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中国病原生物学杂志 2024年第7期19卷 784-788页

作者：米热古丽·艾乃都王卫国陈娜菲周彦霞马西智单文豪李艳敏周晓涛新疆医科大学维吾尔医学院新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院免疫学教研室新疆医科大学第一附属医院新疆地方病及分子生物学重点实验室

目的利用pET30a-EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162重组质粒,诱导表达、纯化获得EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162目的蛋白,并对其进行鉴定,为后续研究提供前提条件。方法利用双酶切的方法验证pET30a-EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162质粒,并将其转化至*** BL21(DE3)菌株,获得表达菌株。采用不同浓度的IPTG在不同诱导时间及温度下诱导表达重组蛋白,菌液超声破碎后,经SDS-PAGE检测上清及沉淀中蛋白的表达。通过镍柱亲和层析法纯化蛋白并进行Western blot鉴定。结果成功鉴定重组质粒pET30a-EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162;重组蛋白EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162在IPTG终浓度为0.5 mmol/L,28℃条件下诱导6 h,上清中的蛋白表达量最高;300 mmol/L咪唑时洗脱得到的目的蛋白较多,洗脱效果较好;Western blot检测重组蛋白EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162能被相应抗体识别,反应条带在35 ku处,与预期相符。结论成功构建pET30a-EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162重组质粒,表达出相应重组蛋白,为细粒棘球病重组疫苗的研究创造条件。

关键词：细粒棘球蚴重组蛋白EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162 蛋白表达及鉴定

融入BOPPPS的混合式教学模式在医学免疫学中的应用

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中国免疫学杂志 2024年

作者：吴瑗赵汉宁赵祖国冯胜军米娜广东医科大学基础医学院

在信息快速发展的新时代，线上线下混合式教学模式将是今后教学模式发展的一个新方向。BOPPPS教学模式包括导入（B）、学习目标(O)、前测(P)、参与式学习(P)、后测(P)、总结(S)等六个模块。本文将BOPPPS理念融入到医学免疫学线上线下混... 详细信息

在信息快速发展的新时代，线上线下混合式教学模式将是今后教学模式发展的一个新方向。BOPPPS教学模式包括导入（B）、学习目标(O)、前测(P)、参与式学习(P)、后测(P)、总结(S)等六个模块。本文将BOPPPS理念融入到医学免疫学线上线下混合式教学过程中，依托“超星学习通”平台，将教学分为课前、课中、课后三个阶段，BOPPPS的前3个模块导入、学习目标、前测放在课前线上进行，后3个模块参与式学习、后测、总结则融合在课中线下课堂及课后线上开展。在教学过程中注重以学生为中心，师生全程交流互动，极大地提高了教学质量，可为后疫情时代医学院校开展混合式教学提供参考。

关键词：医学免疫学混合式教学 BOPPPS

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紫外交联免疫沉淀技术原理及其应用

生物化学与生物物理进展 2024年第1期51卷 136-144页

作者：杜亚琼王琬瑶高帆徐旸时文涛天津医科大学基础医学院遗传学系天津300070 南开大学医学院天津300071

紫外交联免疫沉淀(UV cross-linking immunoprecipitation,CLIP)技术最初建立于2003年。通过紫外交联、免疫沉淀、逆转录及后续的高通量测序等步骤,可在全转录组范围鉴定特定RNA结合蛋白(RNA-binding proteins,RBP)的靶标RNA序列和结合... 详细信息

紫外交联免疫沉淀(UV cross-linking immunoprecipitation,CLIP)技术最初建立于2003年。通过紫外交联、免疫沉淀、逆转录及后续的高通量测序等步骤,可在全转录组范围鉴定特定RNA结合蛋白(RNA-binding proteins,RBP)的靶标RNA序列和结合位点。在近20年的应用过程中,该技术被不断改进和完善,可操作性、实验结果的准确性都有所提升,技术的应用范围也有所拓展。本文对CLIP技术的基本原理、实验方法、实际应用进行介绍,着重比较几种主流CLIP技术的异同,并对如何选择具体的技术路线提出建议。

关键词：紫外交联免疫沉淀高通量测序 RNA结合蛋白

TBK1对NLRC4炎症小体的作用及其机制研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2024年第5期44卷 595-603,614页

作者：曾强张在奎孙乃双陈允梓南京医科大学基础医学院免疫学系江苏南京211166

目的:探究TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)调控核苷结合寡聚化结构域样受体4(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor 4,NLRC4)炎症小体激活的作用及其机制。方法:在鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.T)感染的永生化骨髓巨噬细胞(immortalized bone marrow derived macrophage,IBMDM)中,Western blot检测NLRC4炎症小体激活及其下游分子半胱天冬蛋白酶1(cysteine aspartic acid specific protease 1,Caspase-1)和Gasdermin D(GSDMD)的剪切情况;乳酸脱氢酶检测试剂盒检测细胞培养基上清中乳酸脱氢酶的含量;蛋白质免疫共沉淀实验确定TBK1与NLRC4的相互作用及其具体结构域;细胞免疫荧光实验确定TBK1与NLRC4的空间定位;GST pull-down实验确定TBK1与NLRC4是否存在直接相互作用;凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)寡聚化检测实验验证NLRC4炎症小体组装。构建S.T感染C57BL/6小鼠动物模型,观察小鼠生存情况。涂板计数腹腔灌洗液和肺的细菌负荷量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测腹腔灌洗液及血清中的肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和白细胞介素(interleukin,IL)-1β的含量;流式细胞术检测腹腔灌洗液中的中性粒细胞比例。结果:在S.T感染的IBMDM中,抑制TBK1可减弱NLRC4炎症小体激活,NLRC4磷酸化水平下降,Caspase-1与GSDMD的剪切减少;TBK1与NLRC4存在相互作用,TBK1的N端与NLRC4的NACHT结构域相互作用;TBK1与NLRC4存在空间上的共定位;TBK1可以磷酸化NLRC4的Ser533位点。S.T动物模型实验显示,抑制TBK1活性可以显著提高小鼠的生存率;减低小鼠腹腔灌洗液和肺中的细菌负荷量;降低血清以及腹腔灌洗液中的IL-1β、TNF-α的表达水平;减少腹腔灌洗液中的中性粒细胞比例。结论:TBK1与NLRC4相互作用,磷酸化NLRC4 Ser533位点,促进NLRC4炎症小体的激活,为治疗相关疾病提供理论依据和新的潜在靶点。

关键词： NLRC4炎症小体 TBK1 鼠伤寒沙门氏菌